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大气压辉光放电低温等离子体诱变选育谷氨酰胺转胺酶高产菌株 被引量:28
1
作者 夏书琴 刘龙 +3 位作者 张东旭 李江华 堵国成 陈坚 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第11期1642-1649,共8页
以茂源链轮丝菌(Streptoverticillium mobaraense)03-10为出发菌株,采用一种新型的裸露电极大气压辉光放电的冷等离子体技术对链霉菌孢子进行诱变。根据双层平板法菌落显色及诱变处理后菌落形态差异快速筛选谷氨酰胺转胺酶高产突变株。... 以茂源链轮丝菌(Streptoverticillium mobaraense)03-10为出发菌株,采用一种新型的裸露电极大气压辉光放电的冷等离子体技术对链霉菌孢子进行诱变。根据双层平板法菌落显色及诱变处理后菌落形态差异快速筛选谷氨酰胺转胺酶高产突变株。突变率、正突变率分别达到42.8%和20.6%。最后复筛选育出具有较好遗传稳定性和形态稳定性的高产突变株G2-1,酶活达到2.73U/mL,比出发菌株提高了82%。 展开更多
关键词 大气压辉光放电低温等离子体 谷氨酰胺转胺酶 茂源链轮丝菌 显色
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分批发酵生产谷氨酰胺转氨酶的温度控制策略 被引量:14
2
作者 郑美英 堵国成 +1 位作者 陈坚 顾王芳 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第6期759-762,共4页
Batch fermentation of MTG by S.mobaraense WSH Z2 at various temperatures ranging between 25℃~35℃ were studied.At 30℃,MTG activity and cell dry weight were higher than others,reached 2.94 u/mL and 25.1 g/L respecti... Batch fermentation of MTG by S.mobaraense WSH Z2 at various temperatures ranging between 25℃~35℃ were studied.At 30℃,MTG activity and cell dry weight were higher than others,reached 2.94 u/mL and 25.1 g/L respectively.At 32℃ or higher,lagged time was shorter,specific cell growth rate(μ cell )and specific MTG production rate(μ MTG )were higher at earlier stage of culture,while at mid and last stage,μ cell and μ MTG were higher at 28℃.So the following strategy of temperature control was obtained:0~18 h,culture was performed at 32℃,and after 18 h,the temperature was shifted from 32℃ to 28℃.The results of this strategy showed that maximal MTG activity and productivity reached 3.37 u/mL and 80.2 u/L/h respectively,average μ cell and μ MTG obtained 3.02 u/h/g DCW and 0.028 g/h/gDCW,respectively,higher than all of that at single temperature.It could be seen that MTG production could be improved obviously by this temperature control. 展开更多
关键词 谷氨酰胺转氨酶 分批发酵 温度控制策略
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谷氨酰胺转胺酶发酵条件的优化研究 被引量:7
3
作者 燕国梁 堵国成 陈坚 《工业微生物》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期4-8,共5页
