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辣椒SRAP-PCR反应体系的建立与优化 被引量：149
1
作者 任羽 王得元 +2 位作者 张银东 李颖 王恒明 《分子植物育种》 CAS CSCD 2004年第5期689-693,共5页
SRAP标记(Sequence-related amplified polymorphism,序列相关扩增多态性)是由Li和Quiros发展了一种新的分子标记技术。SRAP标记具有简便、稳定、中等产率、在基因组中分布均匀的特点,已经应用于在水稻、棉花、油菜、马铃薯、苹果、柑... SRAP标记(Sequence-related amplified polymorphism,序列相关扩增多态性)是由Li和Quiros发展了一种新的分子标记技术。SRAP标记具有简便、稳定、中等产率、在基因组中分布均匀的特点,已经应用于在水稻、棉花、油菜、马铃薯、苹果、柑橘类果树、樱桃、梅子、大蒜、莴苣及芹菜等植物和水稻稻瘟病的研究中,对开展遗传图谱构建、基因定位与克隆、比较基因组学、cDNA指纹图谱、生物多样性研究、预测杂种优势等研究是一个十分实用的工具。本研究对辣椒SRAP反应体系的程序、模板、Mg2+等参数进行优化研究,结果表明:辣椒的PCR程序为94℃预变性5min,94℃变性1min,35℃复性1min,72℃延伸1min,5循环,94℃变性1min,50℃复性1min,72℃延伸1min,35循环,最后72℃延伸10min;25滋l反应体系中,模板量为15ng,Mg2+为2.0mmol/L。本研究建立的辣椒SRAP体系重复性好、稳定性强。 展开更多
关键词 辣椒 SRAP-PCR反应体系 体系建立 优化技术
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拟南芥LFY cDNA的克隆及转化菊花的研究 被引量：80
2
作者 邵寒霜 李继红 +1 位作者 郑学勤 陈守才 《Acta Botanica Sinica》 CSCD 1999年第3期268-271,共4页
以野生型拟南芥（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓｔｈａｌｉａｎａ（Ｌ．）Ｈｅｙｎｈ．）为材料，克隆并测序了Ｌｅａｆｙ（ＬＦＹ）基因的全长ｃＤＮＡ；同时构建了ＬＦＹｃＤＮＡ以ＣａＭＶ３５Ｓ为启动子的植物表达载体，并转化菊花（Ｃｈ... 以野生型拟南芥（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓｔｈａｌｉａｎａ（Ｌ．）Ｈｅｙｎｈ．）为材料，克隆并测序了Ｌｅａｆｙ（ＬＦＹ）基因的全长ｃＤＮＡ；同时构建了ＬＦＹｃＤＮＡ以ＣａＭＶ３５Ｓ为启动子的植物表达载体，并转化菊花（Ｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｕｍｍｏｒｉｆｏｌｉｕｍ（Ｒａｍａｔ．）Ｔｚｖｅｌ．）。该ｃＤＮＡ全长１２６３ｂｐ，共编码４２０个氨基酸残基，Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交结果表明，ＬＦＹｃＤＮＡ整合到菊花染色体组中。跟正常植株相比，转基因植株中有３株分别提早６５、６７、７０ｄ开花，２株分别推迟７８、９０ｄ开花。 展开更多
关键词 LFYcDNA 序列分析 转化 菊花 拟南芥
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开发SSR引物方法之研究动态 被引量：78
3
作者 李明芳 郑学勤 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期769-776,共8页
SSR标记是一种基于DNA长度多态性的分子标记技术,是进行群体遗传结构分析、构建遗传连锁图谱非常有效的工具。由于SSR标记是特异引物标记,必须在知道某个物种DNA序列的前提下,才能设计引物进行PCR扩增,故而存在一个引物开发的问题。从SS... SSR标记是一种基于DNA长度多态性的分子标记技术,是进行群体遗传结构分析、构建遗传连锁图谱非常有效的工具。由于SSR标记是特异引物标记,必须在知道某个物种DNA序列的前提下,才能设计引物进行PCR扩增,故而存在一个引物开发的问题。从SSR标记的发展历程来看,开发SSR引物的方法有经典的构建与筛选基因组文库的方法、微卫星富集法、省略筛库法和数据库搜索法等四种。综述了这4种方法的操作流程及其在实际应用中的优缺点,并对近年来SSR引物在相近的物种间转移使用的情况作了介绍。 展开更多
