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夏枯草苯丙氨酸解氨酶基因的克隆与表达分析 被引量：15
1
作者 许锋 曹腾 +3 位作者 宁迎晶 蒋丽阳 张威威 程水源 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2012年第1期39-44,共6页
苯丙氨酸解氨酶(PAL)是迷迭香酸合成途径中的关键酶之一,根据其他植物PAL基因的保守区域设计特异引物,利用3'-RACE-PCR技术,本研究首次从夏枯草中克隆得到了PAL基因的cDNA片段序列,命名为PvPAL,Gen-Bank登录号为JN65446。PvPAL基因c... 苯丙氨酸解氨酶(PAL)是迷迭香酸合成途径中的关键酶之一,根据其他植物PAL基因的保守区域设计特异引物,利用3'-RACE-PCR技术,本研究首次从夏枯草中克隆得到了PAL基因的cDNA片段序列,命名为PvPAL,Gen-Bank登录号为JN65446。PvPAL基因cDNA片段长1 306 bp,其中编码区域为1 047 bp,编码349个氨基酸。蛋白质序列多重比较结果显示,PvPAL蛋白质序列与丹参、地黄、黄芩、藿香等植物的PAL蛋白质高度同源。PAL系统进化树分析结果表明,PvPAL与唇形科植物的PAL基因亲缘关系最近。组织表达分析结果显示,PvPAL基因在根、茎、叶中均表达,其中根中表达量最高。PvPAL基因的克隆为进一步研究夏枯草迷迭香酸合成的分子机制奠定了基础。 展开更多
关键词 苯丙氨酸解氨酶 表达分析 夏枯草 克隆 酶基因 蛋白质序列 唇形科植物 系统进化树分析
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暴马桑黄倍半萜合酶基因SbTps1的克隆及表达分析 被引量：7
2
作者 乌木提·巴合提别克 唐玉倩 +2 位作者 王淑婷 李亚伟 邹莉 《森林工程》 北大核心 2021年第4期33-39,46,共8页
倍半萜(Sesquiterpenes)在动植物及微生物体内广泛存在,且具有重要的生理调节功能。本研究从暴马桑黄转录组数据库中筛选出1个编码暴马桑黄萜类合酶的基因,命名为SbTps1,并对其进行克隆及表达分析,经测序该基因全长1281 bp,编码426个氨... 倍半萜(Sesquiterpenes)在动植物及微生物体内广泛存在,且具有重要的生理调节功能。本研究从暴马桑黄转录组数据库中筛选出1个编码暴马桑黄萜类合酶的基因,命名为SbTps1,并对其进行克隆及表达分析,经测序该基因全长1281 bp,编码426个氨基酸,编码蛋白的相对分子质量为48.17 ku。SDS-PAGE分析结果表明,在相对分子质量69.17 ku(包含21 ku标签蛋白)附近出现与预期大小一致的蛋白条带。系统发育进化树分析表明,暴马桑黄SbTps1蛋白和嗜蓝孢孔菌Tps蛋白同源性最高;荧光定量分析结果表明,SbTps1基因转录水平在不同发育阶段有差异性,并且在菌丝发酵培养第14天时SbTps1基因转录水平达到最高状态,该结果与鲍姆纤孔菌(Inonotus baumii)倍半萜合酶基因的转录水平变化趋势相似,因此可以推测SbTps1与倍半萜合成有关,初步鉴定该基因为倍半萜合酶基因,为后续暴马桑黄倍半萜合酶基因功能的研究奠定理论基础。 展开更多
关键词 暴马桑黄 倍半萜 倍半萜合酶基因 基因克隆与序列分析 原核表达 荧光定量
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红斑丹毒丝菌SpaA抗原基因的克隆、序列分析及蛋白结构预测 被引量：6
3
作者 李伟杰 赵耘 +3 位作者 康凯 岂晓鑫 杜昕波 陈敏 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期1631-1634,1639,共5页
