siRNA沉默ERK-1基因对骨肉瘤细胞U-2OS基质金属蛋白酶-9表达的影响 被引量：1

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作者 胡俊 李卫 +2 位作者 袁忠 陶阳 沈云峰 《当代医学》 2019年第4期4-7,共4页

目的研究ERK-1基因对骨肉瘤细胞U-2OS基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达及细胞迁移侵袭的影响,探讨ERK-1基因在骨肉瘤细胞侵袭过程中的作用机制。方法通过siRNA技术沉默骨肉瘤细胞U-2OS中ERK-1基因表达,采用RT-PCR和Western blot分别检测... 目的研究ERK-1基因对骨肉瘤细胞U-2OS基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达及细胞迁移侵袭的影响,探讨ERK-1基因在骨肉瘤细胞侵袭过程中的作用机制。方法通过siRNA技术沉默骨肉瘤细胞U-2OS中ERK-1基因表达,采用RT-PCR和Western blot分别检测空白对照组、阴性对照组、siRNA沉默组中ERK-1、MMP-9的mRNA水平和蛋白水平,Transwell细胞迁移和侵袭能力实验,验证细胞迁移和侵袭能力。结果骨肉瘤细胞U-2OS转染ERK-1 siRNA后,ERK-1、MMP-9在mRNA和蛋白水平的表达受到明显抑制,细胞迁移和侵袭能力显著下降。结论 ERK-1可通过诱导细胞发生MMP-9的表达来促进骨肉瘤细胞U-2OS侵袭和转移。 展开更多

关键词 sirna技术 ERK-1基因 骨肉瘤细胞U-2OS 基质金属蛋白酶-9

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基因沉默技术在结核病防治研究中的应用 被引量：1

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作者 程春明 曹以诚 《生命的化学》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期493-495,共3页

目前基因沉默技术有反义RNA技术、siRNA技术等。该文介绍基因沉默技术在结核病预防与治疗研究中的应用,为结核病的治疗与药物的开发提供思路。

关键词 基因沉默 反义RNA sirna技术 结核

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INHA基因干扰对马关无角山羊卵巢颗粒细胞的影响

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作者 富国文 王绍卿 +2 位作者 滕晓红 达永仙 樊月圆 《家畜生态学报》 北大核心 2016年第8期12-15,49,共5页

为了揭示INHA基因在马关无角山羊卵泡发育过程中的作用,为山羊多胎性状的研究提供理论依据,以高繁殖力地方品种--马关无角山羊的卵巢颗粒细胞为研究对象,采用siRNA技术,对卵巢颗粒细胞所分泌的糖蛋白激素基因INHA进行了干扰,Western blo... 为了揭示INHA基因在马关无角山羊卵泡发育过程中的作用,为山羊多胎性状的研究提供理论依据,以高繁殖力地方品种--马关无角山羊的卵巢颗粒细胞为研究对象,采用siRNA技术,对卵巢颗粒细胞所分泌的糖蛋白激素基因INHA进行了干扰,Western blot法检验了干扰后INHA蛋白的表达量,Real-time PCR法检测了干扰后凋亡家族主要基因、主要生长因子及激素受体的mRNA表达量变化。Western blot结果显示,干扰48h后的INHA蛋白的表达量极显著低于正常组和阴性对照组(negative control,NC)(P<0.01);Real-time PCR结果显示,凋亡促进基因Bax在转染后,表达量极显著低于正常组和NC组(P<0.01),凋亡抑制基因bcl-2和bcl-xl基因在转染后,表达量极显著高于正常组和NC组(P<0.01);主要生长因子IGF-1和IGF-2基因在转染后,mRNA的表达量明显减少(P<0.01),其中IGF-1的表达量降低最为明显;激素受体FSHR和LHR基因mRNA的表达量极显著低于正常组和NC组(P<0.01)。由此推测,INHA基因可能是通过影响卵巢颗粒细胞凋亡/增殖,进而影响了卵泡的发育。 展开更多

关键词 INHA基因 卵巢颗粒细胞 sirna技术 马关无角山羊

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佛手提取物调控CYP7A1蛋白表达的研究 被引量：9

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作者 邓德城 贝伟剑 《广东药学院学报》 CAS 2016年第2期205-209,共5页

