杆状病毒增效蛋白研究进展 被引量：12

1

作者 马永平 欧洋 +2 位作者 孟小林 徐进平 叶林柏 《中国病毒学》 CSCD 1999年第3期185-189,共5页

关键词 杆状病毒 增效蛋白 舞毒蛾 核型多角体病毒

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棉铃虫颗粒体病毒增效蛋白基因2.1kb片段在大肠杆菌中的表达 被引量：15

2

作者 欧洋 孟小林 徐进平 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第5期595-598,共4页

以棉铃虫颗粒体病毒 (Helicoverpaarmigeragranulosisvirus,简称HaGV)基因组DNA为模板 ,设计引物PCR扩增病毒增效蛋白 (Enhancin)基因 ,然后经SacI/PstI双酶切消化 ,得到 5′端截短的约 2 1kb增效蛋白基因片段 ,再与 pQE30质粒连接 ,... 以棉铃虫颗粒体病毒 (Helicoverpaarmigeragranulosisvirus,简称HaGV)基因组DNA为模板 ,设计引物PCR扩增病毒增效蛋白 (Enhancin)基因 ,然后经SacI/PstI双酶切消化 ,得到 5′端截短的约 2 1kb增效蛋白基因片段 ,再与 pQE30质粒连接 ,构建了重组表达载体pQE/EnC ,转化大肠杆菌M15 (pREP4) ,在IPTG诱导下表达出分子量约为 78× 10 3 D的融合蛋白并命名为P78,纯化的P78包涵体显示了明显的增效活性 ,可提高AcMNPV对小菜蛾幼虫的感染率 2 7 88%～ 32 92 %。 展开更多

关键词 棉铃虫 颗粒体病毒 增效蛋白基因 基因表达

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粉纹夜蛾颗粒体病毒重组增效蛋白的增效作用 被引量：12

3

作者 袁哲明 孟小林 刘树生 《Virologica Sinica》 SCIE CAS CSCD 2000年第S1期58-63,共6页

采用时间 剂量 死亡率模型 ,分析了粉纹夜蛾 (Trichoplusiani)颗粒体病毒重组增效蛋白P96对棉铃虫 (Helicoverpaarmigera)核型多角体病毒 (HaNPV)感染棉铃虫幼虫的增效作用。结果显示 :感染后 11d ,HaNPV +P96组的LC50 值为 3.4 7... 采用时间 剂量 死亡率模型 ,分析了粉纹夜蛾 (Trichoplusiani)颗粒体病毒重组增效蛋白P96对棉铃虫 (Helicoverpaarmigera)核型多角体病毒 (HaNPV)感染棉铃虫幼虫的增效作用。结果显示 :感染后 11d ,HaNPV +P96组的LC50 值为 3.4 7× 10 3 多角体 /mL ,比HaNPV组 ( 3.89× 10 4 多角体 /mL)降低了 91.0 8% ;在 1.6× 10 4 ～ 1.6× 10 6多角体 /mL浓度范围内 ,HaNPV +P96组的LT50 值较HaNPV组缩短 0 .3～ 1.8d。 展开更多

关键词 粉纹夜蛾颗粒体病毒 重组增效蛋白 增效作用 时间-剂量-死亡率模型

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棉铃虫颗粒体病毒增效蛋白基因2.6kb片段的表达 被引量：9

