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博莱霉素诱导小鼠肺间质纤维化造模方式的选择 被引量:27
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作者 李丽娜 王华 +4 位作者 周蕾 张永胜 于永利 王丽颖 孙陆果 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期254-257,共4页
目的:建立博莱霉素导致肺间质纤维化小鼠动物模型,比较不同给药方式的成模差异。方法:利用8周龄雄性ICR小鼠,①随机分为腹腔给药组(P组)、气管内给药组(I组)、阴性对照组(C组),分别经腹腔注射BLM 40 mg/kg 5次、气管内滴入BLM 5 mg/kg ... 目的:建立博莱霉素导致肺间质纤维化小鼠动物模型,比较不同给药方式的成模差异。方法:利用8周龄雄性ICR小鼠,①随机分为腹腔给药组(P组)、气管内给药组(I组)、阴性对照组(C组),分别经腹腔注射BLM 40 mg/kg 5次、气管内滴入BLM 5 mg/kg 1次或气管内滴入生理盐水50μl。分别于14、28、40天处死,②小鼠随机分为4组,分别经腹腔注射BLM 40mg/kg3、4、5次或经腹腔给予生理盐水200μl。分别于28、40天处死。观察小鼠体重、咳嗽、挠鼻症状、肺系数及肺组织病理改变。结果:给予博莱霉素后①小鼠的体重均下降并出现咳嗽及挠鼻等呼吸障碍症状;处置后第14、28及40天处死小鼠,计算肺系数,P组较I组肺系数高;处死小鼠后,P组和I组小鼠均形成广泛、稳定的间质纤维化病理改变,P组主要分布在胸膜下及血管周围,而I组主要分布在肺门和支气管周围。P组较I组肺纤维化病理评分高。②不同腹腔给药次数模型小鼠体重变化以5次给药对体重影响最大;计算肺系数以给药5次肺系数变化最大。上述模型均成功建立。通过比较生存率、呼吸困难症状、组织病理变化等指标,选出腹腔给药5次相对于给药3次及4次为更好的造模方式。结论:利用BLM腹腔注射和气管内滴入制备了肺间质纤维化动物模型,纤维化形成的部位存在着一定的差异,腹腔给药5次方法制备肺间质纤维化模型的成功率更佳。 展开更多
关键词 ICR小鼠 博莱霉素 肺间质纤维化
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不同序列Cp G ODN对牙周膜细胞的促增殖作用 被引量:5
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作者 秦雁雁 申玉芹 +4 位作者 任春霞 郭恪 林崇韬 王丽颖 于永利 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期876-879,I0001,共5页
目的:用不同序列Cp G ODN刺激牙周膜细胞(PDLCs),筛选对PDLC有促增殖作用的Cp G ODN序列,为Cp G ODN在牙周病治疗上的应用提供实验依据。方法:收集因正畸治疗需要而拔除的健康前磨牙48颗,年龄10~15岁。利用组织块原代培养法培养人PDLCs... 目的:用不同序列Cp G ODN刺激牙周膜细胞(PDLCs),筛选对PDLC有促增殖作用的Cp G ODN序列,为Cp G ODN在牙周病治疗上的应用提供实验依据。方法:收集因正畸治疗需要而拔除的健康前磨牙48颗,年龄10~15岁。利用组织块原代培养法培养人PDLCs,取第4和5代细胞用于实验。实验组用1~12号Cp G ODN刺激PDLCs,分别培养24、48和72h,用PBS做对照组,MTT比色法检测吸光度A492值。结果:原代培养的PDLCs呈长梭形或星形,胞突细长,中央有圆形或椭圆型的胞核,抗波形丝蛋白染色阳性,抗角蛋白染色阴性,为中胚层来源细胞。与对照组比较,实验组Cp G ODN的A均值升高,其中9、11号Cp G ODN与对照组比较A值明显升高(P<0.05或P<0.01)。结论:Cp G ODN有促人PDLCs增殖作用,其中9、11号Cp G ODN可显著促进人PDLCs增殖。 展开更多
