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SARS-CoV假病毒中和试验技术的建立及评价 被引量:14
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作者 闫克夏 谭文杰 +3 位作者 张相民 王慧娟 李岩 阮力 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期440-446,共7页
为避免传统的SARS病毒中和试验需要操作活毒而存在的生物安全隐患,建立了基于假病毒系统、操作较安全的SARS中和试验技术平台。本研究应用高效表达SARS-CoV S(密码子优化的全长S蛋白,简称S)的真核表达载体(pVRC8304),与HIV慢病毒包装质... 为避免传统的SARS病毒中和试验需要操作活毒而存在的生物安全隐患,建立了基于假病毒系统、操作较安全的SARS中和试验技术平台。本研究应用高效表达SARS-CoV S(密码子优化的全长S蛋白,简称S)的真核表达载体(pVRC8304),与HIV慢病毒包装质粒(p CMV△8.2)及转移质粒(pHR′CMV EGFP)3个质粒载体系统共同转染人胚肾细胞293T,包装了SARS假病毒;通过SARS假病毒感染的RD-A细胞中标记基因EGFP表达的分析,确定SARS假病毒能有效进入细胞,建立了可在BSL-2级实验室操作的SARS病毒中和试验技术平台。用该技术平台对不同免疫血清进行了中和抗体分析,并比较了基于假病毒和基于SARS活病毒的中和试验效果。结果显示:SARS假病毒和SARS活病毒两个中和试验系统获得中和抗体滴度变化趋势一致,表明本研究构建的SARS假病毒可替代SARS活病毒用于建立操作上安全的SARS病毒中和试验技术平台。 展开更多
关键词 SARS-COV S蛋白 假病毒 中和试验
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鸡新城疫病毒中和单克隆抗体的制备及鉴定 被引量:2
2
作者 李青梅 王丽 +9 位作者 冯丽丽 张雨杭 赵东 杨艳艳 邢广旭 柴书军 李赛赛 张丽萍 郭军庆 张改平 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2017年第1期127-131,共5页
采用差速离心法纯化鸡新城疫病毒(NDV)标准毒株F48E8,免疫Balb/c小鼠,应用杂交瘤细胞技术制备抗NDV单克隆抗体,旨在为NDV中和抗原表位分析奠定基础。将NDV感染BHK-21细胞,建立异源免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)的单克隆抗体检测方法... 采用差速离心法纯化鸡新城疫病毒(NDV)标准毒株F48E8,免疫Balb/c小鼠,应用杂交瘤细胞技术制备抗NDV单克隆抗体,旨在为NDV中和抗原表位分析奠定基础。将NDV感染BHK-21细胞,建立异源免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)的单克隆抗体检测方法,筛选获得14株分泌抗NDV单克隆抗体杂交瘤细胞株,其单克隆抗体腹水IPMA效价均在0.50×10-2~2.56×10-5(F48E8株和La Sota株)。血凝抑制试验(HI)结果表明,单克隆抗体1G6、2C1、4D2、5F2和13A5具有血凝抑制活性,其HI效价在(6~12)log2(F48E8株)和(9~11)log2(La Sota株)。病毒中和试验结果表明,单克隆抗体5F2和13A5对F48E8株和La Sota株均有明显的病毒中和活性,中和效价分别为1∶400~1∶800和1∶25。夹心ELISA结果表明,单克隆抗体5F2识别NDV HN蛋白,13A5识别F蛋白。综上,成功制备了具有中和活性的NDV单克隆抗体(5F2和13A5)。 展开更多
关键词 鸡新城疫病毒 单克隆抗体 免疫过氧化物酶单层细胞试验 血凝抑制试验 中和试验 中和活性
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用于抗西尼罗病毒药物筛选的假病毒报告系统的建立 被引量:4
3
作者 卢星 胡乃静 +7 位作者 王志宏 陈国江 王晶 乔春霞 罗龙龙 沈倍奋 冯健男 肖鹤 《国际药学研究杂志》 CAS 北大核心 2020年第5期342-346,共5页
目的为避免西尼罗病毒(WNV)研究中活病毒所带来的安全隐患,建立WNV的假病毒报告系统,用于抗WNV药物的筛选。方法构建含有海蜃荧光素酶报告基因的WNV复制子重组质粒prWNV-Rluc及表达WNV结构蛋白C、M和E的重组质粒pcDNA3.1-CME,并共转染2... 目的为避免西尼罗病毒(WNV)研究中活病毒所带来的安全隐患,建立WNV的假病毒报告系统,用于抗WNV药物的筛选。方法构建含有海蜃荧光素酶报告基因的WNV复制子重组质粒prWNV-Rluc及表达WNV结构蛋白C、M和E的重组质粒pcDNA3.1-CME,并共转染293T细胞,72 h后获取含有假病毒的培养上清。结果用上清感染BHK21细胞后,BHK21细胞产生荧光,且荧光强度与感染细胞的假病毒量呈量效关系。Western印迹法实验检测到感染的BHK21细胞表达WNV NS1蛋白,证实上清中为WN假病毒。中和实验显示WNV中和性抗体能有效阻断WN假病毒对BHK21细胞的感染。结论建立了WNV的假病毒报告系统,规避了生物安全3级实验室(BSL-3)操作,可用于抗WNV药物的筛选。 展开更多
