摘要
为建立绵羊巴贝斯虫的最佳PCR检测方法,分别设置退火温度和循环次数的梯度,选取条带最亮且无杂带的温度和循环次数作为PCR检测方法的优化结果,并将新建的PCR法与传统的姬姆萨氏染色镜检法的检测结果进行对比。结果表明:PCR反应的最佳体系为94℃预变性5 min;94℃变性1 min,56℃退火90 s,72℃延伸1 min,共循环39次;72℃延伸10 min,4℃保存。在50份临床样品的检测中,PCR法检出的阳性样品有13份,阳性率为26%(13/50);姬姆萨氏染色镜检法检出的阳性样品有8份,阳性率为16%(8/50),由PCR方法检测出的阳性样品与姬姆萨氏染色镜检法检出的阳性样品符合率达100%。说明PCR法的灵敏度和准确性高于姬姆萨氏染色镜检法。
基金
天津市科技计划项目(14JCTPJC00489)
