实时荧光PCR检测动物源性基因鉴定地沟油 被引量：14

1

作者 杨永存 杨冬燕 +3 位作者 李浩 张倩 吴双 邓平建 《中国卫生检验杂志》 北大核心 2013年第18期3514-3517,共4页

目的寻找一个多种动物基因组共有的基因片段作为地沟油鉴定的特异性指标,建立准确、特异、快速的地沟油鉴定方法。方法通过多个数据库的比对分析筛选出靶标基因片段,采用实时荧光PCR方法,以常见动植物组织、正常食用植物油以及6份地沟... 目的寻找一个多种动物基因组共有的基因片段作为地沟油鉴定的特异性指标,建立准确、特异、快速的地沟油鉴定方法。方法通过多个数据库的比对分析筛选出靶标基因片段,采用实时荧光PCR方法,以常见动植物组织、正常食用植物油以及6份地沟油作为验证样品对新建方法的特异性、灵敏度以及在地沟油鉴定中的适用性进行验证。结果筛选得到的HOXC5基因片段在7种动物组织中均有扩增,而在11种植物组织中均没有扩增;此外,8份正常食用植物油样品中均被鉴定为阴性,而6份地沟油样品均被鉴定为阳性。结论筛选出的基因片段具有动物组织特异性,新建方法能够正确区分正常食用植物油和地沟油样品,其检测灵敏度与使用物种特异性动物基因作为检测靶标的方法相当。 展开更多

关键词 地沟油 HOXC5基因 实时荧光pcr

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实时荧光PCR法快速检测肉类中貉源性成分 被引量：7

2

作者 钱云开 王海洋 +5 位作者 崔宗岩 高飞 吴曦 肖艳霞 张进杰 曹彦忠 《中国食品卫生杂志》 2016年第5期602-605,共4页

目的建立貉源性成分的实时荧光PCR快速检测手段。方法根据貉的线粒体Cytb基因序列设计引物和探针,通过优化扩增反应体系进行实时荧光PCR(RT-PCR)扩增,产物进行快速检测。结果此方法特异性良好,灵敏度可达到10^(-4)ng貉源性DNA的量。在... 目的建立貉源性成分的实时荧光PCR快速检测手段。方法根据貉的线粒体Cytb基因序列设计引物和探针,通过优化扩增反应体系进行实时荧光PCR(RT-PCR)扩增,产物进行快速检测。结果此方法特异性良好,灵敏度可达到10^(-4)ng貉源性DNA的量。在混合或纯肉样品以及常见的肉制品中均可检测。结论本方法可以满足实际工作中肉类掺假检测的要求。 展开更多

关键词 貉 实时荧光pcr(rt-pcr) 毛皮动物 肉类 掺假 食品安全 检测 鉴定

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人3型腺病毒荧光定量PCR检测方法的建立 被引量：5

3

作者 谭耀驹 周荣 杨复华 《热带医学杂志》 CAS 2009年第12期1380-1381,1390,共3页

目的通过建立人3型腺病毒荧光定量PCR检测方法，快速鉴定人3型腺病毒感染，为早期诊断提供依据。方法以人3型腺病毒感染的细胞和常见的呼吸道消化道感染的病原体为研究对象，根据病毒六邻体高度保守的序列，设计荧光定量PCR反应体系，... 目的通过建立人3型腺病毒荧光定量PCR检测方法，快速鉴定人3型腺病毒感染，为早期诊断提供依据。方法以人3型腺病毒感染的细胞和常见的呼吸道消化道感染的病原体为研究对象，根据病毒六邻体高度保守的序列，设计荧光定量PCR反应体系，并分析实验的敏感性和特异性。结果人3型腺病毒TCID50细胞培养液中病毒核酸最低检出稀释度是10^-6，对应的拷贝数分别是5．802×10^3copies／mL和6．968×10^2copies／mL．呼吸道和消化道感染常见的病原体未出现交叉反应。结论荧光定量PCR的应用，可有效缩短检测时间，提高检测的敏感度。 展开更多

关键词 人腺病毒 实时rt-pcr 检测

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锦鲤疱疹病毒潜伏感染实时荧光定量PCR检测方法的建立 被引量：6

