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山羊β酪蛋白基因克隆及序列分析 被引量:9
1
作者 王强 陈美珏 +2 位作者 任兆瑞 黄淑帧 曾溢滔 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期17-23,共7页
用LongPCR技术克隆山羊 β酪蛋白 (CSN2 )全基因 13.7kb的序列 (GenBank登录号 :AF4 0 90 96 ) .利用PCR RFLP方法鉴定第 14和 192位氨基酸残基相应的核苷酸序列中出现的 2个多态性位点 ,其中第 192位氨基酸残基处的TspRⅠ位点是Saanen... 用LongPCR技术克隆山羊 β酪蛋白 (CSN2 )全基因 13.7kb的序列 (GenBank登录号 :AF4 0 90 96 ) .利用PCR RFLP方法鉴定第 14和 192位氨基酸残基相应的核苷酸序列中出现的 2个多态性位点 ,其中第 192位氨基酸残基处的TspRⅠ位点是Saanen奶山羊CSN2基因中新发现的 1个多态性位点 .生物信息学方法分析山羊CSN2基因可见 ,非编码区中的SINE和LINE序列内含多种乳蛋白基因表达调控元件 。 展开更多
关键词 山羊 β酪蛋白 基因克隆 PCR-RFLP 序列分析
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亮氨酸或组氨酸通过哺乳动物雷帕霉素靶蛋白信号通路影响奶牛乳腺上皮细胞中酪蛋白的合成 被引量:8
2
作者 高海娜 胡菡 +1 位作者 王加启 郑楠 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期1124-1134,共11页
本试验以永生化奶牛乳腺上皮细胞系为模型,单一添加不同浓度的亮氨酸或组氨酸,检测酪蛋白和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白( mTOR)信号通路相关基因的表达,旨在探讨亮氨酸和组氨酸通过mTOR信号通路影响酪蛋白合成的机制。以厄尔平衡溶液... 本试验以永生化奶牛乳腺上皮细胞系为模型,单一添加不同浓度的亮氨酸或组氨酸,检测酪蛋白和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白( mTOR)信号通路相关基因的表达,旨在探讨亮氨酸和组氨酸通过mTOR信号通路影响酪蛋白合成的机制。以厄尔平衡溶液代替培养基,并设其为阴性对照,单一添加不同浓度的亮氨酸或组氨酸,分别采用噻唑蓝( MTT)比色法检测永生化奶牛乳腺上皮细胞12和24 h的增殖;运用实时荧光定量PCR( qRT?PCR)检测4个酪蛋白编码基因和8个mTOR信号通路相关基因mRNA表达量。结果表明:分别添加不同浓度亮氨酸或组氨酸12和24 h,细胞增殖趋势一致;与阴性对照组相比,分别添加0.15~5.40 mmol/L 亮氨酸或0.15~9.60 mmol/L组氨酸,永生化奶牛乳腺上皮细胞的数量均增加。与阴性对照组相比,当分别添加0.45~10.80 mmol/L亮氨酸6 h时,αs1-酪蛋白( CSN1S1)、αs2-酪蛋白( CSN1S2)和κ-酪蛋白(CSN3)基因表达均显著上调(P<0.05)。当添加0.15~4.80 mmol/L 组氨酸6 h 时, CSN1S1、β-酪蛋白(CSN2)和CSN3基因表达均显著上调(P<0.05)。在试验组中,当亮氨酸浓度为1.35 mmol/L时,mTOR信号通路相关基因mTOR、mTOR调控蛋白( raptor)、mTOR复合物1中的绑定蛋白(GβL)、信号下游因子真核翻译起始因子4E结合蛋白1(4EBP1)和真核细胞翻译延伸因子2(eEF2)基因表达量最高。而核糖体S6蛋白激酶(S6K1)基因的表达量随着亮氨酸浓度的增加而减少。当添加组氨酸时,下游信号因子4EBP1、eEF2、真核翻译起始因子4E ( EIF4E)和核糖体蛋白S6( rps6)基因的表达量随着组氨酸浓度的增加而增加,mTOR基因的表达量随着组氨酸浓度的增加而减少。在试验组中,GβL 的表达量在组氨酸的浓度达到4.80 mmol/L时最高;S6K1基因表达量在组氨酸的浓度� 展开更多