关键词 西尼罗病毒 假病毒 中和实验
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应用假病毒和假型病毒制备抗猪瘟病毒E2蛋白中和性单克隆抗体的初步研究 被引量:4
4
作者 陈景艳 尹晓磊 +5 位作者 王宜 袁丽 王超 邓宏魁 钱永华 袁克湖 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期289-293,共5页
为制备抗猪瘟病毒(CSFV)单克隆抗体(MAb),本实验以表达CSFV E2囊膜糖蛋白的水泡口炎假病毒免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合;利用间接ELISA方法和携带荧光素酶(Luciferase)报告基因的HIV-luc/CSFV-E1&E2假病毒... 为制备抗猪瘟病毒(CSFV)单克隆抗体(MAb),本实验以表达CSFV E2囊膜糖蛋白的水泡口炎假病毒免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合;利用间接ELISA方法和携带荧光素酶(Luciferase)报告基因的HIV-luc/CSFV-E1&E2假病毒系统筛选分泌中和性E2MAb的杂交瘤细胞;测定MAb亚型并纯化后,间接ELISA方法测定MAb的效价;采用western blot鉴定MAb的特异性亲和力;利用HIV-luc/CSFV-E1&E2假病毒进行体外中和试验,分析MAb抑制病毒感染的能力。结果表明本实验获得了1株分泌中和性MAb的杂交瘤细胞9C8,该MAb能与E2蛋白特异性结合,而且体外抑制试验中和效价大于1∶25600。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 中和性单克隆抗体 假病毒 中和试验
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基于猪流行性腹泻病毒GⅡb亚型重组荧光病毒中和抗体检测方法的建立
5
作者 林莉莉 张梦迪 +5 位作者 朱琳琳 马海龙 孙琪 何启盖 张梦佳 李文涛 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期1649-1660,共12页
2010年以来,猪流行性腹泻病毒(PEDV)GⅡ型变异毒株的出现,导致全世界范围内猪流行性腹泻(PED)的病死率显著增加。疫苗免疫是PED有效防控的重要策略之一,疫苗诱导的中和抗体水平是免疫效果评价和疫苗质量评估的重要指标。然而,在Vero-CC... 2010年以来,猪流行性腹泻病毒(PEDV)GⅡ型变异毒株的出现,导致全世界范围内猪流行性腹泻(PED)的病死率显著增加。疫苗免疫是PED有效防控的重要策略之一,疫苗诱导的中和抗体水平是免疫效果评价和疫苗质量评估的重要指标。然而,在Vero-CCL81上开展的PEDV经典中和试验中所添加的胰酶会导致试验结果不稳定等问题。本研究拟在构建稳定表达绿色荧光蛋白的重组病毒基础上,建立一种能准确评估样品中和抗体的检测方法。本研究在pUC57载体上克隆插入GⅡb亚型PEDV-GDU株部分ORF1a和ORF1b基因片段与其他结构基因片段,并通过无缝克隆技术将ORF3基因替换为EGFP基因,构建辅助质粒pUC57-PEDV-GDU-dORF3-EGFP,通过RNA定向重组技术拯救重组荧光病毒rPEDV-GDU-dORF3-EGFP。进一步通过间接免疫荧光试验(IFA)、Western blot和病毒生长曲线测定等方法,比较重组荧光病毒和亲本病毒生物学特性。最终利用重组荧光工具病毒筛选在不添加胰酶的条件下仍能支持PEDV有效增殖的细胞系,并建立中和试验方法。结果表明,成功拯救重组荧光病毒rPEDV-GDU-dORF3-EGFP,且在Vero-CCL81细胞上,重组荧光病毒与亲本病毒呈现相似的生物学特性。利用该重组荧光病毒筛选到一株亚克隆Huh7.10细胞可支持PEDV在无外源胰酶添加条件下的有效感染与复制。并利用Huh7.10细胞和重组荧光病毒成功建立了PEDV中和试验方法,相关性试验分析表明,该方法测定结果与ELISA抗体检测结果相关性高于PEDV经典中和试验。以上试验结果表明,本研究成功建立了PEDV-GDU毒株的反向遗传操作平台,为PED新型疫苗候选毒株的快速制备提供了有力的工具。此外,基于重组荧光病毒在Huh7.10细胞上建立的中和试验方法能更准确地测定血清中和抗体水平,为疫苗免疫效果的评估提供了有效的技术支持手段。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 反向遗传学 胰蛋白酶 报告病毒 中和试验