目的探讨佛手提取物(Finger Citron extract)对Hep G2细胞中胆固醇7α羟化酶(CYP7A1)及其核转录调控因子过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)和肝核因子4α(HNF4α)的蛋白表达量的影响。方法采用MTT法得出佛手提取物对Hep G2细胞生长... 目的探讨佛手提取物(Finger Citron extract)对Hep G2细胞中胆固醇7α羟化酶(CYP7A1)及其核转录调控因子过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)和肝核因子4α(HNF4α)的蛋白表达量的影响。方法采用MTT法得出佛手提取物对Hep G2细胞生长无明显抑制的浓度,Western blot检测CYP7A1、PPARα和HNF4α的蛋白表达量;采用siRNA干扰技术沉默调控因子PPARα后,观察佛手提取物对CYP7A1的蛋白表达的影响。结果佛手提取物浓度为0.2、1、5、25μg/m L对Hep G2细胞无明显的抑制作用,且均能上调CYP7A1、PPARα和HNF4α的蛋白表达量,沉默调控因子PPARα后,CYP7A1的蛋白表达量显著下降。结论佛手提取物具有一定的降脂作用,其机制可能与其上调PPARα的表达来上调CYP7A1的表达有关。 展开更多

关键词 佛手提取物 胆固醇7α羟化酶 WESTERN BLOT sirna干扰技术

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siRNA沉默Drp1对鱼藤酮诱导的帕金森病模型细胞自噬和凋亡的影响 被引量：5

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作者 周鸿雁 张德元 +2 位作者 申存周 郑一帆 陈玲 《临床和实验医学杂志》 2018年第11期1121-1125,共5页

目的探究siRNA沉默动力相关蛋白1(Drp1)后对鱼藤酮诱导的帕金森病模型细胞自噬以及细胞凋亡的影响。方法体外培养人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y,用1μm、5μm、10μm、20μm鱼藤酮进行处理24 h、48 h,MTT法检测细胞抑制情况。将细胞分为鱼... 目的探究siRNA沉默动力相关蛋白1(Drp1)后对鱼藤酮诱导的帕金森病模型细胞自噬以及细胞凋亡的影响。方法体外培养人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y,用1μm、5μm、10μm、20μm鱼藤酮进行处理24 h、48 h,MTT法检测细胞抑制情况。将细胞分为鱼藤酮最佳浓度处理组(20μm鱼藤酮处理,损伤组)、阴性转染组(损伤组基础上转染Drp1阴性序列)、Drp1siRNA处理组(损伤组基础上转染Drp1 siRNA)、Drp1抑制剂组(损伤组基础上添加Mdivi-1试剂)、自噬促进剂组(损伤组基础上添加雷帕霉素)。观察各组线粒体自噬情况、细胞线粒体功能相关蛋白(Mfn2、Drp1、NRF1)、自噬相关蛋白(Beclin-1、LC3、P62)、凋亡蛋白(Bcl-2、Bax)表达情况和细胞凋亡情况。结果与对照组相比,鱼藤酮处理组细胞抑制率均升高,随着浓度以及培养时间的增加,细胞抑制率逐渐增加(P<0.05)。损伤组、阴性转染组、自噬促进剂组LC3II定位在细胞线粒体,且细胞线粒体结构受损,外周出现自噬双层膜。与Drp1 siRNA转染组、Drp1抑制剂组相比,损伤组、阴性转染组、自噬促进剂组Drp1、LC3II、Beclin-1、Bax蛋白表达和细胞凋亡率升高,Mfn2、NRF1、P62、Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05)。结论 Drp1参与鱼藤酮诱导帕金森病细胞线粒体自噬,沉默Drp1后可降低鱼藤酮诱导帕金森病细胞线粒体自噬以及细胞凋亡,具有保护作用。 展开更多

关键词 帕金森病模型细胞 动力相关蛋白1 鱼藤酮 自噬 凋亡 sirna沉默技术

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干预GPR1通路对实验性小鼠脂肪累积的影响 被引量：5

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作者 田小飞 马玮娟 +3 位作者 方光光 肖天霞 陈杰 张键 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2015年第5期457-467,共11页