关键词 亮氨酸 组氨酸 酪蛋白 mTOR 细胞增殖 基因表达
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小鼠β-酪蛋白基因的克隆及序列分析 被引量:6
3
作者 林福玉 杨晓 +1 位作者 王健 黄培堂 《军事医学科学院院刊》 CSCD 北大核心 2002年第1期18-20,23,共4页
目的 :从 12 9Sv小鼠基因组文库中分离克隆 β_酪蛋白基因。 方法 :PCR方法扩增部分 β_酪蛋白基因作为探针 ,用原位杂交和PCR方法从小鼠基因组文库中分离克隆 β_酪蛋白基因。 结果和结论 :通过 3轮原位杂交分析 ,获得了包括小鼠 β_... 目的 :从 12 9Sv小鼠基因组文库中分离克隆 β_酪蛋白基因。 方法 :PCR方法扩增部分 β_酪蛋白基因作为探针 ,用原位杂交和PCR方法从小鼠基因组文库中分离克隆 β_酪蛋白基因。 结果和结论 :通过 3轮原位杂交分析 ,获得了包括小鼠 β_酪蛋白全长基因在内的阳性克隆 。 展开更多
关键词 小鼠 Β-酪蛋白基因 克隆 序列分析 基因组文库 原位杂交 基因打靶
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漏芦对奶山羊乳腺上皮细胞酪蛋白合成相关基因表达的影响 被引量:4
4
作者 刘莉莉 杨炳友 《河南农业科学》 北大核心 2020年第4期160-166,共7页
为探讨漏芦对泌乳动物乳腺酪蛋白合成的调节机制,利用细胞活力分析仪检测漏芦乙醇提取物(25、50、100、200、400、600、800μg/mL)对奶山羊乳腺上皮细胞活力和增殖能力的影响,并选择不抑制细胞生长增殖的乙醇提取物剂量,研究其对奶山羊... 为探讨漏芦对泌乳动物乳腺酪蛋白合成的调节机制,利用细胞活力分析仪检测漏芦乙醇提取物(25、50、100、200、400、600、800μg/mL)对奶山羊乳腺上皮细胞活力和增殖能力的影响,并选择不抑制细胞生长增殖的乙醇提取物剂量,研究其对奶山羊乳腺上皮细胞酪蛋白合成相关基因mRNA表达的影响;采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测乳腺上皮细胞αs1-酪蛋白(CSN1S1)、αs2-酪蛋白(CSN1S2)、β-酪蛋白(CSN2)、κ-酪蛋白(CSN3)、信号转导与转录激活因子5(STAT5)、蛋白质酪氨酸激酶2(JAK2)、哺乳动物雷帕霉素蛋白(mTOR)、真核细胞翻译启动因子4E结合蛋白1(4EBP1)及核糖体蛋白S6激酶1(S6K1)基因的mRNA表达水平。结果表明,较高剂量(200~800μg/mL)的漏芦乙醇提取物明显抑制了奶山羊乳腺上皮细胞的活力和增殖能力(P<0.05),故后续试验添加25、50、100μg/mL的漏芦乙醇提取物处理乳腺上皮细胞;漏芦乙醇提取物可明显上调细胞酪蛋白基因CSN1S1、CSN1S2、CSN2、CSN3及酪蛋白合成相关基因STAT5、JAK2、mTOR、S6K1的mRNA表达水平(P<0.05),但显著下调了4EBP1基因的mRNA表达水平(P<0.05)。由此可见,漏芦乙醇提取物能通过调节奶山羊乳腺上皮细胞酪蛋白合成相关基因的表达,进而促进乳腺细胞酪蛋白的合成。 展开更多
关键词 漏芦 奶山羊 乳腺上皮细胞 αs1-酪蛋白 αs2-酪蛋白 Β-酪蛋白 κ-酪蛋白 基因表达
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亮氨酸水平对奶牛乳腺上皮细胞增殖及κ-酪蛋白合成相关基因表达的影响 被引量:7
5
作者 代文婷 李爱军 +1 位作者 郑楠 王加启 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期1559-1566,共8页
