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广西首例猪圆环病毒3型的发现及其衣壳蛋白序列分析 被引量：34
1
作者 贺会利 李军 +6 位作者 潘艳 胡帅 冯世文 彭昊 李常挺 陈泽祥 杨威 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第8期1499-1503,共5页
【目的】明确猪圆环病毒3型(Porcine circovirustype 3,PCV3)在广西猪群中的致病性及流行病学特点,为有效防控其暴发流行提供参考依据。【方法】采用PCR对广西某猪场腹泻死亡仔猪的病料样品进行PCV3检测,并对其唯一结构蛋白质(Cap)的结... 【目的】明确猪圆环病毒3型(Porcine circovirustype 3,PCV3)在广西猪群中的致病性及流行病学特点,为有效防控其暴发流行提供参考依据。【方法】采用PCR对广西某猪场腹泻死亡仔猪的病料样品进行PCV3检测,并对其唯一结构蛋白质(Cap)的结构进行同源模拟,构建遗传进化树;同时在线(http://www.cbs.dtu.dk/services/)预测Cap蛋白信号肽、糖基化位点和B细胞抗原表位。【结果】在广西某猪场腹泻死亡仔猪的病料样品中检测到PCV3。PCR扩增产物经核苷酸序列测定分析后截取Cap基因序列(645 bp),命名为PCV3/CN/Guangxi001/2017。PCV3/CN/Guangxi001/2017与13株国内PCV3毒株和5株美国PCV3毒株的Cap基因序列同源性分别在96.9%~99.4%和98.3%~99.5%,属于3b亚群;而与PCV1毒株和PCV2毒株的核苷酸序列同源性只有43.0%和45.8%,且B细胞抗原表位差异明显,在PCV1特有的B细胞抗原表位(92~103 aa)、PCV2特有的B细胞抗原表位(69~83 aa、117~131 aa和231~233 aa)及PCV1、PCV2共有的B细胞抗原表位(156~162 aa和179~192 aa)均无相似性。【结论】广西猪群中已存在PCV3感染,鉴于PCV2与PCV3间无交叉免疫保护特性,实际生产中应通过加强清洁消毒、灭鼠杀虫、定期监测、自繁自养等生物安全措施防控PCV3暴发流行。 展开更多
关键词 猪圆环病毒3型(PCV3) 衣壳蛋白(Cap) 序列分析 广西
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广西猪源致病性大肠杆菌对抗菌药物的耐药性变化分析 被引量：21
2
作者 冯世文 李军 +4 位作者 潘艳 彭昊 胡帅 杨威 陈泽祥 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期350-356,共7页
【目的】分析2007和2016年广西猪源致病性大肠杆菌对抗菌药物的耐药性差异,为兽医临床用药防治猪大肠杆菌病提供参考依据。【方法】2016年初从广西25个猪场采集腹泻仔猪的肠内容物、直肠棉拭子或肠系膜淋巴结等200份样品,分离大肠杆菌... 【目的】分析2007和2016年广西猪源致病性大肠杆菌对抗菌药物的耐药性差异,为兽医临床用药防治猪大肠杆菌病提供参考依据。【方法】2016年初从广西25个猪场采集腹泻仔猪的肠内容物、直肠棉拭子或肠系膜淋巴结等200份样品,分离大肠杆菌后进行致病力试验,选取103株致病性大肠杆菌用于体外药敏试验,将药敏试验结果与2007年的相关结果进行对比分析。【结果】从腹泻仔猪的体内共分离获得大肠杆菌178株,分离率为89%,其中有143株大肠杆菌可致试验小鼠死亡。与2007年相比,2016年广西猪源致病性大肠杆菌对50%的抗菌药物(9种)的敏感率上升,50%的抗菌药物的敏感率下降,上升最明显的为壮观霉素,升高34.9%,下降最明显的为氟苯尼考,降低46.9%;除头孢曲松和强力霉素的中介率与2007年相比基本无变化外,其余16种抗菌药物的中介率均降低,最明显的为头孢拉啶,降低55.2%;耐药率降低的抗菌药物只有阿米卡星、壮观霉素和强力霉素3种,降低12.3%~15.5%,耐药率升高的抗菌药物有15种,上升率为1.2%~62.1%,其中阿莫西林上升62.1%,氟苯尼考上升57.0%。耐药谱方面,2007年以5~11重耐药为主,占受试菌总数的75.7%,2016年以11重耐药以上为主,占74.8%。【结论】当前广西猪源致病性大肠杆菌以广谱耐药为主,敏感性降低,中介率降低,耐药率明显升高,生产中可选用阿米卡星和壮观霉素进行猪大肠杆菌病防治。 展开更多
关键词 猪源致病性大肠杆菌 抗菌药物 耐药性
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2015年-2017年广西规模化猪场主要病毒性疫病流行调查 被引量：13
3
作者 贺会利 李军 +6 位作者 潘艳 胡帅 钟舒红 冯世文 柳锋 谢永平 陈泽祥 《动物医学进展》 北大核心 2019年第6期116-120,共5页