4

作者 陈俊杰 李媛媛 +4 位作者 阳瑞雪 古晶晶 汪开毓 耿毅 欧阳萍 《湖南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期310-314,共5页

为建立一种特异和敏感的检测锦鲤疱疹病毒(koi herpesvirus,KHV)潜伏感染的方法,以KHV Sph基因为靶序列设计特异性引物,通过条件优化建立Real–Time PCR检测方法,并且对该方法进行特异性和敏感性评估及临床样品应用研究。结果显示:建立... 为建立一种特异和敏感的检测锦鲤疱疹病毒(koi herpesvirus,KHV)潜伏感染的方法,以KHV Sph基因为靶序列设计特异性引物,通过条件优化建立Real–Time PCR检测方法,并且对该方法进行特异性和敏感性评估及临床样品应用研究。结果显示:建立的方法与鲤痘疱疹病毒、金鱼造血器官坏死病病毒和鳗鲡疱疹病毒均无交叉反应,特异性强;最低检出率为42拷贝/μL,灵敏度高。用本方法对63份临床样品进行检测,有锦鲤疱疹病毒病(KHVD)病史的18份样品的检测结果全为阳性,阳性率为100%;从有临床症状的鱼中得到的15份样品的检测结果全为阳性,阳性率为100%;30份无任何临床症状鱼中的6份被检测为阳性,阳性率为20%。本试验中建立的水生动物疱疹病毒潜伏感染快速检测方法,可为潜伏感染KHV的临床检测提供一种快速、敏感和特异的检测手段,可为KHVD的分子流行病学调查和预防提供参考。 展开更多

关键词 锦鲤疱疹病毒(KHV) 潜伏感染 实时荧光定量pcr(real—timepcr)

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兔斯氏艾美耳球虫荧光定量PCR检测方法的建立 被引量：3

5

作者 温福利 郑和平 +2 位作者 党源 薛来恩 张诗兰 《实验动物与比较医学》 CAS 2017年第6期448-454,共7页

目的建立荧光定量PCR检测兔斯氏艾美耳球虫的方法。方法根据斯氏艾美耳球虫(内转录间隔区1)ITS1序列区设计特异性引物,构建重组质粒,并作为标准品绘制标准曲线,对建立的荧光定量PCR检测方法进行特异性、敏感性和重复性试验。结果建立的... 目的建立荧光定量PCR检测兔斯氏艾美耳球虫的方法。方法根据斯氏艾美耳球虫(内转录间隔区1)ITS1序列区设计特异性引物,构建重组质粒,并作为标准品绘制标准曲线,对建立的荧光定量PCR检测方法进行特异性、敏感性和重复性试验。结果建立的荧光定量PCR能特异性地检测兔斯氏艾美耳球虫,且可检测到含一个卵囊DNA的样本。该方法的重复性较好,组内、组间重复试验的变异系数均小于2%。结论建立了一种特异性好、敏感度高、可靠的检测兔斯氏艾美耳球虫荧光定量PCR方法。 展开更多

关键词 兔斯氏艾美耳球虫 荧光定量pcr 检测

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福建省某规模化猪场三种病毒性疫病抗体监测和病原检测分析

6

作者 骆钰 《福建畜牧兽医》 2022年第4期13-16,共4页

为监测和评估福建省某规模化猪场猪群健康状况,进一步完善该猪场的疫苗免疫程序,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)分别对20日龄、40日龄、60日龄猪的血清进行猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)、伪狂犬病(PR)和猪瘟(CSF)抗体监测及采用实时荧光PCR/R... 为监测和评估福建省某规模化猪场猪群健康状况,进一步完善该猪场的疫苗免疫程序,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)分别对20日龄、40日龄、60日龄猪的血清进行猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)、伪狂犬病(PR)和猪瘟(CSF)抗体监测及采用实时荧光PCR/RT-PCR试验对患猪组织进行病原检测。该猪场20日龄、40日龄、60日龄血清PR gE抗体阳性率均为0.00%;20日龄、40日龄血清PR gB抗体阳性率均为100.00%,60日龄血清PR g B抗体阳性率降为0.00%;20日龄、40日龄、60日龄血清CSF抗体阳性率分别为60.00%、60.00%、100.00%;对患猪不同组织分别进行PRRSV、PRV和CSFV病原检测,实时荧光PCR/RT-PCR结果显示PRRSV阳性,PRV和CSFV阴性。试验结果表明,该猪场PR和CSF的疫苗免疫效果较好,但存在较严重PRRSV野毒株感染的情况,建议今后继续加强猪场PR和CSF疫苗免疫,于40~60日龄时提早对猪群进行PR疫苗加强免疫,同时在该猪群中已存在PRRSV野毒感染,为达疫病净化,应淘汰阳性猪只,做好猪舍消毒,引进阴性猪,长期进行抗体监测。 展开更多