通过优化种子培养条件和发酵培养基组分使谷氨酰胺转胺酶产酶水平有了很大的提高。确定种龄为 2 0~ 2 4h ,接种量 8%左右。发酵培养基含淀粉 15g L、葡萄糖 15g L、蛋白胨 2 5g L、酵母膏 3g L、无水硫酸镁 2g L、磷酸氢二钾 2g L、无... 通过优化种子培养条件和发酵培养基组分使谷氨酰胺转胺酶产酶水平有了很大的提高。确定种龄为 2 0~ 2 4h ,接种量 8%左右。发酵培养基含淀粉 15g L、葡萄糖 15g L、蛋白胨 2 5g L、酵母膏 3g L、无水硫酸镁 2g L、磷酸氢二钾 2g L、无水磷酸二氢钾 2g L ,2 4~ 2 8h添加质量浓度为 0 .5 %的硫酸铵。在 10L发酵罐实验中 ,验证了溶解氧对MTG合成至关重要 ,确定较适宜通气量 1∶1.2 5vvm ,搅拌转速 30 0r min ,最高产酶单位最终稳定在 3.2u mL ,放罐时间在 4 4~ 4 展开更多
关键词 茂原链轮丝菌 微生物谷氨酰胺转胺酵 发酵条件优化
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Streptoverticillium mobaraense谷氨酰胺转胺酶的表达、纯化和复性 被引量:7
4
作者 唐名山 王树英 +1 位作者 陈坚 李华钟 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期17-21,共5页
以基因组DNA为模板 ,利用PCR技术从茂原轮链丝菌 (Streptoverticilliummobaraense)中扩增得到产成熟谷氨酰胺转胺酶MTG的结构基因mtg ,克隆于表达载体pQE 3 0T ,构建成lac启动子控制下的His6融合表达质粒pMTG ,将此重组质粒转化到受体菌... 以基因组DNA为模板 ,利用PCR技术从茂原轮链丝菌 (Streptoverticilliummobaraense)中扩增得到产成熟谷氨酰胺转胺酶MTG的结构基因mtg ,克隆于表达载体pQE 3 0T ,构建成lac启动子控制下的His6融合表达质粒pMTG ,将此重组质粒转化到受体菌E .coliM1 5中。对质粒稳定性的研究表明 ,E .coliM1 5在无选择压的情况下 ,于 3 7℃连续转接 5次 ,质粒丢失率仅有 2 4%,说明质粒基本稳定。重组菌经IPTG诱导 ,表达的重组谷氨酰胺转胺酶占菌体总蛋白的 1 8%,经SDS PAGE分析 ,表达的蛋白质的分子质量为 3 8ku ,与预期分子质量相符。表达产物主要以包涵体的形式存在。细胞经超声破碎 ,离心取包涵体溶于 8mol/L的尿素中 ,然后通过Ni NTA亲和柱分离纯化和稀释法复性。目的蛋白的纯度可达 95 %以上。比酶活为 1 0 3U/mg。 展开更多
关键词 茂原轮链丝菌 谷氨酰胺转胺酶 基因克隆 分离 纯化 基因重组技术 复性
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常压室温等离子体(ARTP)诱变茂源链霉菌菌株 被引量:9
5
作者 田淑翠 牛延宁 +3 位作者 常忠义 高红亮 步国健 金明飞 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第9期47-53,共7页
采用常压室温等离子体(ARTP)诱变技术处理茂源链霉菌(Streptoverticillium mobaraense)菌株HS47的孢子,选育微生物谷氨酰胺转胺酶(MTG)高产菌株。菌株的致死率强度和正突变率高低结果表明,在电源功率为120W,处理距离2mm,工作气流量10slp... 采用常压室温等离子体(ARTP)诱变技术处理茂源链霉菌(Streptoverticillium mobaraense)菌株HS47的孢子,选育微生物谷氨酰胺转胺酶(MTG)高产菌株。菌株的致死率强度和正突变率高低结果表明,在电源功率为120W,处理距离2mm,工作气流量10slpm时,等离子体氦气对茂源链霉菌HS47孢子的最佳处理时间为30s。将诱变后的孢子液稀释涂布后,利用96孔板高通量筛选方法对单菌落进行初筛,选出高产的突变株进行两轮试管复筛,筛选过程中保持对菌株的分离纯化,最终获得一株高产菌株M-8,其MTG酶活由2.8U/ml提高到5.1U/ml,较出发菌株HS47提高了82%。该菌株的摇瓶发酵实验证明,其酶活的提高是单位菌株分泌的MTG有所增加的结果。经过8次传代,证实该菌株具有良好的遗传稳定性。这为谷氨酰胺转胺酶的工业化生产提供了菌种支持和理论支持。 展开更多
关键词 常温室压等离子体诱变 高通量筛选 茂源链霉菌 谷氨酰胺转胺酶
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谷氨酰胺转胺酶(MTG)分批发酵中温度对S.mobaraense生长及产酶影响的模型化 被引量:5
6
作者 郑美英 堵国成 陈坚 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 2000年第5期462-467,共6页