为了解广西地区近3年规模化猪场主要病毒性传染病的流行情况,应用PCR及RT-PCR方法对2015年-2017年广西的1648份疑似猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV-2)、猪圆环病毒3型(PCV-3)、猪伪狂犬病病毒(PRV)... 为了解广西地区近3年规模化猪场主要病毒性传染病的流行情况,应用PCR及RT-PCR方法对2015年-2017年广西的1648份疑似猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV-2)、猪圆环病毒3型(PCV-3)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪流行性腹泻病毒(PEDV)感染的病料进行病原学检测。结果显示,CSFV、PRRSV、PRV、PCV-2、PCV-3、TGEV和PEDV的阳性率分别是2.06%(13/632)、14.43%(192/1331)、12.10%(88/727)、14.32%(132/922)、53.85%(42/78)、10.87%(20/184)和32.00%(72/225)。PRV、TGEV和PEDV的感染率呈逐年上升趋势,PCV-2的感染率呈逐年递减趋势。二重感染以PCV-2和其他病毒感染为主,其中PRRSV和PCV-2的二重感染率最高,平均感染率为2.93%。CSFV、PRRSV、PRV、PCV-2、PEDV的感染率在冬季比较高,分别为3.75%、23.86%、19.02%、27.73%和57.78%。检测结果表明,PRRSV和PCV-2是目前对广西规模化猪场危害较为严重的主要病毒性疫病。PCV-3作为一种新发现病毒,引起母猪皮炎肾病综合征与繁殖障碍和仔猪腹泻,对养猪业造成了一定的威胁。规模化猪场流行的腹泻性病毒主要是PEDV和TGEV。 展开更多
关键词 规模化猪场 病毒性疫病 聚合酶链反应 反转录-聚合酶链反应 调查
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广西猪流行性腹泻病毒感染病例的确诊与病毒S基因变异分析 被引量：9
4
作者 杨春杰 秦毅斌 +4 位作者 陈樱 韦祖樟 黄伟坚 赵武 欧阳康 《畜牧与兽医》 北大核心 2021年第8期86-93,共8页
旨在对广西玉林市某规模化猪场免疫猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)AJ1102疫苗株和猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)二联弱毒活疫苗后,猪群发生的腹泻进行确诊。通过对发病猪群临床观察、腹泻死亡仔猪病理解剖、实验... 旨在对广西玉林市某规模化猪场免疫猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)AJ1102疫苗株和猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)二联弱毒活疫苗后,猪群发生的腹泻进行确诊。通过对发病猪群临床观察、腹泻死亡仔猪病理解剖、实验室RT-PCR检测和基因测序,最终诊断为PEDV变异株感染。对PEDV变异毒株的S基因进行了扩增测序与分析发现,该毒株与国内外参考毒株S基因核苷酸同源性为92.8%~99.5%,氨基酸同源性为91.8%~99.2%;遗传进化分析表明,该PEDV毒株属于G2-a型变异毒株;氨基酸序列比较结果显示,该PEDV变异株氨基酸在多个位点发生了变异,S蛋白在第807位与第827位疏水性氨基酸处出现了较大的变化,在抗原位点第800~813位氨基酸处发生了较为明显的变化。本研究通过该例猪流行性腹泻病毒变异株感染的临床诊断和S基因变异分析,为PEDV病原学研究以及科学防控该病提供参考依据。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻 临床诊断 序列分析
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2015—2019年广西部分规模猪场主要呼吸道疫病流行病学调查 被引量：9
5
作者 段群棚 张艺杰 +9 位作者 赵硕 周英宁 蒋冬福 秦毅斌 卢冰霞 李斌 陈忠伟 梁家幸 赵武 何颖 《畜牧与兽医》 北大核心 2020年第6期120-127,共8页
为了解广西规模猪场猪群中主要呼吸道疫病的感染情况及流行特点,给制定科学合理的防控方案提供理论依据,采用RT-PCR/PCR方法,对2015年3月至2019年2月采集自广西14个地市规模猪场的1114份具有呼吸道症状病猪样品进行猪瘟病毒(CSFV)、猪... 为了解广西规模猪场猪群中主要呼吸道疫病的感染情况及流行特点,给制定科学合理的防控方案提供理论依据,采用RT-PCR/PCR方法,对2015年3月至2019年2月采集自广西14个地市规模猪场的1114份具有呼吸道症状病猪样品进行猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、伪狂犬病毒(PRV)、猪肺炎支原体(Mhp)、副猪嗜血杆菌(HP)、胸膜肺炎放线杆菌(APP)等7种主要疫病病原检测,并分析其样品阳性率在不同年份、季节之间的差异及病原混合感染情况。调查结果显示:CSFV、PRRSV、PCV2、PRV、Mhp、HP和APP均存在不同程度的感染,7种病原的样品平均阳性率从高到低依次为PRRSV(45.87%)、PCV2(38.96%)、HP(25.31%)、CSFV(10.05%)、PRV(6.19%)、Mhp(4.76%)及APP(1.89%);从季节影响因素分析,PRRSV在秋季阳性率较高,PCV2在夏季阳性率较高,HP在秋、冬季阳性率较高,其他病原阳性率的季节性差异均不明显;从混合感染情况分析,7种病原引起的单一感染中,PRRSV(16.52%)阳性率最高,其次是PCV2(9.78%),混合感染包括二重感染、三重感染、四重及以上感染,其中二重感染以PRRSV+PCV2(10.77%)、PRRSV+HP(6.10%)、PCV2+HP(4.49%)为主,三重感染以PRRSV+PCV2+HP(4.49%)为主,四重及以上感染情况较少。调查表明,近年广西地区规模猪场呼吸道疫病仍较多发,全年均有发生,且多为混合感染,PRRSV、PCV2和HP为猪主要呼吸道疫病病原。 展开更多