关键词 SSR标记 SSR引物 开发SSR引物 SSR引物的可转移性
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核酸序列直接分析在真菌鉴定方面的应用 被引量：66
4
作者 张志华 洪葵 《华南热带农业大学学报》 2006年第2期39-43,共5页
综述核酸序列直接分析在真菌分类鉴定方面的基础理论及特点,介绍核酸序列直接分析在真菌鉴定方面的应用及常用的引物,比较真菌分类鉴定中常用的18SrDNA,ITS分子生物学方法。
关键词 真菌鉴定 核酸序列直接分析 18S RDNA ITS
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植物多酚氧化酶研究进展 被引量：44
5
作者 黄明 彭世清 《广西师范大学学报（自然科学版）》 CAS 1998年第2期65-70,共6页
多酚氧化酶（ＰｏｌｙｐｈｅｎｏｌＯｘｉｄａｓｅ简称ＰＰＯ）是一类广泛分布于植物体内能催化多酚类氧化成醌类的质体金属酶．ＰＰＯ由核基因编码，在细胞质中合成，通过一定的方式转运至质体内而成为具酶活性的形式．ＰＰＯ的底物（... 多酚氧化酶（ＰｏｌｙｐｈｅｎｏｌＯｘｉｄａｓｅ简称ＰＰＯ）是一类广泛分布于植物体内能催化多酚类氧化成醌类的质体金属酶．ＰＰＯ由核基因编码，在细胞质中合成，通过一定的方式转运至质体内而成为具酶活性的形式．ＰＰＯ的底物（酚类物质）存在于液泡．这种酶与底物的区域分布，使得ＰＰＯ在完整细胞内的生理功能难以确定．ＰＰＯ基因已分别从番茄、马铃薯、苹果、葡萄等植物中克隆成功．ＰＰＯ基因属于一个基因家族． 展开更多
关键词 多酚氧化酶 组织细胞定位 生理功能 植物
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多价不饱和脂肪酸分离与纯化技术进展 被引量：63
6
作者 黄惠琴 鲍时翔 《中国油脂》 CAS CSCD 北大核心 1999年第2期32-34,共3页
多价不饱和脂肪酸以其独特的生物活性引起了人们极大兴趣，分离纯化技术是多价不饱和脂肪酸工业化生产的关键之一。分析了多价不饱和脂肪酸分离纯化的特点，对低温结晶法、尿素包合法、分子蒸馏法、吸附分离法、超临界流体萃取法、脂肪... 多价不饱和脂肪酸以其独特的生物活性引起了人们极大兴趣，分离纯化技术是多价不饱和脂肪酸工业化生产的关键之一。分析了多价不饱和脂肪酸分离纯化的特点，对低温结晶法、尿素包合法、分子蒸馏法、吸附分离法、超临界流体萃取法、脂肪酶浓缩法等技术进行了评述。 展开更多
关键词 多价 不饱和脂肪酸 油脂 分离 提纯
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兰科植物菌根真菌的研究进展 被引量：44
7
作者 范黎 郭顺星 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第4期227-230,共4页
关键词 兰科植物 菌根真菌 丝核菌
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甘蔗根癌农杆菌介导转化海藻糖合酶基因获得抗渗透胁迫能力增强植株 被引量：42
8
作者 王自章 张树珍 +1 位作者 杨本鹏 李杨瑞 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期140-146,共7页
由双拷贝CaMV35S启动子驱动担子菌灰树花 (Grifolafrondosa)的海藻糖合酶基因 (TSase)构建植物表达载体 pBBBT ,通过三亲交配法将 pBBBT导入根癌农杆菌EHA10 5菌株 ,经根癌农杆菌介导转化甘蔗 (Saccha rumhybrid)栽培品种 ,以增强甘蔗... 由双拷贝CaMV35S启动子驱动担子菌灰树花 (Grifolafrondosa)的海藻糖合酶基因 (TSase)构建植物表达载体 pBBBT ,通过三亲交配法将 pBBBT导入根癌农杆菌EHA10 5菌株 ,经根癌农杆菌介导转化甘蔗 (Saccha rumhybrid)栽培品种 ,以增强甘蔗的抗旱能力。结果表明 ,甘蔗胚性愈伤组织对EHA10 5菌株敏感 ,甘蔗外植体开始大量形成胚性愈伤组织时是感染的适宜时期 ,用膦丝菌素 (PPT)筛选 ,抗性植株发生频率平均为 4 .5 %。经PCR及dot Southern检测证明 ,TSase已经整合到甘蔗基因组中。部分转化植株根叶畸形、株型异常、生长缓慢。移栽到含PEG80 0 0 17.4 % (w/v)的MS培养基后 。 展开更多
