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保护性免疫血清及单克隆抗体筛选日本血吸虫成虫cDNA文库 被引量：25
1
作者 沈际佳 蒋作君 +2 位作者 余新炳 汪学龙 吴忠道 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2000年第3期31-33,共3页
目的　为寻找有效的抗日本血吸虫感染疫苗候选抗原分子。方法　用紫外线照射致弱尾蚴免疫兔血清筛选日本血吸虫成虫cDNA文库 ,再用同法免疫鼠脾细胞制备的单克隆抗体对所获阳性克隆进行再筛选 ,并对免疫筛选的阳性克隆的cDNA插入片段进... 目的　为寻找有效的抗日本血吸虫感染疫苗候选抗原分子。方法　用紫外线照射致弱尾蚴免疫兔血清筛选日本血吸虫成虫cDNA文库 ,再用同法免疫鼠脾细胞制备的单克隆抗体对所获阳性克隆进行再筛选 ,并对免疫筛选的阳性克隆的cDNA插入片段进行PCR扩增。结果　兔免疫血清确定 12个阳性克隆 ,其中 6个克隆与 2株以上的单抗呈阳性反应 :PCR扩增cDNA插入片段大小约 40 0bp～ 1 4kb左右。结论　已筛选到与致弱尾蚴免疫兔血清及同法免疫制备单抗产生特异反应的阳性克隆 ,获得一批编码可能具有保护性作用的日本血吸虫抗原的基因片段。 展开更多
关键词 日本血吸虫 CDNA文库 单克隆抗体
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旋毛虫成虫cDNA文库免疫筛选及序列分析 被引量：21
2
作者 杨雅平 诸欣平 +2 位作者 杨静 周蕾 黄松 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期270-273,共4页
目的　为获得旋毛虫成虫抗原基因。　方法　应用免疫血清和人工感染血清对旋毛虫成虫cDNA文库进行免疫筛选、克隆测序及核苷酸序列数据库 (GenBank)查寻比较 ,采用DNAstar软件进行基因序列分析。　结果　免疫筛选成虫cDNA文库 ,获得 9... 目的　为获得旋毛虫成虫抗原基因。　方法　应用免疫血清和人工感染血清对旋毛虫成虫cDNA文库进行免疫筛选、克隆测序及核苷酸序列数据库 (GenBank)查寻比较 ,采用DNAstar软件进行基因序列分析。　结果　免疫筛选成虫cDNA文库 ,获得 9个阳性克隆。对其中的Ts87进行测序 ,又采用 5′ RACE ,获取全长为 1172bp的cDNA片段 ,该基因编码 3 47个氨基酸。序列分析表明 ,克隆Ts87是个尚未见报道的旋毛虫基因序列 ,存在预测的抗原表位。　结论　获得具有抗原性的旋毛虫抗原新基因。 展开更多
关键词 旋毛虫 成虫 CDNA文库 免疫筛选 序列分析 抗原基因
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东方田鼠感染血清免疫筛选日本血吸虫成虫cDNA文库 被引量：21
3
作者 王庆林 易新元 +4 位作者 曾宪芳 周金春 罗新松 何永康 彭兴华 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期547-551,共5页
东方田鼠 (Microtusfortis ,Mf)对日本血吸虫 (Schistosomajaponicum ,Sj)感染具有抗性 .为探讨Mf感染Sj后是否产生针对虫体某些特异抗原分子的免疫应答 ,用Mf感染血清对Sj成虫cDNA文库进行免疫筛选 .经初筛和复筛 ,共筛选出 12个阳性克... 东方田鼠 (Microtusfortis ,Mf)对日本血吸虫 (Schistosomajaponicum ,Sj)感染具有抗性 .为探讨Mf感染Sj后是否产生针对虫体某些特异抗原分子的免疫应答 ,用Mf感染血清对Sj成虫cDNA文库进行免疫筛选 .