禾谷镰刀菌拮抗菌的筛选与鉴定 被引量：13

1

作者 蔺国强 廖玉才 +1 位作者 宫安东 李和平 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期28-32,共5页

从土壤中分离获得1株具有较强拮抗作用的细菌菌株X-42,经形态特征、16S rDNA序列分析,将其鉴定为解淀粉芽孢杆菌。该菌可产生一系列具有抑菌功能的代谢物,抑制禾谷镰刀菌生长。从X-42菌株发酵液中分离纯化代谢物,经硫酸铵沉淀的脂肽类... 从土壤中分离获得1株具有较强拮抗作用的细菌菌株X-42,经形态特征、16S rDNA序列分析,将其鉴定为解淀粉芽孢杆菌。该菌可产生一系列具有抑菌功能的代谢物,抑制禾谷镰刀菌生长。从X-42菌株发酵液中分离纯化代谢物,经硫酸铵沉淀的脂肽类物质用于抑菌分析,结果表明,来自X-42的脂肽物,既能直接破坏禾谷镰刀菌菌丝结构,也能影响分生孢子萌发,导致菌丝及孢子局部膨大。小麦开花期的田间赤霉病防治研究表明,在接种禾谷镰刀菌前和接种后施用拮抗菌X-42代谢物,均可有效防治赤霉病,其防治效果高达79%～88%,与化学杀菌剂多菌灵相当。 展开更多

关键词 拮抗 解淀粉芽孢杆菌 生物防治 禾谷镰刀菌 小麦赤霉病

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小麦茎尖丛生芽诱导及植株再生 被引量：8

2

作者 张杰 李和平 +1 位作者 廖玉才 瞿波 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期403-407,共5页

为了筛选不受季节限制的小麦遗传转化受体,研究了3个小麦栽培品种在3种萌发培养基、4种诱导培养基、3种不同诱导时间和3种生根培养基下从茎尖直接诱导丛生芽的最佳条件和方法。结果表明,MB5基本培养基不添加任何激素最适于小麦成熟胚萌... 为了筛选不受季节限制的小麦遗传转化受体,研究了3个小麦栽培品种在3种萌发培养基、4种诱导培养基、3种不同诱导时间和3种生根培养基下从茎尖直接诱导丛生芽的最佳条件和方法。结果表明,MB5基本培养基不添加任何激素最适于小麦成熟胚萌发;而在MB5培养基中添加1.0 mg/L TDZ和0.5 mg/L IBA,小麦茎尖丛生芽诱导率最高;单个茎尖形成丛生芽的数目,随诱导时间延长而增加,诱导时间以不超过30 d为宜;品种间的丛生芽诱导率及丛生芽形成数目没有差异;最佳生根培养基为1/2 MS基本培养基添加1.0 mg/LIBA。由丛生芽诱导再生发育形成的植株开花结实正常。这些研究结果为建立基于小麦丛生芽的再生及遗传转化体系提供了方法。 展开更多

关键词 诱导 丛生芽 成熟胚 顶端分生组织 小麦

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伏马菌素B_1特异单链抗体的同源建模及分子对接模拟研究 被引量：7

3

作者 胡祖权 李和平 +2 位作者 张静柏 刘锦龙 廖玉才 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第7期618-622,共5页

目的分析伏马菌素B1(Fumonisin B1,FB1)与其特异单链抗体的分子互作模式。方法通过同源建模构建和优化抗FB1单链抗体的三维结构,结合Procheck和Verify 3D等方法评价得到稳定的抗体模型,利用分子对接研究单链抗体与其抗原FB1的结合特性... 目的分析伏马菌素B1(Fumonisin B1,FB1)与其特异单链抗体的分子互作模式。方法通过同源建模构建和优化抗FB1单链抗体的三维结构,结合Procheck和Verify 3D等方法评价得到稳定的抗体模型,利用分子对接研究单链抗体与其抗原FB1的结合特性、疏水性和表面静电力作用。结果单链抗体的互补决定区参与同其抗原FB1的结合,抗体与抗原之间不仅形成稳定的氢键,疏水性和静电力的匹配也很好。结论氢键结合力、分子间疏水相互作用和静电力的共同作用,使得单链抗体形成一个能够与FB1高度互补的相互作用区域,并在抗体与抗原的特异性识别及结合稳定性等方面起着关键作用。 展开更多