关键词 牙周膜细胞 CP G ODN 细胞增殖
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一种C型CpGODN对柯萨奇病毒感染小鼠的作用初探 被引量:2
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作者 杨亮 孙晚晴 +4 位作者 王莉 吴秀丽 万敏 于永利 王丽颖 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期115-117,共3页
目的:研究自行设计的C型CpGODN(D-SL01)对柯萨奇病毒感染的潜在治疗作用。方法:用柯萨奇病毒体外感染人HeLa细胞的体外模型观察CpGODN刺激的人PBMC培养上清的抗病毒作用;利用柯萨奇病毒感染小鼠模型观察腹腔内给予CpGODN对小鼠体重及心... 目的:研究自行设计的C型CpGODN(D-SL01)对柯萨奇病毒感染的潜在治疗作用。方法:用柯萨奇病毒体外感染人HeLa细胞的体外模型观察CpGODN刺激的人PBMC培养上清的抗病毒作用;利用柯萨奇病毒感染小鼠模型观察腹腔内给予CpGODN对小鼠体重及心肌病变的影响。结果:D-SL01刺激的人PBMC培养上清不仅能抵抗VSV感染VeroE6细胞,也能明显抵抗柯萨奇病毒对HeLa细胞的感染,其作用强度与A-型CpGODN2216相似。然而,当腹腔内连续给药6d后,D-SL01使柯萨奇病毒感染小鼠的质量下降及心肌病变程度与对照组小鼠相比加重。结论:研究结果提示:体内应用CpGODN的机制特别是用于病毒感染性疾病时,应该充分注意给药时机、途径及剂量。 展开更多
关键词 CPG ODN 柯萨奇病毒 心肌炎
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两种尿素浓度测定方法的比较 被引量:4
4
作者 曹昭 万敏 +4 位作者 孙陆果 胡小平 于永利 王丽颖 张培因 《中国实验诊断学》 北大核心 2010年第1期135-136,共2页
关键词 血清尿素 测定方 二甲基氨基苯甲醛 肾小球滤过功能 流动注射分析法 二乙酰一肟 浓度 临床检测
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一种重组口蹄疫疫苗的原核表达、纯化及其活性检测 被引量:3
5
作者 董博翰 王华 +4 位作者 胡小平 房明丽 张永胜 张培因 王丽颖 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期123-125,共3页
目的:利用原核表达系统诱导表达一种可以作为口蹄疫疫苗的重组蛋白J11-G,并对这种蛋白进行纯化以及活性检测。方法:对已经构建的表达载体PET28a-J11-G进行酶切鉴定,将鉴定后的重组载体PET28a-J11-G转化入大肠杆菌BL21,在BL21细菌细胞中... 目的:利用原核表达系统诱导表达一种可以作为口蹄疫疫苗的重组蛋白J11-G,并对这种蛋白进行纯化以及活性检测。方法:对已经构建的表达载体PET28a-J11-G进行酶切鉴定,将鉴定后的重组载体PET28a-J11-G转化入大肠杆菌BL21,在BL21细菌细胞中诱导表达目的蛋白,用改良的镍亲和层析法纯化目的蛋白,以ELISA检测纯化所得蛋白的活性。结果:长期冻存的重组载体PET28a-J11-G结构完整,其在大肠杆菌BL21中经1mmol/LIPTG诱导后表达出相对分子质量(Mr)约为47000的目的蛋白,经纯化后获得了产率和纯度均很高的重组蛋白J11-G,ELISA检测证明该蛋白活性良好。结论:成功地对重组蛋白J11-G进行了诱导表达,改良法有利于蛋白产率和纯度的提高,纯化蛋白具有较好的免疫活性。重组蛋白J11-G将可能成为一种抗口蹄疫疫苗。 展开更多
关键词 口蹄疫疫苗 重组蛋白 纯化 活性检测