一直以来,肥胖是令人担忧和烦恼的健康问题,可导致包括2型糖尿病在内的代谢综合征发生.与肥胖相关疾病的发病机制是多因子影响的结果,但是,越来越多的证据表明,脂肪组织分泌的细胞因子(脂联素、瘦素、TNF-α等)的改变,以及局部的炎症反... 一直以来,肥胖是令人担忧和烦恼的健康问题,可导致包括2型糖尿病在内的代谢综合征发生.与肥胖相关疾病的发病机制是多因子影响的结果,但是,越来越多的证据表明,脂肪组织分泌的细胞因子(脂联素、瘦素、TNF-α等)的改变,以及局部的炎症反应对于这些疾病的发生具有重要作用.Chemerin(也被称为他扎罗汀诱导基因2或者视黄酸受体反应子2),是近年来发现的一种脂肪细胞因子,是G蛋白偶联受体1(GPR1)的配体,在调节代谢、先天免疫等方面具有重要的作用.为了研究Chemerin及其受体GPR1对小鼠脂肪累积的影响,本课题组通过高脂饲料喂养,成功建立小鼠肥胖模型,利用si RNA干扰技术沉默小鼠和分化前3T3-L1细胞中Chemerin或GPR1基因的表达发现:a.Chemerin及其受体GPR1在高脂饲料喂养小鼠的腹股沟脂肪以及肩胛下脂肪中的表达高于正常饲料组;b.沉默C57BL/6小鼠体内Chemerin或GPR1基因的表达后,肝脏以及腹股沟脂肪组织中脂质的累积受到抑制;c.3T3-L1细胞在体外分化成熟过程中,Chemerin和GPR1也呈高表达的趋势,沉默分化前3T3-L1细胞中Chemerin或GPR1基因的表达后,3T3-L1细胞向脂肪细胞的分化受到影响,降低了脂肪细胞中脂质的累积以及与脂质代谢相关基因的表达,改变了成熟脂肪细胞中新陈代谢功能.这些结果提示,Chemerin及其受体GPR1可能在小鼠脂肪累积中具有调控作用.综上所述,Chemerin/GPR1可能是一种调节脂肪组织中脂质累积的潜在信号通路,为肥胖症等代谢紊乱疾病的治疗提供了可能的作用靶点. 展开更多

关键词 脂肪细胞 CHEMERIN GPR1 sirna干扰技术

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下调上皮内膜蛋白1抑制胶质母细胞瘤恶性生物学行为的实验研究

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作者 王君祥 龚铭杰 +1 位作者 孙成法 邵琦 《中国医药科学》 2024年第13期12-15,共4页

目的研究下调上皮内膜蛋白1(EMP1)对胶质母细胞瘤U251与U87细胞系增殖、侵袭、迁移、凋亡及U87细胞系荷瘤小鼠肿瘤体积及免疫组化指标的影响。方法采用siRNA干扰技术下调胶质母细胞瘤细胞系U87与U251中EMP1的表达。RT-qPCR和Western blo... 目的研究下调上皮内膜蛋白1(EMP1)对胶质母细胞瘤U251与U87细胞系增殖、侵袭、迁移、凋亡及U87细胞系荷瘤小鼠肿瘤体积及免疫组化指标的影响。方法采用siRNA干扰技术下调胶质母细胞瘤细胞系U87与U251中EMP1的表达。RT-qPCR和Western blot检测EMP1mRNA和蛋白的表达;CCK8和Transwell实验检测EMP1下调后肿瘤细胞增殖迁移及侵袭能力;流式细胞术检测EMP1下调后肿瘤细胞凋亡表达水平;构建U87细胞系裸鼠荷瘤模型,免疫组化法检测Ki-67和MMP2的表达。结果RT-qPCR和Western blot结果显示siRNA-EMP1导致EMP1的表达降低(P<0.05),CCK8和Transewll实验显示下调EMP1后肿瘤细胞的增殖、迁移及侵袭能力被显著抑制(P<0.05);流式细胞术结果显示下调EMP1后肿瘤细胞的凋亡能力明显增强(P<0.05);U87细胞系裸鼠荷瘤模型中下调EMP1后肿瘤细胞生长延缓,Ki-67及MMP2的表达降低。结论EMP1的表达下调可以抑制胶质母细胞瘤的增殖、迁移及侵袭,促进凋亡,延缓荷瘤小鼠肿瘤的生长与侵袭,从而抑制胶质母细胞瘤的恶性生物学行为。 展开更多

关键词 上皮内膜蛋白1 胶质母细胞瘤 sirna干扰技术 恶性生物学行为

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CCR4表达与胆囊癌细胞GBC-SD侵袭和转移的关系 被引量：3

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作者 孙登群 龚仁华 +4 位作者 孙艳军 钟兴国 蔡军 何新苗 刘学停 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期632-635,639,共5页