关键词 猪呼吸道疫病 流行病学调查 季节因素 混合感染
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牛支原体、牛病毒性腹泻病毒和牛传染性鼻气管炎病毒三重二温式PCR检测方法的建立及应用 被引量：10
6
作者 范晴 谢芝勋 +10 位作者 谢志勤 谢丽基 黄莉 黄娇玲 张艳芳 曾婷婷 王盛 罗思思 邓显文 刘加波 庞耀珊 《动物医学进展》 北大核心 2018年第2期43-48,共6页
为建立一种可同时检测牛支原体(MB)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)和牛传染性支气管炎病毒(IBRV)的三重二温式PCR检测方法。根据GenBank中MB、BVDV和IBRV的保守基因Uvrc基因、5′端非编码区(5′-UTR)和GB基因,分别设计了3对特异引物,将三温式... 为建立一种可同时检测牛支原体(MB)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)和牛传染性支气管炎病毒(IBRV)的三重二温式PCR检测方法。根据GenBank中MB、BVDV和IBRV的保守基因Uvrc基因、5′端非编码区(5′-UTR)和GB基因,分别设计了3对特异引物,将三温式PCR扩增程序简化为两个温度梯度,优化反应条件建立了用于同时检测MB、BVDV以及IBRV 3种常见牛呼吸道传染病病原的三重二温式PCR。结果显示,该方法特异性好,只对MB、BVDV和IBRV模板进行扩增,扩增的目的片段长度分别为412、170、727bp,对其他牛病原体无特异性扩增;灵敏度高,最低能同时检测到10 000拷贝的目的核酸;干扰性小,能同时检测3个不同浓度的模板。研究所建立的MB、BVDV和IBRV三重二温式PCR检测方法,具有特异性好、灵敏度高、方便快速等优点,可用于临床鉴别诊断和流行病学调查,具有很高的临床应用价值。 展开更多
关键词 三重二温式PCR 牛支原体 牛病毒性腹泻病毒 传染性鼻气管炎病毒 检测
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一起猪流行性腹泻病毒和猪链球菌混合感染引发仔猪拉稀病例的诊断及分析 被引量：8
7
作者 刘磊 卢冰霞 +5 位作者 赵硕 秦毅斌 段群棚 周英宁 蒋冬福 赵武 《养猪》 2020年第1期115-117,共3页
为确诊广西一存栏1000头母猪的某规模养猪场2耀3日龄仔猪临床持续表现严重拉稀症状的病因,研究对拉稀仔猪进行了临床诊断和实验室诊断。对拉稀仔猪的发病情况调查,临床症状和病理变化观察,实验室细菌分离培养及鉴定,进行PCR/RT-PCR方法... 为确诊广西一存栏1000头母猪的某规模养猪场2耀3日龄仔猪临床持续表现严重拉稀症状的病因,研究对拉稀仔猪进行了临床诊断和实验室诊断。对拉稀仔猪的发病情况调查,临床症状和病理变化观察,实验室细菌分离培养及鉴定,进行PCR/RT-PCR方法检测可能引起仔猪腹泻的常见疫病病毒(如猪瘟病毒、猪蓝耳病病毒、猪伪狂犬病病毒、猪圆环病毒2型和猪圆环病毒3型)以及常见肠道腹泻病毒(流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪轮状病毒和猪丁型冠状病毒)。结果在2窝拉稀仔猪肠系膜淋巴结中均分离到猪链球菌2型(S.s2),同时在拉稀仔猪肠道中均检测到猪流行性腹泻病毒(PEDV),而其它病原检测均为阴性,表明S.s2和PEDV混合感染可能是引起本次仔猪拉稀病例的主要原因。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 猪链球菌 混合感染 仔猪腹泻 实验室诊断
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猪肺炎支原体、猪圆环病毒2型和3型多重荧光定量PCR检测方法的建立与初步应用 被引量：2
8
作者 肖婷 何颖 +14 位作者 赵硕 蒋家霞 陈忠伟 郭旋 卢冰霞 林昌华 赵武 秦毅斌 段群棚 全琛宇 许心婷 陈婷婷 许艺兰 胡庭俊 张宁 《动物医学进展》 北大核心 2023年第2期8-14,共7页