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卡介苗HSP70的表达、纯化及活性检测 被引量:1
6
作者 李贺 曹昭 +5 位作者 张培因 卫红飞 王华 孙陆果 王丽颖 于永利 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期1112-1114,1118,共4页
目的:在大肠杆菌中表达并纯化出具有良好生物学活性的卡介苗HSP70(BCG HSP70)蛋白。方法:利用PCR技术扩增出BCG HSP70的编码基因,将其克隆到pMD18-T载体,测序分析。再将该目的基因亚克隆至pET28a表达载体,转化入大肠杆菌BL21(DE3),获得... 目的:在大肠杆菌中表达并纯化出具有良好生物学活性的卡介苗HSP70(BCG HSP70)蛋白。方法:利用PCR技术扩增出BCG HSP70的编码基因,将其克隆到pMD18-T载体,测序分析。再将该目的基因亚克隆至pET28a表达载体,转化入大肠杆菌BL21(DE3),获得正确的阳性克隆子后,用IPTG诱导表达。纯化表达产物,SDS-PAGE及Western blot鉴定目的蛋白,并通过脾增生实验检测其生物学活性。结果:扩增的BCG HSP70基因经序列测定与GenBank公布的序列完全一致。表达产物经SDS-PAGE分析,在相对分子质量(Mr)约70000处有表达条带。Western blot结果证实纯化产物在Mr约70000处可见特异性条带。蛋白纯度约96.5%。脾细胞增生试验显示,该蛋白能够明显刺激鼠脾细胞增殖。结论:成功表达并纯化了具有良好生物学活性的BCG HSP70,为进一步研究BCG HSP70及BCG的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 卡介苗 HSP70 pET28a
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新型CpG ODN对乙型肝炎病毒复制的抑制作用 被引量:2
7
作者 杨光 杨亮 +5 位作者 包木胜 刘旭 王俪波 徐海飞 王丽颖 于永利 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期487-490,共4页
目的:探讨我室自行设计的CpG ODN(CpG BW001)在体外对乙型肝炎病毒(HBV)复制的抑制作用。方法:CpGBW001刺激人外周血单个核细胞(PBMC)48小时,用VSV病毒保护实验及ELISA法检测培养上清的病毒保护能力及其中的IFNα-含量。将上述CpG BW00... 目的:探讨我室自行设计的CpG ODN(CpG BW001)在体外对乙型肝炎病毒(HBV)复制的抑制作用。方法:CpGBW001刺激人外周血单个核细胞(PBMC)48小时,用VSV病毒保护实验及ELISA法检测培养上清的病毒保护能力及其中的IFNα-含量。将上述CpG BW001刺激人PBMC的上清与HepG2.2.15细胞共孵育12天后收集培养上清,用放射免疫法检测该培养上清液中HBsAg及HBeAg的含量,用点杂交法检测HBV DNA的含量。结果:CpG BW001刺激人PBMC产生以IFNα-为主的抗病毒物质;CpG BW001刺激人PBMC的培养上清作用于HepG2.2.15细胞后,HepG2.2.15细胞培养上清中HBsAg和HBeAg的含量明显减少,且细胞内HBV DNA的含量也显著降低。结论:CpG BW001能通过刺激细胞产生抗病毒物质如IFNα-等,从而在体外抑制HBsAg和HBeAg的表达及HBV的复制。 展开更多
关键词 CPG ODN 乙型肝炎病毒 人外周血单个核细胞 干扰素
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体内稳定表达HER2多表位基因B16细胞系的建立 被引量:2