4

作者 胡蓉 孟小林 +2 位作者 徐进平 王健 鲁伟 《中国病毒学》 CSCD 2001年第4期364-368,共5页

以棉铃虫颗粒体病毒 (Helicoverpaarmigeragranulosisvirus ,简称HaGV)基因组的DNA为模板设计引物 ,PCR扩增病毒增效蛋白 (Enhanicn)基因 ,然后经BamHI/PstI双酶切消化 ,得到近乎全长的约 2 .6kb的增效蛋白基因片段 ,再与pQE32质粒连接 ... 以棉铃虫颗粒体病毒 (Helicoverpaarmigeragranulosisvirus ,简称HaGV)基因组的DNA为模板设计引物 ,PCR扩增病毒增效蛋白 (Enhanicn)基因 ,然后经BamHI/PstI双酶切消化 ,得到近乎全长的约 2 .6kb的增效蛋白基因片段 ,再与pQE32质粒连接 ,构建了重组表达载体pQE32 /En ,转化大肠杆菌M15 (pREP4 ) ,在IPTG诱导下表达出分子量约为 10 2kD的融合蛋白并命名为P10 2 ,纯化的P10 2 包涵体显示了明显的增效活性 ,在感染后 16 8h时统计可提高HaNPV对棉铃虫幼虫的感染死亡率 6 .2 5 %～ 2 7.0 9% ,缩短LT50 12 .3h以上 ;在感染后 72h时统计可提高Bt对棉铃虫幼虫的感染死亡率 2 8.18% ,缩短LT50 12 .33h。 展开更多

关键词 棉铃虫颗粒体病毒 增效蛋白基因 克隆 表达 生物活性测定 2.6kb片断

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棉铃虫颗粒体病毒增效蛋白基因克隆及在大肠杆菌中表达 被引量：11

5

作者 刘相国 杨恭 +1 位作者 邱并生 田波 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第4期379-383,共5页

用PCR技术从棉铃虫颗粒体病毒基因组中扩增得到增效蛋白基因DNA序列。PCR产物酶切后克隆至 pBluescript质粒中 ,核苷酸序列测定表明 ,有 8个核苷酸、5个氨基酸与Genbank发表的序列不同。继而构建了表达质粒 pET 30a En ,诱导后经SDS PAG... 用PCR技术从棉铃虫颗粒体病毒基因组中扩增得到增效蛋白基因DNA序列。PCR产物酶切后克隆至 pBluescript质粒中 ,核苷酸序列测定表明 ,有 8个核苷酸、5个氨基酸与Genbank发表的序列不同。继而构建了表达质粒 pET 30a En ,诱导后经SDS PAGE和West ernblot检测 ,表明获得了增效蛋白基因在大肠杆菌BL2 1 (DE3)中包涵体形式的特异表达。生物测定结果表明 ,初步纯化的重组增效蛋白具有明显的增效活性 ,可提高棉铃虫核多角体病毒对 3龄幼虫致死率 31 7% - 34 1 %。重组增效蛋白的获得对研究其增效机理及构建新型杀虫剂提供了条件。 展开更多

关键词 棉铃虫颗粒体病毒 增效蛋白 基因克隆 大肠杆菌

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棉铃虫颗粒体病毒增效蛋白基因5′端截短片段的表达及增效活性测定 被引量：9

6

作者 刘相国 杨恭 +2 位作者 邱并生 张克勤 田波 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期167-172,共6页

将带有棉铃虫颗粒体病毒增效蛋白 (HaGVenhancin)基因的重组表达载体 pET 30a En分别用BalⅠ和DraⅠ酶切后连接 ,构建重组表达载体pET 30a Ben和 pET 30a Den ,其外源基因的开放阅读框分别为HaGV增效蛋白基因 5′端的 1 7kb和 2 2kb。... 将带有棉铃虫颗粒体病毒增效蛋白 (HaGVenhancin)基因的重组表达载体 pET 30a En分别用BalⅠ和DraⅠ酶切后连接 ,构建重组表达载体pET 30a Ben和 pET 30a Den ,其外源基因的开放阅读框分别为HaGV增效蛋白基因 5′端的 1 7kb和 2 2kb。IPTG诱导表达产生 66 7kD和 85 1kD的多肽并命名为Ben和Den。初步纯化的Ben和Den显示了对棉铃虫核多角体病毒 (HaNPV)及Bt的增效活性。Ben可对棉铃虫核多角体病毒增效 1 0 5%～2 6 5% ,LT50 缩短 0 9d ,Den增效 1 0 2 %～ 33 0 % ,LT50 缩短 1 2d～ 1 9d。重组增效蛋白可对Bt(1∶2 50 0稀释 )增效 2 0 7%～ 35 4% ,Den增效 1 6 7%～ 31 5% ,Ben增效 1 1 7%～2 7 4%。 展开更多

