目的构建重组人骨形成蛋白4(human bone morphogenetic protein 4,hBMP-4)基因腺相关病毒载体。方法根据hBMP-4的基因序列设计引物,上游引入EcoR位点,下游引入Sal位点,以EX-A0242-M01-hBMP-4为模板扩增目的基因。将hBMP-4基因克隆入pUC1...目的构建重组人骨形成蛋白4(human bone morphogenetic protein 4,hBMP-4)基因腺相关病毒载体。方法根据hBMP-4的基因序列设计引物,上游引入EcoR位点,下游引入Sal位点,以EX-A0242-M01-hBMP-4为模板扩增目的基因。将hBMP-4基因克隆入pUC18载体中,获得重组质粒pUC18-hBMP-4。然后用EcoR与Sal酶切pUC18-hBMP-4及质粒pSNAV,回收酶切片段,T4DNA连接酶16℃过夜,转化大肠杆菌DH5α感受肽细胞,筛选阳性克隆获得pSNAV-hBMP-4,EcoR/Sal双酶切鉴定,并行全基因测序。转染BHK21细胞,G418筛选培养,获得抗药克隆细胞株。HSV1-rc/△UL2感染,包装此细胞株并收获病毒载体AAV-hBMP-4。行DNA点杂交法测定病毒滴度,SDS-PAGE分析判断病毒纯度。结果PCR电泳及酶切鉴定表明,pSNAV-hBMP-4重组成功,基因测序显示装入pSNAV质粒中的hBMP-4基因正确;AAV-hBMP-4病毒的大致滴度为1.5×1012μg/ml,分泌蛋白浓度为0.124mg/ml,病毒载体纯度在95%以上。结论实验获得的病毒载体滴度高、感染性好,可以满足骨组织工程的需要。展开更多
目的探讨重组人骨形态发生蛋白2(recombinant human bone morphogentic protein-2,rhBMP-2)联合自体骨行椎间植骨融合治疗胸腰椎结核的临床疗效。方法选择2017年1月~2019年1月本院收治的74例胸腰椎结核患者,均采用病灶清除、后路经椎弓...目的探讨重组人骨形态发生蛋白2(recombinant human bone morphogentic protein-2,rhBMP-2)联合自体骨行椎间植骨融合治疗胸腰椎结核的临床疗效。方法选择2017年1月~2019年1月本院收治的74例胸腰椎结核患者,均采用病灶清除、后路经椎弓根螺钉内固定、植骨融合治疗;根据不同植骨融合方式分组:对照组47例患者仅采用自体骨植骨融合,观察组47例采用rhBMP-2联合自体骨行椎间植骨融合。随访超过1年,比较两组患者的手术指标和手术疗效。结果两组术中出血量、手术时间、住院时间、并发症发生率差异无统计学意义(P>0.05)。两组治疗后ASIA分级均显著改善,但术后6个月、1年的组间差异无统计学意义(P>0.05)。两组治疗后Cobb角、VAS评分以及红细胞沉降率均显著低于术前,且观察组术后6个月VAS评分低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);两组术后1年组间各指标差异均无统计学意义(P>0.05)。观察组术后6个月的植骨融合率显著高于对照组(P<0.05),术后1年时差异无统计学意义(P>0.05)。结论rhBMP-2联合自体骨行椎间植骨融合治疗胸腰椎结核,能够促进植骨融合,具有良好的疗效与安全性。展开更多
背景：已知骨形态发生蛋白2（bone morphogenetic protein2,BMP2）能促进骨愈合,但能否加速股骨头坏死打压植骨术的修复尚不知。目的：回顾性对照分析加入和未加入BMP2的打压植骨术治疗股骨头坏死（osteonecrosis of the femoral head,O...背景：已知骨形态发生蛋白2（bone morphogenetic protein2,BMP2）能促进骨愈合,但能否加速股骨头坏死打压植骨术的修复尚不知。目的：回顾性对照分析加入和未加入BMP2的打压植骨术治疗股骨头坏死（osteonecrosis of the femoral head,ONFH）的疗效。方法：42例（72髋）非创伤性ONFH手术患者获得随访,男19例,女23例;手术时年龄22~54岁,平均30.9岁。手术方法为经髋关节前路,股骨头颈交界处开窗,坏死灶清除,人工骨打压植骨。第一组每例加入4mgrhBMP2,第二组未加。患髋按国际骨循环学会（Association Research Circulation Osseous,ARCO）分期,按中日友好医院（China-Japan Friend-ship Hospital,CJFH）分型。临床疗效按Harris髋关节功能评分（Harris hip score,HHS）评定,影像学按股骨头是否塌陷及病灶修复情况评定。结果：随访5~7.8年（平均6.1年）。优36髋,良12髋,尚可7髋。股骨头保存率76.4%,第一组为81.8%,第二组为71.8%（P=0.459）。ARCOⅡ期为90.3%,Ⅲa期为34.6%（P=0.0285）;CJFH-C型及L1型为95.3%,L3型为29.6%（P=0.050）。结论：经股骨头颈开窗病灶清除,打压植骨术在选择合适的非创伤ONFH患者（ARCOⅡb,c期及CJFHC型和L1型）可获得优良的中期疗效。加入rhBMP2可提高手术疗效和骨修复质量。展开更多
