苯甲酸、凝结芽孢杆菌和牛至油复合添加剂对大肠杆菌攻毒仔猪生长性能、抗氧化能力和空肠消化吸收功能的影响 被引量：14

1

作者 蒲俊宁 陈代文 +9 位作者 田刚 何军 郑萍 毛湘冰 虞洁 黄志清 罗钧秋 罗玉衡 朱玲 余冰 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第9期3652-3661,共10页

本试验旨在研究苯甲酸、凝结芽孢杆菌和牛至油复合添加剂对大肠杆菌攻毒仔猪生长性能、抗氧化能力、空肠黏膜二糖酶活性和养分转运载体m RNA表达的影响。选取20头平均体重(7.64±0.46)kg健康的(24±1)日龄"杜×长×... 本试验旨在研究苯甲酸、凝结芽孢杆菌和牛至油复合添加剂对大肠杆菌攻毒仔猪生长性能、抗氧化能力、空肠黏膜二糖酶活性和养分转运载体m RNA表达的影响。选取20头平均体重(7.64±0.46)kg健康的(24±1)日龄"杜×长×大"断奶仔猪,随机分为4组,每组5个重复,每个重复1头猪。对照组(CON组)和大肠杆菌组(ETEC组)饲喂基础饲粮,抗生素组(AT组)和复合添加剂组(ABO组)分别饲喂在基础饲粮中添加抗生素(20 g/t硫酸黏菌素+40 g/t杆菌肽锌)和复合添加剂(3 000 g/t苯甲酸+400 g/t凝结芽孢杆菌+400 g/t牛至油)的试验饲粮。试验第22天,ETEC、AT和ABO组仔猪灌服含3×1011CFU大肠杆菌的培养液,CON组仔猪灌服相同剂量的无菌培养液。试验期共26 d。结果表明:与CON组相比,ETEC组仔猪腹泻率和腹泻指数显著提高(P<0.05),血清和空肠黏膜丙二醛(MDA)含量显著提高(P<0.05),血清总抗氧化能力(T-AOC)和总超氧化物歧化酶(T-SOD)活性以及空肠黏膜钠-葡萄糖共转运载体1(SGLT1)m RNA表达水平显著降低(P<0.05),空肠黏膜T-AOC和T-SOD活性有降低的趋势(P<0.10)。与ETEC组相比,ABO组仔猪平均日增重(ADG)显著提高(P<0.05),仔猪料重比(F/G)显著降低(P<0.05),仔猪腹泻率和腹泻指数显著降低(P<0.05),血清和空肠黏膜MDA含量显著降低(P<0.05),血清和空肠黏膜T-AOC和T-SOD活性显著提高(P<0.05),空肠黏膜SG LT1和寡肽转运蛋白1(Pep T1)m RNA表达水平显著提高(P<0.05)。此外,与AT组相比,ABO组仔猪腹泻指数显著降低(P<0.05),血清T-AOC显著提高(P<0.05)。综上所述,饲粮添加苯甲酸、凝结芽孢杆菌和牛至油复合添加剂可显著缓解大肠杆菌攻毒诱导的仔猪腹泻,提高仔猪抗氧化能力,改善仔猪的生长性能和肠道消化吸收功能。 展开更多

关键词 苯甲酸 凝结芽孢杆菌 牛至油 生长性能 抗氧化能力 断奶仔猪

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猪肺疫多杀性巴氏杆菌的分离鉴定 被引量：10

2

作者 黄仆 代洪波 +2 位作者 刘孟良 唐蕊涵 朱玲 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第5期108-110,共3页

为了研究四川乐山某猪场爆发的保育猪严重呼吸道疾病的主要病原,试验采用病理剖检、病毒检测、细菌分离鉴定、生化鉴定、动物回归试验以及多杀性巴氏杆菌种特异性KMT基因的PCR检测对病原进行鉴定。结果表明:发病猪有严重肺炎症状,支气... 为了研究四川乐山某猪场爆发的保育猪严重呼吸道疾病的主要病原,试验采用病理剖检、病毒检测、细菌分离鉴定、生化鉴定、动物回归试验以及多杀性巴氏杆菌种特异性KMT基因的PCR检测对病原进行鉴定。结果表明:发病猪有严重肺炎症状,支气管内部有少量泡沫,腹股沟淋巴结出血、水肿,其他实质器官未见明显病理变化;病毒检测结果显示为蓝耳病病毒阳性,猪瘟病毒、伪狂犬病毒、圆环病毒2型阴性;从病猪肺脏中分离获得大肠杆菌和1株蓝耳病病毒继发的高致病性多杀性巴氏杆菌;该分离菌株对多种药物均高度敏感。 展开更多

