环介导等温扩增技术的研究进展 被引量：19

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作者 张曼 刘宝林 高志贤 《食品安全质量检测学报》 CAS 2019年第18期6124-6130,共7页

环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术是一种新型的恒温核酸扩增技术。与传统的PCR技术相比,该技术能在恒定温度65℃条件下,利用4条特异性设计的引物,2条内引物(forward inner primer,FIP)、(backward inne... 环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术是一种新型的恒温核酸扩增技术。与传统的PCR技术相比,该技术能在恒定温度65℃条件下,利用4条特异性设计的引物,2条内引物(forward inner primer,FIP)、(backward inner primer,BIP)和2条外引物F3 primer、B3 primer和一种具有链置换特性的Bst.DNA聚合酶。在30~60 min内对目的DNA序列进行快速、高效扩增,其扩增产物为大量的双链DNA。通过对产物的处理,结合双链DNA特点,根据目标DNA的含量直接或者间接得到待测物含量,从而达到一个较高的灵敏度检测。利用该技术实现了在多种领域,包括食品致病菌检测,食品微生物含量检测以及生物医学等的广泛应用。本文主要对LAMP的技术原理、产物检测方法、应用领域、与其它方法比较的优缺点以及发展现状进行相关的论述。 展开更多

关键词 环介导等温扩增技术 原理与应用 发展现状

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基于环介导等温扩增微流控芯片技术快速检测蚊媒携带登革病毒方法的建立

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作者 姜宁 白洁 +8 位作者 李平 单文琪 周秋明 董昊炜 袁浩 陶峰 李翔宇 马雅军 彭恒 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CSCD 北大核心 2024年第2期234-241,共8页

目的建立一种基于环介导等温扩增(LAMP)微流控芯片技术的快速检测蚊媒携带登革病毒的方法。方法根据登革病毒衣壳蛋白(C)、前膜蛋白(prM)和非结构蛋白2A(NS2A)基因片段构建pUC-GWAmp-CprM和pUC-GW-Amp-NS2A质粒,设计多组环介导等温扩增... 目的建立一种基于环介导等温扩增(LAMP)微流控芯片技术的快速检测蚊媒携带登革病毒的方法。方法根据登革病毒衣壳蛋白(C)、前膜蛋白(prM)和非结构蛋白2A(NS2A)基因片段构建pUC-GWAmp-CprM和pUC-GW-Amp-NS2A质粒,设计多组环介导等温扩增特异性引物组。制备LAMP微流控芯片,以靶基因质粒、登革病毒核酸为模板进行检测,根据起峰时间、相对荧光单位、假阳性、重复实验稳定性、检测灵敏度等指标筛选最优引物组。用最优引物组分别检测埃及伊蚊、白纹伊蚊等主要登革热传播媒介和常见的致倦库蚊、中华按蚊、摇蚊的cDNA,并与寨卡病毒、流行性乙型脑炎病毒、恶性疟原虫、黄热病毒等常见蚊媒传播病原体进行交叉检测,评价LAMP法的特异性。评价LAMP法检测CprM和NS2A靶基因质粒的灵敏度,分别与PCR、实时荧光定量PCR(qPCR)检测结果进行比较。用登革病毒RNA与传播媒介埃及伊蚊、白纹伊蚊RNA分别以1∶10、1∶100和1∶1000混合,模拟媒介携带登革病毒的样品进行LAMP微流控芯片检测。对采集自宁德市三都岛、西安市、上海朱家角、长兴岛和五角场等5地的白纹伊蚊的cDNA进行检测。结果引物组筛选结果显示,CprMG2和NS2AG1引物组起峰时间早,相对荧光单位高,灵敏度最高,为最优引物组。CprMG2引物组可检测浓度低至10-6 ng/μl的pUC-GW-Amp-CprM质粒,最低检测限为1.3×10^(3)拷贝;NS2AG1引物组可检测浓度低至10-9 ng/μl的pUC-GW-Amp-NS2A质粒,最低检测限为1拷贝。最优引物组CprMG2、NS2AG1对埃及伊蚊、白纹伊蚊、中华按蚊、致倦库蚊、摇蚊等蚊虫cDNA无非特异性扩增,与寨卡病毒、流行性乙型脑炎病毒、恶性疟原虫、黄热病毒核酸无交叉反应。LAMP微流控芯片检测CprM靶基因的最低检测限为1.3×10^(3)拷贝,较PCR检测的最低检测限(1.3×10^(4)拷贝)高1个数量级;LAMP微流控芯片检测CprM和NS2A靶基因的最低检测� 展开更多