本试验旨在研究添加不同水平亮氨酸对乳腺上皮细胞体外增殖及κ-酪蛋白(CSN3)合成相关基因表达的影响。选用中国荷斯坦奶牛乳腺上皮细胞进行体外培养,以不含有亮氨酸的培养基为对照组(0×组),试验组培养基分别添加0.112 5(0.25×... 本试验旨在研究添加不同水平亮氨酸对乳腺上皮细胞体外增殖及κ-酪蛋白(CSN3)合成相关基因表达的影响。选用中国荷斯坦奶牛乳腺上皮细胞进行体外培养,以不含有亮氨酸的培养基为对照组(0×组),试验组培养基分别添加0.112 5(0.25×组)、0.225 0(0.5×组)、0.450 0(1×组)、0.900 0(2×组)、1.800 0(4×组)、3.600 0(8×组)、7.200 0(16×组)、14.400 0 mmol/L(32×组)的亮氨酸。试验采用噻唑蓝(MTT)比色法检测奶牛乳腺上皮细胞增殖;运用实时定量PCR检测CSN3合成相关基因相对表达量。结果表明:亮氨酸能够提高乳腺上皮细胞的相对增殖率。24和48 h时,除0.25×组外,其余各组与对照组相比细胞均差异均显著(P<0.05);72 h时,各组与对照组相比差异均显著(P<0.05);其中2×组的促增殖作用都达到最强。亮氨酸能够促进哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(m TOR)、核糖体蛋白S6激酶1(S6K1)、蛋白质酪氨酸激酶2(JAK2)、转录激活因子5(STAT5)和CSN3基因的表达,抑制真核细胞翻译启动因子4E结合蛋白1(4EBP1)基因的表达,其中2×组对m TOR、S6K1、JAK2、STAT5和CSN3基因的上调表达最强,而对4EBP1基因的下调表达最强。总之,添加亮氨酸能够促进奶牛乳腺上皮细胞增殖和CSN3合成相关基因(除4EBP1)表达,亮氨酸水平为0.900 0 mmol/L时,其促进作用均达到最大。 展开更多
关键词 亮氨酸 细胞增殖 κ-酪蛋白 基因表达
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关于奶牛乳蛋白性状的研究 被引量:6
6
作者 崔胜 《乳业科学与技术》 2003年第2期92-93,65,共3页
本文综述了牛奶中乳蛋白成份的组成及特点。从遗传和选育的角度对乳蛋白性状进行了简要分析,指出乳蛋白性状将是今后奶牛育种工作的重点。
关键词 奶牛 乳蛋白性状 乳蛋白组成 遗传育种 牛奶成分
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赖氨酸对原代奶牛乳腺上皮细胞中酪蛋白及mTOR信号通路相关基因表达的影响 被引量:5
7
作者 高海娜 韩荣伟 +3 位作者 郑楠 胡菡 李发弟 王加启 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期7-15,共9页
为了在探究单一添加不同浓度的赖氨酸对原代奶牛乳腺上皮细胞的增殖,以及mTOR信号通路介导的酪蛋白合成相关基因的影响.试验用厄尔平衡溶液(EBSS)代替正常培养基来处理原代奶牛乳腺上皮细胞,在此基础上依次添加不同浓度的赖氨酸,采用... 为了在探究单一添加不同浓度的赖氨酸对原代奶牛乳腺上皮细胞的增殖,以及mTOR信号通路介导的酪蛋白合成相关基因的影响.试验用厄尔平衡溶液(EBSS)代替正常培养基来处理原代奶牛乳腺上皮细胞,在此基础上依次添加不同浓度的赖氨酸,采用MTT法检测细胞12h和24h的增殖和利用qRT-PCR技术检测4个编码酪蛋白基因和8个mTOR信号通路中与乳蛋白合成翻译相关基因的相对表达量.结果表明:添加赖氨酸12h,浓度为0.5~24mmol/L时,原代奶牛乳腺上皮细胞增殖数量增加(P=0.05);添加赖氨酸24h,浓度为0.5~8mmol/L时,细胞增殖数量增加(P〈0.01).当赖氨酸的添加浓度为0.5~16 mmol/L时,CSN1S1、CSN1S2、CSN2和CSN3基因表达均显著上调(P〈0.01).当赖氨酸添加量为0.5~16mmol/L时,mTOR和raptor基因的表达量显著上调(P〈0.05).在添加不同浓度的赖氨酸时,下游通路信号因子S6K1、4EBP1和eEF2基因表达均显著上调(P〈0.01);rps6基因表达上调,eIF4E基因表达下调,但差异均不显著.以上结果表明,补充赖氨酸能显著促进乳腺上皮细胞中酪蛋白的合成,这一过程与mTOR信号通路介导蛋白质合成相关. 展开更多
关键词 赖氨酸 酪蛋白 MTOR 细胞增殖 基因表达
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小桐子植物特异性酪蛋白激酶PS-CK1-5基因的克隆及原核表达分析
