目的 :比较全长重组人釉原蛋白(recombinant human amelogenin,rhAm)和猪釉基质蛋白(enamel matrix proteins,EMPs)体外诱导人骨髓基质细胞(human bone marrow stromal cells,hBMSCs)成骨分化的作用,探讨rhAm促进hBMSCs成骨的调控机制,...目的 :比较全长重组人釉原蛋白(recombinant human amelogenin,rhAm)和猪釉基质蛋白(enamel matrix proteins,EMPs)体外诱导人骨髓基质细胞(human bone marrow stromal cells,hBMSCs)成骨分化的作用,探讨rhAm促进hBMSCs成骨的调控机制,为rhAm临床应用提供理论依据。方法:经诱导表达并纯化得到25 k Da全长rhAm;利用乙酸法提纯猪EMPs,体外原代培养hBMSCs。采用实时定量PCR及Western印迹法检测不同时间点rhAm和EMPs作用hBMSCs后成骨因子(Runx2、ALP、COL-I)的变化,观察时效关系。采用碱性磷酸酶和茜素红染色检测2种蛋白对hBMSCs成骨矿化作用的影响。采用SPSS 13.0软件包对数据进行统计学分析。结果:体外培养获得原代hBMSCs。实时定量PCR、Western印迹及细胞染色结果表明,10μg/m L rhAm和200μg/m L EMPs均可明显促进hBMSCs中成骨相关因子的基因及蛋白表达,且这种效果和蛋白作用时间有一定相关性。结论 :rhAm与EMPs均能明显促进hBMSCs成骨,作用效果具有一定的时间依赖性。展开更多
文摘目的 :比较全长重组人釉原蛋白(recombinant human amelogenin,rhAm)和猪釉基质蛋白(enamel matrix proteins,EMPs)体外诱导人骨髓基质细胞(human bone marrow stromal cells,hBMSCs)成骨分化的作用,探讨rhAm促进hBMSCs成骨的调控机制,为rhAm临床应用提供理论依据。方法:经诱导表达并纯化得到25 k Da全长rhAm;利用乙酸法提纯猪EMPs,体外原代培养hBMSCs。采用实时定量PCR及Western印迹法检测不同时间点rhAm和EMPs作用hBMSCs后成骨因子(Runx2、ALP、COL-I)的变化,观察时效关系。采用碱性磷酸酶和茜素红染色检测2种蛋白对hBMSCs成骨矿化作用的影响。采用SPSS 13.0软件包对数据进行统计学分析。结果:体外培养获得原代hBMSCs。实时定量PCR、Western印迹及细胞染色结果表明,10μg/m L rhAm和200μg/m L EMPs均可明显促进hBMSCs中成骨相关因子的基因及蛋白表达,且这种效果和蛋白作用时间有一定相关性。结论 :rhAm与EMPs均能明显促进hBMSCs成骨,作用效果具有一定的时间依赖性。