目的构建重组人骨形成蛋白4(human bone morphogenetic protein 4,hBMP-4)基因腺相关病毒载体。方法根据hBMP-4的基因序列设计引物,上游引入EcoR位点,下游引入Sal位点,以EX-A0242-M01-hBMP-4为模板扩增目的基因。将hBMP-4基因克隆入pUC1...目的构建重组人骨形成蛋白4(human bone morphogenetic protein 4,hBMP-4)基因腺相关病毒载体。方法根据hBMP-4的基因序列设计引物,上游引入EcoR位点,下游引入Sal位点,以EX-A0242-M01-hBMP-4为模板扩增目的基因。将hBMP-4基因克隆入pUC18载体中,获得重组质粒pUC18-hBMP-4。然后用EcoR与Sal酶切pUC18-hBMP-4及质粒pSNAV,回收酶切片段,T4DNA连接酶16℃过夜,转化大肠杆菌DH5α感受肽细胞,筛选阳性克隆获得pSNAV-hBMP-4,EcoR/Sal双酶切鉴定,并行全基因测序。转染BHK21细胞,G418筛选培养,获得抗药克隆细胞株。HSV1-rc/△UL2感染,包装此细胞株并收获病毒载体AAV-hBMP-4。行DNA点杂交法测定病毒滴度,SDS-PAGE分析判断病毒纯度。结果PCR电泳及酶切鉴定表明,pSNAV-hBMP-4重组成功,基因测序显示装入pSNAV质粒中的hBMP-4基因正确;AAV-hBMP-4病毒的大致滴度为1.5×1012μg/ml,分泌蛋白浓度为0.124mg/ml,病毒载体纯度在95%以上。结论实验获得的病毒载体滴度高、感染性好,可以满足骨组织工程的需要。展开更多
目的研究重组人骨形态发生蛋白-7(recombinant human bone morphogenetic proteins,rhBMP-7)对大鼠成骨细胞增殖和分化能力的影响。方法从SD大鼠取材进行原代培养,经碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)和矿化结节检测鉴定为成骨细胞...目的研究重组人骨形态发生蛋白-7(recombinant human bone morphogenetic proteins,rhBMP-7)对大鼠成骨细胞增殖和分化能力的影响。方法从SD大鼠取材进行原代培养,经碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)和矿化结节检测鉴定为成骨细胞后传代至第3代,接种至96孔培养板。分为A、B、C、D、E、F共6组,每组3个复孔,rhBMP-7浓度分别为0.000、0.500、1.000、5.000、10.000、50.000mg/L。应用四甲基偶氮唑盐(meth-yl thiazolyl tetrazolium,MTT)法及PNPP偶氮法,分析不同浓度rhBMP-7作用72h后对大鼠成骨细胞增殖和ALP活性的影响,应用单因素方差分析和LSD法统计数据。结果作用72h后,6种浓度rhBMP-7对大鼠成骨细胞ALP活性促进作用的差异有统计学意义(F=11.840,P=0.000),B组成骨细胞ALP活性高于A组,但差异无统计学意义(P=0.078),C、D、E、F组大鼠成骨细胞ALP活性均高于A组(P值均为0.000),rhBMP-7浓度为50.000mg/L时对ALP活性的影响最明显(P=0.000)。作用72h后6种浓度rhBMP-7对大鼠成骨细胞增殖影响的差异有统计学意义(F=2.726,P=0.026);rhBMP-7能促进大鼠成骨细胞的增殖和分化,同A组(rhBMP-7浓度为0.000mg/L)相比,当rhBMP-7浓度为50.000mg/L时并作用至第3天时,大鼠成骨细胞增殖最显著(P=0.000)。结论一定剂量的rhBMP-7明显促进了大鼠成骨细胞的增殖和分化。展开更多
目的探讨重组人骨形态发生蛋白2(recombinant human bone morphogentic protein-2,rhBMP-2)联合自体骨行椎间植骨融合治疗胸腰椎结核的临床疗效。方法选择2017年1月~2019年1月本院收治的74例胸腰椎结核患者,均采用病灶清除、后路经椎弓...目的探讨重组人骨形态发生蛋白2(recombinant human bone morphogentic protein-2,rhBMP-2)联合自体骨行椎间植骨融合治疗胸腰椎结核的临床疗效。方法选择2017年1月~2019年1月本院收治的74例胸腰椎结核患者,均采用病灶清除、后路经椎弓根螺钉内固定、植骨融合治疗;根据不同植骨融合方式分组:对照组47例患者仅采用自体骨植骨融合,观察组47例采用rhBMP-2联合自体骨行椎间植骨融合。随访超过1年,比较两组患者的手术指标和手术疗效。结果两组术中出血量、手术时间、住院时间、并发症发生率差异无统计学意义(P>0.05)。两组治疗后ASIA分级均显著改善,但术后6个月、1年的组间差异无统计学意义(P>0.05)。两组治疗后Cobb角、VAS评分以及红细胞沉降率均显著低于术前,且观察组术后6个月VAS评分低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);两组术后1年组间各指标差异均无统计学意义(P>0.05)。观察组术后6个月的植骨融合率显著高于对照组(P<0.05),术后1年时差异无统计学意义(P>0.05)。结论rhBMP-2联合自体骨行椎间植骨融合治疗胸腰椎结核,能够促进植骨融合,具有良好的疗效与安全性。展开更多