关键词 猪肺疫 多杀性巴氏杆菌 分离 鉴定 KMT基因

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猪肺源致病性大肠杆菌和化脓隐秘杆菌混合感染病原的分离鉴定及主要毒力因子的检测 被引量：10

3

作者 蔡瑶 周雪珂 +3 位作者 江朝源 曾喻兵 徐志文 朱玲 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2020年第1期254-256,共3页

大肠杆菌是一种重要人畜共患病病原体,可感染人和多种动物,根据其对宿主寄生部位不同,划分为肠内致病性大肠杆菌和肠外致病性大肠杆菌(ExPEC)[1]。近几年来,国内外众多学者陆续报道了关于ExPEC的感染案例,指出其可特异性定殖于宿主肠道... 大肠杆菌是一种重要人畜共患病病原体,可感染人和多种动物,根据其对宿主寄生部位不同,划分为肠内致病性大肠杆菌和肠外致病性大肠杆菌(ExPEC)[1]。近几年来,国内外众多学者陆续报道了关于ExPEC的感染案例,指出其可特异性定殖于宿主肠道外,使感染宿主发生不同程度的脑膜炎、败血症、泌尿道及呼吸道感染[2]。目前在ExPEC中发现了多种毒力因子,包括与其致病性相关的毒力岛(PAI)、黏附素、侵袭素、毒素、表面抗原、铁摄取系统和分泌系统等[3]。 展开更多

关键词 猪 肠外致病性大肠杆菌 化脓隐秘杆菌 分离鉴定 混合感染 毒力基因

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2018-2019年四川省伪狂犬病毒的流行病学调查及gC、gE、TK基因遗传进化分析 被引量：9

4

作者 殷鑫欢 鲁令华 +5 位作者 王进疆 谢勇 朱玲 周莉媛 陈弟诗 徐志文 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第12期4142-4154,共13页

【背景】伪狂犬病毒(pseudorabies virus,PRV)是养猪生产中的一类重要病原,自2011年以来,我国接种了Bartha-K61疫苗的养殖场暴发了大规模的伪狂犬病疫情。【目的】调查目前四川省PRV的流行病学以及毒株的遗传进化,对2018-2019年从86个... 【背景】伪狂犬病毒(pseudorabies virus,PRV)是养猪生产中的一类重要病原,自2011年以来,我国接种了Bartha-K61疫苗的养殖场暴发了大规模的伪狂犬病疫情。【目的】调查目前四川省PRV的流行病学以及毒株的遗传进化,对2018-2019年从86个猪场收集的384份疑似PRV感染样本进行病原学检测。【方法】根据PRV-g E基因检测引物对采集的384份样品进行PCR扩增,并对不同季节、不同地区的PRV阳性率进行统计,将PRV感染与临床症状的相关性进行统计学分析。选择部分PRV阳性样本在BHK-21细胞上进行病毒的分离,随后进行分离毒株的g C、g E、TK基因的遗传进化分析。【结果】PRV阳性猪只的比率为9.9%(38/384);阳性猪场比率为16.3%(14/86);流产母猪的PRV阳性率为32.1%(27/84);种公猪阳性率为2.0%(4/198);神经症状猪的PRV阳性率为11.4%(4/35);呼吸症状猪的PRV阳性率为4.5%(3/67)。统计学分析表明,PRV感染与母猪和公猪繁殖障碍症状相关(P<0.01)。其中,冬季(12月、1月、2月)PRV阳性率最高,约为33.0%(31/94);春季(3月、4月、5月)的阳性率为9.1%(3/33);夏季和秋季的阳性率分别约为1.5%(2/130)和1.6%(2/127)。在2018-2019年共分离出3株PRV毒株,分别命名为PRV-SN、PRV-DJY、PRV-CD。PRV-XJ为本实验室2016年在四川省分离的一株毒株,为了了解毒株的遗传进化信息,先后扩增了这4个毒株的g C、g E、TK基因。序列比对表明四川分离株与国内株相似,存在额外的零星性突变和缺失。【结论】养殖场仍应加强对种猪群中伪狂犬病的净化。 展开更多

关键词 伪狂犬病毒 基因分析 流行病学调查

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2014—2016年四川省猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征病毒的血清学调查 被引量：6