参照红斑丹毒丝菌表面抗原A(SpaA)基因的核苷酸序列合成1对引物,对我国生产用红斑丹毒丝菌CVCC43005的SpaA全基因进行了PCR扩增,扩增产物连接到pMD18-T载体上,进行序列测定和分析。结果表明,SpaA基因全长1 881bp,含有1个开放性阅读框,编... 参照红斑丹毒丝菌表面抗原A(SpaA)基因的核苷酸序列合成1对引物,对我国生产用红斑丹毒丝菌CVCC43005的SpaA全基因进行了PCR扩增,扩增产物连接到pMD18-T载体上,进行序列测定和分析。结果表明,SpaA基因全长1 881bp,含有1个开放性阅读框,编码626个氨基酸。与已提交的红斑丹毒丝菌血清型1a、1b、2a、2b、5、8、9、12、15、16、17、N型的氨基酸同源性为97.5%～100%,血清型4、6、11、19、21的氨基酸同源性为52.8%～55.2%。与已提交的丹毒丝菌血清型18的氨基酸同源性为57.5%～58.0%。采用Chou-Fasman和Karplus-Schulz方案预测蛋白质的二级结构和柔性区域;运用Kyte-Doolittle方案预测氨基酸的亲水性,按Jame-son-Wolf方案预测抗原指数,利用Emini方案预测蛋白质的表面可及性。对预测结果综合分析,推测最有可能的B细胞表位位于N端的59～64、85～91、174～186、193～201、212～215、221～231、266～275、278～288、291～308、314～327、329～349、356～376、403～456、508～516、528～537、568～576和607～626。 展开更多
关键词 红斑丹毒丝菌 SpaA基因 克隆和序列分析 结构预测
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几种乳酸菌S-层蛋白的普查以及slp基因的克隆与序列分析 被引量：5
4
作者 双杰 包秋华 +3 位作者 永胜 王艳霞 张和平 格日勒图 《中国乳品工业》 CAS 北大核心 2010年第8期8-10,31,共4页
从内蒙古传统发酵乳制品中分离的几种乳酸菌,包括干酪乳杆菌、乳酸乳球菌、发酵乳杆菌、植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、双歧乳杆菌和嗜酸乳杆菌标准株(L.acidophilus ATCC4356)等为实验材料,应用SDS-PAGE方法和PCR方法分别进行S-层蛋白(S-lay... 从内蒙古传统发酵乳制品中分离的几种乳酸菌,包括干酪乳杆菌、乳酸乳球菌、发酵乳杆菌、植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、双歧乳杆菌和嗜酸乳杆菌标准株(L.acidophilus ATCC4356)等为实验材料,应用SDS-PAGE方法和PCR方法分别进行S-层蛋白(S-layers pro-tein,SLP)的普查和slp基因的检测。结果表明:在各种乳酸菌中,经SDS-PAGE电泳方法检测,只有植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌和其标准菌株的样品中出现膜外蛋白的可疑条带,大小为44～66ku之间,与文献报道的slp基因表达产物大小范围是一致;经PCR方法检测,只有嗜酸乳杆菌和其标准菌株L.acidophilus ATCC4356中扩增出slp基因可疑条带,其大小约为1 300 bp。并对嗜酸乳杆菌slp基因进行克隆、基因序列测序和分析。 展开更多
关键词 嗜酸乳杆菌 S-层蛋白 slp基因 克隆与序列分析
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7种番木瓜环斑病毒分离株外壳蛋白基因的克隆与序列比较 被引量：4
5
作者 魏军亚 刘德兵 +2 位作者 蔡群芳 黎小瑛 周鹏 《华南热带农业大学学报》 2006年第4期1-5,共5页
采用RT-PCR技术对我国海南、云南、广西和广东等不同番木瓜生产区的7个番木瓜环斑病毒外壳蛋白基因(PRSV-CP)进行克隆和鉴定分析。PRSV-CP编码区在864～873核苷酸之间,编码288～291氨基酸。对分离的7个PRSV-CP的核苷酸及氨基酸序列的比... 采用RT-PCR技术对我国海南、云南、广西和广东等不同番木瓜生产区的7个番木瓜环斑病毒外壳蛋白基因(PRSV-CP)进行克隆和鉴定分析。PRSV-CP编码区在864～873核苷酸之间,编码288～291氨基酸。对分离的7个PRSV-CP的核苷酸及氨基酸序列的比较结果表明大部分序列差异都处于N端,而各产区番木瓜PRSV-CP基因的3′端586～864bp区段,即278bpDNA片断的同源率最高,达到98.5%。这一同源序列的获得为利用植物基因工程培育广谱抗病性的番木瓜新品系奠定了基础。 展开更多
