二温式PCR检测猪传染性胸膜肺炎放线杆菌方法的建立与应用 被引量：9

1

作者 庞耀珊 谢芝勋 +3 位作者 刘加波 邓显文 唐小飞 谢志勤 《广西农业科学》 CSCD 2006年第2期203-205,共3页

为了探索简便、快速确诊猪传染性胸膜肺炎的方法,根据猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(APP)apx IV基因序列,设计合成1对特异性引物,建立聚合酶链反应(PCR)检测APP的方法。采用该方法对APP和其他6种猪病病原核酸进行检测,结果只对APP扩增出与... 为了探索简便、快速确诊猪传染性胸膜肺炎的方法,根据猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(APP)apx IV基因序列,设计合成1对特异性引物,建立聚合酶链反应(PCR)检测APP的方法。采用该方法对APP和其他6种猪病病原核酸进行检测,结果只对APP扩增出与预期大小相符的422bp DNA片段,而对其他6种猪病病原核酸的扩增结果为阴性。该PCR最低可检出10pg的APP DNA。对送检的46份可疑病猪组织进行检测,结果有19份样品为阳性,27份为其他病原感染。 展开更多

关键词 猪 传染性胸膜肺炎放线杆菌 聚合酶链反应 检测

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实时荧光反转录聚合酶链式反应检测甲型H1N1流感病毒RNA 被引量：4

2

作者 王晓东 王然 +1 位作者 李凤焕 陈兆拮 《检验医学与临床》 CAS 2017年第A01期57-59,共3页

目的 快速准确检测甲型H1N1流感病毒,提高流感亚型鉴别诊断水平.方法 采用实时荧光反转录聚合酶链式反应（real-time FQ RT-PCR）检测385例流感患者鼻咽拭子标本和血浆H1N1-RNA.结果 68例患者鼻咽拭子甲型H1N1-RNA阳性率为17.66%,治疗第... 目的 快速准确检测甲型H1N1流感病毒,提高流感亚型鉴别诊断水平.方法 采用实时荧光反转录聚合酶链式反应（real-time FQ RT-PCR）检测385例流感患者鼻咽拭子标本和血浆H1N1-RNA.结果 68例患者鼻咽拭子甲型H1N1-RNA阳性率为17.66%,治疗第3、5、7天后甲型H1N1流感患者鼻咽拭子甲型H1N1-RNA阳性阴转率分别为20.51%、66.67%和91.02%,鼻、咽拭子标本检测H1N1-RNA有差异（P〈0.01）,血浆H1N1-RNA检出1例阳性.结论 real-time FQ RT-PCRneng能快速准确检测甲型H1N1流感病毒核酸,有利于早期治疗和疫情控制. 展开更多

关键词 聚合酶链式反应 反转录 流感病毒A型 HIN1亚型 抗原 核酸

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子宫内膜异位症患者AHSG基因突变及芳香酶P450表达的相关性研究