为建立一种快速、特异的猪肺炎支原体(Mhp)、猪圆环病毒2型(PCV2)和猪圆环病毒3型(PCV3)的多重荧光定量PCR鉴别检测方法,根据Mhp、PCV2和PCV3及β-actin基因保守区域序列,设计合成4对特异性引物及4种荧光基团标记的Taq Man探针。构建含... 为建立一种快速、特异的猪肺炎支原体(Mhp)、猪圆环病毒2型(PCV2)和猪圆环病毒3型(PCV3)的多重荧光定量PCR鉴别检测方法,根据Mhp、PCV2和PCV3及β-actin基因保守区域序列,设计合成4对特异性引物及4种荧光基团标记的Taq Man探针。构建含有各目的基因的重组质粒标准品,筛选引物,优化反应条件,成功建立多重荧光定量PCR后评价该方法的特异性、敏感性、重复性并将该方法初步应用于临床样品检测。结果显示,该方法能同时特异性地鉴别检测Mhp、PCV2和PCV3,检测PRRSV、CSFV、PRV、JEV、PPV、PEDV、TGEV、FMDV病毒核酸无交叉反应;对Mhp、PCV2、PCV3和β-actin标准质粒的最小检出量分别为26.4、66.7、25.6、5990 copies/μL;该方法重复性好,组间和组内试验变异系数低于1.5%;用该方法检测101份临床样本,Mhp、PCV2和PCV3阳性率分别为20.8%、36.6%和33.7%。建立的多重荧光定量PCR方法能同时快速和定量检测Mhp、PCV2和PCV3,较普通PCR更敏感,实用性强,有效避免了多次检测耗时长、费用高的问题,为Mhp、PCV2和PCV3的监测和防控提供了可靠的检测技术。 展开更多
关键词 猪肺炎支原体 猪圆环病毒2型 猪圆环病毒3型 多重荧光定量PCR
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桂科育成猪血常规指标的测定分析 被引量：8
9
作者 苏乾莲 梁家幸 +8 位作者 卿珍慧 周英宁 陈忠伟 蒋冬福 卢敬专 李斌 许松芳 段群棚 赵武 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第9期1722-1726,共5页
【目的】检测桂科育成猪的血常规指标,明确不同功能细胞(红细胞、白细胞和血小板)的数量变化及形态分布情况,为桂科猪的免疫评估与抗病性能研究提供基础数据。【方法】于49日龄起每周对44头桂科育成猪(公母各半)采血1次,连续采样7周,测... 【目的】检测桂科育成猪的血常规指标,明确不同功能细胞(红细胞、白细胞和血小板)的数量变化及形态分布情况,为桂科猪的免疫评估与抗病性能研究提供基础数据。【方法】于49日龄起每周对44头桂科育成猪(公母各半)采血1次,连续采样7周,测定其血常规指标,并与长白猪和恩施黑猪的血常规指标进行比较分析。【结果】在桂科育成猪不同日龄的红细胞类检测指标中,红细胞计数(RBC)和血红蛋白含量(HGB)均在70日龄达最低值(6.85×1012/L和97.1 g/L),显著低于49、56、63、84和91日龄时的对应值(P<0.05,下同);平均红细胞血红蛋白(MCH)和平均血红蛋白浓度(MCHC)的变化规律基本一致,均在70日龄达最低值(15.11 pg和275.70 g/L)、91日龄达最高值(16.40 pg和314.30 g/L);红细胞压积(HCT)、平均红细胞体积(MCV)和红细胞体积分布宽度(RDW)的变化相对较稳定,不同日龄间均无显著差异(P>0.05,下同)。在白细胞类检测指标中,白细胞计数(WBC)于63日龄达最低值(13.71×10~9/L)、84日龄达最高值(17.52×10~9/L),二者差异显著;中性粒细胞计数(NEUT)在70日龄时达最低值(3.61×10~9/L),显著低于49和56日龄的对应值。淋巴细胞计数(LYMPH)的变化相对较稳定,受日龄增长的影响不显著。在血小板类检测指标中,血小板计数(PLT)、血小板压积(PCT)及血小板平均分布宽度(PDW)在不同日龄的变化相对较稳定,受日龄增长的影响不显著。与35日龄长白猪和5月龄以上恩施黑猪相比,桂科育成猪除HCT、平均血小板体积(MPV)、PCT和PDW等少数指标表现异常外,其他大部分血常规指标介于长白猪与恩施黑猪血常规指标范围内。【结论】桂科育成猪在血常规指标方面有一定的独特性,发育至49~91日龄时已具备较稳定的免疫系统。 展开更多
关键词 桂科育成猪 长白猪 恩施黑猪 血常规指标 测定分析
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2015—2017年广西规模化猪场主要病毒性疫病血清流行病学调查 被引量：9
10
作者 贺会利 胡帅 +5 位作者 李军 冯世文 钟舒红 柳锋 陈泽祥 潘艳 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第14期83-86,175,共5页
为了解2015—2017年广西地区规模化猪场主要病毒性传染病的抗体水平,试验采用ELISA方法对2015—2017年来自广西不同地区的13022份猪血清样品进行猪瘟病毒(CSFV)抗体、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗体、猪圆环病毒2型(PCV-2)抗体、猪... 为了解2015—2017年广西地区规模化猪场主要病毒性传染病的抗体水平,试验采用ELISA方法对2015—2017年来自广西不同地区的13022份猪血清样品进行猪瘟病毒(CSFV)抗体、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗体、猪圆环病毒2型(PCV-2)抗体、猪伪狂犬-gB病毒(PRV-gB)抗体和猪伪狂犬野毒(PRV-gE)抗体的检测,并根据检测结果对2015—2017年主要病毒抗体阳性率及各季度、各市的抗体阳性率进行分析。结果表明:2015—2017年CSFV、PRRSV、PCV-2、PRV-gB抗体和PRV-gE感染的抗体总阳性率分别是80.68%、66.22%、83.65%、89.17%和22.43%,且CSFV、PCV-2、PRV-gB抗体和PRV-gE感染的抗体阳性率呈逐年上升趋势;不同季度以及不同地区的抗体阳性率存在一定的差异,2015—2017年各季度间CSFV的抗体阳性率差异不显著(P>0.05)。一、二、三、四季度PRRSV的抗体阳性率分别为59.94%、63.92%、68.52%、73.84%,抗体阳性率呈逐渐递升趋势,且第四季度(冬季)抗体阳性率显著高于第一季度(春季)。PCV-2的抗体阳性率从第一至第四季度呈逐渐递升趋势,且第二季度(夏季)、第三季度(秋季)和第四季度显著高于第一季度(P<0.05)。PRV-gB、PRV-gE各季度之间抗体阳性率差异不显著(P>0.05)。说明广西地区CSFV、PCV-2、PRV的免疫效果比较理想,PRRSV的免疫效果并不乐观,猪群中存在PRV野毒感染情况,应选择使用适合于本猪场的PRRSV疫苗,淘汰PRV野毒感染猪,不断净化,建立伪狂犬病阴性猪场,提高广西地区养猪场猪病的防控水平。 展开更多