关键词 棉铃虫 颗粒体病毒 增效蛋白 HANPV BT 增效活性 昆虫病毒

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鞘翅目害虫-华北大黑鳃金龟围食膜结构的初步研究 被引量：11

7

作者 李帅 李淑文 +2 位作者 李长友 周洪旭 李国勋 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2008年第4期55-59,共5页

应用光学显微镜和生化技术，研究了华北大黑鳃金龟（Holotrichia oblita）围食膜的基本结构和表面形态，初步分析了围食膜蛋白质的种类，蛋白质和糖的含量，测定了棉铃虫颗粒体病毒增效蛋白对围食膜结构的影响。结果表明，华北大黑鳃金... 应用光学显微镜和生化技术，研究了华北大黑鳃金龟（Holotrichia oblita）围食膜的基本结构和表面形态，初步分析了围食膜蛋白质的种类，蛋白质和糖的含量，测定了棉铃虫颗粒体病毒增效蛋白对围食膜结构的影响。结果表明，华北大黑鳃金龟围食膜表面平滑致密，富有弹性，但与多数昆虫围食膜相比韧性较差，主要由蛋白质、糖和几丁质组成，其中蛋白质的含量约为36．25％，糖的含量约为8．91％，其他为几丁质等；经SDS—PAGE测定，围食膜的蛋白质种类较多，有28条多肽比较清晰，分子量多在17．6—320．3kDa。棉铃虫颗粒体病毒增效蛋白不能降解华北大黑鳃金龟围食膜中的蛋白质。 展开更多

关键词 华北大黑鳃金龟 围食膜 结构 增效蛋白

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荧光增白剂与增效蛋白对美国白蛾核型多角体病毒(HcNPV)的增效作用 被引量：8

8

作者 刘海明 周洪旭 李长友 《农药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期153-158,共6页

围食膜是昆虫中肠细胞与肠腔之间的一种防御性屏障,破坏围食膜即能促进病原微生物对昆虫的侵染。分别研究了荧光增白剂FB28和棉铃虫Helicoverpa armigera颗粒体病毒增效蛋白(En-Ha)对美国白蛾核型多角体病毒(Hyphantria cunea nucleopol... 围食膜是昆虫中肠细胞与肠腔之间的一种防御性屏障,破坏围食膜即能促进病原微生物对昆虫的侵染。分别研究了荧光增白剂FB28和棉铃虫Helicoverpa armigera颗粒体病毒增效蛋白(En-Ha)对美国白蛾核型多角体病毒(Hyphantria cunea nucleopolyhedrovirus,HcNPV)的增效作用,分析了活体条件下FB28与En-Ha对美国白蛾幼虫围食膜的破坏作用,解释了其增效作用机理。生物测定结果表明,FB28和En-Ha均能够影响围食膜蛋白的表达谱,提高HcNPV的感染率,使其毒力显著提高:单独饲喂HcNPV时的LC50值为1.11×105PIBs/mL,添加FB28和En-Ha后,其LC50值分别降低为1.91×103和7.70×103PIBs/mL,增效比值(SR)分别为58.12和14.42。SDS-PAGE电泳结果发现:用FB28饲喂处理幼虫后,分子质量为60 ku的蛋白条带消失,37 ku的新蛋白条带逐渐出现;幼虫摄取含有En-Ha的饲料后,分子质量为75 ku的蛋白条带消失,44.3 ku的新蛋白条带逐渐出现。经过10～24 h后,FB28和En-Ha处理的幼虫围食膜都能够恢复正常,表明其破坏作用是短暂的。 展开更多