关键词 伏马菌素B1 单链抗体 同源建模 分子对接

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农杆菌介导的小麦转化体系的优化 被引量：5

4

作者 张月婷 廖玉才 +3 位作者 黄涛 刘正位 高春生 李和平 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期23-27,共5页

为建立农杆菌介导的高效小麦遗传转化体系,分析比较了不同小麦栽培品种、不同培养处理条件下的愈伤诱导、分化及转化效率。结果表明:2个长江中下游主推小麦品种扬麦158和华麦13的幼胚愈伤诱导没有差异,但扬麦158形成的胚性愈伤多、分化... 为建立农杆菌介导的高效小麦遗传转化体系,分析比较了不同小麦栽培品种、不同培养处理条件下的愈伤诱导、分化及转化效率。结果表明:2个长江中下游主推小麦品种扬麦158和华麦13的幼胚愈伤诱导没有差异,但扬麦158形成的胚性愈伤多、分化率及转化率高于华麦13,是优良的农杆菌介导的遗传转化受体基因型。预培养20d的愈伤转化率最高,高渗处理可进一步提高转化率。获得的T0、T1代转基因植株,经PCR分析鉴定,表明外源基因已经整合到小麦基因组中。 展开更多

关键词 小麦 农杆菌 幼胚 除草剂 转化体系

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植物叶绿体基因工程研究进展 被引量：5

5

作者 程琳 瞿波 +1 位作者 李和平 廖玉才 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期249-259,共11页

植物叶绿体基因工程与细胞核基因工程相比,具有许多独特的优势,如能够实现外源基因特异整合及高效表达、多基因共表达、外源基因不会随花粉扩散、没有位置效应和基因沉默等。目前已在16种植物中成功获得叶绿体转基因植株,改良了植物的... 植物叶绿体基因工程与细胞核基因工程相比,具有许多独特的优势,如能够实现外源基因特异整合及高效表达、多基因共表达、外源基因不会随花粉扩散、没有位置效应和基因沉默等。目前已在16种植物中成功获得叶绿体转基因植株,改良了植物的农艺性状,特别是在烟草叶绿体中高效表达了40多种外源蛋白,包括多种抗体和疫苗。尽管如此,这项技术目前尚未用于主要粮食作物的性状改良。本文综述了植物叶绿体基因工程的原理、技术、应用、难点及进展。 展开更多

关键词 质体转化 叶绿体 筛选标记基因 植物生物反应器

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根癌农杆菌介导的大麦茎尖转化研究 被引量：4

6

作者 黎冬华 廖玉才 李和平 《麦类作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期44-47,共4页

为了建立农杆菌介导的大麦茎尖遗传转化技术,以我国大麦主推品种鄂大麦9号、鄂大麦32122为材料,以农杆菌介导法转化大麦茎尖,经PPT筛选获得了转抗除草剂基因的大麦株系。PCR鉴定表明,以鄂大麦9号茎尖为受体,筛选获得4个转基因植株,阳性... 为了建立农杆菌介导的大麦茎尖遗传转化技术,以我国大麦主推品种鄂大麦9号、鄂大麦32122为材料,以农杆菌介导法转化大麦茎尖,经PPT筛选获得了转抗除草剂基因的大麦株系。PCR鉴定表明,以鄂大麦9号茎尖为受体,筛选获得4个转基因植株,阳性率为0.59%;以鄂大麦32122茎尖为受体,筛选获得10个阳性植株,阳性率为1.96%。转基因T1代Southern杂交分析证实,外源基因确已整合到大麦基因组中,已鉴定的转基因株系均含单个转基因拷贝,不同转基因株系整合的位点不同。因此大麦茎尖可作为农杆菌转化的受体。本研究结果为拓宽大麦遗传转化受体提供了技术和方法。 展开更多

关键词 大麦 茎尖 农杆菌介导的转化

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抗镰刀菌单链抗体在大肠杆菌中可溶性表达条件的研究 被引量：4

7

作者 胡祖权 李和平 +2 位作者 吴平 廖玉才 张静柏 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期238-243,共6页