8
作者 王海波 吴贞莹 郭俊云 《热带亚热带植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期93-100,共8页
酪蛋白激酶(casein kinase,CK)作为一类普遍存在的Ser/Thr蛋白激酶,通过调节靶标蛋白的活性与稳定性,在植物整个生理过程及信号转导途径中发挥重要作用。基于同源序列比对,该研究对小桐子(Jatropha curcas)酪蛋白激酶基因家族进行鉴定... 酪蛋白激酶(casein kinase,CK)作为一类普遍存在的Ser/Thr蛋白激酶,通过调节靶标蛋白的活性与稳定性,在植物整个生理过程及信号转导途径中发挥重要作用。基于同源序列比对,该研究对小桐子(Jatropha curcas)酪蛋白激酶基因家族进行鉴定与表达分析。结果表明,小桐子基因组中共鉴定到7个酪蛋白激酶1基因(CK1)、5个植物特异性酪蛋白激酶1基因(PS-CK1)、3个酪蛋白激酶2α亚基基因(CK2-α)、2个酪蛋白激酶2β亚基基因(CK2-β),4个亚家族成员在氨基酸长度、等电点及外显子数目等都有其家族特异性。蛋白的氨基酸序列比对表明,小桐子酪蛋白激酶1都包含N端保守激酶结构域,同时其内部都鉴定到典型的激酶活性环基序、ATP结合核心基序、核定位信号肽。qRT-PCR表达分析表明,小桐子JcPS-CK1-5基因在叶片与根中都属于低温诱导基因,可能参与小桐子抗冷性过程。构建其原核表达载体pET-32a-JcPS-CK1-5,并在BL21(DE3)中诱导表达,得到81.6 kD的条带,与理论融合蛋白的分子量一致。这可为小桐子CK基因的功能鉴定及逆境信号转导机制研究提供参考。 展开更多
关键词 小桐子 基因家族 酪蛋白激酶 基因克隆 原核表达
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胰岛素对奶牛乳腺上皮细胞生长及κ-酪蛋白和胰岛素受体基因表达的影响 被引量:4
9
作者 田青 季昀 +1 位作者 庞学燕 王洪荣 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期77-87,共11页
本试验旨在研究培养基中添加不同浓度的胰岛素对奶牛乳腺上皮细胞生长及κ-酪蛋白(CSN3)和胰岛素受体(INSR)基因表达的影响。选用中国荷斯坦奶牛的乳腺上皮细胞进行体外培养,在以无血清无激素的生长培养基为对照的基础上,分别添加胰岛素... 本试验旨在研究培养基中添加不同浓度的胰岛素对奶牛乳腺上皮细胞生长及κ-酪蛋白(CSN3)和胰岛素受体(INSR)基因表达的影响。选用中国荷斯坦奶牛的乳腺上皮细胞进行体外培养,在以无血清无激素的生长培养基为对照的基础上,分别添加胰岛素5、50、500和5 000 ng/mL,测定CSN3和INSR基因表达量以及CSN3相对含量的变化。结果表明:1)胰岛素能够促进乳腺上皮细胞的增殖,其中5~500 ng/mL的胰岛素促增殖作用较好。2)胰岛素能提高乳腺上皮细胞CSN3、INSR基因表达量和CSN3相对含量,50 ng/mL组CSN3基因表达量和CSN3相对含量均显著或极显著高于对照组(P<0.01)以及5(P<0.01)、500(P<0.01)和5 000 ng/mL组(P<0.05),INSR基因表达量显著或极显著高于对照组(P<0.05)以及500(P<0.05)和5 000 ng/mL组(P<0.01)。结果提示,随着胰岛素浓度的增加,CSN3和INSR基因的表达量及CSN3相对含量均呈先增加后下降的趋势,50 ng/mL时最高,而高浓度(5 000 ng/mL)的胰岛素不利于奶牛乳腺上皮细胞合成乳蛋白。 展开更多
关键词 胰岛素 胰岛素受体 κ-酪蛋白 奶牛乳腺上皮细胞 基因表达 细胞增殖
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牛αS1-酪蛋白基因研究新进展 被引量:4
10
作者 田青 《中国牛业科学》 2011年第5期43-45,共3页