关键词 荧光增白剂 增效蛋白 美国白蛾 围食膜 核型多角体病毒

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粉纹夜蛾颗粒体病毒增强蛋白锌离子结合域定点突变 被引量：7

9

作者 尹隽 单梁 +1 位作者 宋大新 钟江 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第11期1111-1115,共5页

粉纹夜蛾颗粒体病毒(Trichoplusia ni granulovirus,TnGV)增强蛋白(enhancin)具有增强病毒感染力的作用。该蛋白包含一个多种杆状病毒增强蛋白都具有的保守结构域HELGH,是典型的金属蛋白酶锌离子结合域,但该结构域对增强蛋白生物活性的... 粉纹夜蛾颗粒体病毒(Trichoplusia ni granulovirus,TnGV)增强蛋白(enhancin)具有增强病毒感染力的作用。该蛋白包含一个多种杆状病毒增强蛋白都具有的保守结构域HELGH,是典型的金属蛋白酶锌离子结合域,但该结构域对增强蛋白生物活性的重要性尚未得到研究。本研究通过定点突变构建了该结构域的5个氨基酸分别突变为2种不同氨基酸的共10种增强蛋白突变体基因,并用杆状病毒载体进行了重组表达。活性测定发现,10种突变型增强蛋白大部分都丧失了野生型增强蛋白所具有的降解粉纹夜蛾幼虫围食膜粘蛋白的生物学功能,只有1种(第4位G突变为A)保留该生物学活性。这一结果表明锌离子结合域对增强蛋白生物活性具有重要作用,也提示增强蛋白确是一种金属蛋白酶。 展开更多

关键词 杆状病毒 增强蛋白 金属蛋白酶 围食膜 定点突变

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杆状病毒杀虫剂增效途径研究进展 被引量：3

10

作者 张建军 周成刚 +1 位作者 郭光智 张乐民 《山东农业大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2004年第1期154-158,共5页

杆状病毒作为杀虫剂应用已成为生物防治中不可缺少的环节。但杆状病毒相对低的毒力和较长的杀虫时间是制约其推广应用的原因之一。本文就如何提高杆状病毒的杀虫效果 ,从基因重组、增效蛋白及化学增效剂三个方面 ,对近年来的相关研究进... 杆状病毒作为杀虫剂应用已成为生物防治中不可缺少的环节。但杆状病毒相对低的毒力和较长的杀虫时间是制约其推广应用的原因之一。本文就如何提高杆状病毒的杀虫效果 ,从基因重组、增效蛋白及化学增效剂三个方面 ,对近年来的相关研究进行了概括 ,并对三种增效途径在研究和应用中存在和面临的问题提出了解决对策。 展开更多

关键词 杆状病毒杀虫剂 生物防治 基因重组 增效蛋白 化学增效剂

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荧光增白剂和增效蛋白对粘虫核型多角体病毒的增效作用 被引量：6

11

作者 陈涛 王俊平 +2 位作者 李淑文 周洪旭 李国勋 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2008年第4期23-27,共5页

离体和活体处理粘虫幼虫围食膜后,通过SDS-PAGE分析其围食膜蛋白条带的变化、观察其形态学特征、生物测定等方法研究了荧光增白剂FB28和棉铃虫颗粒体病毒增效蛋白(En-Ha)对粘虫幼虫围食膜的破坏作用及其对粘虫核型多角体病毒(MsNPV)的... 离体和活体处理粘虫幼虫围食膜后,通过SDS-PAGE分析其围食膜蛋白条带的变化、观察其形态学特征、生物测定等方法研究了荧光增白剂FB28和棉铃虫颗粒体病毒增效蛋白(En-Ha)对粘虫幼虫围食膜的破坏作用及其对粘虫核型多角体病毒(MsNPV)的增效作用。结果表明,FB28离体处理围食膜能够解离大部分围食膜蛋白,幼虫摄取含有1%FB28的饲料4 h后,围食膜破裂,呈现出蓝色的荧光,高分子量蛋白条带消失。En-Ha离体处理围食膜,能够降解高分子量蛋白,出现高分子量蛋白条带消失,低分子量蛋白条带出现的现象;幼虫摄取含有9μg/mL En-Ha饲料7 h后,围食膜极易断裂,高分子量蛋白条带消失。经过一段时间恢复实验后,FB28和En-Ha处理的幼虫围食膜都能够恢复正常,其破坏作用是短暂的。生物测定结果表明,FB28和En-Ha均能够通过破坏围食膜完整性提高MsNPV的感染率,使LC50显著降低。 展开更多