关键词 登革病毒 蚊虫 环介导等温扩增 微流控芯片 现场检测技术

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肺结核临床诊断中应用LAMP技术的价值分析

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作者 宋婷阁 杨鹏 +5 位作者 胡菊 张彬 槐聪颖 闫瑾 张沪 郝杰 《现代生物医学进展》 CAS 2024年第13期2527-2531,共5页

目的:探讨环介导等温扩增技术(LAMP)在肺结核诊断中的潜在应用。方法:回顾性分析305例2020年6月~2023年6月保定市第二中心医院收治的疑似肺结核患者的临床资料,以病理结果为依据,纳入非肺结核病组(123例)和肺结核组(182例)。分析不同性... 目的:探讨环介导等温扩增技术(LAMP)在肺结核诊断中的潜在应用。方法:回顾性分析305例2020年6月~2023年6月保定市第二中心医院收治的疑似肺结核患者的临床资料,以病理结果为依据,纳入非肺结核病组(123例)和肺结核组(182例)。分析不同性状痰标本中,应用改良罗氏培养法、涂片抗酸染色法、LAMP检测结核分枝杆菌的阳性情况、诊断结果以及价值。结果:较涂片抗酸染色法、改良罗氏培养法,LAMP各种样本性状的检查阳性率均相对较高,其中相较于其他样本性状,各项检查对样本性状为干酪痰的检查阳性率均相对较高。涂片抗酸染色法检查结果显示,阳性80例,阴性119例,误诊4例,漏诊102例;改良罗氏培养法检查结果显示,阳性104例,阴性120例,误诊3例,漏诊78例;LAMP检查结果显示,阳性135例,阴性121例,误诊2例,漏诊47例。与涂片抗酸染色法、改良罗氏培养法检查进行比较,LAMP检查诊断结核分枝杆菌的敏感度、阴性预测值、准确度及曲线下面积(AUC)值均相对较高,其中涂片抗酸染色法敏感度、准确度及AUC值均低于改良罗氏培养法(P<0.05)。结论:LAMP技术有利于鉴别各种性状样本的结核分枝杆菌,并且对痰液样本中的结核分支杆菌具有较高的检测诊断敏感度、阴性预测值和准确度,对肺结核的诊断价值更高。 展开更多

关键词 环介导等温扩增技术 肺结核 改良罗氏培养法 涂片抗酸染色法 诊断价值

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环介导等温扩增技术检测呼吸道样本中肺炎克雷伯菌 被引量：5

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作者 司玉莹 赵望 +6 位作者 叶蓓 成宇 张雯雁 叶杨芹 王玉超 王岚 范列英 《临床检验杂志》 CAS 2020年第1期56-59,65,共5页

目的:建立环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)检测呼吸道感染患者痰液中肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae,Kpn)的方法并进行初步应用。方法:基于Kpn phoE基因设计4条特异性引物,对反应条件中的Mg^2+... 目的:建立环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)检测呼吸道感染患者痰液中肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae,Kpn)的方法并进行初步应用。方法:基于Kpn phoE基因设计4条特异性引物,对反应条件中的Mg^2+和甜菜碱浓度进行优化,建立检测Kpn LAMP方法并进行特异性和灵敏度试验;收集308例呼吸道感染患者痰液样本,进行细菌培养法、LAMP法、DNA测序技术检测,评估LAMP检测体系。结果:8 mmol/L、0.4 mmol/L确定为Mg^2+和甜菜碱的最佳扩增浓度;该体系特异性强,与其他菌株无交叉反应,灵敏度为104 CFU/mL;临床样本中Kpn的LAMP检出率(53.89%)高于培养法(42.20%),差异有统计学意义(χ^2=161.65,P<0.05);LAMP法与细菌培养法在Kpn阳性样本、无细菌生长样本、非Kpn其他细菌阳性样本中的一致率分别为96.15%、100%、65.25%,46例不一致样本经DNA测序验证,LAMP法与测序符合率为86.95%(40/46);LAMP法和DNA测序法对131例样本同时进行检测,经Kappa检验两者具有极好的一致性(Kappa系数=0.817)。结论:与细菌培养法相比,LAMP法具有准确性高、灵敏度高、特异性强、反应省时等优势,可以作为肺炎克雷伯菌的快速检测方法。 展开更多