酪蛋白是牛奶蛋白质的主要组成部分,约占总蛋白的70%~80%,而as1-酪蛋白又是酪蛋白的主要组成部分,约占牛奶总蛋白的39%~46%,是牛乳腺组织中转录相当活跃的一个功能基因,因此研究牛αS1-酪蛋白基因就显得尤为重要而且很有必要。本文从牛a... 酪蛋白是牛奶蛋白质的主要组成部分,约占总蛋白的70%~80%,而as1-酪蛋白又是酪蛋白的主要组成部分,约占牛奶总蛋白的39%~46%,是牛乳腺组织中转录相当活跃的一个功能基因,因此研究牛αS1-酪蛋白基因就显得尤为重要而且很有必要。本文从牛as1-酪蛋白基因结构、遗传多态性和酪蛋白活性肽方面做了综述,旨在为以后牛as1-酪蛋白基因的深入研究和通过调控as1-酪蛋白基因而提高牛奶蛋白质的含量提供理论基础。 展开更多
关键词 酪蛋白 活性肽 遗传多态性 基因
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“Golden Gate”克隆法构建靶向载体 被引量:4
11
作者 梁龙 杨华 +2 位作者 杨永林 刘守仁 皮文辉 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期111-116,共6页
在同一反应体系内,利用IIS型限制性核酸内切酶和DNA连接酶进行"Golden Gate"克隆方法,将多个目的基因片段按照设定的顺序连接,实现多基因片段一步"无缝"连接。为编辑小鼠β酪蛋白基因位点,利用"Golden Gate&qu... 在同一反应体系内,利用IIS型限制性核酸内切酶和DNA连接酶进行"Golden Gate"克隆方法,将多个目的基因片段按照设定的顺序连接,实现多基因片段一步"无缝"连接。为编辑小鼠β酪蛋白基因位点,利用"Golden Gate"克隆法,构建了小鼠β酪蛋白基因位点同源重组靶向载体。 展开更多
关键词 DNA重组 &ldquo GOLDEN Gate&rdquo 克隆法 小鼠&beta 酪蛋白基因
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三维模式下培养时间对奶牛乳腺上皮细胞酪蛋白基因表达的影响 被引量:3
12
作者 王秀美 侯先志 +5 位作者 敖长金 高民 考桂兰 高爱武 兰儒冰 塔娜 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期1526-1533,共8页
本试验旨在研究三维模式下培养时间对奶牛乳腺上皮细胞(BMECs)酪蛋白基因表达的影响。采用3头健康的3~5岁泌乳黑白花奶牛的乳腺组织,将BMECs经1代纯化后进行三维培养,在三维模式下分别培养3、5、7、9 d,测定BMECs中αs1-酪蛋白、β-酪... 本试验旨在研究三维模式下培养时间对奶牛乳腺上皮细胞(BMECs)酪蛋白基因表达的影响。采用3头健康的3~5岁泌乳黑白花奶牛的乳腺组织,将BMECs经1代纯化后进行三维培养,在三维模式下分别培养3、5、7、9 d,测定BMECs中αs1-酪蛋白、β-酪蛋白、κ-酪蛋白的基因表达量。结果表明,利用三维模式培养5 d的BMECsαs1-酪蛋白和κ-酪蛋白基因表达量极显著高于培养3、7、9 d(P<0.01);利用三维模式培养5 d的BMECsβ-酪蛋白的基因表达量极显著高于培养3、7 d(P<0.01),高于培养9 d,但差异不显著(P>0.05)。结果显示,三维模式下培养时间影响BMECs中αs1-酪蛋白、β-酪蛋白、κ-酪蛋白的基因表达量,本试验条件下最佳培养时间为5 d。 展开更多
关键词 奶牛乳腺上皮细胞 三维培养 酪蛋白 基因表达 培养时间
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基于肽组学的瑞士乳杆菌酪蛋白水解差异分析 被引量:3
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作者 张心怡 姜杨 +2 位作者 刘小鸣 赵建新 陈卫 《中国食品学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2022年第6期53-61,共9页