5

作者 杨凡 吕文婷 +3 位作者 许思遥 毛汐语 殷玥 徐志文 《猪业科学》 2017年第1期106-109,共4页

为掌握近年来四川省现有防控体系下猪瘟(CSF)、猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)的感染和流行情况,对2014年1月—2016年6月采集于四川省共16个地区的6 489份血样,运用ELISA方法进行CSFV和PRRSV血清学调查。结果显示,2014—2016年CSFV抗体阳性... 为掌握近年来四川省现有防控体系下猪瘟(CSF)、猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)的感染和流行情况,对2014年1月—2016年6月采集于四川省共16个地区的6 489份血样,运用ELISA方法进行CSFV和PRRSV血清学调查。结果显示,2014—2016年CSFV抗体阳性率分别为78.70%、80.25%和82.08%,PRRSV抗体阳性率分别为75.97%、87.16%和88.31%;绵阳、眉山、乐山和宜宾等地的CSFV或PRRSV抗体水平低于60%,与另一种相比差异较大,可能存在免疫干扰或野毒感染;哺乳仔猪和断奶仔猪的CSFV抗体阳性率偏低,各日龄段猪群PRRSV抗体水平较理想。结果提示,四川地区猪群的CSFV、PRRSV抗体阳性率良莠不齐,有必要对饲养管理方式和免疫程序等做适当调整,以防控临床野毒的感染。 展开更多

关键词 猪瘟 猪繁殖与呼吸综合征 ELISA 血清学调查

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副猪嗜血杆菌与猪丹毒丝菌混合感染病原的分离鉴定及生物学特性分析 被引量：7

6

作者 李萍 唐小慧 +5 位作者 李新琼 周远成 刘红亮 杨凡 徐志文 朱玲 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期431-436,共6页

从疑似副猪嗜血杆菌和猪丹毒丝菌混合感染病猪无菌采集心脏、肝脏、脾脏、肺及心包积液,采用常规分离培养法分离病原菌,通过染色镜检、生化鉴定、卫星试验和核酸测序同源性比对,确诊为副猪嗜血杆菌与猪丹毒丝菌混合感染。为进一步了解2... 从疑似副猪嗜血杆菌和猪丹毒丝菌混合感染病猪无菌采集心脏、肝脏、脾脏、肺及心包积液,采用常规分离培养法分离病原菌,通过染色镜检、生化鉴定、卫星试验和核酸测序同源性比对,确诊为副猪嗜血杆菌与猪丹毒丝菌混合感染。为进一步了解2株菌的生物学特性,测定了2株菌以及混合菌液的半数致死量(LD50)以及对常用抗生素的药物敏感性。结果显示:(1)将2株菌的序列与GenBank数据库中已发表序列进行同源性比对,副猪嗜血杆菌与猪丹毒丝菌的同源性各达到96%和99%;(2)致病性试验中,SPF鼠均在接种后24h左右开始死亡,从其心脏、肝脏、脾脏及肺均回收到攻毒菌,表明2株菌均为此次疫病的主要致病菌;(3)通过测定副猪嗜血杆菌和猪丹毒丝菌的LD50分别为5.28×109、3.58×104 CFU/mL,进一步证明二者具有较强毒性。根据2株菌的LD50等体积混合2种菌液注射SPF鼠,副猪嗜血杆菌与猪丹毒丝菌LD50均出现下调,分别为3.70×109、2.51×104 CFU/mL,表明混合感染增强了二者的致病力;(4)药敏试验结果显示副猪嗜血杆菌与猪丹毒丝菌对常用抗生素的耐药性与临床耐药谱相一致,未出现新的耐受药物;同时筛选出了2种菌的共敏感药物氧氟沙星和氟苯尼考,有利于对疾病的快速治疗与防控。 展开更多

关键词 副猪嗜血杆菌 猪丹毒丝菌 混合感染模型 分离鉴定 致病性 药物敏感性 半数致死量

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伪狂犬病病毒四川流行株的分离鉴定及gE和gD基因的序列分析 被引量：7

7

作者 赵军 殷玥 +6 位作者 毛汐语 吕文婷 邓益超 樊毅 许思遥 朱玲 徐志文 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期827-833,共7页