通过优化诱导表达条件,实现抗镰刀菌单链抗体在大肠杆菌周质中高效可溶性表达。将抗镰刀菌单链抗体FvSG7转化到大肠杆菌XL1-Blue中,确定诱导表达培养基,在不同的诱导温度、诱导剂IPTG的浓度和诱导时间条件下培养重组大肠杆菌,通过Wester... 通过优化诱导表达条件,实现抗镰刀菌单链抗体在大肠杆菌周质中高效可溶性表达。将抗镰刀菌单链抗体FvSG7转化到大肠杆菌XL1-Blue中,确定诱导表达培养基,在不同的诱导温度、诱导剂IPTG的浓度和诱导时间条件下培养重组大肠杆菌,通过Western杂交和ELISA检测分析单链抗体的可溶性表达情况以及抗体的活性。重组大肠杆菌培养至OD600nm为0.5时加入终浓度为0.1 mmol/L IPTG,25℃诱导表达2 h可获得最大量的可溶性单链抗体。通过对诱导温度、IPTG浓度和诱导时间等表达条件的优化,可以显著提高Fv SG7抗体在大肠杆菌XL1-Blue周质中的表达量。 展开更多

关键词 单链抗体 可溶性表达 大肠杆菌 优化

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基于抗体的小麦赤霉病抗性研究进展 被引量：3

8

作者 廖玉才 李和平 《科技导报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第22期68-74,共7页

由镰刀菌引起的小麦赤霉病,不仅降低产量和品质,所形成的真菌毒素还会影响食品安全。植物缺乏高抗小麦赤霉病的资源,因此从动物中筛选、分离抗病抗体及其基因,可为培育植物抗病品种提供新种质,也拓展了开发研究新抗源的渠道。抗病抗体... 由镰刀菌引起的小麦赤霉病,不仅降低产量和品质,所形成的真菌毒素还会影响食品安全。植物缺乏高抗小麦赤霉病的资源,因此从动物中筛选、分离抗病抗体及其基因,可为培育植物抗病品种提供新种质,也拓展了开发研究新抗源的渠道。抗病抗体能特异靶向真菌蛋白、抑制抗原的功能;抗体与抗菌肽和顺式表达调控元件结合,使病菌能诱导抗体融合蛋白在镰刀菌侵染小麦的颖壳高效表达,从而有效抑制病菌侵入、扩展及毒素积累。本文综述抗病抗体的抗原类型、抗病抗体及其融合蛋白在体外和植物中的表达以功能、抗原基因结构与功能、抗体抗病机理的研究进展。 展开更多

关键词 抗体介导的抗病性 小麦赤霉病 镰刀菌 膜蛋白 乙二醛氧化酶 真菌毒素

原文传递

抗伏马菌素B1单克隆重组抗体的筛选 被引量：2

9

作者 胡祖权 李和平 +3 位作者 刘锦龙 吴平 廖玉才 张静柏 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期1912-1916,共5页

为了克服无功能抗体编码基因及基因重组等因素导致PCR直接从杂交瘤细胞中扩增组装的重组抗体不一定具有活性,分离伏马菌素B1(fumonisin B1,FB1)的特异重组抗体,首先通过杂交瘤技术制备分泌抗FB1单克隆抗体的杂交瘤细胞株,然后构建单克... 为了克服无功能抗体编码基因及基因重组等因素导致PCR直接从杂交瘤细胞中扩增组装的重组抗体不一定具有活性,分离伏马菌素B1(fumonisin B1,FB1)的特异重组抗体,首先通过杂交瘤技术制备分泌抗FB1单克隆抗体的杂交瘤细胞株,然后构建单克隆重组抗体基因文库,利用噬菌体展示技术筛选抗FB1的重组抗体,并分析比较其亲和力。结果筛选得到的4个杂交瘤细胞株均能够稳定分泌抗FB1单克隆抗体,从抗体基因文库中获得抗FB1的重组抗体FBMH7,分析结果显示其结合能力相对其亲本单克隆抗体降低3.7倍,但仍对FB1抗原具有较高的亲和力(KD=2.00×10-7),为发展伏马菌素的免疫检测技术体系奠定了基础。 展开更多

关键词 伏马菌素 单克隆抗体 噬菌体展示 重组抗体 亲和力

原文传递

绿色荧光蛋白基因在小麦禾谷镰刀菌中的表达与鉴定 被引量：2

10

作者 李和平 张静柏 廖玉才 《麦类作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期824-828,共5页

为了获得稳定表达绿色荧光蛋白(GFP)的我国代表性小麦禾谷镰刀菌菌株用于小麦抗赤霉病接种鉴定与分析,以禾谷镰刀菌武昌菌株Fg175原生质体为受体,经PEG介导将序列优化的水母GFP基因转入该菌株中,分析鉴定了转基因菌株GFP基因的表达。PC... 为了获得稳定表达绿色荧光蛋白(GFP)的我国代表性小麦禾谷镰刀菌菌株用于小麦抗赤霉病接种鉴定与分析,以禾谷镰刀菌武昌菌株Fg175原生质体为受体,经PEG介导将序列优化的水母GFP基因转入该菌株中,分析鉴定了转基因菌株GFP基因的表达。PCR分析表明,Fg175基因组中整合了GFP基因,Western blot检测到高效表达的GFP特异蛋白;激光共聚焦显微镜及体视显微镜观察进一步证实,转基因菌株Fg175-GFP的分生孢子、菌丝及接种小麦麦穗均可发出清晰的绿色荧光。 展开更多