关键词 番木瓜环斑病毒 外壳蛋白基因 克隆 序列比较
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犬冠状病毒V1株纤突蛋白全基因克隆与序列分析 被引量：1
6
作者 乔军 夏咸柱 +4 位作者 胡桂学 谢之景 闫芳 杨松涛 黄耕 《上海交通大学学报（农业科学版）》 2004年第3期266-271,共6页
首次对犬冠状病毒(CCV)V1株纤突蛋白(S)基因进行了克隆和测序。根据GenBank中报道的CCVV54株S基因序列,设计了一对特异性引物,对CCVV1野毒株S基因进行了RT-PCR扩增。将扩增得到的PCR产物纯化后克隆到pGEM-T中得到重组质粒pTS,用于序列... 首次对犬冠状病毒(CCV)V1株纤突蛋白(S)基因进行了克隆和测序。根据GenBank中报道的CCVV54株S基因序列,设计了一对特异性引物,对CCVV1野毒株S基因进行了RT-PCR扩增。将扩增得到的PCR产物纯化后克隆到pGEM-T中得到重组质粒pTS,用于序列测定。结果该基因全长4362bp,编码1453个氨基酸,N端前18个氨基酸为推测的信号肽序列,后1435个氨基酸构成成熟蛋白。将V1株S全基因与GenBank中已发表的6个CCV毒株S基因进行了比较,结果核苷酸序列同源性在91.0%～99.0%之间;推导的氨基酸序列同源性在93.0%～99.0%之间;同时发现CCV变异区主要集中在S基因前1/2处,其中350-370、439-478、1718-1818三个区域碱基变异较大,而1060-1700区碱基却十分保守。基于S全基因聚类分析结果表明,S基因分型结果与CCV毒力强弱并不一致;V1野毒株推导的S蛋白潜在的N-联糖基化位点与CCVV54强毒相同,均为34个,比Insavc-1弱毒多一个;其中第566-568位糖基化位点是多数强毒拥有而弱毒Insavc-1没有的。推导的V1株S蛋白疏水性及抗原表位与Insavc-1株有一定的差异,这些差别对病毒致病性和免疫原性等影响需进一步的研究。 展开更多
关键词 犬 冠状病毒V1株 纤突蛋白基因 基因克隆 序列分析 基因工程疫苗
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甜菜夜蛾核多角体病毒(SeMNPV)gp37基因的克隆及序列分析 被引量：2
7
作者 李充璧 闫庆生 +2 位作者 李朝飞 庞义 杨凯 《中山大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期70-73,共4页
通过鸟枪法克隆了甜菜夜蛾核多角体病毒 (SeMNPV)基因组DNAEcoRⅠ酶切的 2 2kb片段 .序列分析表明 ,该片段含有gp37基因 .SeMNPVgp37基因的开放阅读框为 80 1个核苷酸 ,编码 2 6 8个氨基酸 ,预测蛋白质相对分子质量为 30 40 0 .在gp37... 通过鸟枪法克隆了甜菜夜蛾核多角体病毒 (SeMNPV)基因组DNAEcoRⅠ酶切的 2 2kb片段 .序列分析表明 ,该片段含有gp37基因 .SeMNPVgp37基因的开放阅读框为 80 1个核苷酸 ,编码 2 6 8个氨基酸 ,预测蛋白质相对分子质量为 30 40 0 .在gp37基因起始密码子上游有一典型的杆状病毒晚期基因启动子序列ATAAG .同其它昆虫杆状病毒和昆虫痘病毒GP37/Fusolin蛋白的比较结果表明 ,SeMNPVGP37与已知gp37/fusolin基因的氨基酸序列同源性较高 (5 0 %～ 6 8% ) ,在其蛋白序列内存在类似的保守区和可能的N_连接糖基化位点 .在SeMNPVgp37基因下游存在一个完整阅读框和部分egt基因序列 . 展开更多
关键词 甜菜夜蛾核多角体病毒 gp37基因 克隆 序列分析 生物杀虫剂
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猪IFN-α_1和IFN-β_1基因的克隆与序列分析 被引量：1
8
作者 禤雄标 罗廷荣 +2 位作者 黄伟坚 曾兰 钟勤 《动物医学进展》 CSCD 2006年第4期60-63,共4页