为了解当前四川省伪狂犬病病毒(PRV)流行株的生物学特性及分子特征,2015年从四川省9个市13个猪场采集了13份疑似猪伪狂犬病病毒感染发病病例的脑组织,采用PCR鉴定、PK-15细胞分离培养、蚀斑纯化和动物回归试验等方法从脑组织中共分离得... 为了解当前四川省伪狂犬病病毒(PRV)流行株的生物学特性及分子特征,2015年从四川省9个市13个猪场采集了13份疑似猪伪狂犬病病毒感染发病病例的脑组织,采用PCR鉴定、PK-15细胞分离培养、蚀斑纯化和动物回归试验等方法从脑组织中共分离得到4株PRV,分别命名为PRV-SC-1、PRV-SC-2、PRV-SC-3、PRV-SC-4。通过对gE、g D基因序列进行遗传进化分析,结果表明,本次分离得到的PRV-SC-3株(G en Bank登录号:KU 605803)与N CBI上公布的中国广东2013年分离株KR051971.1和2015年分离株KT 936476.1的亲缘关系最近(同源性为100%),属于同一进化分支,它与2010年公布的比利时分离株F J605132.1的亲缘关系最远(同源性为97.5%);对PRV-SC-3株gE糖蛋白的生物信息学分析结果显示,分离株PRV-SC-3的T细胞抗原表位较2012年后国内分离株未发生变化,但其较比利时分离株减少了2个酪氨酸磷酸化位点。本研究结果为四川省伪狂犬病最新流行动态及病毒变异情况研究奠定了基础。 展开更多

关键词 猪 伪狂犬病病毒 分离鉴定 生物信息学分析 一步生长曲线

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伪狂犬病病毒主要毒力基因对其致细胞病变能力的影响 被引量：7

8

作者 朱玲 郭万柱 +4 位作者 王印 阳爱国 石恬 徐凯 赵玲 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第11期956-963,共8页

以伪狂犬病病毒(PRV)Fa株为对照,对PRV Fa株TK基因缺失株、PRV Fa株gI/gE双基因缺失株和PRV Fa株TK/gI/gE三基因缺失株进行了细胞培养特性的观察。包括对照毒株在内的4个毒株均按0.5 mL(1×106PFU)接种量分别感染IBRS-2、Marc-145... 以伪狂犬病病毒(PRV)Fa株为对照,对PRV Fa株TK基因缺失株、PRV Fa株gI/gE双基因缺失株和PRV Fa株TK/gI/gE三基因缺失株进行了细胞培养特性的观察。包括对照毒株在内的4个毒株均按0.5 mL(1×106PFU)接种量分别感染IBRS-2、Marc-145、ST、Vero和MDBK等细胞系;选择在接种后第0、8、12、24、36和48 h观察感染细胞的形态学变化。结果显示,这4个毒株在这5种细胞上均能增殖并引起细胞病变,但PRV基因缺失株引起的病变程度均不及Fa株。表明,PRV的不同毒力基因对其致细胞病变能力不同。 展开更多

关键词 伪狂犬病基因缺失疫苗 细胞感染 形态学

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猪霍乱沙门菌SC500运载TGEVS与猪IL-15融合基因疫苗的稳定性及免疫安全性 被引量：4

9

作者 韩国全 郭万柱 +3 位作者 孙志勇 王印 王小玉 林华 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期871-877,共7页

为研究猪霍乱沙门菌SC500作为TGEV S与IL-15融合基因疫苗pCC-S-IL-15、pCI-S-IL-15运载体的稳定性与免疫安全性,将外源表达质粒pCC-S-IL-15、pCI-S-IL-15及空载体质粒pCC-neo、pCI-neo转化SC500,采用体外增殖试验研究不同质粒在SC500中... 为研究猪霍乱沙门菌SC500作为TGEV S与IL-15融合基因疫苗pCC-S-IL-15、pCI-S-IL-15运载体的稳定性与免疫安全性,将外源表达质粒pCC-S-IL-15、pCI-S-IL-15及空载体质粒pCC-neo、pCI-neo转化SC500,采用体外增殖试验研究不同质粒在SC500中的稳定性,携带质粒的SC500对ST细胞的黏附率、侵袭力和增殖能力的影响;采用BALB/c小鼠口服免疫试验研究表达质粒在体内的稳定性及SC500对小鼠的安全性。结果显示:外源目的基因影响表达载体在运载体内的稳定性,就载体类型而言,对pCI-neo的影响大于对pCC-neo的影响;携带目的基因的外源质粒影响SC500对ST细胞的黏附率和侵袭率,pCC-neo影响大于pCI-neo;外源质粒影响SC500在小鼠体内的增殖能力,pCC-neo影响大于pCI-neo;SC500在体内的增殖中,其所运载的质粒具有一定的稳定性。结果表明,利用SC500运载基因疫苗pCC-S-IL-15、pCI-S-IL-15免疫小鼠具有相对的稳定性和免疫安全性。 展开更多

