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GⅡ-4型诺如病毒体外结合唾液HBGAs受体的检测与分析 被引量:8
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作者 张绪富 戴迎春 +2 位作者 夏仁飞 周迎春 吕志平 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期560-562,共3页
目的建立诺如病毒(Norovirus,NoV)结合唾液HBGAs受体的实验方法、验证2株GⅡ-4型NoV毒株与我国人群唾液HBGAs的结合方式。方法收集健康志愿者唾液标本,采用凝集抑制实验法检测唾液中HBGAs血型物质,用EIA法检测NoV VLPs、阳性毒株与HBGA... 目的建立诺如病毒(Norovirus,NoV)结合唾液HBGAs受体的实验方法、验证2株GⅡ-4型NoV毒株与我国人群唾液HBGAs的结合方式。方法收集健康志愿者唾液标本,采用凝集抑制实验法检测唾液中HBGAs血型物质,用EIA法检测NoV VLPs、阳性毒株与HBGAs的结合情况。结果63份标本检出O型21例(占33.3%),B型14例(占22.2%),A型和非分泌型各13例(分别占20.6%),AB型2例(占3.2%)。rVA387、2株GⅡ-4型毒株均能结合分泌型,与非分泌型唾液不反应。结论本研究成功建立了NoV结合唾液HBGAs受体的实验方法,通过NoV毒株与HBGAs相互作用的研究有助于了解NoV的宿主适应特性及病毒进化和流行规律;同时为筛选防治我国人群的抗NoV药物提供技术平台。 展开更多
关键词 诺如病毒 HBgAs受体 g-4 结合方式
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GⅡ.4 Sydney[P31]型诺如病毒GZ19株进化及其受体结合特征分析
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作者 王金冬 马亚林 段招军 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期531-536,544,共7页
目的分析我国GⅡ.4型诺如病毒(norovirus,NoV)GZ19株的进化特征,并明确其结合组织血型抗原(histoblood group antigens,HBGAs)受体的能力和方式。方法根据GZ19株中的ORF2区序列,构建进化树,并分析其在HBGAs结合位点(HBGA binding sites,... 目的分析我国GⅡ.4型诺如病毒(norovirus,NoV)GZ19株的进化特征,并明确其结合组织血型抗原(histoblood group antigens,HBGAs)受体的能力和方式。方法根据GZ19株中的ORF2区序列,构建进化树,并分析其在HBGAs结合位点(HBGA binding sites,HBSs)和关键阻断表位的氨基酸序列。采用原核表达系统表达P颗粒并进行纯化,获得的蛋白经SDS-PAGE和间接ELISA法鉴定后,采用唾液结合试验和寡糖结合试验分析P颗粒的糖结合特征。结果GZ19株属于GⅡ.4 Sydney[P31]谱系,其受体结合位点和阻断表位的氨基酸序列相对保守,与近5年其他GⅡ.4Sydney[P31]毒株具有较高的同源性,而与GⅡ.4 Sydney 2012原型株和GⅡ.4 Sydney[P16]株的差异较大。P颗粒仅与A、B、O、AB分泌型唾液和H-di寡糖结合。结论GZ19株代表目前GⅡ.4 Sydney[P31]NoV的进化方向,P颗粒的成功表达及其与HBGAs受体的结合特征分析,为研究我国GⅡ.4 NoVs的流行进化规律及疫苗开发奠定了基础。 展开更多
关键词 诺如病毒 g.4 P颗粒 人类组织血抗原
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实时逆转录环介导等温扩增检测GⅡ.4型诺如病毒的研究 被引量:3
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作者 赵剑虹 张登城 +3 位作者 高艳 焦洋 张士尧 李书明 《中国卫生检验杂志》 CAS 2018年第8期945-948,960,共5页
目的建立快速检测诺如病毒GⅡ.4型的实时逆转录环介导等温扩增方法(RT-LAMP)。方法选取GⅡ.4型诺如病毒的ORF1与ORF2接头处较为保守的基因序列设计RT-LAMP引物并进行筛选,优化反应条件,分析方法的灵敏度、分析特异性和稳定性,采用优化... 目的建立快速检测诺如病毒GⅡ.4型的实时逆转录环介导等温扩增方法(RT-LAMP)。方法选取GⅡ.4型诺如病毒的ORF1与ORF2接头处较为保守的基因序列设计RT-LAMP引物并进行筛选,优化反应条件,分析方法的灵敏度、分析特异性和稳定性,采用优化的方法检测40例临床病毒性腹泻样本,结果与实时荧光逆转录PCR(RT-PCR)比较。结果该研究建立的诺如病毒GⅡ.4型RT-LAMP的最佳反应温度为65℃;该方法检测GⅠ型和GⅡ非诺如病毒4型、轮状病毒、札如病毒、星状病毒、腺病毒、CA16、EV71、CA6和CA10等常见10种其他腹泻病毒的结果为阴性;该方法对诺如病毒GⅡ.4型的检测能力与实时荧光RT-PCR相当;与实时荧光RT-PCR相比,该研究建立的RT-LAMP法检测诺如病毒GⅡ.4型阳性样本和诺如病毒阴性样本的符合率为100%。结论该研究建立的诺如病毒GⅡ.4型RT-LAMP快速检测方法灵敏度高,特异性好,为建立诺如病毒其他基因型的RT-LAMP检测方法奠定了基础。 展开更多