3

作者 陈素琴 张君娜 +1 位作者 李楠 李全香 《中国妇幼保健》 CAS 北大核心 2008年第31期4447-4450,共4页

目的：探讨子宫内膜异位症患者α2-Hs-糖蛋白（AHSG）基因突变及芳香酶P450在子宫内膜异位症患者内膜的表达。方法：以50例Ⅳ期子宫内膜异位症患者（评分〉40）及62例非子宫内膜异位症对照者的外周血白细胞为样本，利用聚合酶链反应（po... 目的：探讨子宫内膜异位症患者α2-Hs-糖蛋白（AHSG）基因突变及芳香酶P450在子宫内膜异位症患者内膜的表达。方法：以50例Ⅳ期子宫内膜异位症患者（评分〉40）及62例非子宫内膜异位症对照者的外周血白细胞为样本，利用聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PER）技术分析了α2-Hs-糖蛋白（AHSG）基因突变。取对照组在位子宫内膜及Ⅳ期子宫内膜异位症患者在位及异位子宫内膜为标本，采用免疫组织化学方法测定各组内膜组织腺细胞中芳香酶P450的表达，根据阳性率和表达强度进行量化评分（组织化学评分）。结果：Ⅳ期子宫内膜异位症组中AHSG基因的三种基因型野生型（wide—type，W）、杂合型（wide—mutation，WM）、突变型（mutate—type，M）各占44％；46％、10％，而对照组则分别为71％、25．8％、3．2％。将突变型与杂合型合并与野生型比较，两组间差异有显著性（Χ^2=8．317，P=0．004），其OR为3．111（95％CI为1．422—6．805），携带变异基因的患病风险率高。AHSG＊1、AHSG＊2等位基因频率总体分布差异有显著性（Χ^2=8．723，P=0．003），携带AHSG＊2等位基因患病危险度高，OR为2．561（95％CI为1．358—4．831）。Ⅳ期子宫内膜异位症组在位子宫内膜腺胞芳香酶P450的表达为（2．1±1．2）分，显著高于对照组为（0．9±1．1）分，两组比较，差异有统计学意义（P〈0．01）。Ⅳ期子宫内膜异位症组异位内膜腺胞芳香酶P450的表达为（1．5±1．0）分，显著低于在位子宫内膜组，两组比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：AHSG＊2基因可使患Ⅳ期卵巢子宫内膜异位囊肿的遗传易感性升高。子宫内膜异位症患者在位、异位内膜腺细胞芳香酶P450表达增加，可促进异位病灶的生长，表达不同反映了不同类型的子宫内膜异位症组织雌激素调节水平不同。 展开更多

关键词 Ⅳ期卵巢子宫内膜异位囊肿 基因多态性 聚合酶链式反应 限制性片段长度多态性 α2-Ha-糖蛋白(AHSG)

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消疣液体外抗尖锐湿疣皮损中HPV的研究 被引量：5

4

作者 孟昭影 刘金禄 +3 位作者 高永荣 李采青 卢成 徐振刚 《中国皮肤性病学杂志》 CAS 北大核心 2007年第2期103-104,共2页

目的观察中药消疣液在体外对尖锐湿疣皮损HPV的杀灭作用。方法以白花蛇舌草、土茯苓、黄柏、姜黄等10味中药制备成消疣液酊剂,将其作用于离体尖锐湿疣皮损组织中的HPV,应用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)技术,通过定量检测HPV-DNA的扩增... 目的观察中药消疣液在体外对尖锐湿疣皮损HPV的杀灭作用。方法以白花蛇舌草、土茯苓、黄柏、姜黄等10味中药制备成消疣液酊剂,将其作用于离体尖锐湿疣皮损组织中的HPV,应用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)技术,通过定量检测HPV-DNA的扩增情况,研究其抗病毒作用。结果经消疣液作用后,DNA扩增受到抑制,检测结果阴性;而对照组,扩增没有受到抑制,结果为阳性。结论消疣液具有明确的杀灭HPV的作用,阐明了其治疗CA的作用机制。 展开更多

关键词 消疣液 人乳头瘤病毒 聚合酶链反应

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核糖体DNA聚合酶链反应诊断新生儿败血症 被引量：4

5

作者 滕懿群 孙眉月 +3 位作者 尚世强 洪文澜 金益人 陈黎勤 《中华儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 1998年第7期418-420,共3页