关键词 荧光增白剂 增效蛋白 粘虫核型多角体病毒 围食膜 增效作用

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乳糖作为棉铃虫颗粒体病毒增效蛋白表达诱导剂的可行性研究 被引量：4

12

作者 董琳茜 张克勤 邱并生 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期5-9,共5页

乳糖不仅可以诱导棉铃虫颗粒体病毒增效蛋白表达,而且表达量与IPTG(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷)作为诱导剂时相比,并不低于后者,这样大规模生产棉龄虫颗粒体病毒增效蛋白的成本就可能被降低.乳糖的最适浓度经优化为2.2%～2.5%(W/V).对乳... 乳糖不仅可以诱导棉铃虫颗粒体病毒增效蛋白表达,而且表达量与IPTG(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷)作为诱导剂时相比,并不低于后者,这样大规模生产棉龄虫颗粒体病毒增效蛋白的成本就可能被降低.乳糖的最适浓度经优化为2.2%～2.5%(W/V).对乳糖的不同除菌处理表明:0.70×105Pa 15min蒸汽灭菌的乳糖可以诱导此增效蛋白表达,这种处理比滤膜过滤除菌更为方便和经济,因此就为棉铃虫颗粒体病毒增效蛋白的生产提供了经济实用的前景. 展开更多

关键词 IPTG 乳糖 棉铃虫颗粒体病毒增效蛋白 T7启动子 LAC UV5启动子

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粘虫颗粒体病毒增效蛋白在苏云金芽胞杆菌中的表达及增效活性

13

作者 黄立鑫 孙俊 +5 位作者 刘琴 韩光杰 李传明 夏杨 陆玉荣 徐健 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期1460-1471,共12页

【目的】在苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)中表达截短后的转宿主粘虫颗粒体病毒(Pseudaletia unipuncta granulovirus-Ps,PuGV-Ps)增效蛋白,为构建增效Bt工程菌提供理论基础。【方法】通过对截短后增效蛋白的密码子进行优化... 【目的】在苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)中表达截短后的转宿主粘虫颗粒体病毒(Pseudaletia unipuncta granulovirus-Ps,PuGV-Ps)增效蛋白,为构建增效Bt工程菌提供理论基础。【方法】通过对截短后增效蛋白的密码子进行优化,构建增效蛋白及其融合蛋白表达载体,分析不同启动子指导下增效蛋白表达量的变化,明确增效蛋白对Bt的增效活性。【结果】本研究构建了表达载体pHTPcry1AcCoEn81、pHTRHCoEn81和pHTNCCoEn81,SDS-PAGE结果显示pHTPcry1AcCoEn81和pHTNCCoEn81分别可以产生81 kDa和134 kDa的重组蛋白。启动子Pcry1Ac和Pcry8E指导下的增效蛋白表达量和重组增效蛋白产量均无显著性差异。生物测定结果表明,重组增效蛋白可以显著增加Bt对小菜蛾的杀虫活性。【结论】研究结果表明,密码子优化的PuGV-Ps增效蛋白可以在Bt中表达并具有显著增效活性,为高效苏云金芽胞杆菌工程菌的构建及应用提供理论指导。 展开更多