关键词 广西 病毒性疫病 酶联免疫吸附试验 血清学调查 季度 地区
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最新4种猪口蹄疫O型灭活疫苗及O型-A型二价灭活疫苗免疫效果评估 被引量：8
11
作者 刘针伶 黄溢泓 +6 位作者 全琛宇 李志源 周师师 覃艳然 许宗丽 马小蓉 邱洁 《养殖与饲料》 2020年第6期11-14,共4页
试验选用政府招标的2家公司生产的猪口蹄疫O型灭活疫苗及猪口蹄疫O型-A型二价灭活疫苗共4种疫苗对健康仔猪按免疫程序进行试验,采用ELISA方法检测不同阶段抗体水平,以期评估不同猪口蹄疫疫苗的免疫效果。试验结果表明,2种O型疫苗免疫21 ... 试验选用政府招标的2家公司生产的猪口蹄疫O型灭活疫苗及猪口蹄疫O型-A型二价灭活疫苗共4种疫苗对健康仔猪按免疫程序进行试验,采用ELISA方法检测不同阶段抗体水平,以期评估不同猪口蹄疫疫苗的免疫效果。试验结果表明,2种O型疫苗免疫21 d后,其抗体阳性率就达70%,二免后抗体效价可达8log2~9log2,抗体合格率高达100%,抗体保护力持久;O型-A型二价灭活苗需2次以上免疫,才能产生较好的抗体保护力度。政府招标购买的疫苗均能产生较好的免疫效果,O型灭活苗免疫效果优于O型-A型二价灭活苗;建议口蹄疫免疫实行二次免疫,间隔28~30 d,必要时进行三免。 展开更多
关键词 猪 口蹄疫 O型灭活疫苗 O型-A型二价灭活疫苗 免疫效果
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一例猪圆环病毒3型引起母猪流产病例的诊断和分析 被引量：8
12
作者 刘磊 卢冰霞 +12 位作者 陈忠伟 秦毅斌 段群棚 周英宁 何颖 李斌 梁家幸 闭炳芬 蒋冬福 卢敬专 杨思仪 苏乾莲 赵武 《养猪》 2019年第2期113-115,共3页
2018年11月广西一存栏1 000头母猪的规模化猪场出现多头怀孕后期母猪流产现象,并将2窝流产胎儿送实验室进行检测。为了解引起母猪流产的病因,实验室采用细菌分离培养方法进行细菌分离鉴定;采用PCR/RT-PCR检测的方法检测猪瘟病毒(CSFV)... 2018年11月广西一存栏1 000头母猪的规模化猪场出现多头怀孕后期母猪流产现象,并将2窝流产胎儿送实验室进行检测。为了解引起母猪流产的病因,实验室采用细菌分离培养方法进行细菌分离鉴定;采用PCR/RT-PCR检测的方法检测猪瘟病毒(CSFV)、猪蓝耳病病毒(PRRSV)、猪乙脑病毒(JEV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)、猪圆环病毒2型(PCV2)和PCV3。结果在流产胎儿内脏组织中未分离到细菌;2窝流产胎儿内脏组织中均检测到PCV3,而其他病原均为阴性,表明PCV3感染可能是引起本次母猪流产的主要原因。 展开更多
关键词 猪圆环病毒3型 母猪 流产 检测 诊断
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罗非鱼无乳链球菌环介导等温扩增(LAMP)检测技术的建立及应用 被引量：7
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作者 余艳玲 彭昊 +3 位作者 冯世文 张永德 罗洪林 李军 《江苏农业科学》 2019年第13期200-200,201-203,共4页
针对罗非鱼无乳链球菌Sip基因建立了LAMP检测方法,并对野外样本进行了无乳链球菌的调查研究。结果表明,目标Sip基因可在63℃40min内被LAMP检测到,比PCR快约2h,其DNA检测最低浓度为3.55×10^-5ng/μL,灵敏度比PCR高100倍,且对参考细... 针对罗非鱼无乳链球菌Sip基因建立了LAMP检测方法,并对野外样本进行了无乳链球菌的调查研究。结果表明,目标Sip基因可在63℃40min内被LAMP检测到,比PCR快约2h,其DNA检测最低浓度为3.55×10^-5ng/μL,灵敏度比PCR高100倍,且对参考细菌无扩增。野外样品检测结果表明,运用LAMP检测技术对GBS的检出率为81.3%,比PCR高约20.0%。应用LAMP和PCR分别检测健康罗非鱼GBS检出率4.4%和2.2%,检测池塘水样品GBS检出率分别为10.0%和6.7%。 展开更多
关键词 罗非鱼 无乳链球菌(GBS) 环介导等温扩增(LAMP)
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猪丁型冠状病毒N基因原核表达及多克隆抗体制备 被引量：3