目的比较１６ＳｒＤＮＡ高度保守区引物聚合酶链反应（ＰＣＲ）与血培养及非特异性诊断指标对新生儿败血症的诊断价值。方法对１３１例拟诊为败血症的新生儿血标本进行细菌ＤＮＡ检测。结果１３１例中，ＰＣＲ检测阳性５６例，阳性率为... 目的比较１６ＳｒＤＮＡ高度保守区引物聚合酶链反应（ＰＣＲ）与血培养及非特异性诊断指标对新生儿败血症的诊断价值。方法对１３１例拟诊为败血症的新生儿血标本进行细菌ＤＮＡ检测。结果１３１例中，ＰＣＲ检测阳性５６例，阳性率为４３％，明显高于血培养的阳性率（血培养阳性２３例，阳性率１８％）。１３１例拟诊败血症中，发现２３例确诊败血症及３１例临床败血症，对这５４例败血症（血培养阳性２３例＋临床败血症３１例）作ＰＣＲ检查，结果阳性４８例，阴性６例；对１３１例中的７７例“非败血症”病例，ＰＣＲ检测阴性６９例，阳性８例。对血培养阳性的２３例进行ＰＣＲ，结果阳性２２例。以血培养作为确诊标准，ＰＣＲ检测的敏感性为９６％，并不受抗生素治疗的影响。３０例阴性对照组ＤＮＡ的ＰＣＲ分析均为阴性。结论在严格控制污染的条件下。 展开更多

关键词 DNA 核糖体 聚合酶链反应 新生儿败血症 诊断

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马尔尼菲青霉酵母相消减cDNA文库的构建及初步筛选 被引量：3

6

作者 刘红芳 席丽艳 +3 位作者 李希清 鲁长明 张军民 马黎 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期218-221,226,共5页

目的构建马尔尼菲青霉酵母相抑制性消减cDNA文库,寻找其在酵母相中的差异表达基因。方法分别提取马尔尼菲青霉菌丝相和酵母相的总RNA并合成cDNA,然后应用抑制性消减杂交技术(SSH),以酵母相为tester(检测子),菌丝相为driver(驱赶子),连... 目的构建马尔尼菲青霉酵母相抑制性消减cDNA文库,寻找其在酵母相中的差异表达基因。方法分别提取马尔尼菲青霉菌丝相和酵母相的总RNA并合成cDNA,然后应用抑制性消减杂交技术(SSH),以酵母相为tester(检测子),菌丝相为driver(驱赶子),连接不同的接头,通过两轮杂交和两次抑制性PCR后,将产物与T载体连接并转染大肠杆菌。经PCR鉴定,共得到480条插入片段。序列分析和同源性比较表明一些基因与细胞壁抗原、转运蛋白、氧化还原酶等具有同源性。结果成功构建了一个以酵母相为tester(检测子)的抑制性消减cDNA文库。结论所构建的cDNA消减文库为进一步筛选马尔尼菲青霉致病相关基因奠定了基础。 展开更多

关键词 马尔尼菲青零 抑制性消减杂交 聚合酶链反应

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胰岛素降解酶基因rs11187007位点多态性与妊娠期糖尿病患者胰岛素抵抗、全身炎症反应的相关性 被引量：5

7

作者 赵倩 高岚 《中国妇幼保健》 CAS 2018年第2期384-387,共4页

目的探讨胰岛素降解酶基因rs11187007位点单核苷酸多态性与妊娠期糖尿病(GDM)遗传易感性及患者胰岛素抵抗、全身炎症反应的相关性。方法将2015年1月~2017年1月在该院住院分娩的186例GDM孕妇和158例葡萄糖耐量正常的孕妇分别纳为观察组... 目的探讨胰岛素降解酶基因rs11187007位点单核苷酸多态性与妊娠期糖尿病(GDM)遗传易感性及患者胰岛素抵抗、全身炎症反应的相关性。方法将2015年1月~2017年1月在该院住院分娩的186例GDM孕妇和158例葡萄糖耐量正常的孕妇分别纳为观察组和对照组,检测计算患者胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、胰岛β细胞功能指数(HOMA-β)、外周血C-反应蛋白(CRP)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,并采用限制性片段长度多态性聚合酶链反应(PCR-RFLP)技术对胰岛素降解酶基因rs11187007位点进行基因分型,开展相关分析。结果观察组胰岛素降解酶基因rs11187007位点AG基因型频率明显高于对照组,AA基因型频率明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。AG基因型孕妇HOMA-IR、外周血CRP、IL-2及TNF-α水平均明显高于AA和GG基因型孕妇(P<0.05),HOMA-β明显低于AA和GG基因型孕妇(P<0.05)。二元Logistic回归分析显示,AG基因型是GDM的独立危险因素(OR=3.800,P<0.05)。结论胰岛素降解酶基因rs11187007位点AG基因型在GDM发病过程中有一定作用,且与胰岛素功能异常、全身炎症反应有关,可能是GDM的易感基因。 展开更多