关键词 猪霍乱沙门菌 TGEV—S基因 猪白细胞介素15基因 稳定性 免疫安全性

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致病性大肠杆菌和蜡样芽胞杆菌的分离鉴定 被引量：6

10

作者 殷鑫欢 曾喻兵 +2 位作者 赵军 徐志文 朱玲 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期811-818,共8页

【背景】猪只消化道疾病是养猪业上一大重要疾病,给养猪业带来一定的经济损失。大肠杆菌是引起猪腹泻的一种常见病原菌,可以引起不同日龄的猪腹泻,但主要以幼龄猪为主。【目的】旨在分离鉴定引起四川省眉山市一规模化养猪场病猪大规模... 【背景】猪只消化道疾病是养猪业上一大重要疾病,给养猪业带来一定的经济损失。大肠杆菌是引起猪腹泻的一种常见病原菌,可以引起不同日龄的猪腹泻,但主要以幼龄猪为主。【目的】旨在分离鉴定引起四川省眉山市一规模化养猪场病猪大规模腹泻的病原菌。【方法】采用常规细菌分离方法结合16S rRNA基因序列的分析方法从发病猪肝脏、胃以及污染的饲料分离鉴定细菌,并对分离株进行小鼠致病性试验、16S rRNA基因遗传进化树分析、毒力基因的检测、药物敏感试验。【结果】从腹泻猪肝脏中分离到一株致病性大肠杆菌,胃中分离到一株蜡样芽胞杆菌,并且追溯到传染源是该猪场饲料。通过检测这两株菌相应的毒力基因发现大肠杆菌不属于肠外致病性型,蜡样芽胞杆菌检测到了nheA、nheB、nheC、bceT、entFM 5种毒力基因;药敏试验表明常规的氨基糖苷类和头孢类抗生素对大肠杆菌抑菌效果较好,红霉素、氟苯尼考、头孢氨苄、头孢哌酮对蜡样芽胞杆菌抑菌效果较好,而蜡样芽胞杆菌对青霉素、阿莫西林等常规药物不敏感。【结论】饲料存在大肠杆菌和蜡样芽胞杆菌的混合污染。 展开更多

关键词 大肠杆菌 蜡样芽胞杆菌 饲料污染 毒力基因 药敏试验

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猪伪狂犬病病毒gC基因的克隆及其部分生物学特性的分析 被引量：5

11

作者 王键义 郭万柱 +2 位作者 徐志文 王印 王小玉 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期830-836,共7页

采用PCR方法扩增出12株伪狂犬病病毒（PRV）的gC基因全序列，并测序，使用生物学软件对这12株PRVgC基因序列和GenBank上登录的6条gC基因序列进行了生物信息学分析和预测。结果显示，PRVgC基因开放阅读框的核苷酸长度为1437～1464bp，编... 采用PCR方法扩增出12株伪狂犬病病毒（PRV）的gC基因全序列，并测序，使用生物学软件对这12株PRVgC基因序列和GenBank上登录的6条gC基因序列进行了生物信息学分析和预测。结果显示，PRVgC基因开放阅读框的核苷酸长度为1437～1464bp，编码478～487个氨基酸。在遗传进化关系上，四川省流行的PRV毒株与日本、欧洲、美洲分离株的亲缘关系较近，而与我国其他地区的分离株亲缘关系较远。这些毒株的蛋白疏水性、抗原表位和高级结构等具有相似性，但也存在一些变化和差异。表明，PRVgC基因具有较高的保守性，但可能存在抗原漂移现象。 展开更多

关键词 伪狂犬病病毒 GC基因 PCR 生物学特性

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伪狂犬病毒表达载体的研究进展 被引量：4

12

作者 赵军 黄剑波 +1 位作者 朱玲 徐志文 《猪业科学》 2016年第2期102-105,共4页

随着生物工程技术的逐步发展和完善,利用伪狂犬病毒作为载体的相关研究也取得了一定突破,为后续的伪狂犬基因工程疫苗研制奠定了基础。文中以缺失处理相关基因的伪狂犬病毒作为载体,与构建的携带外源基因的质粒在细胞内同源重组的研究... 随着生物工程技术的逐步发展和完善,利用伪狂犬病毒作为载体的相关研究也取得了一定突破,为后续的伪狂犬基因工程疫苗研制奠定了基础。文中以缺失处理相关基因的伪狂犬病毒作为载体,与构建的携带外源基因的质粒在细胞内同源重组的研究现状进行了综述。 展开更多