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一种新型冠状病毒假病毒的制备及初步应用 被引量:4
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作者 殷建国 谢欣 高腾森 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第4期363-368,共6页
目的制备一种新型冠状病毒(SARS-CoV-2)假病毒,并将其应用于抗体中和能力检测和抗体广谱性评估。方法整合2种近期出现的SARS-CoV-2变异病毒株(20A.EU1和B.1.1.7)刺突(spike,S)蛋白的突变序列、以及对胞浆区肽段19个氨基酸进行局部缺失突... 目的制备一种新型冠状病毒(SARS-CoV-2)假病毒,并将其应用于抗体中和能力检测和抗体广谱性评估。方法整合2种近期出现的SARS-CoV-2变异病毒株(20A.EU1和B.1.1.7)刺突(spike,S)蛋白的突变序列、以及对胞浆区肽段19个氨基酸进行局部缺失突变,构建突变型S蛋白表达质粒,转染293T细胞进行表达,用Western blot和流式细胞术检测确认S蛋白的表达。将S蛋白表达质粒与其它慢病毒包装质粒共转染293T细胞进行假病毒的包装,用包装好的假病毒分别感染293T-h ACE2细胞和Huh-7细胞,并进行假病毒的半数组织感染剂量(TCID_(50))检测。利用所制备的假病毒对1株抗S蛋白的单克隆抗体(YK-01)进行抗体的中和能力评价。结果Western blot和流式细胞术检测结果显示野生型和突变型S蛋白在293T细胞中表达水平一致,突变型S蛋白在细胞膜表面的分布量略高于野生型。相同的病毒包装条件下,所获得的突变型假病毒感染293T-hACE2细胞的TCID_(50)值为6.30×10^(6),野生型假病毒的TCID_(50)值为1.83×10^(6)。在Huh-7细胞中虽然能够观察到GFP阳性细胞,但GFP阳性细胞比例以及荧光强度均较低。对抗体的中和能力评价结果显示,从新冠肺炎的康复患者的血液筛选获得的YK-01抗体能够有效的中和2种假病毒,抑制假病毒对293T-h ACE2细胞的感染,该抗体对野生型假病毒的IC_(50)值为0.0614μg/ml,对突变型假病毒的IC_(50)值为0.3152μg/ml。结论成功制备了可替代20A.EU1和B.1.1.7变异毒株的假病毒,可用于针对SARS-CoV-2 S蛋白研发出的疫苗或抗体药物疫苗和抗体药物的筛选和相关性能的评价。 展开更多
关键词 新型冠状病毒肺炎 新型冠状病毒 中和分析 中和抗体 假病毒
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人乳头瘤病毒(HPV)58型DNA疫苗免疫原性的初步分析 被引量:3
7
作者 吴雪伶 聂建辉 +3 位作者 张春涛 吴瑜 赵晨燕 王佑春 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期196-201,共6页
为了检测HPV58型不同L1基因的DNA疫苗的免疫原性,以pcDNA3.1为载体分别构建含HPV58型不同L1基因的DNA疫苗,命名为L1h、L1h△c、L1S、L1SM和L1wt。用免疫印迹法检测各DNA疫苗的体外表达情况;各重组质粒与pcDNA3.1-h58L2和pcDNA3.1-GFP共... 为了检测HPV58型不同L1基因的DNA疫苗的免疫原性,以pcDNA3.1为载体分别构建含HPV58型不同L1基因的DNA疫苗,命名为L1h、L1h△c、L1S、L1SM和L1wt。用免疫印迹法检测各DNA疫苗的体外表达情况;各重组质粒与pcDNA3.1-h58L2和pcDNA3.1-GFP共转染293FT细胞,检测其形成假病毒的能力;并将各DNA疫苗肌肉注射免疫小鼠,利用假病毒中和实验检测中和抗体水平,用ELISPOT检测细胞免疫情况。结果显示,本实验成功构建了五种DNA疫苗,L1h△c的体外表达量最高,L1S和L1SM的表达量次之,L1wt没有表达;重组质粒L1S能够形成假病毒,而其他四种重组质粒均不能形成假病毒。L1S和L1h均可在小鼠体内诱导中和抗体,但L1S诱导的中和抗体的平均滴度为1:6400,明显高于L1h诱导的中和抗体水平(平均滴度为1:48),而其他疫苗在小鼠体内未产生中和抗体。对五种疫苗均未检测出特异性的细胞免疫反应。结果提示,体外能够组装成假病毒的DNA疫苗在免疫动物后可诱导高滴度的中和抗体,为今后DNA疫苗的筛选提供参考。 展开更多
关键词 人乳头瘤病毒58型 密码子优化 DNA疫苗 假病毒 中和试验
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两种高危型HPV假病毒的构建及其在血清中和抗体测定中的应用 被引量:3
8
作者 李雄雄 董占柱 +2 位作者 吴元元 安静 马超 《微生物学免疫学进展》 2019年第5期1-9,共9页