为了探究瑞士乳杆菌酪蛋白的水解能力及多肽产物的差异,选取两株瑞士乳杆菌菌株,研究其发酵过程中主要酪蛋白组分的消耗、多肽的动态变化与生物活性肽的生成,以及两株瑞士乳杆菌菌株的蛋白水解基因与胞壁蛋白酶酶活特性。结果表明:两株... 为了探究瑞士乳杆菌酪蛋白的水解能力及多肽产物的差异,选取两株瑞士乳杆菌菌株,研究其发酵过程中主要酪蛋白组分的消耗、多肽的动态变化与生物活性肽的生成,以及两株瑞士乳杆菌菌株的蛋白水解基因与胞壁蛋白酶酶活特性。结果表明:两株瑞士乳杆菌对β-酪蛋白和αs1-酪蛋白的水解有明显差异,而无明显偏好性。肽总量在发酵过程中呈现先增加后减少的趋势,分子质量为2000~10000 u的多肽与总肽含量变化一致,而180~500 u的小分子质量多肽则先消耗后积累。LC-MS/MS结果表明:发酵产物中多肽呈现异质性,7M3产生的特异性肽更多,多来自β-酪蛋白的f78-99区域,并偏好切割αs1-酪蛋白的C端;而M108则产生更多来源于αs1-酪蛋白N端及中间序列的肽段。两株菌株各含不同的胞壁蛋白酶基因及转运系统,发酵前期M108酶活较高。 展开更多
关键词 瑞士乳杆菌 酪蛋白 水解 基因
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Expression and regulation of hFIX minigene and cDNA driven by β-casein gene in mouse mammary gland 被引量:1
14
作者 张克忠 江培宏 +4 位作者 卢大儒 黄伟达 陈立 薛京伦 邱信芳 《Science China(Life Sciences)》 SCIE CAS 1998年第4期406-412,共7页
Mammary gland specific expression vectors for human clotting factor IX (hFIX) and LacZ reporter gene driven by bovine β\|casein gene were constructed. Vectors were packaged by stearylamine (SA) liposome and were tran... Mammary gland specific expression vectors for human clotting factor IX (hFIX) and LacZ reporter gene driven by bovine β\|casein gene were constructed. Vectors were packaged by stearylamine (SA) liposome and were transferred to lactating mice via tail vein. Both hFIX and LacZ gene could be expressed in the mammary gland of the treated mice. The highest production of hFIX protein was 80.28 ng per mL milk, and more than 85% of hFIX protein appeared to be γ carboxylation and biologically active. The results suggested that the 2.0 kb sequence of β casein gene including promoter, exon 1 was effective to drive hFIX gene expression in mammary gland and intron 1 of β casein gene had an effect on the tissue specific expression. The expression level in mouse milk injected with hFIX minigene vector containing hFIX endogenous intron 1 was increased by above 3 times of that injected with hFIX cDNA vector. 展开更多
关键词 casein gene human CLOTTING factor IX (hFIX) mammary gland expression.