关键词 环介导等温扩增技术 呼吸道感染 肺炎克雷伯菌 细菌培养法 DNA测序技术

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基于环介导等温扩增的微流控技术在病原体检测中的发展与应用 被引量：3

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作者 欧红玲 王绮远 +5 位作者 王岩 张巧云 马盈盈 白静 康少平 王欣茹 《医学综述》 CAS 2022年第3期591-595,共5页

微流控技术将样本制备、核酸提取纯化和核酸检测等操作步骤集成到微型芯片,经过自动化检测得出实验结果。近年来,特异性强、灵敏度高、检测耗时短的环介导等温扩增技术与微流控技术的结合优化了耗时费力的病原体检测,具有操作简单、对... 微流控技术将样本制备、核酸提取纯化和核酸检测等操作步骤集成到微型芯片,经过自动化检测得出实验结果。近年来,特异性强、灵敏度高、检测耗时短的环介导等温扩增技术与微流控技术的结合优化了耗时费力的病原体检测,具有操作简单、对设备和人员要求不高、可实现快速检测自动化等特点。但目前建立的病原体微流控检测体系在兼容样本的核酸提取和多重扩增条件的一体化方面尚存在不足,未来还需要开展更多的研究,解决核酸检测过程中的各项技术难点,建立反应基质载体更好、检测体系更优、用时更短、操作简便且准确性更高的方法,以提高病原体快速检测的效率。 展开更多

关键词 病原体检测 环介导等温扩增 微流控技术

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饲料中牛、羊源性成分现场可视化检测方法的建立 被引量：4

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作者 朱珠 兰青阔 +3 位作者 赵新 陈锐 郭永泽 王永 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第7期95-98,共4页

根据牛、羊线粒体中物种特异性序列设计引物,应用可视化环状等温扩增技术(visual loop-mediate isothermal amplification,vLAMP)对牛、羊源性成分进行快速扩增及可视化判断,同时建立牛、羊源成分人工污染的饲料模型,考察vLAMP检测方法... 根据牛、羊线粒体中物种特异性序列设计引物,应用可视化环状等温扩增技术(visual loop-mediate isothermal amplification,vLAMP)对牛、羊源性成分进行快速扩增及可视化判断,同时建立牛、羊源成分人工污染的饲料模型,考察vLAMP检测方法的灵敏度。结果表明,牛源性引物和羊源性引物仅分别对牛、羊源性成分产生特异性扩增,灵敏度高达0.001%。本试验所建立的牛、羊源性成分现场可视化筛查方法具有较高的特异性与灵敏度,操作简单、快速,可用于饲料中牛、羊源性成分污染和食品掺伪的现场可视化检测。 展开更多

关键词 牛、羊源性成分 环状等温扩增技术 现场可视化检测

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环介导等温扩增技术检测食源性致病菌的研究进展 被引量：4

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作者 彭乃才 徐明悦 卢可可 《肉类工业》 2014年第5期32-37,共6页

环介导等温扩增（LAMP）技术是继PCR技术之后又一新型核酸扩增技术,恒温（60-65℃）条件下可在1h内将目的基因扩增到109,具有效率高、特异性强、操作简单等优点,已被广泛应用于食源性致病菌的快速检测。对LAMP的原理、特点、应用及展望... 环介导等温扩增（LAMP）技术是继PCR技术之后又一新型核酸扩增技术,恒温（60-65℃）条件下可在1h内将目的基因扩增到109,具有效率高、特异性强、操作简单等优点,已被广泛应用于食源性致病菌的快速检测。对LAMP的原理、特点、应用及展望进行综述,为后续研究提供理论依据。 展开更多