目的 构建人乳头瘤病毒(human papillomavirus, HPV)16型(HPV16)和18型(HPV18)假病毒,探索优化假病毒制备的条件,并利用制备的假病毒评价HPV疫苗血清抗体的中和活性。方法 将优化后的HPV16和HPV18 L1、L2和EGFP基因片段分别插入pcDNA3.1... 目的 构建人乳头瘤病毒(human papillomavirus, HPV)16型(HPV16)和18型(HPV18)假病毒,探索优化假病毒制备的条件,并利用制备的假病毒评价HPV疫苗血清抗体的中和活性。方法 将优化后的HPV16和HPV18 L1、L2和EGFP基因片段分别插入pcDNA3.1+载体中,通过多质粒共转染293FT细胞制备假病毒。对转染试剂、多质粒共转染比例、转染时间和细胞裂解时间进行摸索优化,通过测定假病毒的滴度,确定假病毒制备的最佳条件。收获的假病毒用30%的碘克沙醇作为介质进行超速离心纯化,纯化后的假病毒用于电镜观察。利用假病毒中和试验对制备的原核表达复性蛋白HPV16 L1免疫血清以及HPV16和HPV18病毒样颗粒(virus-like particles, VLP)免疫血清进行中和活性评价。结果 成功构建了假病毒,并确定了假病毒制备的最佳条件:pL1∶pL2∶pEGFP等3种质粒共转染比例为1∶0.1∶0.5,总量为4μg;转染时间为72 h,细胞裂解时间为24 h时获得的假病毒滴度最高。透射电镜观察结果显示,HPV16和HPV18假病毒颗粒基本呈规则圆形,形态上与天然病毒颗粒相似。中和试验结果显示,当用原核表达复性蛋白HPV16 L1免疫血清中和HPV16假病毒时,并不能抑制假病毒的感染活性;但HPV16和18 VLP免疫血清能明显的抑制HPV16和HPV18假病毒的感染活性。结论 成功构建并制备了2种高危型HPV假病毒,并可用于中和试验评价HPV疫苗血清抗体的中和活性。 展开更多
关键词 高危型人乳头瘤病毒 假病毒 中和试验 感染活性
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化学发光法中和抗体检测技术对广州地区人5型腺病毒的流行病学研究 被引量:3
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作者 苏晓波 马鑫 +3 位作者 洪喆瑜 吴后波 王友绍 陈凌 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期1323-1326,1330,共5页
目的建立高通量、可定量中和抗体检测方法,并且调查广州健康成人及儿童人群中人5型腺病毒中和抗体存在情况。方法采用以带有分泌型碱性磷酸酶报告基因的5型重组腺病毒使用化学发光法,调查116份成人血清和94份儿童血清中5型腺病毒中和抗... 目的建立高通量、可定量中和抗体检测方法,并且调查广州健康成人及儿童人群中人5型腺病毒中和抗体存在情况。方法采用以带有分泌型碱性磷酸酶报告基因的5型重组腺病毒使用化学发光法,调查116份成人血清和94份儿童血清中5型腺病毒中和抗体情况。结果该方法是一种适合高通量调查的血清学调查方法,广州地区成人中人5型腺病毒中和抗体阳性比例占26.72%,儿童中阳性比例为17.02%。结论5型腺病毒在广州人群中具有一定的免疫程度,结合中和实验结果来应用该种病毒载体并同时开发其他血清型的腺病毒载体很有必要。 展开更多
关键词 人5型腺病毒 化学发光法 中和试验 流行病学研究
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HIV-1膜抗原部分糖基化位点改造对免疫原性及假病毒形成的影响 被引量:2
10
作者 聂建辉 张春涛 +5 位作者 种辉辉 刘春雨 吴雪伶 吴瑜 赵晨燕 王佑春 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期540-544,共5页
目的研究HIV-1膜蛋白(Env)特定糖基化位点改造对Env免疫原性及功能性假病毒形成能力的影响。方法采用环形诱变,DpnⅠ筛选的方法对Env进行定点突变,单周期感染试验检测功能性假病毒形成能力,免疫小鼠,利用假病毒中和试验与ELISPOT... 目的研究HIV-1膜蛋白(Env)特定糖基化位点改造对Env免疫原性及功能性假病毒形成能力的影响。方法采用环形诱变,DpnⅠ筛选的方法对Env进行定点突变,单周期感染试验检测功能性假病毒形成能力,免疫小鼠,利用假病毒中和试验与ELISPOT分别检测突变对中和抗体和T细胞分泌Env特异的IFN-γ的影响。结果N197Q突变体使Env诱导中和抗体的能力提高而诱导T细胞分泌Env特异的IFN-γ的能力降低,并使Env不能形成功能性假病毒;G2突变体(N624Q,N637Q)诱导的中和抗体能更好地中和假病毒74-2,但中和假病毒Wt的能力下降,对Env诱导T细胞分泌Env特异的IFN-γ的能力和功能性假病毒形成无明显影响。结论特定糖基化位点的改造影响假病毒的形成及Env的免疫原性。 展开更多
关键词 HIV-1 免疫原性 中和试验 去糖基化 ELISPOT
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人呼吸道合胞病毒中和抗体检测方法的研究进展 被引量:1