经初筛和复筛 ,共筛选出 12个阳性克隆 .这些阳性克隆经辅助噬菌体自动剪切后PCR扩增显示 ,插入的SjcDNA片段大小在 3 0 0bp至 1 8kb之间 ,其中 1 8kb片段 5个 ,1kb片段 1个 ,3 0 0bp片段6个 .经DNA测序分析 ,鉴定出 3个未曾报道过的Sj新基因 ,分别命名为Sj Mf1、Sj Mf2和Sj胞质氨基肽酶 ,并在GenBank登记注册 .结果说明 ,Mf感染血清可识别Sj的特异性抗原分子 ,这些抗原分子的免疫保护作用值得进一步研究 . 展开更多
关键词 日本血吸虫 东方田鼠 CDNA文库 免疫筛选 序列分析 感染血清
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日本血吸虫病患者血清对噬菌体随机7肽库的免疫筛选 被引量：17
4
作者 舒新华 易新元 曾宪芳 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 2000年第2期109-112,共4页
目的从噬菌体随机多肽文库中 ,筛选出能与慢性血吸虫病患者血清特异性结合的短肽分子。方法采用慢性血吸虫病患者血清免疫球蛋白(Ig)作为配基 ,免疫筛选以融合蛋白形式在丝状噬菌体M13外壳蛋白III表达的随机7肽文库。按吸附 -洗脱 -扩... 目的从噬菌体随机多肽文库中 ,筛选出能与慢性血吸虫病患者血清特异性结合的短肽分子。方法采用慢性血吸虫病患者血清免疫球蛋白(Ig)作为配基 ,免疫筛选以融合蛋白形式在丝状噬菌体M13外壳蛋白III表达的随机7肽文库。按吸附 -洗脱 -扩增的淘筛过程 ,经3轮免疫淘筛后 ,随机挑取噬菌体克隆用ELISA检测其特异性 ,并用斑点ELISA分析其诊断血吸虫病的价值。结果经3轮免疫淘筛后 ,特异性结合的噬菌体富集增加近100倍。用ELISA检测第3轮筛选后随机挑取的30个噬菌体克隆 ,有26个克隆能与慢性血吸虫病患者的血清Ig产生特异性反应 ,其中A值最高的2个克隆具有诊断血吸虫病的潜在价值。结论噬菌体随机肽库技术 ,可应用于分析、鉴定血吸虫抗原表位 ,继而为获得亚单位表位水平的诊断试剂和抗血吸虫病的短肽疫苗提供依据。 展开更多
关键词 日本血吸虫病 免疫筛选 噬菌体 随机多肽文库
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噬菌体表达短肽模拟血吸虫致弱尾蚴特异性抗原表位的研究 被引量：16
5
作者 周东明 曾宪芳 +2 位作者 王敏 Larry McReynold 易新元 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2002年第1期30-32,共3页
目的　从噬菌体随机肽库中筛选模拟血吸虫致弱尾蚴特异性抗原表位的噬菌体克隆 ,并探讨其免疫保护效果。方法　用紫外线致弱尾蚴免疫兔血清IgG筛选以融合蛋白形式在丝状噬菌体外壳蛋白Ⅲ表达的随机 7肽库 ,三轮免疫筛选后获得的噬菌体... 目的　从噬菌体随机肽库中筛选模拟血吸虫致弱尾蚴特异性抗原表位的噬菌体克隆 ,并探讨其免疫保护效果。方法　用紫外线致弱尾蚴免疫兔血清IgG筛选以融合蛋白形式在丝状噬菌体外壳蛋白Ⅲ表达的随机 7肽库 ,三轮免疫筛选后获得的噬菌体克隆经皮下免疫小鼠 3次 ,攻击感染 45d后剖杀 ,观察减虫和减卵效果。结果　经三轮筛选 ,特异性结合的噬菌体富集增加了 10 0多倍 ,随机挑取 2 4个噬菌体克隆经ELISA测定 ,有 2 2个克隆能与致弱尾蚴免疫兔血清IgG特异性反应。混合噬菌体克隆免疫小鼠试验的减虫率与减卵率分别为 33.5 7%和 5 6 .0 7% (P均 <0 .0 0 1)。结论　采用噬菌体随机肽库技术可获得模拟致弱尾蚴特异性抗原表位的短肽分子 。 展开更多