关键词 环介导等温扩增技术 食源性致病菌 检测

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转基因大豆GTS40-3-2成分现场可视化检测方法的建立 被引量：4

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作者 王永 兰青阔 +4 位作者 朱珠 赵新 陈锐 郭永泽 程奕 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期570-573,共4页

转基因大豆GTS40-3-2转化体是种植面积最广的转基因大豆品种,根据GTS40-3-2转化体特异性序列设计引物,应用可视化环介导等温扩增技术,对其进行快速扩增及可视化判断;同时建立转基因成分人工污染的食品模型,比较了LAMP法与定性PCR方法检... 转基因大豆GTS40-3-2转化体是种植面积最广的转基因大豆品种,根据GTS40-3-2转化体特异性序列设计引物,应用可视化环介导等温扩增技术,对其进行快速扩增及可视化判断;同时建立转基因成分人工污染的食品模型,比较了LAMP法与定性PCR方法检测的敏感性。结果表明:该方法仅对GTS40-3-2转化体产生特异性扩增,灵敏度高达0.001%。所建立的GTS40-3-2转化体特异性现场可视化筛查方法具有较高的特异性与灵敏性,操作简单、快速,可用于转基因大豆GTS40-3-2成分污染的现场可视化检测。 展开更多

关键词 转基因大豆GTS40-3-2 转化体特异性 环状等温扩增技术 现场可视化检测

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沙门菌属stn基因LAMP快速检测方法的建立及应用 被引量：4

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作者 李爱华 王胜启 秦东春 《中国卫生检验杂志》 CAS 北大核心 2014年第9期1217-1220,共4页

目的本研究以沙门菌属肠毒素基因(stn)为靶基因,运用环介导恒温扩增技术(LAMP),建立LAMP快速检测方法。方法对沙门菌属stn基因的6个特征区域设计4条引物,利用具有链置换活性的Bst DNA聚合酶在恒温条件下催化新链合成,使目的基因高效扩增... 目的本研究以沙门菌属肠毒素基因(stn)为靶基因,运用环介导恒温扩增技术(LAMP),建立LAMP快速检测方法。方法对沙门菌属stn基因的6个特征区域设计4条引物,利用具有链置换活性的Bst DNA聚合酶在恒温条件下催化新链合成,使目的基因高效扩增;对LAMP反应体系和反应条件进行优化,用沙门菌标准株和非沙门菌标准株检测方法的特异性和敏感性。与显色培养基法同时检测肉、蛋、奶、等样品共计100份,检测方法的实用性。结果以沙门菌属stn基因为靶基因建立的LAMP快速检测方法,沙门菌株阳性检出率100%,非沙门菌株检测均为阴性。100份检验样品检测结果与显色培养基检测结果对比,一致率100%。结论沙门菌属stn基因LAMP检测技术敏感性、特异性高,简便快速,是一种适合口岸及基层检验、检疫部门使用的沙门菌快速检测方法。 展开更多

关键词 沙门菌属 沙门菌属肠毒素基因 环介导等温扩增技术

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环介导等温扩增技术检测慢性阻塞性肺疾病伴下呼吸道感染病原菌397例价值研究 被引量：2

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作者 温雅 黄娟 +4 位作者 杜焰家 张伟强 曾汉华 朱旭华 钟子双 《安徽医药》 CAS 2022年第9期1760-1766,共7页