研究了 2 .5L小罐培养过程中控制温度为 2 5℃~ 35℃时对细胞生长和MTG合成的影响 .结果表明 :当控制相对较低的温度时 ,细胞生长的延滞期较长 ,当控制温度较高时 ,细胞生长的延滞期较短 ,达到最大DCW和最高MTG酶活的时间均较短 ;通过... 研究了 2 .5L小罐培养过程中控制温度为 2 5℃~ 35℃时对细胞生长和MTG合成的影响 .结果表明 :当控制相对较低的温度时 ,细胞生长的延滞期较长 ,当控制温度较高时 ,细胞生长的延滞期较短 ,达到最大DCW和最高MTG酶活的时间均较短 ;通过研究各种不同模型对细胞生长的影响得到最适合描述S .mobaraense生长与温度之间的关系方程为Schoolfield方程 ;通过对最大DCW和最大MTG酶活进行数学模拟 ,发现方程X(U) =-a0 (θ -θ0 ) 2 +X1(U1) +a1{ 1-exp[a2 ·(θ-θ1) ) ]}能较好地描述最大DCW和最大MTG酶活与温度之间的关系 ;通过研究延滞时间与温度之间的关系 ,得到描述两者之间关系的最适关系式为 :λ =l/ (A0 +A1·T +A1·T2 +A2 ·T3 +A) 4·T4 ) ;通过对单一温度以及分阶段控制温度的细胞生长及产酶的模型预测值及实验值进行比较 ,发现模型预测值与实验结果较吻合 .图 6表 6参 展开更多
关键词 谷氨酰胺转胺酶 分批发酵 模型化研究 MTG
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发酵法生产谷氨酰胺转胺酶(MTG)的中试研究 被引量:2
7
作者 柏映国 燕国梁 +1 位作者 堵国成 陈坚 《工业微生物》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期1-5,共5页
比较了摇瓶和 2 .5L种子罐所培养的种子液 ,并在 5L罐上考察了以种子罐培养种子时不同接种量对发酵过程的影响。在将 5L小罐实验结果放大到 30 0L和 3m3 罐的中试规模时 ,分别采用以vvm相等和KLa相等的原则 ,对通风量进行放大 ,以P V相... 比较了摇瓶和 2 .5L种子罐所培养的种子液 ,并在 5L罐上考察了以种子罐培养种子时不同接种量对发酵过程的影响。在将 5L小罐实验结果放大到 30 0L和 3m3 罐的中试规模时 ,分别采用以vvm相等和KLa相等的原则 ,对通风量进行放大 ,以P V相等为依据对搅拌转速进行放大。结果表明 ,当采用种子罐培养种子液时 ,适宜的种龄为 18~ 2 0h ,接种量为 2 % ,30 0L罐中酶活和生产强度分别达到 3.12u mL和 78.0u L·h ,均高于 5L罐的水平 ,3m3 罐酶活为 2 .70u mL ,接近于 5L罐的酶活水平 ,表明本研究所采用的通气量。 展开更多
关键词 茂原链轮丝菌 微生物谷氨酰胺转胺酶 MTG 中试 发酵
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产谷氨酰胺转胺酶菌株的高通量筛选 被引量:4
8
作者 刘颖 田沛霖 +5 位作者 陈佳 高红亮 鲁伟 鲁心安 常忠义 金明飞 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2013年第6期167-172,共6页
【目的】用醋酸纤维素膜和96孔板2种方法高通量筛选高产谷氨酰胺转胺酶(MTG)的茂原轮枝链霉菌菌株。【方法】利用紫外诱变获得茂原轮枝链霉菌突变体库后,分别利用醋酸纤维素膜和96孔板2种方法高通量初筛产MTG菌株,然后依次用试管和摇瓶... 【目的】用醋酸纤维素膜和96孔板2种方法高通量筛选高产谷氨酰胺转胺酶(MTG)的茂原轮枝链霉菌菌株。【方法】利用紫外诱变获得茂原轮枝链霉菌突变体库后,分别利用醋酸纤维素膜和96孔板2种方法高通量初筛产MTG菌株,然后依次用试管和摇瓶发酵法复筛,并对96孔板高通量筛选方法的条件进行了优化。【结果】利用醋酸纤维素膜显色法从3 000株紫外诱变的菌株中筛选出1株高产MTG茂原轮枝链霉菌,其MTG活性为4.9U/mL,较出发株(MTG活性2.7U/mL)提高了80%。优化的96孔板高通量筛选方法为:直径为3mm左右的单菌落接种至150μL发酵培养基中,30℃200r/min培养72h;利用该法从3 415株紫外诱变的菌株中筛选获得了2株MTG高产株,其MTG活性为5.4U/mL,较出发株(MTG活性为3.0U/mL)提高了80%。【结论】利用基于醋酸纤维素膜和96孔板的2种高通量筛选方法分别筛选到1株和2株高产MTG的茂原轮枝链霉菌;相较传统的选育方法,这2种高通量筛选方法都大大降低了经济成本,提高了筛选效率,缩短了选育周期。 展开更多
关键词 茂原轮枝链霉菌 微生物谷氨酰胺转胺酶 高通量筛选 醋酸纤维素膜 96孔板
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高产谷氨酰胺转胺酶茂原链霉菌的快速筛选 被引量:4
9
作者 田沛霖 朱一辰 +6 位作者 金明飞 陈佳 刘颖 高红亮 常忠义 刘莉 袁涵 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2013年第3期187-192,共6页