关键词 免疫程序 酶联免疫吸附试验 实时荧光pcr/rt-pcr 抗体 病原

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实时荧光PCR检测基孔肯雅病毒方法的建立及初步应用 被引量：1

7

作者 方巧云 琚雄飞 +3 位作者 刘特 严宇斌 刘燕 曾健君 《预防医学情报杂志》 CAS 2012年第9期747-750,共4页

目的建立基孔肯雅病毒的荧光定量PCR检测方法。方法针对基孔肯雅病毒的基因序列,设计、合成引物、探针及反应体系,摸索出最佳反应条件,建立TaqMan荧光探针法和SYBR荧光染料法。利用建立的方法对30例基孔肯雅热病标本和10份基孔肯雅病毒... 目的建立基孔肯雅病毒的荧光定量PCR检测方法。方法针对基孔肯雅病毒的基因序列,设计、合成引物、探针及反应体系,摸索出最佳反应条件,建立TaqMan荧光探针法和SYBR荧光染料法。利用建立的方法对30例基孔肯雅热病标本和10份基孔肯雅病毒保存液进行扩增、检测和结果分析,并与常规RT-PCR方法的检测结果进行比对。结果实时荧光定量PCR法比常规RT-PCR法快速、灵敏。40份标本TaqMan荧光探针法、SYBR荧光染料法和常规RT-PCR方法的阳性率分别为:17.5%、17.5%、15%。统计分析表明,3种方法差异不具有统计学意义。结论实时荧光定量PCR方法快速且具有较好的特异性、敏感性、重复性,适用于基孔肯雅病毒的快速检验。 展开更多

关键词 基孔肯雅病毒 实时荧光pcr 甲病毒属 检测

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RS4型抗性淀粉对齐口裂腹鱼脂肪代谢相关酶及相关基因表达的影响 被引量：1

8

作者 向世琼 邬应龙 冯娇 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2014年第11期229-234,共6页

目的:研究RS4型抗性淀粉对齐口裂腹鱼脂肪代谢相关酶及相关基因表达的影响。方法:将体质量75g左右的齐口裂腹鱼随机按RS4型抗性淀粉添加量分为5组:0%(对照组)、3.5%、7%、14%、28%。饲喂60d,采用铜试剂法测定脂蛋白脂酶(lipoprotein lip... 目的:研究RS4型抗性淀粉对齐口裂腹鱼脂肪代谢相关酶及相关基因表达的影响。方法:将体质量75g左右的齐口裂腹鱼随机按RS4型抗性淀粉添加量分为5组:0%(对照组)、3.5%、7%、14%、28%。饲喂60d,采用铜试剂法测定脂蛋白脂酶(lipoprotein lipase,LPL)、肝脂酶(hepatic lipase,HL)活性及游离脂肪酸(free fatty acids,FFA)含量,并采用实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time-polymerase chain reaction,RT-PCR)技术检测各组肌肉及肝脏中过氧化物酶增殖体激活受体γ(peroxisome proliferators activated receptorγ,PPARγ)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅助活化因子(peroxisome proliferators activated receptorγcoactivator-1α,PGC-1α)mRNA表达水平。结果:RS4型抗性淀粉添加剂量在7%以上时能够显著的提高齐口裂腹鱼肝脏中脂蛋白脂酶和肝脂酶活性(P<0.05),使血清及肝脏中游离脂肪酸含量增加(P<0.05);添加量为3.5%对LPL、HL活性及FFA含量均无显著影响(P>0.05)。添加量为7%和14%时能显著提高肌肉和肝脏中PPARγ和PGC-1αmRNA表达量(P<0.05)。结论:适当的添加RS4型抗性淀粉能提高齐口裂腹鱼肌肉和肝脏中脂肪代谢相关基因mRNA表达水平,同时也能够增加齐口裂腹鱼肝脏中脂肪代谢相关酶的活性,促进甘油三酯的分解。 展开更多