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作者 李贺 向泽敏 +5 位作者 吴秀丽 王莉 卫红飞 万敏 王丽颖 于永利 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期13-15,共3页
目的:建立体内稳定表达HER2多表位基因的小鼠黑色素瘤B16细胞系。方法:利用分子克隆技术构建真核表达载体pcDNA3-GFP-HER2,阳离子脂质体介导法将其稳定转染入B16细胞,G418克隆筛选及体内传代后,流式细胞术(FCM)分选出GFP-HER2表达阳性... 目的:建立体内稳定表达HER2多表位基因的小鼠黑色素瘤B16细胞系。方法:利用分子克隆技术构建真核表达载体pcDNA3-GFP-HER2,阳离子脂质体介导法将其稳定转染入B16细胞,G418克隆筛选及体内传代后,流式细胞术(FCM)分选出GFP-HER2表达阳性细胞群,对该群细胞进行无G418条件下的单克隆筛选并进行体内稳定性检测。结果:经限制性内切酶鉴定及序列分析,pcDNA3-GFP-HER2构建正确;最终建立的表达HER2基因B16细胞系体内传代后GFP-HER2阳性率高于90%。结论:成功建立了体内稳定表达HER2多表位基因的小鼠黑色素瘤细胞系,为其他体内稳定表达外源基因的转染细胞的建立提供了借鉴。 展开更多
关键词 小鼠黑色素瘤细胞 HER2 阳离子脂质体
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一种B型CpG ODN对乙肝疫苗的免疫佐剂作用 被引量:2
9
作者 董博翰 王莉 +3 位作者 卫红飞 张培因 于永利 王丽颖 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期52-55,共4页
目的研究一种本室设计的B型CpG ODN(BW006)作为乙肝疫苗佐剂的可行性。方法以琼脂糖凝胶电泳法对BW006的质量进行初步检定;H3-掺入法检测BW006对小鼠脾细胞的刺激作用;乙肝疫苗与BW006联合免疫Balb/c小鼠,并用ELISA法检测小鼠血清中的HB... 目的研究一种本室设计的B型CpG ODN(BW006)作为乙肝疫苗佐剂的可行性。方法以琼脂糖凝胶电泳法对BW006的质量进行初步检定;H3-掺入法检测BW006对小鼠脾细胞的刺激作用;乙肝疫苗与BW006联合免疫Balb/c小鼠,并用ELISA法检测小鼠血清中的HBsAb水平。结果BW006的纯度和完整性符合实验要求,并能显著的刺激小鼠脾细胞的增生,同乙肝疫苗联用后能够明显增强乙肝疫苗的免疫效果。结论BW006对乙肝疫苗有较强的免疫佐剂作用。 展开更多
关键词 CPG ODN 乙型肝炎肝疫苗 佐剂 HBSAG
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人乳腺癌融合蛋白疫苗HSP65-HER2的表达、纯化及活性检测 被引量:1
10
作者 曹昭 卫红飞 +5 位作者 张培因 高广宇 胡小平 于永利 王丽颖 万敏 《中国妇幼保健》 CAS 北大核心 2010年第6期824-826,共3页
目的:在大肠杆菌中表达、并纯化获得高纯度的融合蛋白疫苗HSP65-HER2。方法:经过酶切和序列分析后,将pET-28a-HSP65-HER2重组质粒转化Ecoli(BL21)中,经IPTG诱导产生6-his tag-HSP65-HER2融合蛋白,并通过Ni Sepharose 4B和Superdex G-25... 目的:在大肠杆菌中表达、并纯化获得高纯度的融合蛋白疫苗HSP65-HER2。方法:经过酶切和序列分析后,将pET-28a-HSP65-HER2重组质粒转化Ecoli(BL21)中,经IPTG诱导产生6-his tag-HSP65-HER2融合蛋白,并通过Ni Sepharose 4B和Superdex G-25纯化。以纯化的重组融合蛋白免疫小鼠,取脾细胞经体外诱导后,采用CTL活性检测其活性。结果:成功的表达、纯化获得了高纯度的HSP65-HER2融合蛋白,CTL活性检测结果表明具有生物学活性。结论:获得了高纯度的HSP65-HER2融合蛋白,并证明其具有免疫学活性,为进一步研究其生物学活性奠定了基础。 展开更多