【目的】考察茂原链霉菌单菌落表面纹饰特征及边缘特征与产微生物谷氨酰胺转胺酶(MTG)能力的关系,建立一种根据菌落形态快速初筛高产株的方法。【方法】通过自然选育,将原始菌株分离纯化后得到不同形态的单菌落,从中选出典型的表面纹饰... 【目的】考察茂原链霉菌单菌落表面纹饰特征及边缘特征与产微生物谷氨酰胺转胺酶(MTG)能力的关系,建立一种根据菌落形态快速初筛高产株的方法。【方法】通过自然选育,将原始菌株分离纯化后得到不同形态的单菌落,从中选出典型的表面纹饰特征和边缘特征单菌落。用试管发酵48h后测定各形态菌落的酶活,并通过摇瓶发酵验证依据菌落形态特征初筛MTG酶高产株方法的可行性。【结果】表面厚实饱满呈馒头型且边缘毛糙的菌落酶活最高,而表面平薄、边缘光滑的菌落酶活最低。根据这一形态鉴定法,通过摇瓶发酵,筛选出了一株产MTG酶活高达6.33U/mL的菌株,其活性比原始出发株提高了20.1%。【结论】根据菌落形态筛选MTG酶高产株的方法是可行的。 展开更多
关键词 茂原链霉菌 菌落形态 谷氨酰胺转胺酶 快速筛选 高产株
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转谷氨酰胺酶高产突变株的紫外线诱变选育及发酵条件研究 被引量:2
10
作者 陈佳鹏 刘晓兰 +2 位作者 郑喜群 田英华 刘玥 《中国调味品》 CAS 北大核心 2014年第6期23-27,共5页
以茂源链霉菌为出发菌株,对其进行紫外线诱变,通过初筛复筛,选育出性能稳定的高产突变菌株G-17,其酶活力达到0.86U/mL,相对于出发菌株提高了2.4倍。对影响突变菌株G-17摇瓶液态发酵条件进行了研究,确定发酵的最佳条件为:培养基初始pH为7... 以茂源链霉菌为出发菌株,对其进行紫外线诱变,通过初筛复筛,选育出性能稳定的高产突变菌株G-17,其酶活力达到0.86U/mL,相对于出发菌株提高了2.4倍。对影响突变菌株G-17摇瓶液态发酵条件进行了研究,确定发酵的最佳条件为:培养基初始pH为7.0,100μg/L CaCl2,接种量10%(V/V),发酵温度30℃,转速200r/min,摇床震荡培养48h;最佳发酵条件下,发酵液中转谷氨酰胺酶活力达到1.27U/mL。 展开更多
关键词 茂源链霉菌 转谷氨酰胺酶 紫外线诱变 发酵条件
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产转谷氨酰胺酶茂源链霉菌的诱变育种及发酵培养基优化 被引量:1
11
作者 臧学丽 陈光 《吉林农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期548-551,共4页
研究了茂源链霉菌在不同条件下的产转谷氨酰胺酶特性。结果表明:茂源链霉菌的最适产酶温度为32℃,最适pH为7.5。通过紫外诱变茂源链霉菌的转谷氨酰胺酶产量提高了36.8%。茂源链霉菌可利用还原性淀粉作为发酵碳源,将淀粉转化为葡萄糖,葡... 研究了茂源链霉菌在不同条件下的产转谷氨酰胺酶特性。结果表明:茂源链霉菌的最适产酶温度为32℃,最适pH为7.5。通过紫外诱变茂源链霉菌的转谷氨酰胺酶产量提高了36.8%。茂源链霉菌可利用还原性淀粉作为发酵碳源,将淀粉转化为葡萄糖,葡萄糖的液相色谱图出峰时间为6.9 min。采用玉米秸秆作为发酵产转谷氨酰胺酶的碳源,产量虽不及高氏1号培养基,但转谷氨酰胺酶的产量较为理想。 展开更多
关键词 茂源链霉菌 紫外诱变 转谷氨酰胺酶 玉米秸秆
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NaCl对轮枝链霉菌产谷氨酰胺转胺酶的促进作用研究 被引量:4
12
作者 陈佳 金明飞 +4 位作者 谭玉静 刘颖 田沛霖 常忠义 步建国 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期54-58,共5页
为了提高轮枝链霉菌发酵生产谷氨酰胺转胺酶的产量,研究了3种无机盐(NaCl、MgCl2、KCl)对发酵产酶的影响。研究表明0.5%MgCl2、0.5%NaCl均可促进菌体产酶,其中添加NaCl后谷氨酰胺转胺酶酶活提高最为显著。SDS-PAGE图谱分析显示,在各取... 为了提高轮枝链霉菌发酵生产谷氨酰胺转胺酶的产量,研究了3种无机盐(NaCl、MgCl2、KCl)对发酵产酶的影响。研究表明0.5%MgCl2、0.5%NaCl均可促进菌体产酶,其中添加NaCl后谷氨酰胺转胺酶酶活提高最为显著。SDS-PAGE图谱分析显示,在各取样点实验组谷氨酰胺转胺酶酶原和成熟酶的总量高于对照,而且实验组成熟酶的增加也比对照快,从而显示NaCl是通过促进酶原的分泌和谷氨酰胺转胺酶的成熟,从而提高酶活、提早产酶。对NaCl的添加量进行优化,表明NaCl的最适添加量为0.5%,在此条件下,与对照相比,酶活水平提高了12%以上,发酵终点提前了约15h。 展开更多
关键词 NACL 谷氨酰胺转胺酶 轮枝链霉菌
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