关键词 粘虫颗粒体病毒 苏云金芽胞杆菌 增效蛋白 增效活性

原文传递

TnGV增强蛋白在AcMNPV中的表达和活性分析 被引量：4

14

作者 李志广 尹隽 钟江 《中国病毒学》 CSCD 2002年第4期326-330,共5页

为了研究杆状病毒增强蛋白的活性基团 ,本文构建了分别表达三种N端部分缺失的粉纹夜蛾颗粒体病毒增强蛋白的重组杆状病毒 ,这三种蛋白在N端分别缺失了 15 0 ,186和 2 5 0个氨基酸。用重组病毒感染Tn 5B1 4细胞 ,成功地表达了这三种蛋白 ... 为了研究杆状病毒增强蛋白的活性基团 ,本文构建了分别表达三种N端部分缺失的粉纹夜蛾颗粒体病毒增强蛋白的重组杆状病毒 ,这三种蛋白在N端分别缺失了 15 0 ,186和 2 5 0个氨基酸。用重组病毒感染Tn 5B1 4细胞 ,成功地表达了这三种蛋白 ,并得到了纯化的蛋白质。通过体外降解围食膜的方法检测这些部分缺失的增强蛋白的活性 ,结果证实这三种蛋白均失去了增强蛋白的降解围食膜粘蛋白的活性。这一结果表明 。 展开更多

关键词 TnGV增强蛋白 ACMNPV 表达 活性分析 杆状病毒 结构 功能 生物防治

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增强蛋白与多角体蛋白共包埋的研究 被引量：1

15

作者 王立娟 钟江 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期64-68,共5页

颗粒体病毒的增强蛋白 (enhancin)是一种能显著提高核型多角体病毒 (NPV)对昆虫感染力的病毒蛋白。构建了一种不形成多角体但表达粉纹夜蛾颗粒体病毒增强蛋白的重组病毒AcBBH -TnEn ,将它与野生型AcMNPV共同感染SF2 1细胞 ,经SDS -PAGE... 颗粒体病毒的增强蛋白 (enhancin)是一种能显著提高核型多角体病毒 (NPV)对昆虫感染力的病毒蛋白。构建了一种不形成多角体但表达粉纹夜蛾颗粒体病毒增强蛋白的重组病毒AcBBH -TnEn ,将它与野生型AcMNPV共同感染SF2 1细胞 ,经SDS -PAGE、免疫印迹分析、荧光免疫等方法检测证实 ,增强蛋白与多角体可在同一细胞中同时表达 ,而且发现所形成的病毒多角体带有增强蛋白。这表明 ,可以通过混合感染的方式生产带有增强蛋白的病毒多角体。 展开更多

关键词 杆状病毒 增强蛋白 多角体 共包埋

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粘虫颗粒体病毒增效蛋白基因片段优化及功能 被引量：3

16

作者 韩光杰 刘琴 +4 位作者 徐贝贝 王建军 祁建杭 李传明 徐健 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第9期1459-1467,共9页