从猪的肝细胞中提取总RNA，应用RT-PCR技术扩增IFN-α1扣IFN-β1基因，分别克隆到PMD18-T载体上。测序结果表明，克隆的IFN—α1核苷酸序列与GenBank上登录的猪IFN-α1核苷酸同源性为100％，与鼠、犬、人和牛IFN—α1基因同源性为71．1... 从猪的肝细胞中提取总RNA，应用RT-PCR技术扩增IFN-α1扣IFN-β1基因，分别克隆到PMD18-T载体上。测序结果表明，克隆的IFN—α1核苷酸序列与GenBank上登录的猪IFN-α1核苷酸同源性为100％，与鼠、犬、人和牛IFN—α1基因同源性为71．1％～81．4％。克隆的IFN—β1核苷酸序列与Gen—Bank上登录的猪IFN-β1核苷酸同源性为99．6％，推导的氨基酸同源性为99．5％；与人、牛和马IFN-β1基因同源性为76．9％～80．4％。 展开更多
关键词 IFN—α1 IFN—β1 基因克隆 序列分析 猪
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一株野鸭源新城疫病毒F基因的克隆及序列分析 被引量：2
9
作者 张智明 华育平 +1 位作者 李晓冰 曾祥伟 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第10期773-777,共5页
根据GenBank中新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)的F基因序列设计了1对特异性引物,成功地对其中一株野鸭源NDV的F基因进行了克隆、测序,并推导其氨基酸序列,选择F基因部分片段绘制了遗传进化树。F基因全长1 662 bp,单一的阅读框... 根据GenBank中新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)的F基因序列设计了1对特异性引物,成功地对其中一株野鸭源NDV的F基因进行了克隆、测序,并推导其氨基酸序列,选择F基因部分片段绘制了遗传进化树。F基因全长1 662 bp,单一的阅读框架编码553个氨基酸,构成的F蛋白上有13个Cys残基位点和6个潜在的糖基化位点,其裂解位点的氨基酸序列为112R-R-Q-K-116R-117F。遗传进化分析表明,该NDV分离株为基因Ⅶ型NDV,与近年来我国家禽中所报道的NDV的基因型相一致。 展开更多
关键词 野鸭源新城疫病毒 F基因 克隆及序列分析
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鸡传染性支气管炎病毒广西株N基因的克隆与序列分析
10
作者 屈素洁 邹联斌 +6 位作者 胡杰 粟艳琼 尹彦文 陆文俊 李军 施开创 莫胜兰 《中国动物检疫》 CAS 2016年第8期82-85,共4页
参照Gen Bank中鸡传染性支气管炎病毒（IBV）的核酸序列设计了1对引物,利用RT-PCR扩增了1个广西分离株的N基因cDNA片段,并将其克隆到p MDl8-T载体中。序列分析结果表明,N基因序列全长为1 230 bp,编码1条409个氨基酸组成的多肽;分离株与... 参照Gen Bank中鸡传染性支气管炎病毒（IBV）的核酸序列设计了1对引物,利用RT-PCR扩增了1个广西分离株的N基因cDNA片段,并将其克隆到p MDl8-T载体中。序列分析结果表明,N基因序列全长为1 230 bp,编码1条409个氨基酸组成的多肽;分离株与国内外IBV参考毒株相比,核苷酸同源性为83.8%~99.9%,氨基酸同源性为88.4%~99.6%;分离株与LX4株、BJ株关系较近,与疫苗株处于不同的进化分支,亲缘关系较远,是新的IBV变异株。 展开更多
关键词 鸡传染性支气管炎病毒 N基因 基因克隆 序列分析
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猪伪狂犬病病毒豫A株、豫B株PK基因的克隆和序列比较分析
11
作者 皇甫和平 王川庆 刘根展 《郑州牧业工程高等专科学校学报》 2008年第4期4-8,11,共6页