关键词 抗性淀粉 齐口裂腹鱼 实时荧光定量pcr 过氧化物酶增殖体激活受体Γ 过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅助活化因子

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蒙古绵羊大卵泡内颗粒细胞ghrelin mRNA的表达

9

作者 宋艳华 刘剑郁 曹贵方 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第9期39-41,共3页

为了探索ghrelin在绵羊卵母细胞成熟过程中的潜在作用，试验采用实时荧光定量PCR（RT—PCR）技术对大卵泡（3乙箩咖）的壁层颗粒细胞和卵丘颗粒细胞ghrelinmRNA相对表达量进行分析。结果表明：壁层颗粒细胞和卵丘颗粒细胞ghrelinmRNA表... 为了探索ghrelin在绵羊卵母细胞成熟过程中的潜在作用，试验采用实时荧光定量PCR（RT—PCR）技术对大卵泡（3乙箩咖）的壁层颗粒细胞和卵丘颗粒细胞ghrelinmRNA相对表达量进行分析。结果表明：壁层颗粒细胞和卵丘颗粒细胞ghrelinmRNA表达水平差异不显著（P〉0．05），ghrelin mRNA的相对表达量在排卵前无明显变化。 展开更多

关键词 蒙古绵羊 卵母细胞 颗粒细胞 实时荧光定量pcr(rt-pcr) GHRELIN

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辽宁省新布尼亚病毒流行特点及生物特性分析 被引量：19

10

作者 刘芸 张洁 +9 位作者 王博 田疆 毛玲玲 孙英伟 王子江 孙婷婷 吴炜 于丹梅 姚文清 赵卓 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期721-723,共3页

目的调查2009—2011年辽宁省8市发热伴血小板减少综合征新病原,探讨新布尼亚病毒在自然界中可能存在的动物宿主及传播媒介。方法采用ELISA方法检测2009—2011年辽宁省发热伴血小板减少患者血液中发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒(SFTSV... 目的调查2009—2011年辽宁省8市发热伴血小板减少综合征新病原,探讨新布尼亚病毒在自然界中可能存在的动物宿主及传播媒介。方法采用ELISA方法检测2009—2011年辽宁省发热伴血小板减少患者血液中发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒(SFTSV)IgM抗体,采用间接免疫荧光染色法检测鼠肺SFTSV抗原,利用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测鼠肺、蜱悬液、细胞阳性分离物的SFTSV核酸,采用VERO-E6细胞对患者血液及脾悬液标本进行病毒分离鉴定,并进行核苷酸测序分析。结果大连、丹东、抚顺、铁岭均检出SFTSV的IgM抗体阳性;103份中检出20份鼠肺SFTSV抗原阳性,但SFTSV核酸检测均阴性;20组中1组蜱悬液SFTSV核酸检测阳性并分离出SFTSV病毒;148份中有26份急性期血液样本经VERO-E6细胞分离出现细胞病变,经鉴定为SFTSV病毒,并对M片段进行核苷酸序列分析。结论新布尼亚病毒是辽宁省4市发热伴血小板减少综合征的新病原,未检出可能的自然界中的动物宿主鼠类携带SFTSV核酸,蜱可能是其传播媒介之一。 展开更多

关键词 新布尼亚病毒 逆转录-聚合酶链反应(rt-pcr) VERO-E6细胞 传播媒介

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HPV分型及高危八型定量检测在宫颈病变中的意义 被引量：19