关键词 日本血吸虫 噬菌体随机肽库 免疫筛选 分子模拟 表位
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日本血吸虫中国大陆株成虫cDNA文库的免疫筛选及PCR初步鉴定 被引量：14
6
作者 吴海玮 陈淑贞 +2 位作者 王荣芝 苏川 张兆松 《中国血吸虫病防治杂志》 CAS CSCD 1998年第1期7-10,共4页
用成虫抗原免疫免血清筛选构建于表达载体λgt11的日本血吸虫成虫cDNA文库，再以多聚酶链反应（PCR）技术鉴定免疫筛选的阳性克隆。结果，对cDNA表达库中随机选取的约6.2×104个噬菌斑进行了筛选．初筛时共挑出52个可能的阳性斑，... 用成虫抗原免疫免血清筛选构建于表达载体λgt11的日本血吸虫成虫cDNA文库，再以多聚酶链反应（PCR）技术鉴定免疫筛选的阳性克隆。结果，对cDNA表达库中随机选取的约6.2×104个噬菌斑进行了筛选．初筛时共挑出52个可能的阳性斑，经两次复筛后，有25个噬菌仍呈阳性反应；以阳性噬菌斑DNA为模板，经PCR扩增均可获得一定大小的片段，从564bp到1200bp不等。这样能快速大量地筛选cDNA文库，便于高效地获得有价值的重组抗原基因克隆。 展开更多
关键词 日本血吸虫 CDNA文库 免疫筛选 PCR
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旋毛虫新生幼虫cDNA文库的免疫筛选 被引量：17
7
作者 吴秀萍 付宝权 +5 位作者 刘明远 张亚兰 原丽红 李莲瑞 卢强 Pascal Boireau 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期235-239,共5页
目的　获取具有抗原性的旋毛虫新生幼虫基因。　方法　以旋毛虫感染猪血清为抗体探针 ,对旋毛虫新生幼虫cDNA文库进行免疫筛选 ,将获得的阳性克隆进行测序及分析。　结果　从 4 5× 10 5旋毛虫新生幼虫cDNA文库重组子中共获得 15 8... 目的　获取具有抗原性的旋毛虫新生幼虫基因。　方法　以旋毛虫感染猪血清为抗体探针 ,对旋毛虫新生幼虫cDNA文库进行免疫筛选 ,将获得的阳性克隆进行测序及分析。　结果　从 4 5× 10 5旋毛虫新生幼虫cDNA文库重组子中共获得 15 8个阳性克隆。序列分析结果表明 ,其中有 3 6个新的cDNA序列 ,已报道的序列有 5个 ,有 12个序列无开放阅读框架 (ORF) ,与旋毛虫线粒体基因组DNA同源。 展开更多
关键词 旋毛虫感染 新生 免疫筛选 CDNA文库 抗原性 抗体 开放阅读框架 幼虫 猪血清 线粒体基因组
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编码天麻抗真菌蛋白cDNA的分子克隆 被引量：11
8
作者 舒群芳 孙勇如 徐锦堂 《Acta Botanica Sinica》 CSCD 1995年第9期685-690,共6页
用重组ＤＮＡ 技术研究了编码天麻抗真菌蛋白（ＧＡＦＰ）的基因，从天麻（Ｇａｓｔｒｏｄｉａ ｅｌａｔａＢｌ．）块茎中提取Ｐｏｌｙ（Ａ） ｍ ＲＮＡ 后合成ｃＤＮＡ，构建成表达型ｃＤＮＡ 文库，用纯化的蛋白质探针通过免疫筛选找... 用重组ＤＮＡ 技术研究了编码天麻抗真菌蛋白（ＧＡＦＰ）的基因，从天麻（Ｇａｓｔｒｏｄｉａ ｅｌａｔａＢｌ．）块茎中提取Ｐｏｌｙ（Ａ） ｍ ＲＮＡ 后合成ｃＤＮＡ，构建成表达型ｃＤＮＡ 文库，用纯化的蛋白质探针通过免疫筛选找出对应的ｃＤＮＡ 克隆。在进一步证明所选用的ｃＤＮＡ 克隆含有重组的λ－ｐｈａｇｅ ＤＮＡ 后，提取和纯化含有插入片段重组子的ＤＮＡ，用Ｅｃｏ ＲＩ酶切分析可见插入片段。 展开更多
关键词 天麻 抗真菌蛋白 CDNA 分子克隆 药用植物