关键词 胰岛素降解酶基因 rs11187007位点 单核苷酸多态性 妊娠期糖尿病 限制性片段长度多态性聚合酶链反应

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夏枯草对Raji细胞多药耐药基因表达影响的研究 被引量：4

8

作者 张明智 王艳 《中国实用医刊》 2009年第3期24-25,27,共3页

目的探讨夏枯草（prunella vulgaris，PV）对Raji细胞多药耐药基因（mdr1）表达的影响。方法MTT法测定阿霉素（ADM）单用、PV与不同浓度梯度ADM联合应用对Raji细胞半数抑制率（IC50）的影响；运用逆转录多聚酶链式反应（RT—PCR）检测... 目的探讨夏枯草（prunella vulgaris，PV）对Raji细胞多药耐药基因（mdr1）表达的影响。方法MTT法测定阿霉素（ADM）单用、PV与不同浓度梯度ADM联合应用对Raji细胞半数抑制率（IC50）的影响；运用逆转录多聚酶链式反应（RT—PCR）检测不同浓度的PV对Raji细胞mdr1基因表达水平的影响。结果①PV和ADM联用与ADM单用相比，可降低Raji细胞对ADM的，C50值（P〈0．05）。②Raji细胞有mdr1基因的表达。③不同浓度的PV（三个浓度）作用于Raji细胞后其mdr1基因的表达水平有不同程度下调，且随着PV浓度的增加，下调作用更加明显（P〈0．05）。结论PV能部分逆转Raji细胞对阿霉素的耐药性，其机制可能与调节mdr1基因表达水平有关。 展开更多

关键词 夏枯草 RAJI细胞 逆转录多聚酶链反应 多药耐药基因

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基于PCR-DGGE技术分析白木香结香前后内生真菌的变化 被引量：4

9

作者 邹欣涛 万幸 +2 位作者 张韧 邝枣园 黄雅丽 《中药新药与临床药理》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期221-225,共5页

目的比较白木香结香前后内生真菌群落结构和变化,探讨内生真菌对白木香结香的影响。方法分别提取白木香结香前后总DNA,采用真核生物r DNA ITS区通用引物ITS1F-gc/ITS2进行扩增,变性梯度凝胶电泳(Polymerase Chain Reaction-Denaturing G... 目的比较白木香结香前后内生真菌群落结构和变化,探讨内生真菌对白木香结香的影响。方法分别提取白木香结香前后总DNA,采用真核生物r DNA ITS区通用引物ITS1F-gc/ITS2进行扩增,变性梯度凝胶电泳(Polymerase Chain Reaction-Denaturing Gradient Gel Electrophoresis,PCR-DGGE)分离后,切割回收条带进行克隆、测序和比对。结果 PCR-DGGE图谱聚类表明,未结香组与结香组分别聚在一起;与未结香组比较,结香组基因型丰富度、香农多样性指数显著提高(P<0.01);回收条带测序比对结果多为真菌,极个别序列无比对结果。结论白木香结香前后内生真菌群落存在差异,内生真菌可能参与白木香的结香过程。 展开更多

关键词 白木香 内生真菌 沉香 变性梯度凝胶电泳

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RNA干扰抑制肝癌细胞KDR基因表达的实验研究 被引量：1

