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对中国药典中硫柳汞含量测定方法的优化 被引量：6
1
作者 田文莉 陈天泉 万亚芬 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期1990-1992,共3页
目的:通过对比实验研究是否可以通过优化操作步骤提高滴定法测定一般生物制品中硫柳汞含量的准确性、重复性、降低检测限,并确定控制点。方法:以中国药典2010年版三部附录VⅡB所载滴定方法为基础,细化或调整若干步骤具体操作。结果:优... 目的:通过对比实验研究是否可以通过优化操作步骤提高滴定法测定一般生物制品中硫柳汞含量的准确性、重复性、降低检测限,并确定控制点。方法:以中国药典2010年版三部附录VⅡB所载滴定方法为基础,细化或调整若干步骤具体操作。结果:优化控制点:①延长水浴消化时间至4 h;②滴定过程中双硫腙滴定液始终保持在约0℃、几乎完全避光、防空气的条件下,逐次取用,使用时长不得超过120 min;③加入滴定液后应充分振摇并适当延长时间;④实验中可根据样品中硫柳汞含量适当稀释双硫腙滴定液,最低至药典所载配比的2/10。结论:经优化,滴定法可达到回收率在90%～110%、RSD≤5%、检测限最低至0.6μg.mL-1。 展开更多
关键词 防腐剂 硫柳汞 滴定法 标准优化
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酚试剂分光光度法检测亚单位流感疫苗中甲醛含量 被引量：3
2
作者 田文莉 杨江山 +1 位作者 杨旭 李小强 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期653-655,668,共4页
目的:建立酚试剂分光光度法检测亚单位流感疫苗中甲醛含量的方法。方法:采用酚试剂分光光度法,通过改变酚试剂,盐酸,硫酸铁铵浓度,反应时间优化检测条件。结果:在反应体系5 mL中,样本500μL与0.85 mg.mL-1酚试剂2 mL35℃反应10 min后,加... 目的:建立酚试剂分光光度法检测亚单位流感疫苗中甲醛含量的方法。方法:采用酚试剂分光光度法,通过改变酚试剂,盐酸,硫酸铁铵浓度,反应时间优化检测条件。结果:在反应体系5 mL中,样本500μL与0.85 mg.mL-1酚试剂2 mL35℃反应10 min后,加入0.1 mol.L-1盐酸2mL和1%硫酸铁铵0.5 mL,35℃反应20 min为最佳反应条件,在0.1～5μg.mL-1范围内呈线性相关,样品加标回收率为98.5%。结论:该方法适用于实验室对亚单位流感疫苗中微量甲醛含量的常规检测。 展开更多
关键词 流感疫苗 亚单位 甲醛 MBTH 分光光度法
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乙酰丙酮分光光度法检测亚单位流感疫苗中的甲醛含量 被引量：3
3
作者 田文莉 杨江山 +3 位作者 万亚芬 祁骥 杨旭 李小强 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2012年第4期510-512,共3页
目的采用乙酰丙酮分光光度法检测亚单位流感疫苗中的甲醛含量。方法采用乙酰丙酮分光光度法检测亚单位流感疫苗中的甲醛含量,对测定波长、乙酰丙酮、乙酸、乙酸铵浓度、保温时间、降温时间进行优化,并对方法进行验证。结果在500μl样品... 目的采用乙酰丙酮分光光度法检测亚单位流感疫苗中的甲醛含量。方法采用乙酰丙酮分光光度法检测亚单位流感疫苗中的甲醛含量,对测定波长、乙酰丙酮、乙酸、乙酸铵浓度、保温时间、降温时间进行优化,并对方法进行验证。结果在500μl样品和4.5 ml乙酰丙酮溶液反应体系中,在0.125%乙酰丙酮、1.5%乙酸、25%乙酸铵条件下,40℃保温30 min,室温静置30 min后,在波长414 nm处测定甲醛含量,可获得最佳检测效果;在1～50μg/ml的浓度范围内标准曲线线性关系良好,回收率为101.9%,最低定量限为1μg/ml。结论应用乙酰丙酮分光光度法检测亚单位流感疫苗中的甲醛含量简便、快速、准确,灵敏度高,适用于实验室对甲醛含量的常规检测。 展开更多
关键词 甲醛 乙酰丙酮 流感疫苗
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国产流感病毒亚单位疫苗的安全性及免疫原性 被引量：3
4
作者 张艳 吴徐锋 +3 位作者 田文莉 潘晓男 仇艳平 李小强 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2012年第8期1013-1016,共4页