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作者 张丽 李海 +2 位作者 李晓梅 许文波 张燕 《中国病毒病杂志》 CAS 2023年第5期363-369,共7页
人呼吸道合胞病毒(human respiratory syncytial virus,HRSV)是引起5岁以下儿童、老年人以及免疫功能低下人群急性下呼吸道感染最重要的病毒性病原之一,引起的疾病负担较为严重。经过近70年的研究,全球2款HRSV疫苗(Arexvy和Abrysvo)已... 人呼吸道合胞病毒(human respiratory syncytial virus,HRSV)是引起5岁以下儿童、老年人以及免疫功能低下人群急性下呼吸道感染最重要的病毒性病原之一,引起的疾病负担较为严重。经过近70年的研究,全球2款HRSV疫苗(Arexvy和Abrysvo)已获美国食品药品监督管理局批准上市,还有几十种HRSV疫苗处于临床试验阶段,包括重组蛋白疫苗、病毒载体疫苗、减毒活疫苗等。中和抗体是评价HRSV疫苗有效性的一项重要指标。目前,HRSV中和抗体的检测方法主要有微量中和试验和噬斑减少中和试验(plaquereduction neutralization test,PRNT)两大类型,检测方法的不统一在一定程度上阻碍了HRSV疫苗的研发和不同HRSV疫苗效果的评价。目前临床试验中大多数采用免疫染色的PRNT来检测中和抗体的滴度,本文就HRSV疫苗临床试验中使用的中和抗体检测方法进行综述。中和抗体检测方法的不断改进和标准化使得该方法在HRSV疫苗的研发与评价中发挥重要作用,有助于提高中和抗体滴度测定的准确性和可重复性。 展开更多
关键词 人呼吸道合胞病毒 中和抗体 中和试验 免疫染色 检测方法
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White spot syndrome virus envelope protein VP124 involved in the virus infection
12
作者 ZHU Yanbing WU Chenglin YANG Feng 《Acta Oceanologica Sinica》 SCIE CAS CSCD 2008年第4期130-136,共7页
White spot syndrome virus (WSSV) is one of the major shrimp pathogens causing large economic losses to shrimp farming. In an attempt to identify the envelope proteins involved in the virus infection, purified WSSV v... White spot syndrome virus (WSSV) is one of the major shrimp pathogens causing large economic losses to shrimp farming. In an attempt to identify the envelope proteins involved in the virus infection, purified WSSV virions were mixed with three antisera against WSSV envelope proteins (VP39, VP124 and VP187 ), individually. And then they were injected intramuscularly into crayfish (Procambarus clarkii) to conduct in vivo neutralization assays. The results showed that for groups injected with virions only and groups injected with the mixture of virions and antiserum against VP124, the crayfish mortalities were 100% and 60% on the 8th day postinfection, individually. The virus infection could be delayed or neutralized by antibody against the envelope protein VP124. Quantitative PCR was used to further investigate the influence of three antisera described above on the virus infection. The results showed that the antiserum against VP124 could restrain the propagation of WSSV in crayfish. All of the results suggested that the viral envelope protein VP124 played a role in WSSV infection. 展开更多