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鸭疫里默氏杆菌基因组文库的构建及免疫原性基因初步筛选 被引量：12
9
作者 朱德康 程安春 +1 位作者 汪铭书 丁轲 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期834-837,共4页
以血清1型鸭疫里默氏杆菌（RA）CH-1株为材料提取基因组DNA，采用限制性内切酶Sau3AI进行部分酶切消化，纯化回收1．0～6．5kb片段，用T4DNA连接酶将回收片段与经BamHI酶切并去磷酸化的ZAP Express载体进行连接，用噬菌体包装蛋白包装... 以血清1型鸭疫里默氏杆菌（RA）CH-1株为材料提取基因组DNA，采用限制性内切酶Sau3AI进行部分酶切消化，纯化回收1．0～6．5kb片段，用T4DNA连接酶将回收片段与经BamHI酶切并去磷酸化的ZAP Express载体进行连接，用噬菌体包装蛋白包装。经测定包装滴度为5.23×10^6pfu／mL，蓝白斑筛选重组率为96．8％，表明已成功构建血清1型RA CH-1株部分基因组文库。在此基础上以RA抗血清为抗体探针进行免疫筛选，获得3个阳性克隆，经多次重复筛选后再体内删除，得到含有插入片段的质粒并测序。生物信息学分析结果显示，该序列（GenBank登录号：DQ151838）含有1个编码369个氨基酸的完整开放阅读框架，是尚未见报道的RA基因序列，并且存在多个预测的抗原表位。 展开更多
关键词 鸭疫里默氏杆菌 免疫筛选 抗原表位
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广州管圆线虫成虫cDNA文库抗原基因的筛选 被引量：7
10
作者 孟锦绣 李卓雅 +5 位作者 詹希美 吴长有 沈浩贤 梁瑜 张瑞琳 何蔼 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2004年第11期934-937,共4页
目的从广州管圆线虫成虫cDNA文库中筛选特异性抗原基因。方法用大鼠感染血清做免疫探针,筛选广州管圆线虫成虫cDNA文库,对筛选得到的阳性克隆作交叉反应试验,PCR扩增外源基因插入片段并测序,用在线生物信息学软件进行同源性比对,推导氨... 目的从广州管圆线虫成虫cDNA文库中筛选特异性抗原基因。方法用大鼠感染血清做免疫探针,筛选广州管圆线虫成虫cDNA文库,对筛选得到的阳性克隆作交叉反应试验,PCR扩增外源基因插入片段并测序,用在线生物信息学软件进行同源性比对,推导氨基酸序列和蛋白质结构及进行功能分析。结果获得15个阳性克隆,分属三种基因,1个属中间纤维(IF)家族基因,3个与旋盘尾丝虫和秀丽杆线虫的真皮抗原同源,11个属主要精原蛋白(MSP)家族基因。其中1种基因表达产物没有发生明显交叉反应。结论从广州管圆线虫成虫cDNA文库中初步筛选出1个潜在特异性抗原基因和1个可能的主要抗原基因。 展开更多
关键词 广州管圆线虫成虫 CDNA文库 抗原基因 筛选
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紫外线致弱尾蚴免疫兔血清筛选血吸虫成虫cDNA文库 被引量：7
11
作者 周东明 易新元 +1 位作者 曾宪芳 周金春 《湖南医科大学学报》 CSCD 2000年第6期522-524,共3页