【目的】研究转宿主粘虫颗粒体病毒(Pseudaletia unipuncta granulovirus,Pu GV-Ps)增效蛋白基因截短片段优化及其增效作用,探索增效蛋白基因的合理利用途径。【方法】生物信息学分析增效蛋白结构域,构建增效蛋白基因截短片段原核表达载... 【目的】研究转宿主粘虫颗粒体病毒(Pseudaletia unipuncta granulovirus,Pu GV-Ps)增效蛋白基因截短片段优化及其增效作用,探索增效蛋白基因的合理利用途径。【方法】生物信息学分析增效蛋白结构域,构建增效蛋白基因截短片段原核表达载体,分析目的基因片段表达产物的表达水平、围食膜蛋白降解效能和增强活性,进一步明确Pu GV-Ps增效蛋白基因的功能区域。【结果】Pu GV-Ps增效蛋白含有M60-like结构域、锌离子催化域和糖蛋白结合域,并包含13个潜在的糖基化位点。以此为依据设计P69(短截M60-like结构域)和P77(短截糖蛋白结合域)2个截短片段,构建了表达载体p ET15b-P69和p ET15bP77,原核表达量明显高于全长基因P104。表达产物纯化蛋白围食膜降解活性表明,P69对斜纹夜蛾围食膜大分子蛋白降解程度高于P77,但两者均低于P104。病毒增强苏云金杆菌(Bt)实验表明,截短片段的表达产物提高了Bt对小菜蛾的毒力,但增强活性显著低于P104。【结论】研究结果表明,Pu GV-Ps增效蛋白基因N端M60-like结构域和C端糖蛋白结合域对其增效作用的发挥都具有一定功能,这些结构对维持增效蛋白的构象也发挥了一定的作用,截短片段P69有利于保持Pu GV-Ps增效蛋白的活性、提高表达水平。该研究结果对增效蛋白的工业化生产具有一定的指导意义。 展开更多

关键词 粘虫颗粒体病毒 增效蛋白 短截片段 增效活性

原文传递

文山松毛虫质型多角体病毒在Sf21细胞中离体增殖试验 被引量：2

17

作者 马永平 孟小林 徐进平 《中国病毒学》 CSCD 2002年第2期137-141,共5页

研究了文山松毛虫质型多角体病毒 (DpCPV W )在Sf2 1细胞中的离体增殖行为 ,并进行了空斑试验 ,结果显示DpCPV W毒株能够在Sf2 1细胞中增殖 ,也能在Sf2 1细胞上形成空斑 ,并能产生形态正常的病毒多角体。在DpCPV W中加入基因工程增效蛋... 研究了文山松毛虫质型多角体病毒 (DpCPV W )在Sf2 1细胞中的离体增殖行为 ,并进行了空斑试验 ,结果显示DpCPV W毒株能够在Sf2 1细胞中增殖 ,也能在Sf2 1细胞上形成空斑 ,并能产生形态正常的病毒多角体。在DpCPV W中加入基因工程增效蛋白 ,能显著增加病毒粒子对离体细胞的感染率 ,增幅达 145 %。生物测定表明 ,离体增殖的病毒多角体与虫体增殖的多角体的毒力相当。因此 ,Sf2 1细胞可以作为文山松毛虫CPV增殖行为研究的离体细胞系统 。 展开更多

关键词 文山松毛虫质型 多角体病毒 Sf21细胞 离体增殖试验 空斑试验 增效蛋白

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PuGV-Ps增效蛋白质基因特征及其整合载体的构建 被引量：1

18

作者 韩光杰 赵松 +2 位作者 刘琴 李传明 徐健 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2015年第2期279-284,共6页

为了明确增效蛋白质基因特性,获得重组增效苏云金杆菌,本试验通过生物信息学方法分析了转宿主东方粘虫颗粒体病毒（Pu GV-Ps）增效蛋白质基因（En）的特征及二级结构,利用In-fusion技术构建了整合载体。基于Pu GV-Ps增效蛋白质基因进化... 为了明确增效蛋白质基因特性,获得重组增效苏云金杆菌,本试验通过生物信息学方法分析了转宿主东方粘虫颗粒体病毒（Pu GV-Ps）增效蛋白质基因（En）的特征及二级结构,利用In-fusion技术构建了整合载体。基于Pu GV-Ps增效蛋白质基因进化树显示,颗粒体病毒与多角体病毒为2个明显的分支,美洲粘虫颗粒体病毒（Pu GV）与转宿主东方粘虫颗粒体病毒的增效蛋白质基因遗传距离极小。6种颗粒体病毒增效蛋白质氨基酸序列比对结果显示,增效蛋白质N端相似性较高,均含有锌离子结构域（244位）与催化域（526～565位）;增效蛋白质基因二级结构中α螺旋和无规则卷曲占整个片段的73%,且N端以不规则卷曲为主;利用改进的In-fusion技术构建整合载体,双酶切结果显示增效蛋白质基因连接方向正确,p LTV1-En构建成功;通过高温整合获得重组工程菌Bt71En。表明,Pu GV-Ps与Pu GV增效蛋白质基因同源性较高,其二级结构复杂,影响载体构建,通过高温处理连接片段可以明显提高载体的连接效率。 展开更多