关键词 甘蔗 根癌 农杆菌介导转化 海藻糖合酶基因 抗渗透胁迫能力 增强植株
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中国野生葡萄抗黑痘病基因的RAPD标记 被引量：27
9
作者 王跃进 王西平 +1 位作者 周鹏 郑学勤 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第5期321-325,共5页
以葡萄种间杂交组合 90 3(毛葡萄商 - 2 4×欧洲葡萄龙眼 )的F1群体为试材 ,运用RAPD技术 ,采用集群分离分析 (BulkedSegregantAnalysis ,BSA)方法进行中国野生葡萄抗黑痘病基因连锁的分子标记研究 ,获得了与抗病基因相连锁的RAP... 以葡萄种间杂交组合 90 3(毛葡萄商 - 2 4×欧洲葡萄龙眼 )的F1群体为试材 ,运用RAPD技术 ,采用集群分离分析 (BulkedSegregantAnalysis ,BSA)方法进行中国野生葡萄抗黑痘病基因连锁的分子标记研究 ,获得了与抗病基因相连锁的RAPD标记OPV0 2 6 0 0 。 展开更多
关键词 葡萄 黑痘病 RAPD 抗病基因 分子标记
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植物多酚氧化酶的研究进展 被引量：28
10
作者 彭世清 《热带农业科学》 2000年第3期61-66,共6页
植物多酚氧化酶是一类含铜的金属蛋白 ,催化单元酚和二元酚等多元酚到联苯酚以及联苯酚到醌的脱氢反应。植物多酚氧化酶被认为是许多果实等农产品有害褐变的主要原因 ,同时被认为与病原体或虫害相互作用有关 ,只是目前仍缺少直接的证据... 植物多酚氧化酶是一类含铜的金属蛋白 ,催化单元酚和二元酚等多元酚到联苯酚以及联苯酚到醌的脱氢反应。植物多酚氧化酶被认为是许多果实等农产品有害褐变的主要原因 ,同时被认为与病原体或虫害相互作用有关 ,只是目前仍缺少直接的证据。就植物多酚氧化酶的功能、发生和基因及其表达等方面进行了简要的综述和探讨。 展开更多
关键词 植物 多酚氧化酶 功能 基因 表达
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核果类基因组DNA提取和RAPD条件优选 被引量：30
11
作者 沈向 郑学勤 +1 位作者 任小林 李嘉瑞 《山东农业大学学报（自然科学版）》 CSCD 1999年第2期154-160,共7页
采用３种方法分离杏、桃等核果类树种的基因组ＤＮＡ，比较了其分离效果。并以此为模板进行ＲＡＰＤ反应，调整ＲＡＰＤ反应体系组成和热循环条件，以进行该树种的系统分类研究。
关键词 核果类 基因组DNA RAPD
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利用套叠PCR技术进行基因突变和拼接 被引量：43
12
作者 周鹏 董克家 《生命科学研究》 CAS CSCD 2001年第1期52-55,共4页
利用套叠 PCR技术 (又称重叠区扩增基因拼接法 )对 h GM-CSF基因内第 2 8位氨基酸处的糖基化位点进行突变和进行人促性腺激素基因、腺苷酸激酶短肽与胰岛素样生长因子 -I基因三者之间的拼接 ,结果表明采用该技术能在体外实行有效的基因... 利用套叠 PCR技术 (又称重叠区扩增基因拼接法 )对 h GM-CSF基因内第 2 8位氨基酸处的糖基化位点进行突变和进行人促性腺激素基因、腺苷酸激酶短肽与胰岛素样生长因子 -I基因三者之间的拼接 ,结果表明采用该技术能在体外实行有效的基因重组和定点突变 ,其成功率为 1 0 0 % ;这一技术不需要内切酶消化和连接酶处理 ,技术操作简单易行 ,在基因拼接。 展开更多
关键词 套叠PCR 基因拼接 基因突变
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海藻糖的研究进展及其应用前景 被引量：25
13