关键词 表达 纯化 热休克蛋白65 HER2表位
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HSP65-MUC1肿瘤疫苗对小鼠胰腺组织的分子模拟作用 被引量:1
11
作者 孙琳 吴秀丽 +1 位作者 王丽颖 于永利 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期15-17,F0002,共4页
目的:探讨重组抗肿瘤融合蛋白疫苗热激蛋白65-黏蛋白1(HSP65-MUC1)在小鼠体内通过分子模拟方式损伤小鼠胰腺的可能性。方法:21只C57BL/6小鼠随机分为PBS对照组、HSP65组和HSP65-MUC1组(每组7只),分别皮下注射PBS、HSP65和HSP65-MUC1,每... 目的:探讨重组抗肿瘤融合蛋白疫苗热激蛋白65-黏蛋白1(HSP65-MUC1)在小鼠体内通过分子模拟方式损伤小鼠胰腺的可能性。方法:21只C57BL/6小鼠随机分为PBS对照组、HSP65组和HSP65-MUC1组(每组7只),分别皮下注射PBS、HSP65和HSP65-MUC1,每周1次,给药3周。无菌分离小鼠脾细胞,利用流式细胞术检测特异性淋巴细胞的增殖情况,组织病理学观察小鼠胰腺的病理改变。结果:流式细胞术检测,与PBS对照组和HSP65组比较,HSP65-MUC1肿瘤疫苗组HSP65-MUC1特异性淋巴细胞升高了16.88%(P<0.001);HSP65特异性淋巴细胞升高了7.29%(P<0.01);与HSP60交叉识别的特异性淋巴细胞升高了5.79%(P<0.05)。3个免疫组小鼠胰腺组织HE染色病理均正常。结论:HSP65-MUC1肿瘤疫苗没有通过分子模拟诱导损伤小鼠胰腺。 展开更多
关键词 重组抗肿瘤融合蛋白 疫苗 热激蛋白65-黏蛋白1 分子模拟
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一例尖锐湿疣皮损内含HPV11型和HPV31型混合感染的实验研究
12
作者 丛宪玲 朱明姬 +2 位作者 孙然 王丽颖 于永利 《中国实验诊断学》 北大核心 2009年第10期1416-1418,共3页
目的探讨尖锐湿疣(CA)患者临床特征和其皮损内HPV型别的关系。方法收集临床尖锐湿疣(CA)患者的临床资料和疣组织,以通用引物PCR,型特异性引物PCR和测序分析的方法确定尖锐湿疣皮损内HPV型别。结果发现了一例巨大尖锐湿疣皮损内含HPV11型... 目的探讨尖锐湿疣(CA)患者临床特征和其皮损内HPV型别的关系。方法收集临床尖锐湿疣(CA)患者的临床资料和疣组织,以通用引物PCR,型特异性引物PCR和测序分析的方法确定尖锐湿疣皮损内HPV型别。结果发现了一例巨大尖锐湿疣皮损内含HPV11型和HPV31型混合感染。结论尖锐湿疣皮损内可能含不同型别HPV的混合感染。 展开更多
关键词 尖锐湿疣 HPV型别 聚合酶链式反应
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卡介苗热休克蛋白70对肿瘤细胞裂解物免疫原性的影响
13
作者 李贺 王华 +6 位作者 吴秀丽 卫红飞 孙陆果 张永胜 于永利 王丽颖 万敏 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期68-71,I0002,共5页