目的探讨环介导等温扩增技术(LAMP),即呼吸道病原菌核酸联合检测(13联)对慢性阻塞性肺疾病(COPD)伴下呼吸道感染病原菌检测的临床应用价值。方法选取梅州市人民医院2018年1月至2020年12月住院病人临床诊断为COPD伴急性下呼吸道感染的病... 目的探讨环介导等温扩增技术(LAMP),即呼吸道病原菌核酸联合检测(13联)对慢性阻塞性肺疾病(COPD)伴下呼吸道感染病原菌检测的临床应用价值。方法选取梅州市人民医院2018年1月至2020年12月住院病人临床诊断为COPD伴急性下呼吸道感染的病例397例,其中有入住普通病房的病例195例,需要呼吸机辅助通气而入住重症监护室的病例202例,每例病人均留取痰液/支气管肺泡灌洗液/支气管吸出物送检LAMP(13联)检测和病原菌培养,比较入住不同病房治疗的COPD伴下呼吸道感染病原菌经LAMP(13联)检测出的病原菌分布特点,计算LAMP(13联)检测的灵敏度和特异度,以及统计分析LAMP(13联)检测与传统培养方法检测结果的一致性,探讨LAMP(13联)方法对COPD伴下呼吸道感染的临床应用价值。结果LAMP检测方法对普通病房、重症监护室的COPD伴下呼吸道感染病原菌的检测阳性率分别为45.13%、47.03%,均比传统培养方法高(P<0.05);根据LAMP检测结果,入住普通病房的COPD病人感染病原菌排在前三名为流感嗜血杆菌34例(17.44%)、耐甲氧西林葡萄球菌25例(12.82%)、铜绿假单胞菌13例(6.67%)、肺炎链球菌13例(6.67%);入住重症监护室的COPD病人感染病原菌排在前三名的为耐甲氧西林葡萄球菌43例(21.29%)、流感嗜血杆菌14例(6.93%)、肺炎链球菌13例(6.44%);LAMP对普通病房和ICU病房的COPD病人感染病原菌检测的灵敏度分别为78.95%、85.29%,特异度分别为58.52%、60.71%;与传统培养方法比较,铜绿假单胞菌的Kappa值最高,为0.87。结论LAMP对普通病房及重症监护室的COPD伴下呼吸道感染病原菌的检测均具有敏感、快速、经济有效的特点,能为临床治疗选用有效抗生素提供证据,对COPD伴下呼吸道感染的临床治疗具有重要意义。 展开更多

关键词 肺疾病 慢性阻塞性 呼吸道感染 核酸扩增技术 病原菌 环介导等温扩增技术 回顾性分析 痰液 支气管肺泡灌洗液

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椰毒假单胞菌酵米面亚种检测方法研究进展 被引量：1

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作者 梁美丹 尹玮璐 +3 位作者 黄志深 蒋佳希 张明明 肖剑 《食品安全导刊》 2022年第25期174-177,共4页

近年来,由椰毒假单胞菌酵米面亚种引起的食物中毒事件常有发生,其毒素米酵菌酸的致病性极强,死亡率高,引起人们的高度关注。本文主要从国标法中的微生物培养技术、基因测序技术、PCR技术(包含常规PCR和实时荧光PCR技术)、环介导等温扩... 近年来,由椰毒假单胞菌酵米面亚种引起的食物中毒事件常有发生,其毒素米酵菌酸的致病性极强,死亡率高,引起人们的高度关注。本文主要从国标法中的微生物培养技术、基因测序技术、PCR技术(包含常规PCR和实时荧光PCR技术)、环介导等温扩增技术及微滴数字PCR技术等方面总结椰毒假单胞菌酵米面亚种的检测方法,并对该菌未来的研究方向进行展望。 展开更多

关键词 椰毒假单胞菌酵米面亚种 基因测序技术 PCR技术 环介导等温扩增技术 微滴数字PCR技术

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上海市某行政区空气中细菌总数分布与常见致病菌检测 被引量：2

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作者 储燕萍 赵望 刘思秀 《复旦学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期240-244,共5页

本文采用FA-1型六级撞击式空气微生物采样器对上海市某区4个功能区的细菌进行了收集,并应用菌落计数器和显微镜对收集到的细菌进行平皿菌落计数以分析空气中细菌总数分布现状.细菌致病性分析采用崂应2050型空气智能中流量采样器对4个功... 本文采用FA-1型六级撞击式空气微生物采样器对上海市某区4个功能区的细菌进行了收集,并应用菌落计数器和显微镜对收集到的细菌进行平皿菌落计数以分析空气中细菌总数分布现状.细菌致病性分析采用崂应2050型空气智能中流量采样器对4个功能区的细菌进行了收集,应用环介导等温扩增技术对特定致病细菌进行检测,并对该区的细菌污染状况进行评价.细菌总数和致病细菌检测结果显示:4个监测站点微生物总量的变化范围是294~1862CFU/m^3,低于3000CFU/m^3,依据《大气微生物评价分级标准》评价,该区的空气始终处于清洁水平,空气质量较好;夏季空气中检出沙门氏菌和金黄色葡萄球菌的概率比秋季高. 展开更多