对来自河南省的两份疑似伪狂犬的病料进行了Prv PK基因的PCR扩增,将两份扩增产物分别克隆于pMD18-T载体,对重组质粒作PCR、酶切分析和序列测定,证实了克隆片段的特异性。借助生物学分析软件,将YuA株和YuB株PK基因的核苷酸序列与已被Gene... 对来自河南省的两份疑似伪狂犬的病料进行了Prv PK基因的PCR扩增,将两份扩增产物分别克隆于pMD18-T载体,对重组质粒作PCR、酶切分析和序列测定,证实了克隆片段的特异性。借助生物学分析软件,将YuA株和YuB株PK基因的核苷酸序列与已被Genebank收录的Prv MinA株、Prv Er株、NIA-3株及Ka株的PK基因核苷酸序列进行同源性和差异性比较,六个Prv毒株PK基因核苷酸序列间具有很高的同源性,最低者为YuA株和Ka株,其同源性为97.1%;YuA株在282位比其它毒株少一个G,导致缺失突变,93位以后氨基酸序列的同源性大大降低,该毒株与MinA株、YuB株、Er株、Nia-3和Ka株同源性分别降为30.7%、30.7%、30.2%、29.5%和19.5%,明显低于其它组间的最低值86.1%,分离毒对家兔的不致病性可能与该位点的缺失突变有一定关系。以NiA-3株为标准,在其238至249位有一个高变区,在1081至1098位有一个高变区,这两个高变区没有打乱读码框,也没有破坏PK激酶的保守氨基酸位点,推测这两个区域对于PK激酶结构的稳定性和功能的发挥是非必需的。 展开更多
关键词 猪伪狂犬病病毒 YuA株 YuB株 PK基因 克隆 序列分析
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德州足螨副肌球蛋白基因的克隆与序列分析
12
作者 郑晶 张晓谦 +2 位作者 杨光友 古小彬 余增莹 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期38-41,共4页
根据GenBank中登录的绵羊痒螨副肌球蛋白基因序列(登录号为AM114275)设计了3对引物,采用RT-PCR法从德州足螨总RNA中克隆了副肌球蛋白基因,研究了该基因与部分螨类副肌球蛋白基因的同源性以及推导的氨基酸序列之间的同源性。结果显示,该... 根据GenBank中登录的绵羊痒螨副肌球蛋白基因序列(登录号为AM114275)设计了3对引物,采用RT-PCR法从德州足螨总RNA中克隆了副肌球蛋白基因,研究了该基因与部分螨类副肌球蛋白基因的同源性以及推导的氨基酸序列之间的同源性。结果显示,该基因全长2 628 bp,编码875个氨基酸,预测分子质量约为97.24 ku。与已报道的绵羊痒螨、欧洲尘螨、美洲尘螨、人疥螨和热带无爪螨的副肌球蛋白基因同源性分别为95.5%、90.5%、89.4%、82.6%和79.5%,推导的氨基酸同源性分别为98.0%、97.0%、98.0%、94.0%和89.0%。 展开更多
关键词 德州足螨 副肌球蛋白基因 克隆 序列分析
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短小乳杆菌内蒙古分离株S-层蛋白的普查、鉴定和基因分析
13
作者 兰丽 魏建民 +3 位作者 王艳霞 王敏 满达 格日勒图 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第8期26-30,共5页
S-层蛋白(S-layers protein)是位于某些细菌表面的高度有序的具有超微结构的一种外膜蛋白。本试验以蒙古族传统乳制品中分离的短小乳杆菌(Lactobacillus brevis)为材料,应用SDS-PAGE技术对若干乳杆菌进行S-层蛋白的普查,并应用PCR方法... S-层蛋白(S-layers protein)是位于某些细菌表面的高度有序的具有超微结构的一种外膜蛋白。本试验以蒙古族传统乳制品中分离的短小乳杆菌(Lactobacillus brevis)为材料,应用SDS-PAGE技术对若干乳杆菌进行S-层蛋白的普查,并应用PCR方法克隆出L.brevis的slp基因,对该slp基因进行测序及序列分析。试验结果表明,SDS-PAGE电泳结果显示L.brevis样品在44～55 ku之间出现目的条带,与文献报道的S-层蛋白大小范围一致;PCR方法正确扩增出大小约为1300 bp的slp基因,经DNAStar软件遗传分析发现该基因与鸡乳酸杆菌株(GenBank登录号:AY597266.1)的亲缘关系和遗传距离最近,与其他种类乳酸菌遗传距离也非常相近;经Genetyx生物软件推导出的S-层蛋白大小理论值约为47 ku,具有显著的外膜蛋白的特性。本试验为后续遗传改造等研究工作奠定基础。 展开更多