目的:观察卡介苗热休克蛋白70(BCGHSP70)对肿瘤细胞裂解物(TCL)免疫原性的影响,为TCL相关肿瘤疫苗的制备提供依据。方法:应用冻融法制备B16黑色素瘤细胞裂解物B16TCL,将BCGHSP70与B16TCL在体外混合制备BCGHSP70-B16TCL。将C57BL/6小鼠... 目的:观察卡介苗热休克蛋白70(BCGHSP70)对肿瘤细胞裂解物(TCL)免疫原性的影响,为TCL相关肿瘤疫苗的制备提供依据。方法:应用冻融法制备B16黑色素瘤细胞裂解物B16TCL,将BCGHSP70与B16TCL在体外混合制备BCGHSP70-B16TCL。将C57BL/6小鼠随机分为BCGHSP70-B16TCL组、PBS组、BCGHSP70组和B16TCL组,分别于第1和14天皮下免疫BCGHSP70-B16TCL、PBS、BCGHSP70和B16TCL。于末次免疫后第7天处死小鼠,MTT法观察不同免疫组小鼠脾淋巴细胞在B16TCL体外刺激后的增殖情况,计算刺激指数(SI)。结果:应用冻融法能够使B16细胞完全裂解,所制备的B16TCL中含有丰富的蛋白成分。与PBS组、BCGHSP70组和B16TCL组比较,BCGHSP70-B16TCL组免疫小鼠脾脏明显增大;BCGHSP70-B16TCL免疫组SI高于PBS免疫组(P=0.00)、B16TCL免疫组(P=0.01)和BCGHSP70免疫组(P=0.00)。结论:BCGHSP70能够增强B16TCL的免疫原性,提示BCGHSP70可能作为有效的免疫佐剂用于TCL相关肿瘤疫苗的研究。 展开更多
关键词 卡介苗 热休克蛋白质类 肿瘤细胞裂解物 免疫原性 免疫佐剂
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乳鼠及人肺原代成纤维细胞的分离培养
14
作者 李丽娜 王华 +3 位作者 张永胜 王丽颖 于永利 孙陆果 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期957-958,共2页
目的建立体外原代培养乳鼠及人肺成纤维细胞的方法。方法采用非胰酶消化组织块法培养乳鼠及人肺成纤维细胞,细胞长出组织块后经形态学检测确定是否为成纤维细胞。结果乳鼠肺成纤维细胞需3~5d可增殖形成单层,并进行第1次传代;人肺成纤... 目的建立体外原代培养乳鼠及人肺成纤维细胞的方法。方法采用非胰酶消化组织块法培养乳鼠及人肺成纤维细胞,细胞长出组织块后经形态学检测确定是否为成纤维细胞。结果乳鼠肺成纤维细胞需3~5d可增殖形成单层,并进行第1次传代;人肺成纤维细胞30~35d左右增殖形成单层,并进行第1次传代。结论非胰酶消化组织块法是一种可行的成纤维细胞培养方法。 展开更多
关键词 成纤维细胞 原代培养
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应用RAW264.7-L929细胞系建立一种新型抑制性ODN的筛选方法
15
作者 孙然 杨光 +3 位作者 吴秀丽 孙陆果 王丽颖 于永利 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期172-174,共3页
目的:为研究拮抗TNF-α的新型免疫抑制性ODN建立一种快速的筛选方法。方法:以CpGODN1826作为刺激剂,将其作用于小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞,6h后收集上清,作用于L929细胞,利用L929是TNF-α敏感细胞的原理,检测TNF-α活性。结果:筛选条件... 目的:为研究拮抗TNF-α的新型免疫抑制性ODN建立一种快速的筛选方法。方法:以CpGODN1826作为刺激剂,将其作用于小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞,6h后收集上清,作用于L929细胞,利用L929是TNF-α敏感细胞的原理,检测TNF-α活性。结果:筛选条件确定为CpGODN1826终浓度为20mg/L,RAW264.7上清液1/80倍稀释。放线菌素D浓度为1mg/L,L929细胞数在2×104个/孔,反应时间为18h。应用此条件成功筛选出自行设计的抑制性ODN-IMO03。结论:建立的实验体系,能很好的区分自行设计的ODN抑制CpGODN1826诱导的RAW264.7细胞的TNF-α的生物学活性。 展开更多