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作者 刘磊 何颖 +14 位作者 陈忠伟 赵武 段群棚 赵硕 梁家幸 周英宁 全琛宇 许心婷 陈婷婷 许艺兰 李斌 蒋冬福 卢敬专 秦毅斌 卢冰霞 《畜牧与兽医》 CAS 北大核心 2023年第2期67-72,共6页
旨在研究猪丁型冠状病毒(porcine deltacoronavirus,PDCoV)N蛋白的抗原性,为下一步诊断试剂盒的研发提供依据。试验通过RT-PCR的方法扩增PDCoV CH/GX/1468B/2017株完整的N基因并构建原核表达质粒pET32a-N,将pET32a-N转化至大肠杆菌BL21... 旨在研究猪丁型冠状病毒(porcine deltacoronavirus,PDCoV)N蛋白的抗原性,为下一步诊断试剂盒的研发提供依据。试验通过RT-PCR的方法扩增PDCoV CH/GX/1468B/2017株完整的N基因并构建原核表达质粒pET32a-N,将pET32a-N转化至大肠杆菌BL21感受态细胞中,经诱导表达获得重组N蛋白,纯化后经Western blot方法检测其反应原性,免疫昆明小鼠制备重组N蛋白多克隆抗体并进行效价测定(间接ELISA法)和特异性验证(间接免疫荧光法)。结果显示:重组N蛋白在IPTG终浓度为1.0 mmol/L,37℃诱导表达6 h的条件下可获得最高表达量,该重组蛋白主要以可溶性蛋白的形式表达;Western blot结果显示,纯化后的重组N蛋白可以和PDCoV阳性猪血清发生特异性结合,具有良好的反应原性。制备的多克隆抗体的效价可达1∶64000,间接免疫荧光法结果表明其能特异性识别和结合PDCoV,说明重组N蛋白具有较好免疫原性。提示:PDCoV N蛋白抗原性好,可作为诊断试剂盒的候选抗原。 展开更多
关键词 猪丁型冠状病毒 N基因 原核表达 多克隆抗体 抗原性分析
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香菇多糖对蛋鸡生长性能、免疫功能及禽流感疫苗免疫效果的影响
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作者 莫文湛 刘磊 +7 位作者 顾祖华 钟强 何宏勇 熊飚 梁礼南 邓森松 陈国活 卢冰霞 《中国饲料》 北大核心 2024年第10期63-67,共5页
为掌握香菇多糖对蛋鸡生长性能、免疫功能及禽流感疫苗免疫效果的影响,试验将120只1日龄禽流感非免疫罗曼灰蛋鸡随机分为4组,对照组不添加香菇多糖,试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组分别添加50、100、200 mg/kg香菇多糖进行试验,试验为期77 d。结果显示... 为掌握香菇多糖对蛋鸡生长性能、免疫功能及禽流感疫苗免疫效果的影响,试验将120只1日龄禽流感非免疫罗曼灰蛋鸡随机分为4组,对照组不添加香菇多糖,试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组分别添加50、100、200 mg/kg香菇多糖进行试验,试验为期77 d。结果显示,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ平均日增重显著高于对照组(P<0.05),料重比显著低于对照组(P<0.05),Ⅲ组最佳;Ⅲ组蛋鸡血清中IL-2和IFN-γ水平显著高于对照组(P<0.05);禽流感疫苗免疫后,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组蛋鸡禽流感H5抗体水平均显著高于对照组(P<0.05),Ⅲ组抗体水平最高。结果表明,香菇多糖可以提高蛋鸡生长性能、免疫功能及禽流感疫苗免疫效果,在本试验条件下,香菇多糖的最佳添加量为200 mg/kg。 展开更多
关键词 香菇多糖 蛋鸡 生长性能 免疫功能 禽流感疫苗免疫
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一株布氏乳杆菌的分离、鉴定及其特性研究
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作者 石艳 彭昊 +10 位作者 李军 李常挺 白慧丽 马春霞 陶立 彭红艳 尹杨燕 王乐平 谭奕舟 廖玉英 李珣 《广西畜牧兽医》 2024年第1期17-20,共4页
为寻找抗性菌,以替代部分抗生素,并研究其特性,试验以大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和鼠伤寒沙门氏菌为指示菌,采用牛津杯法从传统发酵食品中筛选出1株对3种病原菌均具有拮抗作用的菌株。利用菌落形态、革兰氏染色、16SrDNA序列分析来鉴定菌... 为寻找抗性菌,以替代部分抗生素,并研究其特性,试验以大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和鼠伤寒沙门氏菌为指示菌,采用牛津杯法从传统发酵食品中筛选出1株对3种病原菌均具有拮抗作用的菌株。利用菌落形态、革兰氏染色、16SrDNA序列分析来鉴定菌株,并测定其生长曲线。结果显示,试验筛选得到了1株对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和沙门氏菌均具有抑制作用的益生菌,经鉴定为布氏乳杆菌(Lentilactobacillus buchneri)。此分离菌为革兰氏阳性菌,单生或成对生长。此菌在抑菌方面具有良好的应用前景。 展开更多