目的探讨趋化因子CCR4对人胆囊癌细胞GBC-SD增殖、周期、侵袭和迁移运动能力的影响。方法应用Western blot法检测人不同胆囊癌细胞株中CCR4的表达水平;慢病毒感染胆囊癌细胞GBC-SD;siRNA-CCR4沉默CCR4基因;Western blot法鉴定干扰效果... 目的探讨趋化因子CCR4对人胆囊癌细胞GBC-SD增殖、周期、侵袭和迁移运动能力的影响。方法应用Western blot法检测人不同胆囊癌细胞株中CCR4的表达水平;慢病毒感染胆囊癌细胞GBC-SD;siRNA-CCR4沉默CCR4基因;Western blot法鉴定干扰效果。胆囊癌细胞GBC-SD分为三组:GBC-SD、GBC-SD/CCR4-RNAi和GBC-SD/control细胞,CCR4配体CCL17对这三组细胞进行作用。采用CCK8法检测三组细胞的增殖能力;流式细胞仪检测细胞周期;Transwell小室运动侵袭试验检测细胞迁移和侵袭能力;Western blot法检测CCR4基因沉默后,对其相应配体CCL17和CCL22蛋白表达的影响。结果沉默CCR4基因,对胆囊癌细胞GBC-SD的细胞周期及增殖均无影响,但能显著抑制GBC-SD细胞的侵袭及运动迁移能力,CCR4基因的沉默对肿瘤细胞CCL17和CCL22基因的表达无影响。结论胆囊癌细胞GBC-SD表达趋化因子受体CCR4,CCR4可以促进胆囊癌细胞GBC-SD的侵袭和转移。 展开更多

关键词 胆囊肿瘤 侵袭性 关联性 CCR4 sirna干扰技术

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Sema4D介导的IRS-1信号通路在抑制成骨细胞分化中的作用机制研究 被引量：2

9

作者 张韬 翁艳 +3 位作者 陈冬冬 周燕芸 肖莉莉 张怡元 《福建医药杂志》 CAS 2016年第6期54-58,共5页

目的通过siRNA干扰技术沉默轴突导向因子4D(Sema4D)基因,探讨Sema4D基因对成骨细胞分化的影响。方法采用RT-PCR、细胞免疫荧光法和Western blot测定Sema4D基因表达情况,分析沉默效率;采用ALP染色、VonKossa染色及ALP活性观测成骨细胞分... 目的通过siRNA干扰技术沉默轴突导向因子4D(Sema4D)基因,探讨Sema4D基因对成骨细胞分化的影响。方法采用RT-PCR、细胞免疫荧光法和Western blot测定Sema4D基因表达情况,分析沉默效率;采用ALP染色、VonKossa染色及ALP活性观测成骨细胞分化。结果 siRNA干扰技术下调了Sema4D的表达,成功构建了Sema4D基因沉默体系;Sema4DsiRNA中成骨细胞的分化明显增强,出现了一定程度的钙化。结论沉默Sema4D基因与成骨细胞的分化有关。 展开更多

关键词 sirna干扰技术 Sema4D基因 成骨细胞分化

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SIRT2抑制对MPP^(+)诱导的帕金森病细胞模型凋亡和线粒体动态平衡的影响 被引量：2

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作者 段阳阳 张凤亭 +3 位作者 成江 石瑾 杨娟 李海宁 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第4期1-8,共8页

探究siRNA敲减沉默信息调节因子2(SIRT2)对1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP^(+))诱导的帕金森病细胞模型细胞损伤的影响和机制。CCK-8法检测不同浓度MPP+处理对体外培养小鼠海马神经元HT-22细胞生存率的影响。将细胞分为对照组、MPP^(+)最佳... 探究siRNA敲减沉默信息调节因子2(SIRT2)对1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP^(+))诱导的帕金森病细胞模型细胞损伤的影响和机制。CCK-8法检测不同浓度MPP+处理对体外培养小鼠海马神经元HT-22细胞生存率的影响。将细胞分为对照组、MPP^(+)最佳浓度处理组(1mmol/LMPP+处理组)、阴性转染组(对照组基础上转染SIRT2阴性序列)、SIRT2siRNA处理组(损伤组基础上转染SIRT2siRNA)。观察各组细胞凋亡情况,检测凋亡相关蛋白(Bcl-2、Bax、Caspase-9)、线粒体分裂及融合相关蛋白(Drp1、Fis1、OPA1、Mfn1、Mfn2)。与对照组相比,MPP+处理组细胞抑制率均升高,细胞抑制率随MPP+浓度增加而逐渐增加(P<0.05)。与SIRT2siRNA转染组相比,损伤组Bax、Caspase-9、Drp1、Fis1蛋白表达和细胞凋亡率升高,Bcl-2、Mfn1、Mfn2蛋白表达降低(P<0.05)。SIRT2在MPP+诱导帕金森病细胞模型中表达升高,抑制SIRT2可减轻MPP+诱导帕金森病细胞模型中细胞凋亡并促进线粒体融合,从而对神经元具有一定的保护作用。 展开更多