关键词 抑制性ODN RAW264.7-L929细胞 TNF-Α 放线菌素D
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体外筛选对犬具有免疫刺激活性的CpG寡脱氧核苷酸
16
作者 任继玲 何春燕 +4 位作者 周蕾 张培因 万敏 王丽颖 于永利 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期304-307,共4页
建立并优化犬特异性寡脱氧核苷酸(CpGODN)的体外筛选条件,筛选自行设计的对犬具有免疫刺激活性的CpGODN。用CpGODN2006对犬的免疫细胞进行刺激,测定细胞增殖能力。对免疫细胞的来源、细胞铺板浓度、CpGODN的刺激时间和浓度及增值能力的... 建立并优化犬特异性寡脱氧核苷酸(CpGODN)的体外筛选条件,筛选自行设计的对犬具有免疫刺激活性的CpGODN。用CpGODN2006对犬的免疫细胞进行刺激,测定细胞增殖能力。对免疫细胞的来源、细胞铺板浓度、CpGODN的刺激时间和浓度及增值能力的测定方法等条件进行优化。并对自行设计的CpGODN进行了初步筛选。结果显示,犬脾细胞对CpGODN的反应性比外周血单个核细胞好。在犬脾细胞为6×105个/孔,37℃5%CO2条件下,经10mg/LCpGODN2006刺激48h,使脾细胞明显增生。3H-TdR掺入法测得的结果比MTT法更敏感。自行设计的CpGODNR008能显著地刺激犬脾细胞增生,且优于CpGODN2006(P<0.05)。结果表明,优化了犬特异性CpGODN的体外筛选条件,并筛选出了对犬具有免疫刺激活性的CpGODN。 展开更多
关键词 寡脱氧核苷酸 犬脾细胞 免疫刺激活性
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牛AsiaⅠ型口蹄疫病毒重组蛋白疫苗的构建及功能研究
17
作者 任继玲 王华 +5 位作者 张永胜 张培因 魏学峰 陈九连 王丽颖 于永利 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期312-315,共4页
目的为了取代有安全隐患的牛AsiaⅠ型口蹄疫病毒灭活疫苗,我们构建了基因工程重组蛋白疫苗。方法应用PCR方法合成含有表位的基因片段,经过克隆连接获得重组基因,在大肠杆菌中表达后经镍亲和层析纯化重组蛋白。重组蛋白免疫豚鼠后,分别经... 目的为了取代有安全隐患的牛AsiaⅠ型口蹄疫病毒灭活疫苗,我们构建了基因工程重组蛋白疫苗。方法应用PCR方法合成含有表位的基因片段,经过克隆连接获得重组基因,在大肠杆菌中表达后经镍亲和层析纯化重组蛋白。重组蛋白免疫豚鼠后,分别经ELISA和乳鼠中和实验检测血清中抗FMDV抗体水平。结果构建了牛AsiaⅠ型口蹄疫病毒重组蛋白疫苗的结构基因,并成功表达和纯化了该重组蛋白。功能实验表明,该蛋白在豚鼠体内诱生了高水平的抗牛AsiaⅠ型口蹄疫病毒的中和性抗体。结论该重组蛋白为制备牛AsiaⅠ型口蹄疫病毒新型疫苗提供了有价值的线索。 展开更多
关键词 口蹄疫 免疫 重组蛋白疫苗 表位 原核表达
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一种AsiaⅠ型口蹄疫重组表位蛋白的表达及免疫活性
18
作者 曹昭 卫红飞 +7 位作者 张培因 张永胜 徐海飞 胡小平 万敏 于永利 王丽颖 王华 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期234-236,共3页