关键词 white spot syndrome virus envelope protein VP124 ANTIBODY INFECTION neutralization assay
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单纯疱疹病毒2型糖蛋白D和CCL28佐剂双顺反子重组DNA疫苗对小鼠的免疫保护效果 被引量:1
13
作者 阎岩 胡勤学 +1 位作者 付明 Davgadorj Chantsalmaa 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期342-350,共9页
目的研究内部核糖体进入位点(internal ribosome entry site,IRES)序列连接"抗原-佐剂"的单纯疱疹病毒2型(herpes simplex virus type 2,HSV-2)DNA疫苗对免疫小鼠的保护作用。方法利用IRES重组构建HSV-2包膜糖蛋白D(glycoprot... 目的研究内部核糖体进入位点(internal ribosome entry site,IRES)序列连接"抗原-佐剂"的单纯疱疹病毒2型(herpes simplex virus type 2,HSV-2)DNA疫苗对免疫小鼠的保护作用。方法利用IRES重组构建HSV-2包膜糖蛋白D(glycoprotein D,gD)和CCL28佐剂双表达DNA疫苗pgD-IRES-CCL28和pCCL28-IRES-gD,经测序验证,肌肉注射免疫BALB/c小鼠2次后,定期收集小鼠的血清和阴道灌洗液样品,分离免疫后的脾细胞、肠系膜淋巴结细胞和直肠黏膜组织。通过终点ELISA法检测免疫后小鼠的抗原特异性抗体滴度,采用体外中和试验检测免疫后及攻毒后血清和阴道灌洗液中的中和抗体滴度,采用脾细胞和肠系膜淋巴结细胞趋化试验和直肠组织的免疫组织化学染色检测组织和器官内的CCL28响应性免疫细胞变化。对免疫后小鼠进行阴道攻毒试验,采用荧光定量PCR、称量体重及观察疾病严重程度的方法评估各组小鼠抵抗病毒感染的能力。通过与1∶1混合的单独表达gD和CCL28的DNA疫苗(pgD+pCCL28)的免疫保护效果比较,分析IRES双表达DNA疫苗诱导的小鼠体液免疫和细胞免疫应答水平,以及免疫保护效果。结果pCCL28-IRES-gD免疫小鼠后可产生与pgD+pCCL28组相似的血清IgG滴度、阴道灌洗液IgA抗体滴度,以及较高的抗体中和能力、直肠黏膜IgA+浆细胞和黏膜组织内CCL28响应性免疫细胞,攻毒后血清中和抗体出现较晚,但小鼠未出现体重减轻、疾病症状和死亡。但pgD+pcDNA3.1和pgD-IRES-CCL28对小鼠的免疫保护无效。结论pCCL28-IRES-gD双表达DNA疫苗可诱导小鼠产生较强的黏膜免疫应答,有较强的免疫保护作用。 展开更多
关键词 单纯疱疹病毒2型 糖蛋白D CCL28 中和试验 内部核糖体进入位点 免疫保护
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水疱性口炎病毒纯化抗原制备多克隆抗体的检测结果分析
14
作者 胡涛 金郁 +1 位作者 汪学龙 李群 《热带病与寄生虫学》 2019年第1期40-42,共3页
目的水疱性口炎病毒纯化抗原制备兔抗VSV多克隆抗体,免疫学方法检测其结果分析比较。方法纯化的抗原制备兔抗VSV多克隆抗体,采用双向琼脂扩散试验,间接ELISA方法和中和试验测定效价。结果兔抗VSV多克隆抗体最高效价双向琼脂扩散试验为1... 目的水疱性口炎病毒纯化抗原制备兔抗VSV多克隆抗体,免疫学方法检测其结果分析比较。方法纯化的抗原制备兔抗VSV多克隆抗体,采用双向琼脂扩散试验,间接ELISA方法和中和试验测定效价。结果兔抗VSV多克隆抗体最高效价双向琼脂扩散试验为1∶32,间接ELISA法为1∶640,中和试验为1∶256。结论试验结果分析比较表明,建立纯化抗原制备的兔抗VS多克隆抗体,中和试验特异性好、敏感性高,可做为VSV的血清学检测和流行抗学调查抗供技术保障。 展开更多
关键词 水疱性口炎病毒 中和试验 抗原纯化 多克隆抗体
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中和试验在确认低滴度HBV感染中的价值
15
作者 陈永健 徐岚 杨露露 《浙江检验医学》 2008年第2期7-9,共3页