目的观察国产流感病毒亚单位疫苗的安全性及免疫原性。方法按照单盲法、随机、对照的原则,将900名观察对象分为幼儿组、儿童组、成人组和老年组,各组分别按2∶1的比例随机接种试验疫苗和对照疫苗(进口疫苗),观察各组接种后的全身反应、... 目的观察国产流感病毒亚单位疫苗的安全性及免疫原性。方法按照单盲法、随机、对照的原则,将900名观察对象分为幼儿组、儿童组、成人组和老年组,各组分别按2∶1的比例随机接种试验疫苗和对照疫苗(进口疫苗),观察各组接种后的全身反应、局部反应和其他不良反应以及免疫后HI抗体阳转率、保护率和GMT增长倍数。结果观察组接种后全身反应发生率为8.33%,仅1例发生局部反应,不同年龄人群全身反应发生率与对照组相比,差异均无统计学意义(P>0.05);免疫后观察组H1N1、H3N2和B(亚)型HI抗体总阳转率分别为87.90%、70.02%和71.32%,保护率分别为93.30%、93.30%和74.67%,与对照组相比,差异均无统计学意义(P>0.05);GMT增长倍数分别为31.6、8.2和14.0,除H1N1亚型GMT平均增长倍数高于对照组外,其他两(亚)型与对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论国产流感病毒亚单位疫苗具有与进口同类疫苗相似的安全性和免疫原性。 展开更多
关键词 流感疫苗 亚单位疫苗 安全性 免疫原性
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亚单位流感疫苗中裂解剂壬苯醇醚-9含量HPLC检测方法的建立 被引量：1
5
作者 田文莉 杨江山 +4 位作者 宋庆余 万亚芬 高燕燕 张艳 李小强 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2011年第12期1503-1506,共4页
目的建立亚单位流感疫苗中裂解剂壬苯醇醚-9含量的HPLC检测方法。方法采用4倍体积甲醇沉淀处理亚单位流感疫苗样品,HPLC色谱条件为：色谱柱：Thermo BioBasic-4 C4柱（4.6 mm×150 mm,5μm）,流动相：甲醇∶水=80∶20（v/v）,流速：... 目的建立亚单位流感疫苗中裂解剂壬苯醇醚-9含量的HPLC检测方法。方法采用4倍体积甲醇沉淀处理亚单位流感疫苗样品,HPLC色谱条件为：色谱柱：Thermo BioBasic-4 C4柱（4.6 mm×150 mm,5μm）,流动相：甲醇∶水=80∶20（v/v）,流速：1 ml/min,紫外检测器检测波长：275 nm,柱温：33℃,上样量：100μl。并对建立的HPLC法进行验证。结果建立的HPLC法检测壬苯醇醚-9标准品在5~2 500μg/ml浓度范围内线性关系良好;检测壬苯醇醚-9的专属性良好;检测壬苯醇醚-9在灭活流感全病毒提取液和亚单位流感疫苗中的回收率约为100%;检测各浓度壬苯醇醚-9标准品溶液和亚单位流感疫苗的日内和日间精密性均小于3%;检测限和定量限均为5μg/ml。结论建立的HPLC法简便、快速、准确,适用于实验室对亚单位流感疫苗中裂解剂含量的常规检测。 展开更多
关键词 流感疫苗 亚单位 壬苯醇醚-9 色谱法 高压液相
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亚单位流感疫苗中裂解剂壬苯醇醚-9含量两种检测方法的比较
6
作者 田文莉 杨江山 +2 位作者 万亚芬 祁骥 杨旭 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2013年第1期120-121,共2页
目的比较高效液相色谱法(HPLC)和紫外分光光度法检测亚单位流感疫苗中裂解剂壬苯醇醚-9含量的效果。方法分别采用HPLC法和紫外分光度法检测亚单位流感疫苗中间体和成品中壬苯醇醚-9的含量,并取中间体进行SDS-PAGE分析。结果紫外分光光... 目的比较高效液相色谱法(HPLC)和紫外分光光度法检测亚单位流感疫苗中裂解剂壬苯醇醚-9含量的效果。方法分别采用HPLC法和紫外分光度法检测亚单位流感疫苗中间体和成品中壬苯醇醚-9的含量,并取中间体进行SDS-PAGE分析。结果紫外分光光度法测定亚单位流感疫苗成品和中间体的壬苯醇醚-9含量比HPLC法高10%以上,测定中间体3壬苯醇醚-9含量的结果差异更显著;SDS-PAGE分析显示中间体1、2、3的核蛋白(NP)含量差异显著,大多数存在于中间体3中。结论 HPLC法可代替紫外分光光度法检测亚单位流感疫苗中裂解剂壬苯醇醚-9的含量。 展开更多
关键词 亚单位流感疫苗 壬苯醇醚-9 高效液相色谱法 紫外分光光度法
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去垢剂对单向免疫扩散法测定流感病毒疫苗血凝素含量的影响
7
作者 田文莉 祁骥 +3 位作者 高燕燕 陈群 杨旭 李小强 《中国当代医药》 2012年第6期49-51,共3页