关键词 短小乳杆菌 S-层蛋白 slp基因 克隆与序列分析
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猪胸膜肺炎放线杆菌16S rDNA基因的克隆及序列分析
14
作者 沈萍 王喜军 《湖南农业科学》 2011年第8期154-156,161,共4页
为了阐明猪胸膜肺炎放线杆菌16S rDNA基因的遗传变异情况,选择猪胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacilluspleuropneumoniae,APP)的16S rDNA基因设计引物,应用聚合酶链反应(PCR)扩增APP的16S rDNA基因的部分序列,将该产物克隆到pMD18-T载体上,... 为了阐明猪胸膜肺炎放线杆菌16S rDNA基因的遗传变异情况,选择猪胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacilluspleuropneumoniae,APP)的16S rDNA基因设计引物,应用聚合酶链反应(PCR)扩增APP的16S rDNA基因的部分序列,将该产物克隆到pMD18-T载体上,重组质粒通过菌落PCR鉴定后,对阳性菌落进行序列测定并进行序列分析。结果表明:本研究得到的长沙(CS)株与血清3、5、7型同源性为99.4%～99.6%,与李氏放线杆菌、脲放线杆菌、马驹放线杆菌、荚膜放线杆菌同源性分别为97.8%、96.3%、97.3%、96.3%。该结果为APP分子流行病学调查、亲缘性关系的研究提供了依据,同时为APP的监控奠定了基础。 展开更多
关键词 猪胸膜肺炎放线杆菌 16S RDNA基因 克隆及序列分析
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鸡内源性类J亚群禽白血病病毒gp85基因的克隆及分析 被引量：7
15
作者 杨玉莹 秦爱建 +1 位作者 顾玉芳 赵振华 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期54-59,共6页
为深入探讨J亚群禽白血病病毒(AvianleukosisvirussubgroupJ,ALV J)的亚群特性,利用ALV Jgp85基因两侧的序列片段为引物,从正常SPF蛋鸡、商品肉鸡和DF1细胞基因组中完整地扩增了内源性类ALV Jgp85基因。肉鸡和DF1细胞内源性类ALV Jgp85... 为深入探讨J亚群禽白血病病毒(AvianleukosisvirussubgroupJ,ALV J)的亚群特性,利用ALV Jgp85基因两侧的序列片段为引物,从正常SPF蛋鸡、商品肉鸡和DF1细胞基因组中完整地扩增了内源性类ALV Jgp85基因。肉鸡和DF1细胞内源性类ALV Jgp85基因同源性达99 9%;SPF蛋鸡内源性类ALV Jgp85基因与肉鸡和DF1细胞的内源性类ALV Jgp85基因之间同源性达95 6%、95 3%。三种不同来源的内源性类ALV Jgp85基因DNA与IMC10200株ALV J的gp85基因的同源性分别为91 8%、94 1%、94 0%;与ALV J原型株HPRS 103gp85基因的同源性分别为95 6%、98 3%、99 9%。内源性类ALV Jgp85序列与外源性ALV Jgp85基因具有相似或一致的ORF和Jameson Worlf抗原表位优势。 展开更多
关键词 内源性反录病毒 GP85基因 基因克隆 J亚群禽白血病病毒 鸡
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斜纹夜蛾NPV多角体基因的克隆和部分测序 被引量：3
16
作者 曾庆 龙綮新 +1 位作者 王章 蒲蛰龙 《中山大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 1994年第4期70-77,共8页