11

作者 赵颖 林敏 +2 位作者 潘美晨 杨礼 蔡应木 《分子诊断与治疗杂志》 2013年第2期102-106,共5页

目的分析宫颈病变中的人乳头瘤病毒的亚型分布及病毒载量的情况,以及其与宫颈疾病进展的关系。方法潮州中心医院就诊的220例液基细胞学检查异常的患者行阴道镜检查及组织病理学检查。收集宫颈脱落细胞标本,运用HybriMax导流杂交技术检测... 目的分析宫颈病变中的人乳头瘤病毒的亚型分布及病毒载量的情况,以及其与宫颈疾病进展的关系。方法潮州中心医院就诊的220例液基细胞学检查异常的患者行阴道镜检查及组织病理学检查。收集宫颈脱落细胞标本,运用HybriMax导流杂交技术检测HPV的21个亚型,运用实时荧光PCR定量检测八个高危亚型的病毒载量。结果 220例样本中,HPV感染率为87.3%,其中HPV16是最主要的基因型(50.91%),随着宫颈病变程度的增高,总HPV感染率和HPV16感染率逐渐升高。HPV58,HPV33,HPV52,HPV31和HPV18是仅次于HPV16的五种基因亚型,其检出率分别为22.73%,11.82%,11.36%,5.9%和4.54%。高危HPV亚型的病毒载量与宫颈病变的严重程度呈正相关(r=0.373,P<0.001)。结论尽管HPV52和HPV58是该地区HPV感染的主导亚型,但在宫颈病变患者中HPV感染以HPV16为主,而与宫颈癌最相关的是HPV16和HPV18。病毒载量是一个潜在的确定子宫颈癌及癌前病变的辅助指标。 展开更多

关键词 高危型人乳头瘤病毒 宫颈上皮内瘤变 实时荧光定量pcr

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流式细胞术与定量PCR法检测HLA-B27的比对 被引量：15

12

作者 胡晓舟 苑腾 +1 位作者 王小林 张捷 《中国实验诊断学》 北大核心 2009年第6期745-746,共2页

目的评价实时荧光定量PCR法和流式细胞术两种方法检测人类白细胞抗原HLA-B27对强直性脊柱炎的临床诊断价值。方法将疑似强直性脊柱炎患者199例全血分别采用实时荧光定量PCR和流式细胞仪法检测HLA-B27,以流式细胞术HLA-B27阳性作为判断标... 目的评价实时荧光定量PCR法和流式细胞术两种方法检测人类白细胞抗原HLA-B27对强直性脊柱炎的临床诊断价值。方法将疑似强直性脊柱炎患者199例全血分别采用实时荧光定量PCR和流式细胞仪法检测HLA-B27,以流式细胞术HLA-B27阳性作为判断标准,确定实时荧光定量PCR法检测HLA-B27的敏感度、特异度、阳性预测值及阴性预测值。将流式细胞术HLA-B27阳性的样本44例,按照实时荧光定量PCR检测结果将其分为疑似组、阴性组及阳性组,确定有无表达抗原表达强度的差异。结果91.5%样本分型结果相同,差异不具有统计学意义(P<0.05)。实时荧光定量PCR检测HLA-B27的敏感度为95.1%,特异度达到96.8%,阳性预测值为88.6%,阴性预测值为98.7%。实时荧光定量PCR检测疑似组、阴性组及阳性组,无显著表达抗原表达强度的差异。结论实时荧光定量PCR与流式细胞术检测HLA-B27具有相似敏感度和特异度,是一种较为快速、简单、有效的检测方法。 展开更多

关键词 HLA-B27 强直性脊柱炎 流式细胞术 实时荧光定量pcr法

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ELISA法和RT-PCR法在麻疹病毒检测中的应用比较分析 被引量：12

13

作者 褚文达 《标记免疫分析与临床》 CAS 2016年第11期1352-1354,共3页

目的探讨酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)和实时荧光定量PCR(quantitative realtime PCR,RT-PCR)对疑似麻疹病例的麻疹病毒的检测,为疾病的尽早确诊及治疗提供实验依据。方法以上海市宝山区2014年4月至2015... 目的探讨酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)和实时荧光定量PCR(quantitative realtime PCR,RT-PCR)对疑似麻疹病例的麻疹病毒的检测,为疾病的尽早确诊及治疗提供实验依据。方法以上海市宝山区2014年4月至2015年12月的250例疑似麻疹病例为研究对象,采集其血清标本和咽拭子标本,分别应用ELISA法检测患者血清中的麻疹特异性的免疫球蛋白M(immunoglobulin M,Ig M)抗体和RT-PCR法检测咽拭子中麻疹病毒的核酸。结果 250例疑似麻疹病例,排除风疹病毒阳性的34例病例,其中麻疹病毒(measles virus,MV)Ig M抗体呈阳性的有80例,阳性率为37.04%;MV RT-PCR呈阳性的有128例,阳性率为59.26%。RT-PCR的检测阳性率显著高于Ig M检测(χ2=41.14,P<0.001)。结论 RT-PCR法可快速诊断麻疹病毒的病原学,且对出疹初期麻疹Ig M呈阴性的病例可进一步确诊,是一种有效可靠的方法。 展开更多