目的构建一种能预防AsiaⅠ型口蹄疫病毒(FMDV)的感染表位重组蛋白疫苗,并对其免疫学活性进行研究。方法以AsiaⅠ型FMDV VP1上的B细胞表位和T细胞表位氨基酸序列为抗原位点,设计了包含上述位点的、具有最佳空间构象的重组蛋白,命名为&quo... 目的构建一种能预防AsiaⅠ型口蹄疫病毒(FMDV)的感染表位重组蛋白疫苗,并对其免疫学活性进行研究。方法以AsiaⅠ型FMDV VP1上的B细胞表位和T细胞表位氨基酸序列为抗原位点,设计了包含上述位点的、具有最佳空间构象的重组蛋白,命名为"CZ-1"。通过PCR及基因克隆等方法构建了其表达质粒,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达。通过镍亲和层析和G-25凝胶过滤层析纯化及复性,获得具有免疫学活性的重组蛋白CZ-1。免疫豚鼠获得含针对AsiaⅠ型FMDV中和抗体的血清,通过细胞中和试验及乳鼠中和试验,检测豚鼠血清中抗FMDV的保护性中和抗体滴度。结果该基因工程重组蛋白能够在动物体内诱导产生抗AsiaⅠ型FDMV具有保护性的中和性抗体。结论该基因工程重组蛋白有望开发成预防AsiaⅠ型FDMV感染的新型疫苗。 展开更多
关键词 基因工程疫苗 FDMV 重组蛋白 活性检测
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人乳头瘤病毒重组蛋白疫苗的计算机辅助设计及真核表达
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作者 任继玲 王华 +4 位作者 杨明 王丽 吴秀丽 王丽颖 于永利 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期38-40,共3页
目的:设计并表达预防16型人乳头瘤病毒感染的重组蛋白疫苗。方法:选取HPV16型病毒L1蛋白上的B表位和T表位,将其连接组合成多种方式,利用计算机预测蛋白质的三维结构,选取其中最优的结构进行基因克隆构建,并利用杆状昆虫系统进行表达。结... 目的:设计并表达预防16型人乳头瘤病毒感染的重组蛋白疫苗。方法:选取HPV16型病毒L1蛋白上的B表位和T表位,将其连接组合成多种方式,利用计算机预测蛋白质的三维结构,选取其中最优的结构进行基因克隆构建,并利用杆状昆虫系统进行表达。结果:利用计算机设计出了一种重组蛋白,成功构建了该重组蛋白的结构基因,并在杆状昆虫表达系统中得到表达。结论:成功构建并表达了人乳头瘤病毒的重组蛋白疫苗。 展开更多
关键词 人乳头瘤病毒 重组蛋白疫苗 计算机辅助设计 真核表达
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CpG 002促进人胚肺成纤维细胞增殖及Ⅰ型胶原表达
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作者 李丽娜 王华 +5 位作者 张永胜 王颖 吴秀丽 孙陆果 于永利 王丽颖 《中国实验诊断学》 北大核心 2010年第3期352-354,共3页
目的观察C型CpG ODN(002)对人胚肺成纤维细胞增殖及表达Ⅰ型胶原的影响。方法采用人胚肺成纤维细胞(human embryonic lung fibroblast,HELF)作为靶细胞,以细胞计数的方法观察两种C型CpG ODN对HELF细胞增殖的影响,以RT-PCR方法检测CpG OD... 目的观察C型CpG ODN(002)对人胚肺成纤维细胞增殖及表达Ⅰ型胶原的影响。方法采用人胚肺成纤维细胞(human embryonic lung fibroblast,HELF)作为靶细胞,以细胞计数的方法观察两种C型CpG ODN对HELF细胞增殖的影响,以RT-PCR方法检测CpG ODN诱导HELFⅠ型胶原mRNA的表达情况。结果两种C型CpG ODN(CpG 001和CpG 002)均能明显刺激HELF增殖,但只有CpG 002也同时表现出诱导HELF表达Ⅰ型胶原的作用。结论C型CpG ODN 002能促进人胚肺成纤维细胞增殖及分泌Ⅰ型胶原。 展开更多
关键词 人胚肺成纤维细胞 增殖 Ⅰ型胶原 CPG ODN
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