10

作者 刘颖 崔广凯 +1 位作者 王晶岩 王杰 《中国厂矿医学》 2009年第6期644-646,共3页

目的通过研究RNA干扰(RNAi)对肝癌细胞激酶功能区受体(kinase domain receptor,KDR)基因表达的抑制,为肝癌基因治疗提供理论依据。方法应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测KDR在肝癌细胞系HHCC、HepG2、Hep-6及正常肝细胞L-02的表... 目的通过研究RNA干扰(RNAi)对肝癌细胞激酶功能区受体(kinase domain receptor,KDR)基因表达的抑制,为肝癌基因治疗提供理论依据。方法应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测KDR在肝癌细胞系HHCC、HepG2、Hep-6及正常肝细胞L-02的表达情况,筛选KDR高表达细胞株。设计构建针对KDR的靶向小干扰RNA(siRNA)质粒载体,通过脂质体转染高表达细胞株HHCC,观察其干扰效果。细胞计数法观察KDR-siRNA对HHCC细胞生长的影响。结果酶切鉴定、DNA测序分析证实重组质粒构建成功,分别命名为KDR-siRNA1、KDR-siRNA2和KDR-siRNA3。荧光定量PCR结果显示:3个KDR-siRNA转染的HHCC细胞株KDR的表达明显受到抑制,抑制率分别为68.86%、82.63%和64.47%,其中KDR-siRNA2抑制作用最为明显;转染阳性和阴性对照组载体的HHCC细胞和未转染的HHCC细胞生长趋势较为一致,且生长速度明显高于转染3种KDR-siRNA表达载体的HHCC。从接种第2天开始,KDR-siRNA转染组与对照组比较,细胞增殖明显受到抑制(P<0.01)。结论KDR靶向RNAi重组质粒载体能有效抑制肝癌HHCC细胞KDR基因的表达和细胞增殖,为探索KDR介导的肿瘤基因治疗的新途径奠定了实验基础。 展开更多

关键词 激酶功能区受体 RNA干扰 小干扰RNA 逆转录聚合酶链反应 实时定量聚合酶链反应 肝癌细胞株

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PCR杂交梳技术在乙型肝炎诊断中的应用 被引量：2

11

作者 郭劲松 曾令兰 +2 位作者 李淑莉 罗端德 李璐 《中西医结合肝病杂志》 CAS 1999年第3期8-9,共2页

目的:为临床诊断乙型肝炎提供灵敏、准确、可靠的实验依据。方法:采用PCR杂交梳(反相膜杂交法),对71例乙型肝炎患者血清进行DNA验证性检测,并与一般聚合酶链反应(PCR琼脂糖凝胶电泳法)同步对比分析。结果:71例乙型肝炎患者血清中杂交梳... 目的:为临床诊断乙型肝炎提供灵敏、准确、可靠的实验依据。方法:采用PCR杂交梳(反相膜杂交法),对71例乙型肝炎患者血清进行DNA验证性检测,并与一般聚合酶链反应(PCR琼脂糖凝胶电泳法)同步对比分析。结果:71例乙型肝炎患者血清中杂交梳方法检出HBV DNA阳性58例,阳性率81.7％;琼脂糖凝胶电泳质检出HBV DNA阳性50例,阳性率70％。结论:PCR杂交梳法较PCR法具有更高特异性和敏感性。 展开更多

关键词 聚合酶链反应 乙型肝炎 诊断

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大鼠脊髓缺血再灌注损伤后MMP-9的基因表达变化 被引量：2