关键词 转宿主粘虫颗粒体病毒 增效蛋白质 整合载体

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黄地老虎颗粒体病毒enhancin-like基因的表达与增效功能研究 被引量：1

19

作者 张小霞 梁振普 +3 位作者 陈晓慧 宋小凤 王丽薇 邵新峰 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期258-264,共7页

增效蛋白(ENHANCIN)是一种主要在昆虫杆状病毒中存在的杀虫增效因子,黄地老虎颗粒体病毒(Agrotis segetum granulovirus,AgseGV)基因组中有一个ORF的编码产物为杆状病毒ENHANCIN同源物,命名为en-hancin-like。生物信息学分析结果表明,Ag... 增效蛋白(ENHANCIN)是一种主要在昆虫杆状病毒中存在的杀虫增效因子,黄地老虎颗粒体病毒(Agrotis segetum granulovirus,AgseGV)基因组中有一个ORF的编码产物为杆状病毒ENHANCIN同源物,命名为en-hancin-like。生物信息学分析结果表明,AgseGV的enhancin-like基因编码产物含有ENHANCIN的保守域,无信号肽序列,不存在a-螺旋跨膜区,在其C-末端拥有类似哺乳动物的脯氨酸富集区。为了确定AgseGV的EN-HANCIN-like蛋白是否具有增效功能,构建了AgseGV的enhancin-like全基因和5′端片段(1 017bp)的原核表达载体。利用层析技术纯化截短片段的原核表达产物,以其为抗原制备了抗体。利用自制抗体和His-tag抗体,Western blot检测了enhancin-like全基因的表达产物。结果表明,在融合蛋白预期大小处显示出阳性条带,证明目的基因得到了良好的表达。以棉铃虫为供试虫进行生物测定,证明在棉铃虫核多角体病毒(HaNPV)浓度为1.17×102 PIBS/mL时,AgseGV enhancin-like的全基因原核表达产物能使其感染3龄初幼虫的死亡率提高16.25%,增效作用显著。但是,5'端截短片段的原核表达产物对HaNPV没有增效作用。 展开更多

关键词 黄地老虎颗粒体病毒 增效蛋白 原核表达 WESTERN BLOT 棉铃虫核多角体病毒

原文传递

粉纹夜蛾颗粒体病毒增效基因3′端2.5kb片段在大肠杆菌中的表达 被引量：14

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作者 袁哲明 孟小林 刘树生 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期155-160,共6页

将粉纹夜蛾Trichoplusiani颗粒体病毒增效基因 3′端 2 5kb片段插入 pQE 31中构建了重组表达载体 pQE/enhancin ,转化大肠杆菌M 15( pREP4 )在IPTG诱导下成功表达出分子量约为96kD的融合蛋白并命名为P96。初步纯化的P96显示了明显的增... 将粉纹夜蛾Trichoplusiani颗粒体病毒增效基因 3′端 2 5kb片段插入 pQE 31中构建了重组表达载体 pQE/enhancin ,转化大肠杆菌M 15( pREP4 )在IPTG诱导下成功表达出分子量约为96kD的融合蛋白并命名为P96。初步纯化的P96显示了明显的增效活性 ,可提高棉铃虫核型多角体病毒对棉铃虫 3龄幼虫感染死亡率 2 7 4 0 %～ 34 50 % ,缩短LT50 1 展开更多

关键词 粉纹夜蛾颗粒体病毒 增效基因 克隆 表达 生物测定

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