关键词 细菌 总数 致病性 环介导等温扩增

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一种快速检测纺织品中沙门氏菌的方法 被引量：2

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作者 李轲 郭会清 +2 位作者 郭华麟 张淑霞 王新辉 《棉纺织技术》 CAS 北大核心 2017年第12期32-37,共6页

探讨纺织品中快速检测沙门氏菌的方法。应用了环介导等温扩增技术结合基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术建立纺织品中沙门氏菌的快速检测方法。沙门氏菌invA基因序列具有致病性菌株属特异性,根据其特点设计出一套沙门氏菌环介导等... 探讨纺织品中快速检测沙门氏菌的方法。应用了环介导等温扩增技术结合基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术建立纺织品中沙门氏菌的快速检测方法。沙门氏菌invA基因序列具有致病性菌株属特异性,根据其特点设计出一套沙门氏菌环介导等温引物。环介导等温扩增结果为可疑或阳性时,分离菌株,通过基质辅助技术快速鉴定结果。选择典型参考菌株做特异性试验;沙门氏菌菌液稀释成不同梯度做灵敏度试验。试验结果表明:该方法特异性好,灵敏度较高,检测限可达4.6CFU/mL。认为:该方法可用于快速检测纺织品中沙门氏菌。 展开更多

关键词 纺织品 沙门氏菌 快速检测 invA基因 环介导等温扩增技术

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基于LAMP^(■)技术的核酸快速诊断技术平台建立 被引量：1

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作者 刘威 李奉京 +2 位作者 何旭峰 黄留玉 袁静 《中国医疗器械信息》 2014年第4期43-47,共5页

本文介绍了LAMP技术核酸快速诊断技术平台建立的流程,解决了LAMP法易污染、非特异扩增、无法定量、无法高通量等问题,并将RT-LAMP技术应用于H7N9疫情的检测,灵敏度能达到10 copy/μl,比RT-PCR高100倍,整个反应时间更短,比RT-PCR节... 本文介绍了LAMP技术核酸快速诊断技术平台建立的流程,解决了LAMP法易污染、非特异扩增、无法定量、无法高通量等问题,并将RT-LAMP技术应用于H7N9疫情的检测,灵敏度能达到10 copy/μl,比RT-PCR高100倍,整个反应时间更短,比RT-PCR节约45min。LAMP法具有快速、恒温、简易、高特异、高敏感性的优点,特别适用于现场、基层医疗单位的快速检测。 展开更多

关键词 LAMP^(■)技术 LAMP^(■)核酸快速诊断平台 灵敏度

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环介导等温扩增与qPCR用于检测肉制品中狗源性成分的比较 被引量：1

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作者 韦涛 黄继锦 +3 位作者 黄惠琳 黄晓韵 谢耐珍 张璜 《食品安全质量检测学报》 CAS 北大核心 2021年第8期3060-3070,共11页

目的建立基于实时荧光PCR和环介导等温扩增检测肉制品中狗源性成分的检测方法并比较2种方法的检测效能。方法针对狗线粒体CYTB基因保守序列,采用Primer Explorer Version 4软件设计环介导等温扩增引物,Primer Express 3.0.1软件设计实... 目的建立基于实时荧光PCR和环介导等温扩增检测肉制品中狗源性成分的检测方法并比较2种方法的检测效能。方法针对狗线粒体CYTB基因保守序列,采用Primer Explorer Version 4软件设计环介导等温扩增引物,Primer Express 3.0.1软件设计实时荧光PCR引物及探针。提取狗肉基因组DNA作为阳性模板,黄牛肉等20种基因组DNA作为阴性对照,分析扩增特异性;用含靶序列的人工质粒确定检测灵敏度及人工掺肉样确定最低检出限;用市售肉制品分析检出率。结果对于肉制品中狗源性成分检测,实时荧光PCR和环介导等温扩增检测均有较好的特异性,人工质粒分析灵敏度分别为0.1、1fg/μL。对10种市售狗肉制品的狗源性成分均检出阳性、10份不含狗肉制品均检出阴性,qPCR法和环介导等温扩增法的检测结果符合率均为100%。结论qPCR法和环介导等温扩增法在检测肉及肉制品中的狗源性成分时,在灵敏度、检出限和准确度上具有相当的效能。 展开更多