关键词 伪狂犬病毒 表达载体 研究进展

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猪繁殖与呼吸综合征与猪δ冠状病毒病混合感染的诊断 被引量：4

13

作者 冯宇 徐志文 朱玲 《猪业科学》 2018年第12期78-79,共2页

2018年1月,四川遂宁某猪场发生保育猪大批死亡,且整窝均发病,临床症状表现为高热、喘气、水样性腹泻、呼吸急促、精神沉郁、食欲废绝等。病理解剖患病猪只均发现肺部有炎症和实变,全身各淋巴结均有肿大现象,小肠胀气且变透明,有些猪小... 2018年1月,四川遂宁某猪场发生保育猪大批死亡,且整窝均发病,临床症状表现为高热、喘气、水样性腹泻、呼吸急促、精神沉郁、食欲废绝等。病理解剖患病猪只均发现肺部有炎症和实变,全身各淋巴结均有肿大现象,小肠胀气且变透明,有些猪小肠表面有黄色米粒大小的结节。发病1 d后猪只死亡,呈现典型病毒病症状。发病率达80%,死亡率达100%。通过实验室诊断确诊为猪繁殖与呼吸综合征和猪δ冠状病毒病混合感染。 展开更多

关键词 猪繁殖与呼吸综合征 猪δ冠状病毒病 混合感染 诊断

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共表达γ干扰素的乙型脑炎病毒与猪细小病毒核酸疫苗的构建及其免疫原性研究 被引量：4

14

作者 叶茂 郭万柱 +2 位作者 徐志文 王小玉 李云云 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2010年第3期890-896,共7页

为了构建和筛选良好的猪乙型脑炎和猪细小病毒的核酸疫苗,并提高核酸疫苗的免疫效果,用重叠PCR法把PPV VP2和JEV E10连接,再将扩增的IFN-γ连入构建载体pcDNA.VEI使其共同表达。用脂质体将pcDNA.VEI介导入Vero细胞,通过间接免疫荧光法... 为了构建和筛选良好的猪乙型脑炎和猪细小病毒的核酸疫苗,并提高核酸疫苗的免疫效果,用重叠PCR法把PPV VP2和JEV E10连接,再将扩增的IFN-γ连入构建载体pcDNA.VEI使其共同表达。用脂质体将pcDNA.VEI介导入Vero细胞,通过间接免疫荧光法检测目的基因的体外表达。用pcDNA.VEI和不表达IFN-Κ的pcDNAZ.VE分别免疫Balb/c小鼠,同时设立PBS、猪细小病毒灭活疫苗、乙型脑炎弱毒疫苗和pcDNA3.1空白质粒免疫对照组。共免疫两次,间隔2周检测免疫指标。结果表明,通过鉴定核酸疫苗的构建达到了预期目标,并可在荧光显微镜下观察到了其转染的Vero细胞。该核酸疫苗能够诱导脾淋巴细胞增殖。ELISA结果显示,与pcDNA.VE和阴性对照组进行比较,pcDNA.VEI所诱导产生的两种抗体都较高。pcDNA.VEI组能较稳定的诱导产生T细胞亚群,并检测到CD4+/CD8+比例于首免2周后都高于pcDNA.VE。因此表明该核酸疫苗能产生特异诱导体液免疫和细胞免疫且是安全的,证明了IFNγ基因具有免疫增强效果,为乙脑和猪细小病毒核酸疫苗研究提供了实验依据。 展开更多

关键词 猪Γ干扰素 乙型脑炎病毒 猪细小病毒 核酸疫苗 免疫原性 增强免疫

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猪繁殖与呼吸综合征病毒四川株的分离鉴定及Nsp2生物信息学分析 被引量：3

15

作者 毛汐语 周远成 +7 位作者 赵军 殷玥 吕雯婷 邓益超 樊毅 许思遥 朱玲 徐志文 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期1497-1504,共8页