目的 :寻找照射致弱尾蚴中起免疫保护作用的抗原分子 ,为血吸虫病疫苗研究提供新的候选抗原。方法 :用紫外线照射致弱尾蚴免疫兔血清筛选日本血吸虫 (Schistosomajaponicum ,Sj)成虫cDNA文库 ,并对阳性克隆的插入基因片段进行PCR扩增及... 目的 :寻找照射致弱尾蚴中起免疫保护作用的抗原分子 ,为血吸虫病疫苗研究提供新的候选抗原。方法 :用紫外线照射致弱尾蚴免疫兔血清筛选日本血吸虫 (Schistosomajaponicum ,Sj)成虫cDNA文库 ,并对阳性克隆的插入基因片段进行PCR扩增及测序分析。结果 :经三轮筛选 ,获 10个阳性克隆 ,其插入的SjcDNA片段大小为 1 5～1.8kb。初步测序获 5个部分序列 ,其中 2个序列分别与Sj动力蛋白轻链 5 (DLC 5 )及Sj线粒体基因明显同源 ,其余 3个序列为未知的新基因片段。结论 展开更多
关键词 日本血吸虫 弱尾蚴 CDNA文库 紫外线 疫苗
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东方田鼠感染血清免疫筛选日本血吸虫成虫cDNA文库的初步报告 被引量：6
12
作者 王庆林 易新元 +4 位作者 周金春 曾宪芳 罗新松 何永康 彭兴华 《湖南医科大学学报》 CSCD 2000年第2期119-121,共3页
东方田鼠 (Microtusfortis,Mf)对日本血吸虫 ( Schistosomajaponicum ,Sj)感染具有抗性。为探讨Mf感染Sj后是否产生针对虫体某些抗原分子的免疫应答 ,作者用Mf受感染血清对Sj成虫cDNA文库进行免疫筛选 ,经初筛和复筛 ,共筛选出 1 2个阳... 东方田鼠 (Microtusfortis,Mf)对日本血吸虫 ( Schistosomajaponicum ,Sj)感染具有抗性。为探讨Mf感染Sj后是否产生针对虫体某些抗原分子的免疫应答 ,作者用Mf受感染血清对Sj成虫cDNA文库进行免疫筛选 ,经初筛和复筛 ,共筛选出 1 2个阳性克隆 ,这些阳性克隆经辅助噬菌体自动剪切后PCR扩增显示 ,插入的SjcDNA片段大小在30 0bp～ 1 .8kb之间 ,其中 30 0bp片段 6个 ,1kb片段 1个 ,1 8kb片段 5个。说明Mf感染血清可识别Sj的特异性抗原分子。 展开更多
关键词 日本血吸虫病 东方田鼠 CDNA文库 免疫筛选
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青海血蜱幼蜱cDNA表达文库的构建及其保护性抗原基因的免疫学筛选 被引量：6
13
作者 赵海平 高金亮 +6 位作者 李有全 樊瑞泉 李金杰 赵金国 刘军龙 殷宏 罗建勋 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期461-464,共4页
采用常规方法构建了青海血蜱幼蜱cDNA表达文库,初级文库的库容量为5.0×105PFU/mL,扩增后的库容量为8×109PFU/mL;用兔抗青海血蜱幼蜱阳性血清对该文库进行了免疫学筛选,对阳性噬菌体进行了亚克隆,提取质粒后转化宿主菌JM109,... 采用常规方法构建了青海血蜱幼蜱cDNA表达文库,初级文库的库容量为5.0×105PFU/mL,扩增后的库容量为8×109PFU/mL;用兔抗青海血蜱幼蜱阳性血清对该文库进行了免疫学筛选,对阳性噬菌体进行了亚克隆,提取质粒后转化宿主菌JM109,最终共得到幼蜱基因11个,分别命名为HqL1、HqL2、HqL3、HqL4、HqL5、HqL6、HqL7、HqL8、HqL9、HqL10、HqL11。测序分析表明,其中的6个为新基因。分析发现HqL7、HqL8、HqL9和HqL11具有较高的研究价值。 展开更多
关键词 青海血蜱 幼蜱 CDNA表达文库 免疫学筛选
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日本血吸虫童虫文库免疫筛选及其高丰度表达膜蛋白初步鉴定 被引量：4
14
作者 朱绍春 赵志荣 +2 位作者 雷黎 张林杰 沈际佳 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期106-110,共5页