目的探讨酶免法和化学发光法均阳性的低滴度HBsAg的阳性真实性及其与病毒复制的关系。方法用酶免法对病人血清标本作乙肝三系检测,选取HBsAg呈低滴度阳性并同时进行化学发光法定量复查亦为弱阳性的标本143例,对这些标本进行HBsAg的确认... 目的探讨酶免法和化学发光法均阳性的低滴度HBsAg的阳性真实性及其与病毒复制的关系。方法用酶免法对病人血清标本作乙肝三系检测,选取HBsAg呈低滴度阳性并同时进行化学发光法定量复查亦为弱阳性的标本143例,对这些标本进行HBsAg的确认试验,同时作HBV-DNA检测。结果143例弱阳性HBsAg经确认试验检测有112例标本确认阳性,确认阳性率为78.3(;6例标本HBV-DNA阳性,阳性率为4.0(;抗-HBs阳性组HBsAg的确认试验阳性率明显小于阴性组,其测定值亦小于阴性组,两者差异显著,P【0.05。结论低滴度HBsAg即使经化学发光定量复查后亦为阳性仍还有较高的假阳性率(21.7%),虽然是筛查试验,尤其在HBsAb阳性时,假阳性率更高(70%)。低滴度HBsAg阳性的HBV感染者仍具一定的传染性。 展开更多
关键词 HBSAG 乙型肝炎病毒 乙肝DNA 中和试验
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白斑综合症病毒膜蛋白VP124参与病毒的感染
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作者 朱艳冰 吴成林 杨丰 《海洋学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期135-139,共5页
白斑综合症病毒(white spot syndrome virus,WSSV)是对虾的最主要病毒病原之一,给对虾养殖造成了巨大的经济损失。WSSV分别与三种该病毒膜蛋白VP39,VP124和VP187的特异性抗血清在体外作用后,再注射到螯虾体内,进行中和试验。结果显示,... 白斑综合症病毒(white spot syndrome virus,WSSV)是对虾的最主要病毒病原之一,给对虾养殖造成了巨大的经济损失。WSSV分别与三种该病毒膜蛋白VP39,VP124和VP187的特异性抗血清在体外作用后,再注射到螯虾体内,进行中和试验。结果显示,注射同或未同VP124抗血清作用的WSSV,8 d后螯虾的死亡率分别是100%和60%,WSSV的感染能够被抗VP124抗体中和。进一步利用定量PCR分析上述三种特异性抗血清对病毒感染的影响,结果显示,VP124抗血清可抑制WSSV在螯虾体内的增殖。所有结果表明,VP124在病毒的感染中起作用。 展开更多
关键词 白斑综合症病毒 膜蛋白VP124 抗血清 感染 中和试验
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单纯疱疹病毒2型糖蛋白D和CCL19佐剂融合重组DNA疫苗对小鼠的免疫保护效果
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作者 阎岩 胡勤学 +1 位作者 Davgadorj Chantsalmaa 王旭 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期333-341,共9页
目的通过比较简单混合和融合重组的单纯疱疹病毒2型糖蛋白D(herpes simplex virus type 2 glycoprotein D,HSV-2 gD)联合分子佐剂CCL19的DNA疫苗对免疫小鼠的免疫应答及免疫保护效果的差异,揭示融合重组疫苗的保护作用。方法利用基因重... 目的通过比较简单混合和融合重组的单纯疱疹病毒2型糖蛋白D(herpes simplex virus type 2 glycoprotein D,HSV-2 gD)联合分子佐剂CCL19的DNA疫苗对免疫小鼠的免疫应答及免疫保护效果的差异,揭示融合重组疫苗的保护作用。方法利用基因重组技术构建HSV-2 gD和CCL19单独表达及融合表达的DNA疫苗,经测序、Western blot和ELISA验证后,肌肉注射免疫BALB/c小鼠两次,免疫后定期收集血清和阴道灌洗液,分离免疫后的脾细胞、肠系膜淋巴结细胞及直肠组织。通过终点法ELISA、体外中和试验、免疫组织化学染色、趋化试验、阴道攻毒试验、荧光定量PCR、称量体重及观察疾病严重程度,比较两种形式的疫苗免疫后小鼠的体液免疫、细胞免疫应答和免疫保护作用的差异。结果融合重组的pgD-IZ-CCL19质粒可在体外正常表达gD蛋白和CCL19蛋白,但pCCL19-IZ-gD质粒的CCL19蛋白表达量比pgD-IZ-CCL19少。免疫pgD-IZ-CCL19的小鼠能产生比pgD+pCCL19组更高水平的血清IgG抗体、阴道灌洗液IgA抗体(P<0.01)和中和能力。与其他组比较,pgD-IZ-CCL19组小鼠免疫后直肠黏膜、脾脏和肠系膜淋巴结均招募了较多的淋巴细胞,攻毒后该组小鼠未出现体重减少和疾病症状,阴道黏膜HSV-2检出率最低,小鼠死亡率也最低,而pCCL19-IZ-gD组的免疫保护无效。结论pgD-IZ-CCL19融合重组的DNA疫苗能诱导小鼠产生较强的免疫应答和免疫保护作用,免疫保护效果优于简单混合DNA疫苗。 展开更多
关键词 单纯疱疹病毒2型 糖蛋白D CCL19 中和试验 免疫保护
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犬瘟热病毒抗体检测方法的比较研究 被引量:33