关键词 布氏乳杆菌 分离 鉴定
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广西生鲜畜禽产品源致病性大肠杆菌血清型、耐药性及耐药基因调查 被引量：6
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作者 钟舒红 李军 +7 位作者 冯世文 周庆安 陈泽祥 许力士 柳锋 马春霞 胡帅 潘艳 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第11期1010-1015,共6页
目的了解广西生鲜畜禽产品中致病性大肠杆菌血清型分布、耐药性以及β-内酰胺酶blaTEM、blaCTX-M基因和氟喹诺酮类抗生素耐药基因qnrA、oqxA、oqxB、aac(6′)-Ib-cr的流行情况。方法采用玻片凝集法对2015—2016年间分离自广西生鲜畜禽... 目的了解广西生鲜畜禽产品中致病性大肠杆菌血清型分布、耐药性以及β-内酰胺酶blaTEM、blaCTX-M基因和氟喹诺酮类抗生素耐药基因qnrA、oqxA、oqxB、aac(6′)-Ib-cr的流行情况。方法采用玻片凝集法对2015—2016年间分离自广西生鲜畜禽产品中的249株致病性大肠杆菌进行"O"抗原血清型鉴定;K-B纸片法对已定型菌株进行24种常见抗生素的敏感性试验;PCR方法检测blaTEM、blaCTX-M、qnrA、oqxA、oqxB、aac(6′)-Ib-cr。结果 249株致病性大肠杆菌中136株可定型、96株未定型、17株自凝,分别占鉴定菌株的54.6%、38.6%、6.8%;136株已定型菌株分属25个血清型,以O8 (19.85%)、O86(8.82%)、O6(6.62%)、O28(6.62%)、O124(6.62%)为主要优势血清型;136株已定型菌株对24种抗生素均产生不同程度的耐药,耐药率从16.18%到100%,且全部为多重耐药,主要集中在12～18重耐药,共占多重耐药的72.06%;136株已定型菌株对6种耐药基因的检出率为qnrA 91.18%(124/136)、oqxA 80.88%(110/136)、oqxB 50.00%(68/136)、aac(6′)-Ib-cr35.29%(48/136)、blaTEM100.00%(136/136)、blaCTX-M23.53%(32/136)。结论广西生鲜畜禽产品源致病性大肠杆菌O抗原血清型呈多样性分布,耐药情况严重,临床日益严重的耐药现象与耐药基因的普遍存在有重要的关系。 展开更多
关键词 大肠杆菌 血清型 耐药性 耐药基因 畜禽产品
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血清4型禽腺病毒Fiber-2蛋白截短表达及单克隆抗体制备 被引量：6
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作者 韦悠 谢芝勋 +6 位作者 邓显文 李小凤 谢志勤 范晴 张艳芳 黄娇玲 王盛 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第8期2341-2349,共9页
【目的】获得截短表达的血清4型禽腺病毒(FAdV-4)Fiber-2重组蛋白及其单克隆抗体,为建立快速灵敏的病毒检测方法提供基础材料。【方法】对Fiber-2基因序列进行密码子优化,截取Fiber-2蛋白抗原性集中片段,PCR扩增其基因序列,连接至pET-32... 【目的】获得截短表达的血清4型禽腺病毒(FAdV-4)Fiber-2重组蛋白及其单克隆抗体,为建立快速灵敏的病毒检测方法提供基础材料。【方法】对Fiber-2基因序列进行密码子优化,截取Fiber-2蛋白抗原性集中片段,PCR扩增其基因序列,连接至pET-32a(+)构建原核表达载体。将表达的重组蛋白进行纯化,并通过Western blotting验证其在大肠杆菌中的表达情况。将重组蛋白免疫BALB/c小鼠后取脾细胞与SP2/0细胞融合,利用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)法筛选阳性细胞株,再利用秋水仙素裂解法、间接ELISA法和间接免疫荧光法(IFA)对其进行鉴定。【结果】成功构建Fiber-2基因截短片段的原核表达系统,获得大小约为67 kD的Fiber-2截短蛋白,以包涵体的形式出现,经纯化后可获得单一的特异性条带,经Western blotting鉴定证明其可与FAdV-4阳性血清结合从而产生一条特异性条带。经过4次亚克隆后筛选到5株能稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株(2C2、4F6、5A5、6G10和10B5),其抗体分泌稳定性、特异性好,诱生的细胞上清液抗体效价为1:1600~1:6400,腹水抗体效价为1:320000~1:1280000,秋水仙素裂解检测染色体数目为94~110条。2C2、4F6和10B5杂交瘤细胞分泌的抗体重链为IgG2b亚型,轻链为Kappa链;5A5和6G10杂交瘤细胞分泌的抗体重链为IgG1亚型,轻链为Kappa链。5株杂交瘤细胞株与感染FAdV-4的鸡肝癌上皮细胞系(LMH)进行IFA检测,结果均为阳性。【结论】制备的Fiber-2截短重组蛋白及单克隆抗体具有良好的反应原性和特异性,可用于FAdV-4病毒检测试剂盒研发。 展开更多