关键词 麻疹病毒 酶联免疫吸附试验 实时荧光定量pcr 血清 核酸

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广东地区2782例妇女高危型人乳头瘤病毒感染阳性率和年龄段的关系 被引量：9

14

作者 李亚红 李楠 +2 位作者 张珍 李泽泳 雷达 《分子诊断与治疗杂志》 2010年第2期112-114,共3页

目的探讨广东地区妇女高危型人乳头瘤病毒(high-risk human papilloma virus,HR-HPV)感染的阳性率和各年龄段的关系。方法回顾性分析2007年10月到2008年11月在本院妇科门诊就诊的妇女2782例。用实时多重荧光PCR技术对13种HR-HPV进行检测... 目的探讨广东地区妇女高危型人乳头瘤病毒(high-risk human papilloma virus,HR-HPV)感染的阳性率和各年龄段的关系。方法回顾性分析2007年10月到2008年11月在本院妇科门诊就诊的妇女2782例。用实时多重荧光PCR技术对13种HR-HPV进行检测,将筛查人群分为8个年龄段,分别计算阳性检出率,分析HR-HPV的阳性检出率和年龄段的关系,并以年龄段和阳性率的关系作图加以分析。结果在2782例中共检出HR-HPV564例阳性,阳性率为20.3%。HR-HPV的感染阳性检出率和年龄段相关,分别为36～40岁和46～50岁的两年龄段阳性检出率高。结论广东地区妇女HR-HPV的阳性检出率和年龄段相关,且以36～40岁和46～50岁的两年龄段阳性检出率高。 展开更多

关键词 高危型人乳头瘤病毒 实时荧光pcr 年龄 筛查

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实时荧光定量PCR及RT-PCR与常规PCR及RT-PCR检测对虾病毒效果的比较 被引量：3

15

作者 沈飚 王忠发 +1 位作者 胡兴娟 顾松叶 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2012年第3期30-36,共7页

常规PCR及RT-PCR已用于对虾DNA及RNA病毒检测,但存在费时、灵敏度较低、不能定量等问题。建立了TaqMan实时荧光定量PCR及RT-PCR方法,分别用于检测白斑综合症病毒(WSSV)、传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV)及桃拉综合征病毒(TSV)、黄... 常规PCR及RT-PCR已用于对虾DNA及RNA病毒检测,但存在费时、灵敏度较低、不能定量等问题。建立了TaqMan实时荧光定量PCR及RT-PCR方法,分别用于检测白斑综合症病毒(WSSV)、传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV)及桃拉综合征病毒(TSV)、黄头病毒(YHV)4种对虾病毒。与常规PCR及RT-PCR比较,所建立的TaqMan实时荧光定量PCR及RT-PCR检测上述4种对虾病毒不仅有很高的特异性,检测灵敏度也提高了10～100倍,同时还具有快速、简便、不污染环境、重复性好、实时定量等优点,可明显提高对虾病毒检验检疫工作质量及效率。 展开更多

关键词 实时荧光定量pcr/rt—pcr 常规pcr/rt—pcr 对虾病毒 检测效果 比较

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酶联免疫吸附试验与实时荧光定量PCR法在麻疹和风疹检测中的比较分析 被引量：4