12

作者 赵庆华 贾连顺 +1 位作者 周许辉 宋滇文 《颈腰痛杂志》 2007年第3期182-185,共4页

目的研究脊髓缺血再灌流损伤过程中的脊髓神经细胞MMP-9表达的变化。方法30只成年Wistar大鼠,解剖分离腹主动脉,按缺血和再灌流各时间段分别阻断开放腹主动脉,造成脊髓腰尾段缺血,假手术组不阻断腹主动脉,取缺血前、缺血30min、缺血60m... 目的研究脊髓缺血再灌流损伤过程中的脊髓神经细胞MMP-9表达的变化。方法30只成年Wistar大鼠,解剖分离腹主动脉,按缺血和再灌流各时间段分别阻断开放腹主动脉,造成脊髓腰尾段缺血,假手术组不阻断腹主动脉,取缺血前、缺血30min、缺血60min,缺血30min再灌注2、6、10h后,分别造成脊髓缺血再灌注损伤模型,每个时相点5只。对局部脊髓逆转录PCR(RT-PCR)及荧光定量PCR检测基质金属蛋白酶9(MMP-9)的表达水平。结果正常对照组(缺血前)脊髓可见少量MMP-9表达,而实验组(缺血30min、缺血60min)MMP-9基因表达明显增加,再灌注2、6、10h,MMP-9mRNA表达逐渐增加,且MMP-9的基因表达较缺血期明显增加,各组之间存在明显的差异(P<0.05)。结论MMP-9在脊髓缺血再灌注中起一定作用,再灌注期细胞内MMP-9基因表达明显多于缺血期,MMP-9与缺血再灌注时间之间存在时效关系,表明MMP-9可能参与脊髓再灌流损伤,是脊髓再灌注损伤过程中一个重要的病理学环节,研究结果对于揭示脊髓继发性损伤的发病机理具有积极意义。 展开更多

关键词 脊髓缺血再灌注损伤 神经细胞 逆转录聚合酶链反应

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应用聚合酶链反应突变和克隆HIV-lgag基因片段 被引量：2

13

作者 吉昌华 苏成芝 阎小君 《中国病毒学》 CSCD 1992年第3期265-271,共7页

作者设计并合成了一对突变引物PGO1和PGO2,分别在两引物中设计了两个突变点,使突变后基因含有EcoRI、BamHI和ATG及TAA序列,以便于HlV-1gag基因序列的定向克隆和表达。用PCO1和PGO2作引物,采用PCR方法从HIV-1基因组DNA中扩增出一个长504b... 作者设计并合成了一对突变引物PGO1和PGO2,分别在两引物中设计了两个突变点,使突变后基因含有EcoRI、BamHI和ATG及TAA序列,以便于HlV-1gag基因序列的定向克隆和表达。用PCO1和PGO2作引物,采用PCR方法从HIV-1基因组DNA中扩增出一个长504bp的DNA片段,用EcoRl和BamHI双酶切位点将此片段定向克隆入pUC19质粒。将克隆基因插入M13mp18进行DNA序列分析,结果表明,该基因序列及读框完全正确,且在其5′末端突变出EcoRI位点和ATG起始码,3′末端突变出TAA终业码和BamHI位点,从而为该基因的表达研究奠定了基础。 展开更多

关键词 聚合酶链反应 克隆 免疫缺陷病毒

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头颈部肿瘤基因组中HPV16DNA的同源序列 被引量：2

14

作者 杨平 赵文先 +4 位作者 刘学锋 伍欣星 丁晓华 姚昌德 杨强 《中国病毒学》 CSCD 1992年第3期259-264,共6页

利用头颈部肿癌临床活检新鲜组织和石蜡包埋组织的两种处理标本,分别采用核酸分子杂交和聚合酶链反应(PCR)两种技术,分析了头颈部肿瘤组织基因组中人乳头瘤病毒16型的同源序列,并研究HPV16的感染同头颈部肿瘤发生发展的关系。结果表明:1... 利用头颈部肿癌临床活检新鲜组织和石蜡包埋组织的两种处理标本,分别采用核酸分子杂交和聚合酶链反应(PCR)两种技术,分析了头颈部肿瘤组织基因组中人乳头瘤病毒16型的同源序列,并研究HPV16的感染同头颈部肿瘤发生发展的关系。结果表明:1.喉鳞状细胞癌DNA中有HPV16 DNA同源序列,检测频率在20.0％以上。2.PCR扩增石蜡包埋肿瘤组织DNA中HPV16的URR(病毒基因上游调控区)中的序列,电泳分析扩增产物在喉乳头状瘤、喉癌、鼻腔内翻性乳头瘤和口腔癌中检测率分别是11.1％、20.0％、42.9％和27.3％。3.研究表明HPV16 DNA阳性率与喉癌原发部位,分化程度和临床分期之间可能有一定的相关性。 展开更多