为了解四川省猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的流行情况及分子特征,本研究选用2012—2014年四川省不同地区采集并诊断为PRRSV阳性的病料,以Marc 145细胞进行病毒分离,经蚀斑纯化,病毒基因扩增、测序后与NCBI现有序列进行比对分析并通过... 为了解四川省猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的流行情况及分子特征,本研究选用2012—2014年四川省不同地区采集并诊断为PRRSV阳性的病料,以Marc 145细胞进行病毒分离,经蚀斑纯化,病毒基因扩增、测序后与NCBI现有序列进行比对分析并通过构建系统进化树等方法研究分离株的分子特征。共成功分离到10株PRRSV,分析证明所有分离毒株均是高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)株,序列比对显示,其中SC2012、SC2012-2株Nsp2部分基因与众多HP-PRRSV株核苷酸同源性在91%~97%之间,与经典毒株CH-1a株同源性为72.9%,与所有BLAST毒株相比存在新缺失位点,与CH-1a、BJ-4株相比,在Nsp2蛋白485 aa^498 aa处存在14个连续氨基酸缺失,其他8株均含30个不连续氨基酸缺失。氨基酸同源性比对显示,SC2012、SC2012-2株高变区与国内分离株同源性介于61.5%~97.2%之间。通过TCID50法测得SC2012、SCSN2012-1、SCSN2012-2、SCCD2012、SCLS2012、SCMY2012、SCBZ2012、SCXC2012、SCXJ2012和SC2012-2病毒毒价分别为10^(-5.41)/m L、10^(-6.5)/m L、10^(-7.29)/m L、10^(-6.41)/m L、10^(-5.5)/m L、10^(-7.67)/m L、10^(-6.29)/m L、10^(-6.8)/m L、10^(-7.41)/m L和10^(-6)/m L。以上结果表明,本研究所分离的SC2012、SC2012-2株是新变异毒株,为四川省PRRSV分子流行病学和遗传变异研究奠定了一定基础。 展开更多

关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 分离鉴定 NSP2 生物信息学

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PEDV M蛋白对Ⅰ型干扰素信号通路的抑制作用 被引量：2

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作者 陈盼 李莎莎 +2 位作者 朱紫祥 郑海学 徐志文 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2019年第7期40-46,共7页

【目的】研究猪流行性腹泻病毒(PEDV)M蛋白对Ⅰ型干扰素信号通路的影响。【方法】克隆PEDV M基因,构建其真核表达载体pcDNA3.1-Myc-PEDV-M,并转染HEK-293T细胞。采用Western bloting试验检测M蛋白的表达。通过双荧光素酶报告试验检测M... 【目的】研究猪流行性腹泻病毒(PEDV)M蛋白对Ⅰ型干扰素信号通路的影响。【方法】克隆PEDV M基因,构建其真核表达载体pcDNA3.1-Myc-PEDV-M,并转染HEK-293T细胞。采用Western bloting试验检测M蛋白的表达。通过双荧光素酶报告试验检测M蛋白对SeV诱导的干扰素通路活化的影响;通过Real-time PCR分析M蛋白对SeV诱导的IFN-β及干扰素刺激基因ISG54、ISG56、RIG-I mRNA表达的影响。通过过表达试验验证上调表达M蛋白对PEDV复制的影响。【结果】克隆了676 bp的PEDV M基因,成功构建其真核表达载体pcDNA3.1-Myc-PEDV-M,且其可在HEK-293T细胞中表达。PEDV M蛋白可抑制Ⅰ型干扰素信号通路的激活,且M蛋白对SeV诱导的Ⅰ型干扰素通路活化的抑制具有剂量依赖效应;M蛋白能够抑制IFN-β与干扰素诱导基因ISG52、ISG56、RIG-I mRNA的表达,并具有剂量依赖效应。过表达试验表明,M蛋白在抑制Ⅰ型干扰素信号通路激活的同时促进PEDV复制。【结论】PEDVM蛋白能够抑制Ⅰ型干扰素信号通路的激活,并促进PEDV复制。 展开更多

关键词 猪流行性腹泻病毒 PEDV M蛋白 干扰素信号通路

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一例严重猪乙型脑炎与伪狂犬病混合感染的诊断 被引量：2

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作者 赵军 朱玲 徐志文 《养猪》 2016年第1期108-110,共3页