16

作者 王慧晶 李爱军 +3 位作者 王雨 胡玉婕 石岩 张子赫 《医学动物防制》 2022年第3期246-249,共4页

目的比较分析麻疹、风疹疑似病例标本的酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)与实时荧光定量PCR法(real-time quantitative PCR,RT-PCR)的检测结果,为麻疹、风疹的尽早确诊和检测方法选择提供科学依据。方法应用... 目的比较分析麻疹、风疹疑似病例标本的酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)与实时荧光定量PCR法(real-time quantitative PCR,RT-PCR)的检测结果,为麻疹、风疹的尽早确诊和检测方法选择提供科学依据。方法应用ELISA法检测平顶山市2015—2019年531例疑似病例的血清标本中的IgM抗体,RT-PCR法检测咽拭子标本中的核酸。结果 ELISA法检出血清麻疹IgM阳性147例,阳性率为27.68%;检出血清风疹IgM阳性24例,阳性率为4.52%。RT-PCR法检测咽拭子中麻疹病毒核酸阳性194例,阳性率为36.53%;检测风疹病毒核酸阳性46例,阳性率为8.66%。两种方法检测阳性率差异均有统计学意义(χ^(2)=9.54、7.40,P=0.002、0.007)。ELISA法灵敏度分别为69.34%、50.91%,RT-PCR法灵敏度分别为91.51%、83.64%,差异有统计学意义(χ^(2)=26.62、8.03,P<0.01、0.004)。出疹3 d内,RT-PCR法检测阳性率与ELISA法比较,差异均有统计学意义(χ^(2)=8.09、4.66,P=0.004、0.031)。无免疫史或免疫史不详者两方法检出阳性率差异均有统计学意义(χ^(2)=11.36、4.08,P=0.001、0.043)。结论麻疹和风疹利用RT-PCR法检测阳性率和灵敏度均高于ELISA法,可为两者的临床诊断提供科学的确诊依据。 展开更多

关键词 麻疹 风疹 酶联免疫吸附试验 实时荧光定量pcr 检测 比较 分析

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霜霉病菌诱导大白菜几丁质酶和葡聚糖酶基因的表达 被引量：5

17

作者 陈晓峰 隋好林 +1 位作者 马清华 侯喜林 《山东农业科学》 2015年第2期96-99,共4页

以大白菜抗霜霉病菌品种为材料,采用实时定量PCR技术检测接种霜霉病菌(Peronospora parasitica)后几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶基因的表达。结果表明,霜霉病菌接种处理显著诱导了几丁质酶基因在大白菜抗病品种中的表达,但β-1,3-葡聚糖基... 以大白菜抗霜霉病菌品种为材料,采用实时定量PCR技术检测接种霜霉病菌(Peronospora parasitica)后几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶基因的表达。结果表明,霜霉病菌接种处理显著诱导了几丁质酶基因在大白菜抗病品种中的表达,但β-1,3-葡聚糖基因的表达却呈现双峰曲线特点,表明这两种基因可能在大白菜对霜霉病抗性中起到了重要作用。 展开更多

关键词 大白菜 病程相关蛋白 霜霉病菌 几丁质酶 Β-1 3-葡聚糖酶 实时定量pcr

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缺刻缘绿藻FAD基因的序列特征及其相对转录量对氮饥饿的响应 被引量：3

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作者 刘凡 李慧 +2 位作者 李春阳 欧阳珑玲 周志刚 《中国水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期729-740,共12页

为探讨缺刻缘绿藻(Myrmecia incisa)花生四烯酸(20:4 6,AA)合成过程中一系列脂肪酸去饱和酶(FAD)的作用,本研究克隆了12、6及5 FAD基因的cDNA全长序列(GenBank登录号分别为JN205757、JN205755和JN205756)及其相应的DNA序列。它们的cDNA... 为探讨缺刻缘绿藻(Myrmecia incisa)花生四烯酸(20:4 6,AA)合成过程中一系列脂肪酸去饱和酶(FAD)的作用,本研究克隆了12、6及5 FAD基因的cDNA全长序列(GenBank登录号分别为JN205757、JN205755和JN205756)及其相应的DNA序列。它们的cDNA全长分别为1 806 bp、2 674 bp及2 318 bp,其中ORF长为1 137bp、1 443 bp和1 446 bp,分别编码由378、480和481个氨基酸组成的蛋白;通过其cDNA与DNA序列的比对,发现12、6及5 FAD基因分别具有4、5和7个内含子,其剪切位点均符合"GT-AG"规则。Δ12、Δ6和Δ5 FAD编码蛋白均富含疏水性氨基酸,约占各自氨基酸组成的52.8%、46.6%及50.9%。密码子的偏好性与缺刻缘绿藻其他基因保持一致。推测这3个FAD基因编码蛋白都存在4个跨膜区,而12和5 FAD还各有一个明显不跨膜的疏水区;都具有FAD家族各自相对保守的3个组氨酸簇基序。基于缺刻缘绿藻和其他物种相应的FAD基因编码蛋白序列所构建的Neighbor-joining(NJ)系统进化树,表明Δ12、Δ6、Δ5及ω3 FAD分别隶属于各自的分支,其中,Δ12与ω3 FAD的亲缘关系较近,而Δ6与Δ5 FAD具有较近的亲缘关系。利用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,Q-RT-PCR)分析这3个FAD基因在缺刻缘绿藻缺氮培养96 h后又恢复氮培养72 h过程中的相对转录量,结果表明这3个基因的相对转录量都受到氮信号的调控,它们随着氮饥饿培养时间延长明显上升,而氮恢复培养后迅速并显著地下降到氮饥饿胁迫前的水平。结合已知脂肪酸成分在此过程中的变化,推测这3个基因对缺刻缘绿藻AA的合成和积累都起着重要的作用,而Δ6 FAD的作用可能更关键。 展开更多

