摘要
目的观察长链非编码RNA(LncRNA)CCAT1对宫颈癌细胞株HeLa增殖的影响,并探讨其可能作用机制。方法 (1)过表达、抑制CCAT1表达对HeLa增殖的影响:取对数生长期HeLa细胞分为1、2、3、4组,分别转染pcDNA3.1-CCAT1过表达慢病毒、pcDNA3.1对照慢病毒、siRNA、CCAT1-siRNA,别于转染0、24、48 h时采用CCK8法观察各组细胞增殖情况。(2)HeLa细胞CCAT1互补microRNA分子分析:采用核质分离实验分析CCAT1的细胞定位,网站预测并分析与CCAT1互补配对的microRNA分子。(3)LncRNA CCAT1靶向microRNA分子分析:取HeLa细胞分为A、B、C组,分别转染乱序无意义序列、CCAT1-siRNA、pcDNA3.1-CCAT1过表达的慢病毒。转染48 h采用荧光定量PCR方法检测各组细胞miR-181a-5p、miR-181b-5p、miR-4295、miR-130a-5p、miR-148b-3p、miR-543。(4)细胞RASSF1A、cyclin D1 mRNA检测:取HeLa细胞,分为甲、乙、丙、丁、戊组,分别转染乱序无意义序列、CCAT1-siRNA、CCAT1-siRNA+miR-181a-5p inhibitor(miR-181a-5p抑制剂)、pcDNA3.1-CCAT1过表达的慢病毒、pcDNA3.1-CCAT1过表达的慢病毒+miR-181a-5p mimic(miR-181a-5p类似物)。转染48 h采用荧光定量PCR法检测各组细胞RASSF1A、cyclin D1的RNA表达。结果转染24、48 h时,1组细胞增殖OD值小于2组,3组细胞增殖OD值高于4组(P均<0.05)。与CCAT1互补的前6位microRNA分别为miR-181a-5p、miR-181b-5p、miR-4295、miR-130a-5p、miR-148b-3p、miR-543。转染48 h时B组miR-181a-5p、miR-181b-5p、miR-4295、miR-130a-5p相对表达量均高于A、C组,C组miR-181a-5p、miR-181b-5p、miR-4295相对表达量均低于A组(P均<0.05)。转染48 h时,乙组RASSF1A相对表达量低于、cyclin D1 mRNA相对表达量高于甲组,丁组RASSF1A相对表达量高于、cyclin D1mRNA相对表达量低于甲组(P均<0.05);丙、丁、戊组RASSF1A相对表达量高于、cyclin D1 mRNA相对表达量低于乙组(P均<0.05);丁组RASSF1A相对表达量高于、cyclin D1 mRNA相对表达量低于丙组(P均<0.05);戊组RASSF1A相对表�
出处
《山东医药》
CAS
北大核心
2017年第19期33-36,共4页
Shandong Medical Journal