目的获得新的可能具有诊断意义的血吸虫蛋白分子并对其鉴定。方法免疫学方法筛选日本血吸虫童虫cDNA文库,对获得的阳性克隆进行测序分析,设计引物体外扩增目的蛋白基因,将其亚克隆入原核表达载体pET28a中,并转化大肠埃希菌BL21,进行诱... 目的获得新的可能具有诊断意义的血吸虫蛋白分子并对其鉴定。方法免疫学方法筛选日本血吸虫童虫cDNA文库,对获得的阳性克隆进行测序分析,设计引物体外扩增目的蛋白基因,将其亚克隆入原核表达载体pET28a中,并转化大肠埃希菌BL21,进行诱导表达,最后用Westernblotting鉴定。结果获得34个阳性克隆,选择其中24个进行测序,其中13个是日本血吸虫相对分子质量(Mr)为22600膜相关蛋白(Sj22.6)基因。Sj22.6基因在体外被成功扩增,并被亚克隆入pET28a中进行表达。WesternBlotting结果显示,菌体表达的条带可以被感染兔血清以及血吸虫患者血清识别。结论Sj22.6膜相关蛋白基因在童虫cDNA文库中可以被高频率筛出,融合蛋白Sj22.6成功地在BL21中表达并具有免疫反应性。 展开更多
关键词 日本血吸虫 童虫 CDNA文库 免疫筛选 sj22.6
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旋毛虫3日龄成虫cDNA文库的免疫筛选 被引量：5
15
作者 张亚兰 付宝权 +6 位作者 刘明远 原丽红 吴秀萍 李莲瑞 卢强 陈启军 P.Boireau 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期355-357,共3页
以旋毛虫感染猪血清为抗体探针 ,对旋毛虫 3日龄成虫 c DNA文库进行免疫筛选 ,将获得的阳性克隆进行测序 ,用分子生物学软件对所得 c DNA序列进行序列分析。结果从 4× 10 5个重组噬菌体中共获得 33个阳性克隆。序列分析结果显示 :... 以旋毛虫感染猪血清为抗体探针 ,对旋毛虫 3日龄成虫 c DNA文库进行免疫筛选 ,将获得的阳性克隆进行测序 ,用分子生物学软件对所得 c DNA序列进行序列分析。结果从 4× 10 5个重组噬菌体中共获得 33个阳性克隆。序列分析结果显示 :共发现新 c DNA序列 16个 ,已知 c DNA序列 4个。其中阳性克隆 Zh8,9,10 ,12 ,13,14 ,2 0 ,2 6 ,2 8,2 9,36 ,5 4 ,6 8,70编码丝氨酸蛋白酶。通过免疫学筛选直接获得了具有免疫反应原性的阳性 c DNA克隆 。 展开更多
关键词 旋毛虫 成虫 CDNA文库 免疫筛选 猪血清
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青海血蜱cDNA表达文库的免疫学筛选和阳性克隆的鉴定 被引量：5
16
作者 高金亮 罗建勋 +5 位作者 樊瑞泉 魏永红 李文卉 任巧云 关贵全 殷宏 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期631-633,共3页
为获得抗青海血蜱免疫原基因,用兔抗青海血蜱差异蛋白阳性血清和兔抗青海血蜱唾液蛋白阳性血清对青海血蜱cDNA表达文库进行了免疫学筛选,经过初筛和复筛共获得58个阳性信号。用所得阳性噬菌体转染宿主菌BM25.8使之自动亚克隆为重组质粒... 为获得抗青海血蜱免疫原基因,用兔抗青海血蜱差异蛋白阳性血清和兔抗青海血蜱唾液蛋白阳性血清对青海血蜱cDNA表达文库进行了免疫学筛选,经过初筛和复筛共获得58个阳性信号。用所得阳性噬菌体转染宿主菌BM25.8使之自动亚克隆为重组质粒,用此亚克隆质粒转化宿主菌JM109并从中提取重组质粒进行PCR、酶切和测序分析。序列分析表明:共获得新cDNA序列21个。将前5个cDNA登录GenBank/ncbi,获取登录号。所获阳性克隆为青海血蜱保护性抗原的筛选奠定了基础。 展开更多