关键词 头颈部肿瘤 人乳头瘤病毒 PCR

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孕妇血浆胎儿DNA定量分析在产前性别诊断中的应用 被引量：1

15

作者 李晓红 林正 +2 位作者 武学清 庄广伦 郭应禄 《中国全科医学》 CAS CSCD 2003年第9期720-722,共3页

目的 探索一种早期、快速、非创伤性的围生期胎儿性别的诊断方法。方法 应用即时定量TagMan探针DNA扩增技术,检测61例妊娠8～39周的正常孕妇游离在血浆内的无细胞胎儿DNA的SRY基因,并有针对性的对部分孕妇检测妊娠过程中及产后母体血浆... 目的 探索一种早期、快速、非创伤性的围生期胎儿性别的诊断方法。方法 应用即时定量TagMan探针DNA扩增技术,检测61例妊娠8～39周的正常孕妇游离在血浆内的无细胞胎儿DNA的SRY基因,并有针对性的对部分孕妇检测妊娠过程中及产后母体血浆中代表母体与胎儿DNA总和的β-珠蛋白基因和代表胎儿DNA的SRY基因的变化关系。结果 妊娠第8周可在母体外周血浆中检测出胎儿游离DNA,其数量随妊娠时间增加而增高;30例孕妇血浆中游离DNA检则SRY基因阳性,经证实均为男性胎儿,31例SRY基因阴性,经证实均为女性胎儿,符合率为100％,分娩6个月后,SRY基因基本从母体血浆中消失。结论 即时定量TagMan探针DNA扩增技术,检测游离在孕妇血浆内的无细胞胎儿DNA,能早期鉴别胎儿性别,为早期诊断某些选择性遗传性疾病开拓了一条新的途径。 展开更多

关键词 孕妇 血浆 胎儿 DNA 定量分析 产前诊断 临床应用 聚合酶链反应 性别鉴定

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巢式PCR检测人乳头状瘤病毒的方法学建立及临床应用

16

作者 王瑜敏 陈洁 +3 位作者 陶志华 陈占国 周武 何晶晶 《中华医院感染学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期1039-1041,共3页

目的建立巢式PCR(nPCR)检测人乳头状瘤病毒的方法学及作临床应用。方法以MY09/MY11为外引物,GP5+/GP6+为内引物建立nPCR,优化体系,评价其特异性和灵敏度,同时检测了54例HPV DNA阳性、4例弱阳性、42例阴性的标本,与基因导流杂交法作一致... 目的建立巢式PCR(nPCR)检测人乳头状瘤病毒的方法学及作临床应用。方法以MY09/MY11为外引物,GP5+/GP6+为内引物建立nPCR,优化体系,评价其特异性和灵敏度,同时检测了54例HPV DNA阳性、4例弱阳性、42例阴性的标本,与基因导流杂交法作一致比较。结果检测到单一目的片段;最低能检测到1∶16 384稀释的HPV18阳性对照品,明显高于MY09/MY11方法;nPCR法检测到60例HPV DNA阳性标本,40例HPV DNA阴性的标本,与基因导流杂交法具有较好的一致性(χ2=39.518,P<0.001;Kappa=0.628,P<0.001)。结论所建立的nPCR具有较好的特异性和灵敏度,与基因导流杂交法具有较好一致性。 展开更多