本文对ＳＩＮＰＶ基因组作了酶解分析，测得其基因组大小为１４５ｋｂ，并用双酶法确定了ＳＩＮＰＶ基因组的ＨｉｎｄⅢ和ＰｓｔⅠ物理图谱。以含ＡｃＮＰＶ多角体基因的质粒ｐＡＣ－Ⅰ的ＳａｌＩ－Ｃ片段为探针，对ＳＩＮＰＶＤＮＡ酶... 本文对ＳＩＮＰＶ基因组作了酶解分析，测得其基因组大小为１４５ｋｂ，并用双酶法确定了ＳＩＮＰＶ基因组的ＨｉｎｄⅢ和ＰｓｔⅠ物理图谱。以含ＡｃＮＰＶ多角体基因的质粒ｐＡＣ－Ⅰ的ＳａｌＩ－Ｃ片段为探针，对ＳＩＮＰＶＤＮＡ酶切片段ｓｏｕｔｈｅｒｎ转印杂交结果，初步判断多角体基因定位于ＰｓｔＩ－Ｂ／Ｃ／Ｄ片段、ＢｇｌⅡ－Ｃ／Ｄ片段、ＢａｍＨＩ－Ｂ／Ｃ片段和ＥｃｏＲＩ－Ａ／Ｂ片段上，且ＳＩＮＰＶ与ＡｃＮＰＶ多角体蛋白基因有６４％的同源性，而以大肠仟菌质粒ｐＵＣ１９为载体对ＳＩＮＰＶ的多角体基因试克隆，得到带有ＢｇｌⅡ－ＰｓｔⅠ双酶切片段的２个克隆子。对这两个杂交阳性克隆子之一的核苷酸序列测定，表明插入片段与ＢｍＮＰＶ多角体基因上游序列亦有一定同源性。 展开更多
关键词 斜纹夜蛾 NPV 多角体基因 克隆
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马铃薯块茎糖基转移酶基因的克隆及其RNAi载体的构建 被引量：3
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作者 王旺田 张金文 +3 位作者 王蒂 张俊莲 司怀军 陶士珩 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期1926-1934,共9页
为探讨鼠李糖基转移酶(rhamnosyltransferase,sgt3)基因与类固醇糖苷生物碱(steroidal glycoalkaloid,SGAs)合成关系,揭示sgt3基因在SGAs合成中的作用,本研究根据GenBank No:DQ266437保守区设计特异引物,通过RT-PCR技术获得马铃薯块... 为探讨鼠李糖基转移酶(rhamnosyltransferase,sgt3)基因与类固醇糖苷生物碱(steroidal glycoalkaloid,SGAs)合成关系,揭示sgt3基因在SGAs合成中的作用,本研究根据GenBank No:DQ266437保守区设计特异引物,通过RT-PCR技术获得马铃薯块茎sgt3相似基因;采用生物信息学相关软件分析,预测sgt3相似基因cDNA序列编码的蛋白质结构和功能,构建基于sgt3基因的植物干扰表达载体。结果表明,克隆的sgt3相似基因与报道的sgt3基因序列相似性达到99.54%,其ORF长为1500bp,编码505个氨基酸残基,具有UDPG糖基转移酶保守结构域及许多重要功能位点;三级结构预测表明,该氨基酸同糖基转移酶单体结构模型相似,为糖基转移酶家族成员,表明可能具有合成类固醇糖苷生物碱功能,基因序列已注册到GenBank,序列登录号为HM188447。以此为靶序列,构建由Actin启动子和CIPP启动子驱动的与sgt1和sgt2基因相似度高的含有sgt3基因序列的干扰表达载体,将为糖苷生物碱的合成、代谢的进一步研究及低糖苷生物碱转基因马铃薯品种的培育奠定基础。 展开更多
关键词 马铃薯 鼠李糖基转移酶 基因克隆 序列分析 RNAI载体
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巴西橡胶树棒孢霉落叶病菌Slt2类MAPK同源基因CMP1的克隆与序列分析 被引量：3
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作者 漆艳香 张欣 +4 位作者 蒲金基 陆英 张贺 张辉强 谢艺贤 《热带作物学报》 CSCD 2010年第11期1951-1958,共8页
根据几种丝状真菌Slt2类MAPK的保守氨基酸序列设计简并引物,从巴西橡胶树棒孢霉落叶病菌[Corynespora cassiicola(Berk.&Curt.)Wei]中扩增出MAPK同源基因的部分片段,再利用染色体步移法延伸该片段的上、下游邻接序列,获得MAPK编码... 根据几种丝状真菌Slt2类MAPK的保守氨基酸序列设计简并引物,从巴西橡胶树棒孢霉落叶病菌[Corynespora cassiicola(Berk.&Curt.)Wei]中扩增出MAPK同源基因的部分片段,再利用染色体步移法延伸该片段的上、下游邻接序列,获得MAPK编码基因的全长序列,命名为CMP1(GenBank Accession No.GU321364)。