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作者 乔贵林 夏咸柱 +4 位作者 王度林 贾补年 袁书智 林庆年 王允海 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第1期26-29,共4页
用犬瘟热(CD)弱毒和自制的高免犬血清,建立了检测犬瘟热病毒(CDV)抗体的中和(SN)试验、间接荧光抗体技术(IFAT)和间接免疫酶染色法。这3种方法对38份CD弱毒疫苗免疫犬血清抗体效价的测定结果表明,当被检血清... 用犬瘟热(CD)弱毒和自制的高免犬血清,建立了检测犬瘟热病毒(CDV)抗体的中和(SN)试验、间接荧光抗体技术(IFAT)和间接免疫酶染色法。这3种方法对38份CD弱毒疫苗免疫犬血清抗体效价的测定结果表明,当被检血清稀释度为1∶100时,SN试验、IFAT和间接免疫酶染色法测定时的阳性血清数分别为29,7和31份,IFAT和间接免疫酶染色法测定结果相对于SN试验结果的符合率分别为42.1%和94.7%。同时发现,当SN试验测定的血清效价在1∶100以上时,IFAT测定结果总是在1∶25以上,间接免疫酶染色法测定结果总是在1∶100以上。3种方法以各自初步确定的CDV血清抗体效价完全保护值指标计算所测血清的完全保护率,SN试验为76.3%,IFAT为78.9%,间接免疫酶染色法为81.6%。据此认为,IFAT和间接免疫酶染色法均可部分代替SN试验用于CD疫苗免疫效果的评价。 展开更多
关键词 犬瘟热病毒 抗体 间接荧光抗体 间接免疫酶染色
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假病毒中和试验对狂犬病毒中和抗体效价的检测效能分析 被引量:1
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作者 吴小红 赵丹华 +2 位作者 丁如霞 李玉华 聂建辉 《中国药事》 CAS 2024年第2期210-216,共7页
目的:组织不同的实验室分析假病毒中和法(Pseudo Virus-based Neutralization Assay,PBNA)对不同样品的狂犬病病毒中和抗体水平的检测能力,并比较其与经典的快速免疫荧光灶抑制试验(Rapid Fluorescent Focus Inhibition Test,RFFIT)以... 目的:组织不同的实验室分析假病毒中和法(Pseudo Virus-based Neutralization Assay,PBNA)对不同样品的狂犬病病毒中和抗体水平的检测能力,并比较其与经典的快速免疫荧光灶抑制试验(Rapid Fluorescent Focus Inhibition Test,RFFIT)以及小鼠中和试验法(Mouse Neutralization Test,MNT)的相关性。方法:共9家实验室,分别采用PBNA、RFFIT以及MNT法对6份样品进行狂犬病病毒中和抗体检测,每个实验室进行3~5次重复实验。采用配对t检验及Pearson相关系数对3种检测方法的结果进行统计学分析。结果:PBNA与RFFIT、PBNA与MNT、RFFIT与MNT Pearson相关系数分别为0.985、0.988和0.974,抗体几何平均滴度进行t检验,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:3种方法重复检测6份样品的定量结果具有高度的相关性,PBNA法可作为《中华人民共和国药典》方法RFFIT、MNT的一种替代或补充方法,用于人用狂犬病疫苗临床血清、狂犬病人免疫球蛋白及抗狂犬病血清的狂犬病病毒中和抗体效价检测。 展开更多
关键词 假病毒中和试验 免疫荧光灶抑制试验 小鼠中和试验法 狂犬病毒中和抗体 协作研究
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幽门螺杆菌空泡毒作用及空泡毒中和试验 被引量:5
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作者 施理 向友华 +3 位作者 戴立人 侯晓华 易粹琼 张锦坤 《中华医学检验杂志》 CSCD 1999年第2期80-82,共3页
目的探讨幽门螺杆菌(helicobacterpylori,Hp)的空泡毒作用及其与疾病的关系。方法用细胞培养观察Hp的空泡毒作用。结果69.35%(43/62株)的Hp空泡毒作用阳性,其空泡毒作用能被相应患者血清中和... 目的探讨幽门螺杆菌(helicobacterpylori,Hp)的空泡毒作用及其与疾病的关系。方法用细胞培养观察Hp的空泡毒作用。结果69.35%(43/62株)的Hp空泡毒作用阳性,其空泡毒作用能被相应患者血清中和。78.26%(36/46例)的消化性溃疡患者,感染的是空泡毒作用阳性的Hp+(Toxin+),而只有42.86%(6/14例)胃炎患者感染的是Hp+,两者Hp+感染率差异有显著性(χ2=4.83,P<0.05)。结论Hp+感染与消化性溃疡密切相关,其在体内也有空泡毒作用并产生相应抗体。 展开更多
关键词 幽门螺杆菌 中和试验 空泡毒作用
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