关键词 巢式PCR 基因导流杂交法 人乳头状瘤病毒 MY09/MY11 GP5^+/GP6^+

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用聚合酶链反应诊断男性淋菌性尿道炎

17

作者 陈涤平 许鹏 +4 位作者 桂晓峰 历建欣 胡安华 王善征 徐秦 《实用男科杂志》 CSCD 1995年第2期98-100,共3页

采用聚合酶反应（ＰＣＲ），对１５０例男性淋菌性尿道炎病人进行检测。与直接涂片检查的结果相比较，ＰＣＲ具有快速、特异和敏感的特点。

关键词 聚合酶链反应 淋病 尿道炎

全文增补中

补充验证试验在抗-HCV检测中的应用

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作者 蔡怡珊 郑大利 +1 位作者 黄金宝 欧阳钦芬 《旅行医学科学》 2005年第3期34-36,共3页

目的探讨补充验证试验在一般人群抗-HCV 检测中的应用。方法应用重组免疫印迹实验(RIBA)对血清抗-HCV 酶联检测结果阳性者进行抗-HCV 确认,并应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测 HCV RNA。结果 2002-2003年福州市部分人群血清抗-HCV ... 目的探讨补充验证试验在一般人群抗-HCV 检测中的应用。方法应用重组免疫印迹实验(RIBA)对血清抗-HCV 酶联检测结果阳性者进行抗-HCV 确认,并应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测 HCV RNA。结果 2002-2003年福州市部分人群血清抗-HCV 酶联检测的阳性率为0.593%,低于贵州出入境人群和部分地区无偿献血员的抗-HCV 检出率,而与长沙和南京地区无偿献血员的检出率相近。抗-HCV 酶联检测阳性者经 RIBA 确认后,仅1例阳性,6例为阴性.另有5例结果为不确定。5例不确定者的血清经 RT-PCR 检测 HCV RNA,结果均为阴性。结论 RIBA 和RT-PCR作为抗-HCV 酶联检测的补充试验有助于抗-HCV 检测结果的确认和解释,可在抗-HCV检测中推广应用。 展开更多

关键词 丙型肝炎病毒 重组免疫印迹实验(RIBA) 逆转录聚合酶链反应(RT—PCR)

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包装细胞转导提高逆转录病毒滴度的研究

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作者 傅建新 陈子兴 +2 位作者 王玮 岑建农 阮长耿 《江苏医药》 CAS CSCD 1998年第10期706-708,共3页

将含标志基因NeoR的逆转录病毒载体pLXSN用脂质体转染法导入包装细胞，然后利用宿生范围不同的包装细胞（PA317／GP＋envAm12与GP＋E86）相互转导来提高病毒滴度，并用敏感方法检测其安全性。结果显示脂质体DOSPER转染法获得生产细胞的... 将含标志基因NeoR的逆转录病毒载体pLXSN用脂质体转染法导入包装细胞，然后利用宿生范围不同的包装细胞（PA317／GP＋envAm12与GP＋E86）相互转导来提高病毒滴度，并用敏感方法检测其安全性。结果显示脂质体DOSPER转染法获得生产细胞的病毒滴度为（2．0～8．0）×105CFU／ml，而病毒相互转导方法则为（2．8～16）×106CFU／ml，可提高滴度达10倍以上；以NIH3T3细胞为靶细胞证实NeoR基因可被重组病毒转移至靶细胞基因组，巢式PCR与标志基因补救分析均未能检测到野生型辅助病毒。提示“乒乓效应”为提高病毒滴度的有效方法且无辅助病毒产生，因而该基因转移系统是安全的。 展开更多

关键词 逆转录病毒 基因转移 基因标记 白血病 基因治疗

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CD44V8-10在胃癌诊断中的意义 被引量：2

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作者 刘宇宏 刘敬忠 +2 位作者 肖白 王世鑫 夏成青 《中华肿瘤杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期489-489,共1页

关键词 CD44V8-10 胃癌 诊断 聚合酶链反应

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