2015年7月,四川眉山某猪场发生15日龄左右仔猪大面积死亡,临床症状表现为高热、抽搐、呼吸急促、精神沉郁、不采食等,病程短,发病1 d后死亡,呈现典型病毒病症状。发病率达80%,死亡率达100%。剖检病死猪发现全身淋巴结出血,肺瘀血、水肿... 2015年7月,四川眉山某猪场发生15日龄左右仔猪大面积死亡,临床症状表现为高热、抽搐、呼吸急促、精神沉郁、不采食等,病程短,发病1 d后死亡,呈现典型病毒病症状。发病率达80%,死亡率达100%。剖检病死猪发现全身淋巴结出血,肺瘀血、水肿,打开颅腔后发现脑和脊髓膜充血出血,通过流行病学和实验室诊断确诊为伪狂犬病和流行性乙型脑炎混合感染。 展开更多

关键词 猪乙型脑炎 猪伪狂犬病 混合感染 诊断

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一例猪伪狂犬病病毒的分离鉴定及综合防治措施 被引量：2

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作者 杨凡 徐志文 +3 位作者 李萍 方和俊 郭博 周远成 《猪业科学》 2016年第1期48-50,共3页

无菌采集疑似猪伪狂犬病病猪脑组织，进行病毒的分离鉴定。经PCR检测为阳性的病料接种PK-15细胞进行病毒分离，将所分病毒暂命名为SC株。蚀斑实验测定病毒滴度，并采用PCR和琼扩实验对其进行进一步鉴定。结果：PRV阳性病料接种PK-15细... 无菌采集疑似猪伪狂犬病病猪脑组织，进行病毒的分离鉴定。经PCR检测为阳性的病料接种PK-15细胞进行病毒分离，将所分病毒暂命名为SC株。蚀斑实验测定病毒滴度，并采用PCR和琼扩实验对其进行进一步鉴定。结果：PRV阳性病料接种PK-15细胞，传至第5代后产生稳定细胞病变，主要表现为细胞变圆、变亮、聚堆且可见典型的空斑，而对照组细胞贴壁生长良好；基于PRVgE基因的PCR检测，扩增产物为378bp，与预期目的条带一致；用病毒蚀斑技术测定该分离株的滴度为2.65×104PFU／mL；琼扩实验显示病毒原液至32倍稀释后均能与PRV阳性血清形成可见沉淀线。以上结果均表明所送检病猪为PRV阳性，据此为猪场提出综合防治措施。 展开更多

关键词 猪伪狂犬病病毒 分离鉴定 蚀斑实验 琼扩实验 综合防治

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2011年四川省部分规模化猪场猪瘟抗体水平监测 被引量：2

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作者 李淞 朱玲 +1 位作者 吴江江 周璐 《养猪》 2012年第3期114-115,共2页

为掌握四川省规模养猪场猪瘟的免疫状况，为有目的、有重点地开展相应免疫提出合理的建议，笔者对四川省生猪生产相对集中地区的15个规模化猪场的1108份血清进行了猪瘟抗体水平检测。

关键词 规模化猪场 猪瘟抗体 四川省 抗体水平 监测 免疫状况 规模养猪场 水平检测

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猪流感病毒M2多肽抗体间接ELISA检测方法的建立 被引量：1

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作者 刘红亮 周远成 +5 位作者 刘小琬 李萍 周桐枫 徐志文 朱玲 杨泽晓 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第7期700-705,共6页

为建立快速检测猪流感病毒抗体的血清学方法,利用合成的甲型流感病毒M2蛋白多肽作为包被抗原,建立了检测猪流感病毒血清抗体的间接ELISA,并对各种检测条件进行了优化。结果显示,优化后确定的抗原最适包被量为250ng/孔,血清最佳稀释度为1... 为建立快速检测猪流感病毒抗体的血清学方法,利用合成的甲型流感病毒M2蛋白多肽作为包被抗原,建立了检测猪流感病毒血清抗体的间接ELISA,并对各种检测条件进行了优化。结果显示,优化后确定的抗原最适包被量为250ng/孔,血清最佳稀释度为1∶100,酶标二抗最佳稀释度为1∶4 000。在优化条件下,阴阳性临界值的判定标准为0.249。用建立的间接ELISA对CSFV、PRRSV、PCV2、PPV、PRV、FMDV、JEV阳性血清进行了检测,均无交叉反应。用该方法对280份冬季采集的猪血清样品进行检测,有60份样品呈现阳性;同时用IDEXX甲型流感病毒抗体检测试剂盒进行平行检测,有61份样品呈现阳性,两者的符合率达到98.35%。结果表明,建立的ELISA具有良好的敏感性、特异性和可信度。本研究为猪流感的诊断和流行病学调查提供了一种准确、快速、简便的方法。 展开更多

关键词 流感病毒 猪流感病毒 M2蛋白多肽 间接ELISA

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