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αs1-酪蛋白基因研究进展 被引量:2
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作者 田青 《中国饲料》 北大核心 2011年第20期17-19,共3页
本文就αs1-酪蛋白基因结构和表达调控研究进展作一综述。
关键词 酪蛋白 基因 调控
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融合启动子调控下的t-PA cDNA乳腺定位表达
16
作者 李银聚 程相朝 +3 位作者 赖良学 赵君 扈荣良 殷震 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2001年第5期23-26,共4页
由牛 β- Casein启动子与大鼠 WAP启动子融合构建了 t- PA c DNA乳腺定位表达载体 p SVL-β△ WAP- PA,以研究 t- PA乳腺定位表达的调控。结果表明 ,将表达载体 p SVL- βb- PA,p SVL- WAP- PA及 p SVL-β△ WAP- PA分别直接注入怀孕的... 由牛 β- Casein启动子与大鼠 WAP启动子融合构建了 t- PA c DNA乳腺定位表达载体 p SVL-β△ WAP- PA,以研究 t- PA乳腺定位表达的调控。结果表明 ,将表达载体 p SVL- βb- PA,p SVL- WAP- PA及 p SVL-β△ WAP- PA分别直接注入怀孕的家兔乳腺管中 ,溶圈试验显示 3种表达载体均能在家兔乳腺中表达 ,且以分娩后第 4天的乳汁中表达水平最高 ,分别为 390 ,430和 6 70 ng/ m L。证明 0 .6 kb的牛 β- Casein上游调控序列具有一定的定位表达调控能力。融合启动子较单纯的 β- Casein或 WAP启动子调控下的 t- PA c 展开更多
关键词 β-casein基因 乳清酸蛋白基因 T-PA CDNA 乳腺定位表达 融合启动子
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串联启动子调控下的t-PAcDNA乳腺定位表达
17
作者 侯玉泽 李银聚 +3 位作者 邓雯 赵君 扈荣良 殷震 《河南农业大学学报》 CAS CSCD 2001年第2期188-191,共4页
由牛 β Casein启动子与大鼠WAP启动子串联构建了t PAcDNA乳腺定位表达载体pSVL WAPβ PA ,将 3种表达载体pSVL βb PA ,pSVL WAP PA及pSVL WAPβ PA分别注入怀孕家兔乳腺导管中 ,溶圈试验结果显示 ,3种表达载体均能在家兔乳腺中表达 ,... 由牛 β Casein启动子与大鼠WAP启动子串联构建了t PAcDNA乳腺定位表达载体pSVL WAPβ PA ,将 3种表达载体pSVL βb PA ,pSVL WAP PA及pSVL WAPβ PA分别注入怀孕家兔乳腺导管中 ,溶圈试验结果显示 ,3种表达载体均能在家兔乳腺中表达 ,且以分娩后第 4d的乳汁中表达水平最高 ,分别为 390 ,44 0 ,45 0 μg·L-1.本试验为进一步研究t PA基因乳腺定位表达调控和建立t 展开更多
关键词 Β-酪蛋白基因 乳清秀 酸蛋白基因 调控序列 t-PAcDNA 乳腺 表达
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牛奶中不同酪蛋白遗传变异体及其分型鉴定研究 被引量:1
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作者 谭莲英 夏忠悦 +3 位作者 钱成林 董成虎 宋艳梅 范光彩 《中国乳业》 2022年第12期120-124,共5页