关键词 缺刻缘绿藻 脂肪酸去饱和酶 基因克隆 实时荧光定量pcr 氮饥饿

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基于双基因分析的结肠癌标志基因选择 被引量：2

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作者 李建更 高志坤 +1 位作者 严志 阮晓钢 《中国生物医学工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期691-695,共5页

针对结肠癌标志基因选择问题,引入一种最高得分对(TSP)方法,处理一组包含40个肿瘤和22个正常样本的结肠癌微阵列数据,得到标志基因对(VIP,DARS)并构建双基因分类器。结果显示,该分类器对62例样本的分类准确率可达93.55%。进一步,利用荧... 针对结肠癌标志基因选择问题,引入一种最高得分对(TSP)方法,处理一组包含40个肿瘤和22个正常样本的结肠癌微阵列数据,得到标志基因对(VIP,DARS)并构建双基因分类器。结果显示,该分类器对62例样本的分类准确率可达93.55%。进一步,利用荧光实时定量PCR在10个独立样本上检验所选基因对的分类效果,正确率为100%,表明该方法能有效地选择结肠癌标志基因,对临床诊断有积极的意义。 展开更多

关键词 标志基因 结肠癌 双基因分类器 荧光实时定量pcr(Q-rt-pcr)

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3种检测方法在出血热病原检测中的应用效果比较 被引量：1

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作者 魏卓超 张巍 +2 位作者 隋丹 邓晓丽 王盛 《中华卫生杀虫药械》 CAS 2020年第6期556-559,共4页

目的探究3种检测方法在出血热病原检测中的实际应用效果,为出血热防控提供科学准确的检测数据。方法参照《全国肾综合征出血热监测方案(试行)》中的检测方法,以免疫荧光法(IFA)、酶联免疫吸附实验(ELISA)法、实时荧光定量PCR(RT-PCR)法... 目的探究3种检测方法在出血热病原检测中的实际应用效果,为出血热防控提供科学准确的检测数据。方法参照《全国肾综合征出血热监测方案(试行)》中的检测方法,以免疫荧光法(IFA)、酶联免疫吸附实验(ELISA)法、实时荧光定量PCR(RT-PCR)法对2018—2019年鞍山市国家级监测点采集的宿主动物标本进行检测。结果利用IFA法在400份鼠肺标本中共检出30份鼠肺抗原阳性,带毒率为7.5%;用ELISA法在400份鼠血标本中共检出41份鼠血总抗体阳性,鼠感染率为10.25%;用RT-PCR法检测400份鼠肺标本,检出22株出血热阳性,4份灰区,PCR法阳性率为5.5%;3种方法两两配对卡方检验,对IFA法和ELISA法结果进行比较,差异无统计学意义(χa^2=3.70,P>0.05),将PCR法分别与IFA法和ELISA法的结果比较,差异有统计学意义(χb^2=4.08,χc^2=12.96,P<0.05);对3种方法进行筛选试验,RT-PCR法灵敏度和特异度更高。结论 3种方法各有特点,IFA法适合初步筛查性工作,ELISA法检测时间较短,RT-PCR方法较为精准。 展开更多

关键词 出血热 免疫荧光法 酶联免疫吸附实验(ELISA) 实时荧光定量pcr(rt-pcr)

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