关键词 血清4型禽腺病毒(FAdV-4) Fiber-2 基因克隆 重组蛋白 单克隆抗体 Western blotting
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鸡新城疫病毒、鸡细小病毒和禽流感病毒三重PCR检测方法的建立及应用 被引量：7
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作者 奉彬 谢芝勋 +7 位作者 邓显文 张艳芳 谢丽基 谢志勤 范晴 曾婷婷 罗思思 黄娇玲 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第11期2576-2582,共7页
【目的】建立能同时检测鸡新城疫病毒(NDV)、鸡细小病毒(ChPV)和禽流感病毒(AIV)的三重PCR检测方法,为临床上快速诊断及有效防控NDV、ChPV和AIV的单一或混合感染提供技术支持。【方法】参考NCBI中已公布NDV的F基因(登录号DQ195265.1)、C... 【目的】建立能同时检测鸡新城疫病毒(NDV)、鸡细小病毒(ChPV)和禽流感病毒(AIV)的三重PCR检测方法,为临床上快速诊断及有效防控NDV、ChPV和AIV的单一或混合感染提供技术支持。【方法】参考NCBI中已公布NDV的F基因(登录号DQ195265.1)、ChPV的NS1基因(登录号GU214704.1)和AIV的M基因保守区(登录号DQ485211.1),设计合成针对NDV、ChPV和AIV的特异性引物,应用这3对引物建立三重PCR检测方法,对反应体系及扩增程序进行优化,并通过特异性试验、敏感性试验、重复性试验和临床样品检测等评估其实用性。【结果】优化后的三重PCR反应体系为ChPV和AIV的上、下游引物各0.5μL,NDV的上、下游引物各1.0μL,NDV、ChPV和AIV的核酸模板各1.0μL,Premix TaqTM 12.5μL,无RNase水补足至25.0μL。最佳扩增程序:95.0℃预变性5 min;94.0℃1 min,58.5℃1 min,72.0℃1 min,进行35个循环;72.0℃延伸10 min,12.0℃结束反应。建立的三重PCR能同时扩增出NDV(453 bp)、ChPV(687 bp)和AIV(239 bp)的特异性条带,对应的最低检测下限分别为2.5 pg NDV、6.4 pg ChPV和2.0 pg AIV,但扩增传染性支气管炎病毒(IBV)、禽呼肠孤病毒(ARV)、马立克病毒(MDV)、传染性喉气管炎病毒(AILTV)和禽肺炎病毒(APV)等病原体均呈阴性。应用建立的三重PCR对50份鸡喉头或泄殖腔棉拭子样品进行检测,结果显示有1份NDV阳性、9份ChPV阳性和2份AIV阳性样品,其中包含2份ChPV和AIV均呈阳性的样品,1份ChPV和NDV均呈阳性的样品,与常规PCR的检测结果一致。【结论】建立的三重PCR能同时对NDV、ChPV和AIV 3种病原进行特异性诊断,在混合感染病例鉴别诊断方面具有广阔的应用前景。 展开更多
关键词 鸡新城疫病毒 鸡细小病毒 禽流感病毒 三重PCR 特异性 敏感性
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单原子添加剂对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的体外抑制效果及稳定性研究
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作者 彭红艳 彭昊 +6 位作者 李军 李常挺 钟舒红 马春霞 谭文宝 廖玉英 韦英益 《广西畜牧兽医》 2023年第5期197-199,201,共4页
为研究单原子添加剂对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的体外抑菌效果。本研究采用体外共培养的方法,分析单原子添加剂对这2种常见致病菌的最小抑菌浓度和最小杀菌浓度,同时进行单原子添加剂抑菌活性的酸碱稳定性、热稳定性研究。结果表明:单... 为研究单原子添加剂对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的体外抑菌效果。本研究采用体外共培养的方法,分析单原子添加剂对这2种常见致病菌的最小抑菌浓度和最小杀菌浓度,同时进行单原子添加剂抑菌活性的酸碱稳定性、热稳定性研究。结果表明:单原子添加剂对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌最小抑菌浓度为3.125 mg/mL,最小杀菌浓度为50 mg/mL;除100℃外,其余温度处理并未对单原子添加剂抑菌效果有显著影响;pH值为4~8时,单原子添加剂对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌效果与阴性对照组无明显差异。说明单原子添加剂对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌均有很好的抑制作用,且具有良好的热稳定性和酸碱稳定性。 展开更多
关键词 单原子添加剂 大肠杆菌 金黄色葡萄球菌 抑菌效果 稳定性
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