牛奶中存在不同种类的蛋白质,且不同基因型遗传变异体牛奶蛋白质的构型和功效存在差异。酪蛋白分型鉴定方法有基因鉴定、毛细管电泳分离鉴定、高效液相色谱分离鉴定等。本文对比介绍了不同构型κ-酪蛋白和β-酪蛋白的分型鉴定方法,重点... 牛奶中存在不同种类的蛋白质,且不同基因型遗传变异体牛奶蛋白质的构型和功效存在差异。酪蛋白分型鉴定方法有基因鉴定、毛细管电泳分离鉴定、高效液相色谱分离鉴定等。本文对比介绍了不同构型κ-酪蛋白和β-酪蛋白的分型鉴定方法,重点验证了高效液相色分离谱鉴定方法的精密度、回收率,同时将该方法应用于生乳和乳制品酪蛋白分型检测鉴定,区分不同牧场牛群的遗传变异体类型和比例。通过该方法可指导牧场快速分群饲养奶牛,生产不同酪蛋白类型的生乳,并加工不同类型的高品质乳制品。 展开更多
关键词 牛奶 酪蛋白 基因亚型 分型鉴定
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中国荷斯坦奶牛K-酪蛋白基因多态性与泌乳性能关联性分析 被引量:1
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作者 郑新宝 吴琳娜 +1 位作者 徐世永 毋状元 《草食家畜》 2013年第6期40-44,共5页
本研究采用PCR-RFLP技术检测新疆地区中国荷斯坦奶牛K-CN基因多态性,并分析了该基因多态性与奶牛泌乳性能的关系。结果表明:检测群体K-CN基因表现出三种基因型:AA、AB、BB,基因型频率分别为0.6171、0.3278、0.0551,且达到平衡状态。三... 本研究采用PCR-RFLP技术检测新疆地区中国荷斯坦奶牛K-CN基因多态性,并分析了该基因多态性与奶牛泌乳性能的关系。结果表明:检测群体K-CN基因表现出三种基因型:AA、AB、BB,基因型频率分别为0.6171、0.3278、0.0551,且达到平衡状态。三种基因型与泌乳性状的关联性分析表明,B基因对中国荷斯坦奶牛乳脂率有显著影响。 展开更多
关键词 中国荷斯坦奶牛 K-酪蛋白 基因多态性 泌乳性能 关联性分析
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中国人乳β-酪蛋白基因克隆表达及生物信息学分析 被引量:1
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作者 任皓威 李春 +1 位作者 刘宁 顾鑫 《中国食品学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2015年第8期231-237,共7页
文献显示:牛β-酪蛋白(CSN2)目前有12种遗传变种,提示人类中也可能存在这种现象。为探究中国人乳β-酪蛋白是否与NCBI数据库中该种蛋白的1级结构具有差异性,验证作者先前对中国人乳β-酪蛋白氨基酸序列的分析,采集正常中国女性乳腺组织... 文献显示:牛β-酪蛋白(CSN2)目前有12种遗传变种,提示人类中也可能存在这种现象。为探究中国人乳β-酪蛋白是否与NCBI数据库中该种蛋白的1级结构具有差异性,验证作者先前对中国人乳β-酪蛋白氨基酸序列的分析,采集正常中国女性乳腺组织,提取总RNA,并以其为模板,通过RT-PCR方法扩增人乳β-酪蛋白的编码区(CDS)基因,连接T载体测序,然后提交至Gen Bank(登录号:KF 751868)。与NCBI上人β-酪蛋白的核苷酸序列比较,所得人乳β-酪蛋白CDS序列同源性达到100%,说明该基因在不同人种间具有高度保守性。由其核苷酸序列及推导的氨基酸序列进行生物信息学分析,结果:理论等电点(p I)5.52,该蛋白质不存在跨膜结构,具有较强的疏水区域。连接重组质粒和PET-30a-GST载体后,转化大肠杆菌BL21(DE3)获得表达菌株,37℃诱导4 h,目标重组蛋白以包涵体形式表达,通过Ni2+-NTA柱纯化重组蛋白,经SDS-PAGE验证,成功构建原核表达载体PET-30a-GST-CSN2,并获得重组人乳β-酪蛋白。这为进一步研究中国人乳β-酪蛋白奠定良好的基础。 展开更多
关键词 Β-酪蛋白 基因 克隆 序列分析
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