关键词 青海血蜱 CDNA表达文库 免疫学筛选
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日本血吸虫新抗原基因的筛选、克隆、表达和免疫效果研究 被引量：7
17
作者 陈利玉 易新元 +2 位作者 曾宪芳 蔡春 L.McREYNOLDS 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第4期331-337,共7页
为了寻找日本血吸虫(Schistosomajaponicum,Sj) 新的疫苗候选基因并进行免疫效果研究,用Sj雌虫抗原免疫家兔制备血清,对Sj成虫cDNA文库进行免疫筛选,将获得的新基因(命名为Sj-F1,GenBank登录号为AY261995) 克隆入原核表达载体pTWIN1和... 为了寻找日本血吸虫(Schistosomajaponicum,Sj) 新的疫苗候选基因并进行免疫效果研究,用Sj雌虫抗原免疫家兔制备血清,对Sj成虫cDNA文库进行免疫筛选,将获得的新基因(命名为Sj-F1,GenBank登录号为AY261995) 克隆入原核表达载体pTWIN1和真核表达载体pcDNA3,经PCR、限制性酶切筛选和鉴定阳性重组子. 将pTWIN1/Sj-F1质粒转化大肠杆菌ER2566,在低温和低IPTG浓度下诱导表达可溶性重组融合蛋白(rSj-F1/intein2),并经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹(Western blot)分析鉴定. 将pcDNA3/Sj-F1质粒转化大肠杆菌ER2502,大量制备DNA疫苗. 用重组融合蛋白和DNA疫苗免疫小鼠,末次免疫后2周用Sj尾蚴进行攻击感染. 感染后42天剖杀冲虫,计算减虫率和减卵率. 感染前采血用ELISA法检测抗体. 免疫保护效果测定显示:重组蛋白疫苗以FCA作佐剂经皮下免疫和以壳聚糖作佐剂经粘膜免疫分别获得了28.07%、24.69%的减虫率和48.30%、46.38%的减卵率;DNA疫苗(pcDNA3/Sj-F1)单独免疫获得了18.47%的减虫率和35.06%的减卵率;用DNA疫苗启动免疫后用重组蛋白疫苗经皮下加强免疫,减虫率和减卵率分别提高到了40.42%和56.17%;用DNA疫苗启动免疫后用重组蛋白疫苗经黏膜加强免疫,减虫率和减卵率增高更明显,分别提高到了42.38%和62. 展开更多
关键词 日本血吸虫 免疫筛选 雌虫 Sj-F1 免疫
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旋毛虫肌幼虫cDNA文库的免疫筛选及初步分析 被引量：6
18
作者 付宝权 原丽红 +6 位作者 张亚兰 吴秀萍 李莲瑞 卢强 刘明远 陈启军 P.Boireau 《吉林农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期323-325,333,共4页
用旋毛虫感染猪血清对旋毛虫肌幼虫cDNA文库进行了免疫筛选,从1 6×105个重组噬菌体中筛选出21个阳性克隆。阳性克隆的测序结果表明:有9个克隆为未曾报道过的新基因;有9个克隆不含有开放阅读框架(ORF),与旋毛虫线粒体DNA同源,编码... 用旋毛虫感染猪血清对旋毛虫肌幼虫cDNA文库进行了免疫筛选,从1 6×105个重组噬菌体中筛选出21个阳性克隆。阳性克隆的测序结果表明:有9个克隆为未曾报道过的新基因;有9个克隆不含有开放阅读框架(ORF),与旋毛虫线粒体DNA同源,编码核糖体大亚基RNA;3个克隆为旋毛虫已知基因,其中克隆ML12,34与Serineproteaseinhibitor[Trichinellaspiralis](AAF63473)同源性为99%,克隆ML42与HypotheticalOFR17 20[Trichinellaspiralis](AAB48489)同源性为99%,与21kDExcretory secretoryprotein[Trichinellapseudospiralis](AAF79206)同源性为90%,这为进一步研究基因重组抗原奠定了基础。 展开更多