关键词 狗源性成分 肉类掺假鉴定 环介导等温扩增技术 实时荧光PCR 肉制品

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基于环介导等温扩增技术快速鉴定宽体金线蛭

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作者 张环宇 王文秀 +4 位作者 高晗 谭伟 余小磊 李振国 田晓轩 《天津中医药大学学报》 CAS 2022年第5期649-652,共4页

[目的]建立中药材宽体金线蛭的环介导等温扩增(LAMP)检测技术,实现对宽体金线蛭及其常见混伪品的快速检测。[方法]针对宽体金线蛭线粒体细胞色素氧化酶I(COI)的基因序列设计LAMP引物。在64°C恒温条件下,用设计的LAMP引物组对水蛭进... [目的]建立中药材宽体金线蛭的环介导等温扩增(LAMP)检测技术,实现对宽体金线蛭及其常见混伪品的快速检测。[方法]针对宽体金线蛭线粒体细胞色素氧化酶I(COI)的基因序列设计LAMP引物。在64°C恒温条件下,用设计的LAMP引物组对水蛭进行LAMP扩增。[结果]LAMP反应结束后,宽体金线蛭均扩增出梯状条带,对照组无条带产生。加入0.2μL荧光染料10000×SYBR GreenⅠ后,宽体金线蛭反应液在自然光下呈绿色(阳性),对照组呈橙色(阴性)。将加入了0.2μL 10000×SYBR GreenⅠ的扩增产物置于紫外灯下观察,结果宽体金线蛭在紫外光下呈绿色荧光(阳性),对照组无绿色荧光产生(阴性)。[结论]利用LAMP技术可实现宽体金线蛭及其常见混伪品的快速鉴别,为水蛭中药材的现场鉴别提供技术支撑。 展开更多

关键词 宽体金线蛭 环介导等温扩增技术 分子鉴定 快速检测

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猪圆环病毒2型LAMP可视化检测方法的建立与应用

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作者 廖帆 谭磊 +3 位作者 雷磊 湛洋 段德勇 王爱兵 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期679-684,共6页

为建立一种适用于猪圆环病毒2型(PCV2)现场、快速、可视化检测方法,本研究根据PCV2ORF1基因中的保守序列设计合适的环介导等温扩增(LAMP)引物对,优化反应体系及条件,并评估该方法的灵敏度和特异性。结果显示,63℃恒温扩增45 min即可出... 为建立一种适用于猪圆环病毒2型(PCV2)现场、快速、可视化检测方法,本研究根据PCV2ORF1基因中的保守序列设计合适的环介导等温扩增(LAMP)引物对,优化反应体系及条件,并评估该方法的灵敏度和特异性。结果显示,63℃恒温扩增45 min即可出现梯形条带,检测下限为1.0×10^(1)copies/μL,较普通PCR敏感性提高100倍,且当产物中加入SYBR GreenⅠ染料后可实现可视化检测。应用该方法对72份临床样品进行检测,结果显示,PCV2阳性率为47.2%(34/72),与qPCR检测的符合率为98.6%(71/72),与普通PCR的符合率为94.4%(68/72)。结果表明,该基于LAMP的检测方法具有敏感特异、简便快捷、可视化的特点,为PCV2临床检测提供了一种新的选择。 展开更多

关键词 猪圆环病毒2型 ORF1基因 环介导等温扩增技术 可视化

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环介导等温扩增技术在植物寄生线虫检测中的应用

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作者 王一椒 《现代农业科技》 2023年第11期105-109,共5页