作者 张树珍 《华南热带农业大学学报》 2000年第3期22-29,共8页
综述海藻糖的理化性质、来源、相关的酶及其对生物分子的保护特性、作用机理和可能的应用前景。
关键词 海藻糖 理化性质 作用机理 代谢途径 保护特性
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橡胶树新种植材料——自根幼态无性系 被引量：41
14
作者 陈雄庭 王泽云 +1 位作者 吴胡蝶 张秀娟 《热带作物学报》 CSCD 2002年第1期19-23,共5页
大田试验结果表明:橡胶微繁无性系离地50 cm处平均茎围为对照(老态的供体无性系)的1303%,花药体细胞植株离地50cm处平均茎围为对照(老态的供体无性系)的109.1%～120.2%,头4 a平均单株干胶产量为对照的129.9%～146.3%,自根幼态无性系和... 大田试验结果表明:橡胶微繁无性系离地50 cm处平均茎围为对照(老态的供体无性系)的1303%,花药体细胞植株离地50cm处平均茎围为对照(老态的供体无性系)的109.1%～120.2%,头4 a平均单株干胶产量为对照的129.9%～146.3%,自根幼态无性系和供体无性系相比,这2个性状均达显著差异.说明橡胶自根幼态无性系是一种速生、高产的种植材料. 展开更多
关键词 橡胶树 自根幼态无性系 高产性 速生性状
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以农杆菌为介导花生遗传转化研究 被引量：27
15
作者 单世华 李春娟 +3 位作者 刘思衡 官德义 林俊芳 庄伟建 《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期9-13,共5页
应用花生丛生芽再生体系 ,以农杆菌为介导将含有几丁质酶和 β - 1,3-葡聚糖酶抗病基因的植物双价表达载体 pCGⅡ转入花生品种泉花 10号和金花 10 12 ,获得转基因植株 ,并已通过PCR和Southernblot鉴定。研究表明 ,侵染时间以 5～ 15min... 应用花生丛生芽再生体系 ,以农杆菌为介导将含有几丁质酶和 β - 1,3-葡聚糖酶抗病基因的植物双价表达载体 pCGⅡ转入花生品种泉花 10号和金花 10 12 ,获得转基因植株 ,并已通过PCR和Southernblot鉴定。研究表明 ,侵染时间以 5～ 15min的效果较好 ,侵染时间过长不利于提高转化率 ;0～ 1d预培养对基因转化有利 ,预培养2d可使转化率下降。 展开更多
关键词 花生 农杆菌介导 丛生芽 基因转化
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海南豆科饲用植物资源及营养价值评价 被引量：37
16
作者 刘国道 罗丽娟 +2 位作者 白昌军 王东劲 郑学勤 《草地学报》 CAS CSCD 2006年第3期254-260,共7页
全面考察了海南及其周边岛屿,报道了海南豆科饲用植物资源及其分布情况,记载饲用豆科植物57属211种,并分析其中48种植物的化学成分,测定其中23种植物的叶黄素和β-胡萝卜素含量。
关键词 海南 豆科饲用植物 评价
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中国柱花草炭疽病原菌遗传多态性的RAPD分析 被引量：30
17
作者 易克贤 黄俊生 +2 位作者 刘国道 Pualine Weeds Sukumar Charkraborty 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期379-387,共9页
在对中国柱花草炭疽病进行广泛调查和病原采样收集的基础上 ,利用RAPD分子标记技术对 43个代表性菌株进行了基因组DNA分析 ,并与 2 76份国外菌株进行了综合聚类分析。结果表明所用 8个引物的扩增片段位于 0 3～ 2 8kb之间 ,菌株间呈... 在对中国柱花草炭疽病进行广泛调查和病原采样收集的基础上 ,利用RAPD分子标记技术对 43个代表性菌株进行了基因组DNA分析 ,并与 2 76份国外菌株进行了综合聚类分析。结果表明所用 8个引物的扩增片段位于 0 3～ 2 8kb之间 ,菌株间呈现显著的DNA多态性。以柱花草起源中心———南美的柱花草炭疽菌分类为基础 ,中国柱花草炭疽菌可划分成 3大类型即Ⅱ、Ⅲ、Ⅵ类。中国菌株与来自柱花草起源中心———南美的菌株相比之下 ,其生物多样性和遗传变异性则相对简单。就中国菌株而言海南菌株与广西、广东菌株相比多样性较丰富 ,中国柱花草胶孢炭疽菌正在出现种内遗传分化。从聚类结果看 ,通常来自于同一个地理区域或同一个寄主基因型的菌株聚成一类 ,即同一RAPD聚类组内的菌株通常来自于同一寄主基因型或同一地理区域。说明来自不同寄主基因型或物种的炭疽菌在遗传基因上具有专化性 ,而地理上隔离的国家或地区的柱花草炭疽病原菌各自具有相对独立的进化途径。 展开更多