序列分析表明,该基因含有5个外显子和4个内含子,编码417个氨基酸的多肽,推测分子量为47.5 ku,等电点为5.57。CMP1含有一个参与双重磷酸化作用的MAPK蛋白激活域(TEY),其氨基酸序列与丝状真菌的MAPK,AAslt2和MAP-kinase等高度同源。系统聚类结果显示,该基因与白菜黑斑病菌(Alternaria brassicicola)、细交链格孢菌(A.alternata)和玉米小斑病菌(Cochliobolus heterostrophus)的Slt2类MAPK基因具有较高的同源性。Southern杂交分析表明,CMP1基因在巴西橡胶树棒孢霉落叶病菌基因组中以单拷贝形式存在。 展开更多
关键词 橡胶树棒孢霉落叶病菌 蛋白激酶 基因克隆 生物信息学
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抗bFGF McAb制备、鉴定及轻链可变区基因克隆和序列分析 被引量：1
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作者 崔蕴霞 王一飞 +4 位作者 林剑 任哲 银巍 宁波 冯炼强 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第7期353-355,共3页
目的：以重组人碱性成纤包生长因子为抗原免疫小鼠，建立多株稳定分泌ｂＦＧＦ单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的杂交瘤细胞。半对ｂＦＧＦ单克隆抗体（ＭｃＡｂ）可变区基因进行扩增及序列分析。方法：采用Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ法和免疫沉... 目的：以重组人碱性成纤包生长因子为抗原免疫小鼠，建立多株稳定分泌ｂＦＧＦ单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的杂交瘤细胞。半对ｂＦＧＦ单克隆抗体（ＭｃＡｂ）可变区基因进行扩增及序列分析。方法：采用Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ法和免疫沉淀法对抗体特异性和ｌｇ类型进行鉴定，同时，应用分子生物学技术，对Ｖｋ基因的ＤＮＡ片段进行克隆，并对４ａ２Ｖｋ基因进行序列测定。结果：ｂＦＧＦ单克隆抗体可特异性结合人重组ｂＦＧＦ抗原。 展开更多
关键词 单克隆抗体 基因克隆 DNA序列分析 bFGF抗体
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粗山羊草新型硬度等位基因的克隆及分析 被引量：2
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作者 曹雯梅 刘述忠 +1 位作者 张亚菲 郑明辉 《麦类作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期1202-1207,共6页
小麦籽粒硬度是其最为重要的品质性状之一,现已发现控制小麦籽粒硬度的主效基因是Pina和Pinb。为了丰富籽粒硬度新型等位基因,根据已报道的小麦Pina和Pinb基因的保守序列,设计了2对特异性引物,对粗山羊草(Aegilops tauschii)进行Pina和P... 小麦籽粒硬度是其最为重要的品质性状之一,现已发现控制小麦籽粒硬度的主效基因是Pina和Pinb。为了丰富籽粒硬度新型等位基因,根据已报道的小麦Pina和Pinb基因的保守序列,设计了2对特异性引物,对粗山羊草(Aegilops tauschii)进行Pina和Pinb基因的PCR扩增、克隆及序列分析。结果表明,本研究共得到2个新型Pina等位基因和3个新型Pinb等位基因,核酸序列长度均为447bp,编码148个氨基酸残基,具有麦类作物PINA和PINB蛋白所特有的色氨酸结构域:WRWWKWWK和WPTKWWK。与已知的Pina和Pinb基因序列相比较,这些基因含有多个SNP变异位点,丰富了小麦籽粒硬度改良的遗传资源。 展开更多
关键词 籽粒硬度 粗山羊草 等位基因 基因克隆 序列分析
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