文摘目的构建重组人骨形成蛋白4(human bone morphogenetic protein 4,hBMP-4)基因腺相关病毒载体。方法根据hBMP-4的基因序列设计引物,上游引入EcoR位点,下游引入Sal位点,以EX-A0242-M01-hBMP-4为模板扩增目的基因。将hBMP-4基因克隆入pUC18载体中,获得重组质粒pUC18-hBMP-4。然后用EcoR与Sal酶切pUC18-hBMP-4及质粒pSNAV,回收酶切片段,T4DNA连接酶16℃过夜,转化大肠杆菌DH5α感受肽细胞,筛选阳性克隆获得pSNAV-hBMP-4,EcoR/Sal双酶切鉴定,并行全基因测序。转染BHK21细胞,G418筛选培养,获得抗药克隆细胞株。HSV1-rc/△UL2感染,包装此细胞株并收获病毒载体AAV-hBMP-4。行DNA点杂交法测定病毒滴度,SDS-PAGE分析判断病毒纯度。结果PCR电泳及酶切鉴定表明,pSNAV-hBMP-4重组成功,基因测序显示装入pSNAV质粒中的hBMP-4基因正确;AAV-hBMP-4病毒的大致滴度为1.5×1012μg/ml,分泌蛋白浓度为0.124mg/ml,病毒载体纯度在95%以上。结论实验获得的病毒载体滴度高、感染性好,可以满足骨组织工程的需要。
文摘目的探讨重组人骨形态发生蛋白2(recombinant human bone morphogentic protein-2,rhBMP-2)联合自体骨行椎间植骨融合治疗胸腰椎结核的临床疗效。方法选择2017年1月~2019年1月本院收治的74例胸腰椎结核患者,均采用病灶清除、后路经椎弓根螺钉内固定、植骨融合治疗;根据不同植骨融合方式分组:对照组47例患者仅采用自体骨植骨融合,观察组47例采用rhBMP-2联合自体骨行椎间植骨融合。随访超过1年,比较两组患者的手术指标和手术疗效。结果两组术中出血量、手术时间、住院时间、并发症发生率差异无统计学意义(P>0.05)。两组治疗后ASIA分级均显著改善,但术后6个月、1年的组间差异无统计学意义(P>0.05)。两组治疗后Cobb角、VAS评分以及红细胞沉降率均显著低于术前,且观察组术后6个月VAS评分低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);两组术后1年组间各指标差异均无统计学意义(P>0.05)。观察组术后6个月的植骨融合率显著高于对照组(P<0.05),术后1年时差异无统计学意义(P>0.05)。结论rhBMP-2联合自体骨行椎间植骨融合治疗胸腰椎结核,能够促进植骨融合,具有良好的疗效与安全性。
文摘背景：已知骨形态发生蛋白2（bone morphogenetic protein2,BMP2）能促进骨愈合,但能否加速股骨头坏死打压植骨术的修复尚不知。目的：回顾性对照分析加入和未加入BMP2的打压植骨术治疗股骨头坏死（osteonecrosis of the femoral head,ONFH）的疗效。方法：42例（72髋）非创伤性ONFH手术患者获得随访,男19例,女23例;手术时年龄22~54岁,平均30.9岁。手术方法为经髋关节前路,股骨头颈交界处开窗,坏死灶清除,人工骨打压植骨。第一组每例加入4mgrhBMP2,第二组未加。患髋按国际骨循环学会（Association Research Circulation Osseous,ARCO）分期,按中日友好医院（China-Japan Friend-ship Hospital,CJFH）分型。临床疗效按Harris髋关节功能评分（Harris hip score,HHS）评定,影像学按股骨头是否塌陷及病灶修复情况评定。结果：随访5~7.8年（平均6.1年）。优36髋,良12髋,尚可7髋。股骨头保存率76.4%,第一组为81.8%,第二组为71.8%（P=0.459）。ARCOⅡ期为90.3%,Ⅲa期为34.6%（P=0.0285）;CJFH-C型及L1型为95.3%,L3型为29.6%（P=0.050）。结论：经股骨头颈开窗病灶清除,打压植骨术在选择合适的非创伤ONFH患者（ARCOⅡb,c期及CJFHC型和L1型）可获得优良的中期疗效。加入rhBMP2可提高手术疗效和骨修复质量。