目的研究单向免疫扩散法测定流感病毒亚单位疫苗不同生产阶段中间产品的血凝素含量实验中,去垢剂对检测结果的影响,寻找最佳裂解条件。方法以不同的去垢剂浓度和不同裂解时间分别对完整病毒和亚单位疫苗样本进行处理后,利用单向免疫扩... 目的研究单向免疫扩散法测定流感病毒亚单位疫苗不同生产阶段中间产品的血凝素含量实验中,去垢剂对检测结果的影响,寻找最佳裂解条件。方法以不同的去垢剂浓度和不同裂解时间分别对完整病毒和亚单位疫苗样本进行处理后,利用单向免疫扩散实验测定样本的血凝素含量,并对测定结果进行比较和分析。结果亚单位疫苗的单向免疫扩散沉淀圈在去垢剂Zwittergent浓度小于0.125%时随去垢剂浓度的增加而增大,当去垢剂浓度达到0.125%后不再继续增大;而完整病毒的沉淀圈在去垢剂浓度达到1%后才不再增大。以终浓度1%的去垢剂对完整病毒和亚单位疫苗分别处理30、60、120min后进行单向免疫扩散,测定结果比较差异无统计学意义。结论以终浓度1%的去垢剂Zwittergent对完整病毒或亚单位疫苗样本裂解30min后进行单向免疫扩散测定血凝素含量,均可得到稳定准确的结果,有利于提高工作效率、缩小实验间误差、节约实验成本。 展开更多
关键词 单向免疫扩散 流感病毒疫苗 血凝素 亚单位 去垢剂
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流感病毒亚单位疫苗中间体中沙门菌快速检测方法的建立
8
作者 田文莉 祁骥 +1 位作者 杨旭 李小强 《生物技术通讯》 CAS 2013年第3期406-408,共3页
目的:建立一种能够快速、准确地检测流感病毒亚单位疫苗中间体样品中沙门菌污染的方法。方法:首先利用选择性增菌培养基对样品进行增菌培养,然后提取样品中的细菌基因组DNA,通过沙门菌特异性引物对基因组DNA进行PCR扩增,以琼脂糖凝胶电... 目的:建立一种能够快速、准确地检测流感病毒亚单位疫苗中间体样品中沙门菌污染的方法。方法:首先利用选择性增菌培养基对样品进行增菌培养,然后提取样品中的细菌基因组DNA,通过沙门菌特异性引物对基因组DNA进行PCR扩增,以琼脂糖凝胶电泳实现对目的片段的检测。结果:该PCR反应体系的扩增检测灵敏度可达1 pg的沙门菌DNA,利用选择性增菌培养配合该PCR体系可在最快24 h内实现对沙门菌的准确检测,测定结果与传统方法相符。结论:此方法应用于流感病毒亚单位疫苗中间体的沙门菌检查,较之传统的培养法结合生化鉴定的方法,大大缩短了检测周期,降低了结果判读的难度,在实际生产中有很好的应用前景。 展开更多
关键词 流感病毒亚单位疫苗 沙门菌 PCR 增菌培养
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一种用于流感病毒亚单位疫苗纯度分析的改进方法
9
作者 田文莉 邵铭 +5 位作者 祁骥 刘淑珍 谷堃 李长贵 杨旭 李小强 《生物技术通讯》 CAS 2013年第1期98-100,共3页
目的:在SDS-PAGE方法的基础上建立一种改进方法,用于流感病毒亚单位疫苗中间体的杂质分析。方法:用糖苷酶F对不同亚型的疫苗中间体去糖基化处理后进行SDS-PAGE,与未经去糖基化处理的还原型SDS-PAGE结果进行比较。结果:去糖基化处理消除... 目的:在SDS-PAGE方法的基础上建立一种改进方法,用于流感病毒亚单位疫苗中间体的杂质分析。方法:用糖苷酶F对不同亚型的疫苗中间体去糖基化处理后进行SDS-PAGE,与未经去糖基化处理的还原型SDS-PAGE结果进行比较。结果:去糖基化处理消除了血凝素的糖基化对电泳迁移率的影响,从而实现了血凝素亚基和杂质的电泳分离。结论:此方法应用于流感病毒亚单位疫苗中间体的杂质分析,较之常规的还原型SDS-PAGE方法具有更高的分辨力。 展开更多
关键词 流感病毒亚单位疫苗 SDS-PAGE 血凝素 糖苷酶F 去糖基化
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亚单位流感疫苗中裂解剂检测方法的改进
10
作者 田文莉 杨江山 +1 位作者 杨桂华 李小强 《中国药事》 CAS 2012年第1期35-37,共3页
目的改进检测亚单位流感疫苗中裂解剂(壬苯醇醚-9)含量的HPLC方法。方法以C4柱(Thermo BioBasic-4)代替药典使用的C18柱(Thermo BDS Hypersil C18),改变相应流动相比例。结果 C4柱保留时间仅3.27～3.34min,杂峰少,易积分,在5～2500μg.m... 目的改进检测亚单位流感疫苗中裂解剂(壬苯醇醚-9)含量的HPLC方法。方法以C4柱(Thermo BioBasic-4)代替药典使用的C18柱(Thermo BDS Hypersil C18),改变相应流动相比例。结果 C4柱保留时间仅3.27～3.34min,杂峰少,易积分,在5～2500μg.mL-1范围内线性关系良好,回收率约为100%,日内精密度和日间精密度均小于3%。结论 C4柱与C18柱相比更快速准确,更适用于实验室对裂解剂含量的常规检测。 展开更多
关键词 壬苯醇醚-9 HPLC 亚单位流感 疫苗
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