文摘目的构建重组人骨形成蛋白4(human bone morphogenetic protein 4,hBMP-4)基因腺相关病毒载体。方法根据hBMP-4的基因序列设计引物,上游引入EcoR位点,下游引入Sal位点,以EX-A0242-M01-hBMP-4为模板扩增目的基因。将hBMP-4基因克隆入pUC18载体中,获得重组质粒pUC18-hBMP-4。然后用EcoR与Sal酶切pUC18-hBMP-4及质粒pSNAV,回收酶切片段,T4DNA连接酶16℃过夜,转化大肠杆菌DH5α感受肽细胞,筛选阳性克隆获得pSNAV-hBMP-4,EcoR/Sal双酶切鉴定,并行全基因测序。转染BHK21细胞,G418筛选培养,获得抗药克隆细胞株。HSV1-rc/△UL2感染,包装此细胞株并收获病毒载体AAV-hBMP-4。行DNA点杂交法测定病毒滴度,SDS-PAGE分析判断病毒纯度。结果PCR电泳及酶切鉴定表明,pSNAV-hBMP-4重组成功,基因测序显示装入pSNAV质粒中的hBMP-4基因正确;AAV-hBMP-4病毒的大致滴度为1.5×1012μg/ml,分泌蛋白浓度为0.124mg/ml,病毒载体纯度在95%以上。结论实验获得的病毒载体滴度高、感染性好,可以满足骨组织工程的需要。
文摘目的研究重组人骨形态发生蛋白-7(recombinant human bone morphogenetic proteins,rhBMP-7)对大鼠成骨细胞增殖和分化能力的影响。方法从SD大鼠取材进行原代培养,经碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)和矿化结节检测鉴定为成骨细胞后传代至第3代,接种至96孔培养板。分为A、B、C、D、E、F共6组,每组3个复孔,rhBMP-7浓度分别为0.000、0.500、1.000、5.000、10.000、50.000mg/L。应用四甲基偶氮唑盐(meth-yl thiazolyl tetrazolium,MTT)法及PNPP偶氮法,分析不同浓度rhBMP-7作用72h后对大鼠成骨细胞增殖和ALP活性的影响,应用单因素方差分析和LSD法统计数据。结果作用72h后,6种浓度rhBMP-7对大鼠成骨细胞ALP活性促进作用的差异有统计学意义(F=11.840,P=0.000),B组成骨细胞ALP活性高于A组,但差异无统计学意义(P=0.078),C、D、E、F组大鼠成骨细胞ALP活性均高于A组(P值均为0.000),rhBMP-7浓度为50.000mg/L时对ALP活性的影响最明显(P=0.000)。作用72h后6种浓度rhBMP-7对大鼠成骨细胞增殖影响的差异有统计学意义(F=2.726,P=0.026);rhBMP-7能促进大鼠成骨细胞的增殖和分化,同A组(rhBMP-7浓度为0.000mg/L)相比,当rhBMP-7浓度为50.000mg/L时并作用至第3天时,大鼠成骨细胞增殖最显著(P=0.000)。结论一定剂量的rhBMP-7明显促进了大鼠成骨细胞的增殖和分化。
文摘目的探讨重组人骨形态发生蛋白2(recombinant human bone morphogentic protein-2,rhBMP-2)联合自体骨行椎间植骨融合治疗胸腰椎结核的临床疗效。方法选择2017年1月~2019年1月本院收治的74例胸腰椎结核患者,均采用病灶清除、后路经椎弓根螺钉内固定、植骨融合治疗;根据不同植骨融合方式分组:对照组47例患者仅采用自体骨植骨融合,观察组47例采用rhBMP-2联合自体骨行椎间植骨融合。随访超过1年,比较两组患者的手术指标和手术疗效。结果两组术中出血量、手术时间、住院时间、并发症发生率差异无统计学意义(P>0.05)。两组治疗后ASIA分级均显著改善,但术后6个月、1年的组间差异无统计学意义(P>0.05)。两组治疗后Cobb角、VAS评分以及红细胞沉降率均显著低于术前,且观察组术后6个月VAS评分低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);两组术后1年组间各指标差异均无统计学意义(P>0.05)。观察组术后6个月的植骨融合率显著高于对照组(P<0.05),术后1年时差异无统计学意义(P>0.05)。结论rhBMP-2联合自体骨行椎间植骨融合治疗胸腰椎结核,能够促进植骨融合,具有良好的疗效与安全性。