关键词 帕金森病模型细胞 沉默信息调节因子2 凋亡 线粒体分裂及融合 sirna沉默技术

原文传递

siRNA干扰技术对沉默CKIP-1基因大鼠进展性牙周炎影响的研究 被引量：1

11

作者 王阳 王穆洋 +3 位作者 崔怡 费栋栋 王勤涛 林颖 《牙体牙髓牙周病学杂志》 CAS 2017年第10期563-568,共6页

目的:通过siRNA干扰技术沉默络蛋白激酶2-作用蛋白1(CKIP-1)基因,以观察其对大鼠牙周炎发生发展的影响。方法:取SPF级SD大鼠9只,并将其随机分为空白对照组(BC组)、阴性对照组(NC组)、阳性对照组(PC组)(n=3)。其中NC、PC两组均采用双侧... 目的:通过siRNA干扰技术沉默络蛋白激酶2-作用蛋白1(CKIP-1)基因,以观察其对大鼠牙周炎发生发展的影响。方法:取SPF级SD大鼠9只,并将其随机分为空白对照组(BC组)、阴性对照组(NC组)、阳性对照组(PC组)(n=3)。其中NC、PC两组均采用双侧上颌第二磨牙细线结扎和注射LPS-PG的方法建立牙周炎模型,并在造模期间对PC组注射CKIP-1 siRNA干扰;NC组注射生理盐水作为对照。造模加干预4周后,分别对所有大鼠的双侧上颌骨进行Micro-CT扫描,分析其骨缺损高度和根分叉处牙槽骨体积的变化;然后再取其双侧上颌骨标本并制作近远中向牙周牙体组织联合切片,常规HE染色观察其牙槽骨破坏及牙周组织炎症反应情况。结果:Micro-CT扫描显示:NC组的骨缺损程度大于PC组,其牙槽骨吸收高度(mm)分别为0.9606±0.1112、0.6759±0.0514,根分叉处牙槽骨体积(%)分别为0.5958±0.014、0.7509±0.0355(P<0.05)。组织学观察显示:相比于PC组,NC组大鼠的牙槽骨吸收更明显,且牙周膜纤维排序紊乱。结论:通过siRNA干扰技术沉默CKIP-1基因后,可减少大鼠牙周炎模型的骨缺损破坏程度及炎症反应。 展开更多

关键词 sirna干扰技术 CKIP-1基因 牙周炎 大鼠

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趋化因子受体4在肾透明细胞癌进展中的机制研究 被引量：1

12

作者 李晓东 王文光 +2 位作者 闫燊燊 刘强 王玉杰 《新疆医科大学学报》 CAS 2020年第12期1525-1530,共6页

目的研究趋化因子受体4(CCR4)在肾透明细胞癌(ccRCC)组织中的表达与临床预后关系,及对ccRCC细胞株786-0增殖、侵袭和迁移能力的影响。方法选择2013年3月—2018年9月新疆医科大学第一附属医院病理诊断为ccRCC患者(63例)的肾脏组织标本为... 目的研究趋化因子受体4(CCR4)在肾透明细胞癌(ccRCC)组织中的表达与临床预后关系,及对ccRCC细胞株786-0增殖、侵袭和迁移能力的影响。方法选择2013年3月—2018年9月新疆医科大学第一附属医院病理诊断为ccRCC患者(63例)的肾脏组织标本为研究组,14例正常肾脏组织标本为对照组,采用免疫组织化学方法检测两组CCR4的表达,分析CCR4阳性表达与阴性表达患者预后生存(OS)。利用Western blot技术检测不同ccRCC细胞株CCR4表达情况,CCR4干扰慢病毒沉默CCR4基因的表达后,将ccRCC细胞株786-0分为3组:786-0、786-0/siRNA、786-0/control细胞,利用MTT法检测3组细胞增殖能力,细胞划痕实验和Transwell侵袭实验检测细胞迁移和侵袭能力,并进行比较分析。结果研究组CCR4阳性表达率为52.38%(33/63),对照组CCR4阳性表达率为21.43%(3/14),差异有统计学意义(χ^2=4.408,P=0.036)。Kaplan-Meier生存曲线分析显示CCR4是ccRCC患者OS的影响因素(χ^2=9.319,P=0.002)。ccRCC细胞株786-0沉默CCR4基因后,对ccRCC细胞增殖无影响,但使细胞的迁移侵袭能力减弱。结论CCR4在ccRCC组织中呈现高表达,且与ccRCC患者临床预后密切相关,其可能通过影响肿瘤细胞的侵袭转移能力,进而影响肿瘤的发生与进展,CCR4可能成为ccRCC的潜在治疗靶点。 展开更多

关键词 肾透明细胞癌 侵袭性 CCR4 sirna干扰技术

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