关键词 诺如病毒g.4 实时逆转录环介导等温扩增 检测
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基于中和表位的GⅡ.4型重组诺如病毒VP1蛋白病毒样颗粒抗原含量检测方法的建立及验证 被引量:1
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作者 唐芳 韩子泊 +5 位作者 侯俊伟 杜丽芳 栗子谦 靳玉琴 雷泽华 李启明 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2019年第11期1257-1262,共6页
目的建立基于中和表位的GⅡ.4型重组诺如病毒(Norovirus,NoV)VP1蛋白病毒样颗粒(virus-like particle,VLP)抗原含量检测方法,并进行验证,以用于重组NoV疫苗质量控制。方法应用ELISA和HBGA-VLP阻断试验筛选中和性单克隆抗体,并筛选配对抗... 目的建立基于中和表位的GⅡ.4型重组诺如病毒(Norovirus,NoV)VP1蛋白病毒样颗粒(virus-like particle,VLP)抗原含量检测方法,并进行验证,以用于重组NoV疫苗质量控制。方法应用ELISA和HBGA-VLP阻断试验筛选中和性单克隆抗体,并筛选配对抗体,分别作为包被抗体和检测抗体,建立GⅡ.4型重组NoV VP1蛋白VLP双抗夹心ELISA抗原定量检测方法。确定方法的线性检测范围,并对方法的专属性、准确性和精密性进行验证。结果27株GⅡ.4 VLP特异性ELISA检测阳性的杂交瘤细胞克隆中,有12株GⅡ.4型阻断抗体检测呈阳性,选择具有GⅡ.4型阻断活性的特异性单抗2H7-C5和2E6-B3作为双抗夹心抗体对,用于建立GⅡ.4型重组NoV VP1蛋白VLP双抗夹心ELISA抗原定量检测方法。该方法的线性测定范围为15.63~250 ng/mL,标准曲线R2均>0.98;准确性验证的加标回收率在72.23%~134.03%之间;重复性验证的相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)为7.06%,中间精密性验证的RSD分别为8.04%和9.14%。结论建立了基于中和表位的GⅡ.4型重组NoV VP1蛋白VLP抗原含量检测方法,该方法专属性、准确性、精密性良好,可用于GⅡ.4型重组NoV VP1蛋白VLP定量检测,为GⅡ.4抗原相关疫苗研发中质量控制和检定提供了技术支持。 展开更多
关键词 g.4诺如病毒 VP1蛋白 病毒样颗粒 中和表位 酶联免疫吸附测定
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贵州省2011年急性胃肠炎诺如病毒的哨点监测及其基因特征分析 被引量:1
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作者 阎岩 吴悦 +2 位作者 郭军 田克诚 王定明 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期51-55,共5页
为了解贵州省2011年诺如病毒的基因型,监测了2011年5月至12月于贵州省人民医院就诊的急性胃肠炎病例,收集粪便标本,采用荧光定量逆转录-聚合酶链反应(Real-time RT-PCR)初步鉴定,并对阳性株的VP1基因区克隆及测序。检测标本70份,GⅠ型... 为了解贵州省2011年诺如病毒的基因型,监测了2011年5月至12月于贵州省人民医院就诊的急性胃肠炎病例,收集粪便标本,采用荧光定量逆转录-聚合酶链反应(Real-time RT-PCR)初步鉴定,并对阳性株的VP1基因区克隆及测序。检测标本70份,GⅠ型诺如病毒阳性1株,阳性率1.43%,GⅡ型诺如病毒阳性34株,阳性率48.57%,获得7份GⅡ型诺如病毒VP1基因序列,3株为GⅡ.4亚型,为新型变异株(GⅡ4 2011),与GⅡ4 2006b变异株的亲缘关系最近,有1个氨基酸位发生了回复突变;4株为GⅡ.3亚型,分为2个基因簇,1簇与2008~2009年韩国株(HM635118)及上海株(GU991355)的亲缘关系最近,1簇与2010年日本株(AB629943)及2007年印度株(EU921389)等的亲缘关系最近,有4个氨基酸位点易发生回复突变。 展开更多
关键词 诺如病毒 g4 g3 VP1基因 贵州
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