植物寄生线虫是世界各地农林业生产中一种重要的生物胁迫,在早期快速、准确地鉴定出植物寄生线虫种类是减少其危害的重要前提。环介导等温扩增(LAMP)技术因在实际操作中具有简易、快速和灵敏等特点,已被广泛应用于多种植物病原体的检测... 植物寄生线虫是世界各地农林业生产中一种重要的生物胁迫,在早期快速、准确地鉴定出植物寄生线虫种类是减少其危害的重要前提。环介导等温扩增(LAMP)技术因在实际操作中具有简易、快速和灵敏等特点,已被广泛应用于多种植物病原体的检测和诊断。本文主要就LAMP技术在伞滑刃线虫、根结线虫、孢囊线虫、短体线虫、滑刃线虫、粒线虫等重要植物寄生线虫检测中的应用研究情况进行了综述,以期为针对不同的植物寄生线虫开发和选用最佳的LAMP检测方法提供参考。 展开更多

关键词 环介导等温扩增(LAMP)技术 植物寄生线虫 检测

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应用LAMP技术鉴定含89K毒力岛2型猪链球菌菌株 被引量：3

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作者 朱水荣 王志刚 +4 位作者 余昭 张政 梅玲玲 杨婷婷 卢亦愚 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期659-662,667,共5页

目的应用LAMP(Loop-Mediated Isothermal Amplification)技术鉴别含89K毒力岛2型猪链球菌(Streptococ-cus suisserotype2,S.suis2)菌株。方法根据S.suis2中国分离株(05ZYH33)89K毒力岛中基因序列设计4条引物(2条内引物、2条外引物);应用... 目的应用LAMP(Loop-Mediated Isothermal Amplification)技术鉴别含89K毒力岛2型猪链球菌(Streptococ-cus suisserotype2,S.suis2)菌株。方法根据S.suis2中国分离株(05ZYH33)89K毒力岛中基因序列设计4条引物(2条内引物、2条外引物);应用LAMP,对21株S.suis2、18株其它链球菌、9株葡萄球菌、5株其它菌株及49份未知样本进行检测,并对LAMP的最低检测限进行测试,结果通过肉眼目测或电泳检测,并将结果与PCR/定量PCR结果比较。结果该方法仅对含89K毒力岛的中国S.suis2特有株检测为阳性,而其它菌株经LAMP检测均为阴性,试验表明本方法特异性好,其最低检测限为24CFU/反应,无需特殊设备,结果通过肉眼即可判断,从菌株核酸的提取至检测完成仅需2h左右。应用本方法对49份不同来源样本进行实际考核,其中32份不明发热病人呼吸道咽拭子应急样本及15份正常猪扁桃体咽拭子样本经检测89K毒力岛基因均为阴性,2份疑似SS2病人血液应急样本中一份检测到该毒力岛基因,该结果与普通PCR/定量PCR检测结果一致。结论成功建立了检测S.suis289K毒力岛的LAMP方法 ,该方法特异性好,操作简便,无需特殊的仪器设备,操作简单方便,极适合在我国广大基层实验室(包括基层医院/动物检疫等部门)开展应用。 展开更多

关键词 89K毒力岛基因 猪链球菌2型 改良LAMP技术 鉴定检测

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LAMP技术在食源性病原微生物检测中的应用 被引量：3

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作者 陈传 凌霄 +3 位作者 郭震 邵筱 张如胜 魏泉德 《生命科学研究》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期140-144,共5页

针对常见引起食物中毒细菌的特异保守基因设计环介导恒等温扩增(LAMP)引物,并以此套引物建立食源性病原微生物的检测方法。特异性及灵敏性试验显示,LAMP法最低检出限为10-5,Real-time LAMP最低检出限为10-7,而普通PCR的检出下限仅为10-3... 针对常见引起食物中毒细菌的特异保守基因设计环介导恒等温扩增(LAMP)引物,并以此套引物建立食源性病原微生物的检测方法。特异性及灵敏性试验显示,LAMP法最低检出限为10-5,Real-time LAMP最低检出限为10-7,而普通PCR的检出下限仅为10-3;且LAMP全部反应在1 h内完成;LAMP反应结果可通过肉眼直接观测判定结果。LAMP快速检测常见食物中毒菌的方法初步建立,同时结合Real-time LAMP,可提供更准确的检测结果并可实现仪器在线式实时监测。 展开更多

关键词 食源性微生物 LAMP 奇异变形杆菌 Real—time

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