关键词 旋毛虫 肌幼虫 CDNA文库 免疫筛选
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用日本血吸虫病化疗后再感染人血清对成虫cDNA文库的初步筛选 被引量：4
19
作者 王荣芝 吴海玮 +3 位作者 陈淑贞 张兆松 苏川 吴观陵 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2000年第2期67-69,共3页
为了获取日本血吸虫特异的cDNA克隆，用日本血吸虫病流行区化疗后再感染人群血清筛选构建于表达载体λt11的日本血吸虫成虫cDNA文库，再以多聚酶链反应（PCR）技术鉴定免疫筛选的阳性cDNA克隆。结果对cDNA表达库中约8．6×104个噬... 为了获取日本血吸虫特异的cDNA克隆，用日本血吸虫病流行区化疗后再感染人群血清筛选构建于表达载体λt11的日本血吸虫成虫cDNA文库，再以多聚酶链反应（PCR）技术鉴定免疫筛选的阳性cDNA克隆。结果对cDNA表达库中约8．6×104个噬菌斑进行了筛选，初筛时共挑出59个可能的阳性斑，经两次复筛后，有11个噬菌斑仍呈阳性反应。以阳性噬菌斑DNA为模板，经PCR均扩增出一定大小的片段，从564bp到740bp不等。 展开更多
关键词 日本血吸虫病 CDNA 克隆 免疫筛选
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卫氏并殖吸虫成虫cDNA文库的单抗筛选 被引量：5
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作者 凌家俭 章子豪 张耀娟 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2002年第3期48-50,53,共4页
目的　从卫氏并殖吸虫成虫cDNA文库中筛选并鉴定出可用于免疫诊断和免疫预防的基因克隆。方法　采用预吸收的抗肺吸虫成虫单克隆抗体筛选多次后得到 5个阳性克隆 ,经PCR扩增后测定其插入片段的大小。用辅助噬菌体做体内剪切 ,以抗生素... 目的　从卫氏并殖吸虫成虫cDNA文库中筛选并鉴定出可用于免疫诊断和免疫预防的基因克隆。方法　采用预吸收的抗肺吸虫成虫单克隆抗体筛选多次后得到 5个阳性克隆 ,经PCR扩增后测定其插入片段的大小。用辅助噬菌体做体内剪切 ,以抗生素平板筛选含重组质粒的阳性菌落。其中 3个克隆测定其DNA序列 ,用BLAST软件对所得DNA序列进行同源性比较。结果　得到 1,2 ,4三个不同阳性克隆 ,其长度分别为 1783bp、397bp和 1132bp ,分别与卫氏并殖吸虫卵黄铁蛋白 (P wyolkferritin)基因、鞘脂激活蛋白A(DictyosterliumdiscoideumsaposinA)基因和曼氏血吸虫主要卵抗原 (Smmajoreggantigen -P4 0 )基因同源。 结论　本研究首次报道用抗肺吸虫成虫单克隆抗体筛选卫氏并殖吸虫成虫cDNA文库 ,所获克隆1、2。 展开更多
关键词 卫氏肺吸虫 CDNA文库 免疫学筛选 单克隆抗体 卫氏并殖吸虫病
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