关键词 小麦 禾谷镰刀菌 真菌原生质体 绿色荧光蛋白 荧光图像

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禽流感病毒HA基因在拟南芥中的表达 被引量：2

11

作者 张鹏 廖玉才 +2 位作者 黄涛 瞿波 李和平 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期386-389,共4页

将H5N1亚型禽流感病毒血凝素(HA)基因构建到植物表达载体,经农杆菌法转入拟南芥基因组中,酶联免疫吸附(ELISA)测定分析T2代转基因株系,据OD值筛选获得HA基因高效表达株系;RT-PCR及Western blot分析进一步证实,这些转基因株系均可转录HA... 将H5N1亚型禽流感病毒血凝素(HA)基因构建到植物表达载体,经农杆菌法转入拟南芥基因组中,酶联免疫吸附(ELISA)测定分析T2代转基因株系,据OD值筛选获得HA基因高效表达株系;RT-PCR及Western blot分析进一步证实,这些转基因株系均可转录HA基因,翻译形成相应的蛋白质。拟南芥叶片中表达积累的HA蛋白经亲和层析纯化,Western blot分析检测到1条分子量为65 ku的蛋白质带,与预期的HA蛋白大小完全一致,没有发生蛋白质降解现象。表明禽流感病毒HA蛋白可在植物细胞中稳定表达,植物可用于生产禽流感疫苗。 展开更多

关键词 禽流感病毒 血凝素基因 拟南芥 植物表达蛋白 亲和层析纯化

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基因枪介导的转Vp-1基因小麦的获得及检测 被引量：1

12

作者 杨晨 黄涛 《湖北农业科学》 北大核心 2014年第2期265-267,271,共4页

为了探究源于玉米的抗穗发芽基因Vp-1改良小麦(Triticum aestivum L.)抗穗发芽性状的可行性,以pmi及bar为筛选标记基因,通过基因枪介导法将Vp-1基因导入小麦栽培品种郑麦9023幼胚愈伤组织中,用甘露糖和双丙氨磷(Bialaphos)2种不同的筛... 为了探究源于玉米的抗穗发芽基因Vp-1改良小麦(Triticum aestivum L.)抗穗发芽性状的可行性,以pmi及bar为筛选标记基因,通过基因枪介导法将Vp-1基因导入小麦栽培品种郑麦9023幼胚愈伤组织中,用甘露糖和双丙氨磷(Bialaphos)2种不同的筛选剂筛选得到抗性植株并对其进行PCR鉴定。结果显示,通过pmi/甘露糖筛选体系得到53株抗性植株,其中5株为转基因小麦植株,转化率为0.29%;通过bar/Bialaphos筛选体系得到152株抗性植株,其中11株为转基因小麦植株,转化率为0.78%。 展开更多

关键词 小麦(Triticum AESTIVUM L.) 基因枪转化 Vp-1基因 pmi基因 BAR基因

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鸡源性抗FB_1噬菌体单链抗体库的构建与鉴定 被引量：1

13

作者 胡祖权 李和平 +2 位作者 张静柏 刘锦龙 廖玉才 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期991-995,共5页

目的构建免疫鸡源性噬菌体单链抗体基因文库,筛选鉴定抗伏马菌素B1(fumonisin B1,FB1)的单链抗体。方法制备抗原免疫来亨母鸡,提取脾脏RNA反转录后通过PCR扩增获得单链抗体编码基因,构建单链抗体基因文库,噬菌体展示技术筛选抗FB1单链抗... 目的构建免疫鸡源性噬菌体单链抗体基因文库,筛选鉴定抗伏马菌素B1(fumonisin B1,FB1)的单链抗体。方法制备抗原免疫来亨母鸡,提取脾脏RNA反转录后通过PCR扩增获得单链抗体编码基因,构建单链抗体基因文库,噬菌体展示技术筛选抗FB1单链抗体,并利用表达ELISA检测抗体的亲和力。结果构建的单链抗体库的质量较高,通过噬菌体展示淘选和ELISA鉴定获得5个抗FB1的单链抗体。结论成功构建鸡源性抗FB1噬菌体单链抗体库,并鉴定获得抗FB1的单链抗体,表明鸡源性噬菌体单链抗体库可用于分离FB1等小分子半抗原的特异单链抗体。 展开更多