关键词 中国柱花草 炭疽病原菌 遗传多态性 RAPD分析 豆科牧草
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食用菌遗传转化研究进展 被引量：33
18
作者 郭丽琼 陈守才 林俊芳 《食用菌学报》 2001年第4期47-53,共7页
食用菌遗传转化的方法主要有PEG法、电激法、基因枪法、限制酶介导法、农杆菌介导法 ;采用的启动子有ras启动子和 gpd启动子 ;采用的筛选标记有营养缺陷型标记、抗生素抗性筛选标记、除草剂和杀菌剂抗性筛选标记、代谢产物抗性筛选标记... 食用菌遗传转化的方法主要有PEG法、电激法、基因枪法、限制酶介导法、农杆菌介导法 ;采用的启动子有ras启动子和 gpd启动子 ;采用的筛选标记有营养缺陷型标记、抗生素抗性筛选标记、除草剂和杀菌剂抗性筛选标记、代谢产物抗性筛选标记。本文综述了这些遗传转化方法以及启动子、筛选标记的最新研究进展。 展开更多
关键词 食用菌 遗传转化 限制酶介导法 农杆菌介导法 筛选标记 育种
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中国野生葡萄果实抗炭疽病基因的RAPD标记 被引量：25
19
作者 王跃进 徐炎 +1 位作者 张剑侠 周鹏 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期536-540,共5页
以葡萄种间杂交组合 88 110 [毛葡萄 83 4 96 (♀ )×欧洲葡萄粉红玫瑰 ]的F1群体为试材 ,运用RAPD技术 ,采用集群分离分析 (bulkedsegregantanalysis,BSA)法进行中国野生葡萄抗炭疽病基因连锁的分子标记研究。获得了与抗炭疽病基... 以葡萄种间杂交组合 88 110 [毛葡萄 83 4 96 (♀ )×欧洲葡萄粉红玫瑰 ]的F1群体为试材 ,运用RAPD技术 ,采用集群分离分析 (bulkedsegregantanalysis,BSA)法进行中国野生葡萄抗炭疽病基因连锁的分子标记研究。获得了与抗炭疽病基因相连锁的RAPD标记 :OPC15 130 0 ,并在 5 0株杂种后代、中国野生葡萄 8种 32个株系、14个欧洲葡萄品种中证明了该标记是可以遗传的。 展开更多
关键词 抗病性 中国 野生葡萄果实 抗炭疽病基因 PAPD标记
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抗冷冻蛋白基因遗传转化草菇的研究 被引量：34
20
作者 郭丽琼 林俊芳 +1 位作者 熊盛 陈守才 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期39-43,共5页
采用RT PCR技术从瑞典的北极云杉卷叶蛾幼虫中扩增出抗冷冻蛋白基因 ,利用基因枪法遗传转化草菇。PCR检测和Southern杂交结果证明 ,抗冷冻蛋白基因已整合进草菇基因组。低温胁迫试验结果表明 ,转基因草菇具有较强的耐低温能力。转基因... 采用RT PCR技术从瑞典的北极云杉卷叶蛾幼虫中扩增出抗冷冻蛋白基因 ,利用基因枪法遗传转化草菇。PCR检测和Southern杂交结果证明 ,抗冷冻蛋白基因已整合进草菇基因组。低温胁迫试验结果表明 ,转基因草菇具有较强的耐低温能力。转基因草菇生物学特性观测结果显示 ,大多数草菇转化子的生长速率明显地慢于对照的宿主菌株 ,多数转化子的菌丝也明显地比宿主菌丝细弱。转化子筛选结果表明 ,采用三轮的转化子筛选程序 ,即第一轮在固体培养基上筛选、第二轮和第三轮在液体培养基中筛选 ,有利于获得真实转化子和淘汰假转化子。转基因草菇一代低温胁迫结果证明 ,转基因草菇后代仍然具有较强的低温耐受能力 。 展开更多
关键词 草菇 抗冷冻蛋白基因 转化 基因枪法
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