摘要
目的构建人AQP-1基因的RNA干扰（RNAi）慢病毒载体，沉默人结肠癌SW480细胞的AQP-1基因并观察其对SW480细胞生长和血管内皮生长因子VEGF表达的影响。方法设计并合成4条AQP-1基因特异性RNAi靶序列，构建到慢病毒pEGFP—N1—3FLAG载体中，慢病毒包装转染293T细胞，获得病毒上清并测定其滴度；感染SW480细胞，实时定量聚合酶链反应（RT—PCR）及蛋白质印迹法鉴定RNA干扰效率。结果蛋白质印迹法检测、PCR扩增和测序表明成功构建AQP-1慢病毒干扰载体AQP-1-RNAi—LV，病毒载体包装获得的病毒上清滴度在2×109Tu／mL，可以有效地沉默sW480细胞中AQP-1基因的表达，构建的RNAi慢病毒载体感染SW480细胞后AQP-1基因的mRNA表达量同对照组减少约60％。结论慢病毒介导的RNA干扰可以高效稳定地沉默AQP-1基因的表达，AQP-1可能通过影响VEGF的表达参与了结肠癌肿瘤形成过程。
出处
《中华肿瘤防治杂志》
CAS
北大核心
2015年第B22期11-13,共3页
Chinese Journal of Cancer Prevention and Treatment