关键词 伏马菌素 鸡源性单链抗体 噬菌体展示 酶联免疫吸附实验

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油菜叶绿体多顺反子定点整合表达载体的构建

14

作者 李文品 廖玉才 +1 位作者 黄涛 李和平 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期460-466,共7页

根据拟南芥叶绿体基因组序列设计PCR引物,从我国甘蓝型油菜栽培品种F4叶绿体基因组中克隆了长度为1.5kb的trnI和trnA2个基因序列,核酸序列分析表明它们与拟南芥基因的同源性高达94%和99%,这两个克隆的油菜叶绿体基因组序列trnI和trnA被... 根据拟南芥叶绿体基因组序列设计PCR引物,从我国甘蓝型油菜栽培品种F4叶绿体基因组中克隆了长度为1.5kb的trnI和trnA2个基因序列,核酸序列分析表明它们与拟南芥基因的同源性高达94%和99%,这两个克隆的油菜叶绿体基因组序列trnI和trnA被用于构建叶绿体定点整合表达载体。利用烟草叶绿体基因强启动子Prrn和终止子TpsbA,以及筛选标记基因aadA和目的基因HSA,构建了多顺反子表达盒Prrn-aadA-HSA-TpsbA,将表达盒置于油菜叶绿体trnI和trnA序列之间,最后构建成油菜叶绿体多顺反子定点整合表达载体pIPaHTA。酶切鉴定及序列分析证实,构建的表达载体具有预期的调控元件及结构,这为后期油菜叶绿体转化体系的建立奠定了基础。 展开更多

关键词 油菜(Brassica napus) 叶绿体 同源重组 多顺反子表达载体

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人类免疫缺陷病毒单克隆抗体在小麦胚乳中的表达

15

作者 齐燕妮 廖玉才 +2 位作者 胡祖权 章美云 李和平 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期9-13,共5页

为了建立利用小麦生产抗人类免疫缺陷病毒(HIV)单克隆抗体的方法,将植物胚乳特异启动子AsGlo分别与该抗体的重链(HC)和轻链(LC)连接构建小麦表达载体,以基因枪法转入小麦品种扬麦158。转基因T0～T3代PCR鉴定表明,HC和LC在小麦基因组中... 为了建立利用小麦生产抗人类免疫缺陷病毒(HIV)单克隆抗体的方法,将植物胚乳特异启动子AsGlo分别与该抗体的重链(HC)和轻链(LC)连接构建小麦表达载体,以基因枪法转入小麦品种扬麦158。转基因T0～T3代PCR鉴定表明,HC和LC在小麦基因组中共整合和稳定遗传。RT-PCR分析表明,IgG重链和轻链基因可在小麦胚乳中正常转录。酶联免疫吸附(ELISA)进一步证实了IgG在小麦胚乳中的积累和抗原结合活性,表明IgG蛋白能够在小麦胚乳中稳定表达,可利用小麦种子生产抗HIV抗体。 展开更多

关键词 转基因小麦 HIV 单克隆杭体 胚乳 特异表达

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禽流感病毒表面抗原HA基因转化小麦的初步研究

16

作者 常向博 廖玉才 李和平 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期266-269,共4页

为了建立利用小麦生产禽流感口服疫苗的方法,选择禽流感病毒H5N1亚型表面抗原HA基因,与谷类作物启动子构建小麦表达载体,经基因枪法转入我国小麦栽培品种郑9023幼胚,在含5 mg/L草铵膦愈伤诱导培养基和分化培养基及含4 mg/L草铵膦生根培... 为了建立利用小麦生产禽流感口服疫苗的方法,选择禽流感病毒H5N1亚型表面抗原HA基因,与谷类作物启动子构建小麦表达载体,经基因枪法转入我国小麦栽培品种郑9023幼胚,在含5 mg/L草铵膦愈伤诱导培养基和分化培养基及含4 mg/L草铵膦生根培养基上筛选后,PCR鉴定获得转HA基因植株,Southern杂交分析转基因T1代植株证实,外源HA基因确已整合到小麦基因组中。 展开更多

关键词 禽流感病毒 基因枪转化 小麦 植物生物反应器

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