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整合法预测HBV相关抗原的HLA-A* 0201限制性结合肽 被引量：2
1
作者 王书峰 尚小云 +1 位作者 巩沅鑫 吴玉章 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期465-468,共4页
目的预测HBV的相关抗原HBsAg、HBcAg、DNA polymerase新的HLA-A*0201限制性结合肽。方法选取SYFPEITHI、BIMAS、SVMHC、IEDB、EpiJen预测工具以及整合法预测抗原对应蛋白序列P03146,P03138,P03156的HLA-A*0201限制性结合肽,并与现有表... 目的预测HBV的相关抗原HBsAg、HBcAg、DNA polymerase新的HLA-A*0201限制性结合肽。方法选取SYFPEITHI、BIMAS、SVMHC、IEDB、EpiJen预测工具以及整合法预测抗原对应蛋白序列P03146,P03138,P03156的HLA-A*0201限制性结合肽,并与现有表位数据库中的结合肽比较。结果整合法与单个预测算法相比提高了预测的灵敏度和特异性,对3种抗原的预测准确性均有提高,MR(misclassification rate)值分别降为1.14%、3.41%、1.46%;利用此方法发现3种抗原尚未得到实验验证的HLA-A*0201结合肽,分别为,HBcAg:ELMTLATWV(64-72)、LMTLATWVGV(65-74);HBsAg:LMT-LATWVGV(246-254)、IIFLFILLL(244-252)、FLFILLLCLI(246-255)、SLYSILSPFL(367-375)以及LLCLIFLLVL(251-260);DNA polymerase:SLFTAVTNFL(513-522)、GLLGFAAPFT(554-563);在HBsAg蛋白序列中发现了31个氨基酸的免疫热点区域FIIFLFILLLCLIFLLVLLDYQGMLPVCPLI(243-273)。结论整合法比单个预测算法性能更好,能够更准确地预测抗原的HLA限制性结合肽,采用该方法所发现的9条可能表位和1个免疫热点区域为后续HBV新表位的鉴定及其功能研究提供了有价值的线索。 展开更多
关键词 MHC HLA-A* 0201 预测算法 整合法 结合肽
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结核分枝杆菌esxN特异性细胞表位的鉴定及其在肺结核诊断中的应用 被引量：1
2
作者 徐志刚 李德周 +3 位作者 陈新宇 段志良 毛嘉媛 文金生 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第12期1686-1691,共6页
目的鉴定结核分枝杆菌早期分泌靶向抗原6(ESAT-6)样蛋白esxN特异性HLA-A~*0201限制性细胞毒性T细胞(CTL)表位并用于肺结核诊断。方法采用SYFPEITHI软件预测esxN中受HLA-A~*0201限制性的CTL表位并合成候选表位;采用主要组织相容性复合体(... 目的鉴定结核分枝杆菌早期分泌靶向抗原6(ESAT-6)样蛋白esxN特异性HLA-A~*0201限制性细胞毒性T细胞(CTL)表位并用于肺结核诊断。方法采用SYFPEITHI软件预测esxN中受HLA-A~*0201限制性的CTL表位并合成候选表位;采用主要组织相容性复合体(MHC)-肽复合物稳定性实验检测候选表位与HLA-A~*0201分子结合力;采用酶联免疫斑点实验(ELISPOT)研究候选表位在HLA-A~*0201转基因小鼠中的免疫原性;基于鉴定的CTL表位、ESAT-6和培养滤液蛋白10(CFP-10),采用ELISPOT检测肺结核患者体内表位及蛋白特异性CTL的水平。结果 6条候选CTL表位中,esxN_(15-24)(AMIRAQAASL)和esxN_(48-57)(VACQEFITQL)与HLA-A~*0201分子有较高结合力;候选表位免疫HLA-A~*0201转基因小鼠,esxN_(48-57)诱导产生可分泌γ干扰素(IFN-γ)的T细胞反应;在HLA-A~*0201阳性肺结核患者中检测到esxN_(15-24)、esxN_(48-57)、ESAT-6、CFP-10特异性分泌IFN-γ的T细胞;esxN_(15-24)、esxN_(48-57)诊断肺结核的敏感率与ESAT-6、CFP-10相近。结论从结核分枝杆菌esxN中鉴定出两条HLA-A~*0201限制性CTL表位,其有望用于辅助肺结核病的诊断。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 ESAT-6样蛋白esxN HLA-A~＊ 0201 表位
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为0201时代升级——新兴的高速芯片贴装解决方案
3
作者 斯科特.杰瑞特 《电子工业专用设备》 2006年第6期47-51,共5页
许多SMT行业传媒正大力宣传01005元器件,人们留下了这样一种印象,即0201s贴装已经过时。然而,尽管大多数贴装设备厂商把0201列为已经实现的功能,但如果进一步地探究,您就会发现这其中还存在许多限制。这些限制更多地是在面临许多实际状... 许多SMT行业传媒正大力宣传01005元器件,人们留下了这样一种印象,即0201s贴装已经过时。然而,尽管大多数贴装设备厂商把0201列为已经实现的功能,但如果进一步地探究,您就会发现这其中还存在许多限制。这些限制更多地是在面临许多实际状况时才会显现,而不会一开始就一览无遗。 展开更多
关键词 0201s 线性电动机技术 贴装头技术
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探讨0201元件运用中的几个问题
4
作者 向希龙 《电子电路与贴装》 2008年第2期58-59,65,共3页
随着电子组装行业的发展，电子产品提供更多的功能的同时，体积也在不断的缩小，更小的元件与更窄的间距为电路板装配提出了新的挑战，特别是开始普及的0201元件，0201元件在体检上小很多，加工工艺要求更加严格，任何细小的瑕疵都将引... 随着电子组装行业的发展，电子产品提供更多的功能的同时，体积也在不断的缩小，更小的元件与更窄的间距为电路板装配提出了新的挑战，特别是开始普及的0201元件，0201元件在体检上小很多，加工工艺要求更加严格，任何细小的瑕疵都将引起品质上的缺陷。 展开更多
关键词 0201 电子组装 SMT 焊接技术
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调心方有效部位TX0201对类AD模型大鼠学习记忆和细胞凋亡相关基因的影响 被引量：12
5
作者 郁志华 王东建 林水淼 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期839-842,共4页
目的:观察调心方有效部位TX0201对Aβ1-40双侧杏仁核注射所致的类阿尔茨海默病(AD)大鼠模型学习记忆和皮层、海马细胞凋亡相关基因的影响。方法:应用β-淀粉样蛋白1-40片段(Aβ1-40)注射入大鼠双侧杏仁核建立类AD的动物模型;实验设正常... 目的:观察调心方有效部位TX0201对Aβ1-40双侧杏仁核注射所致的类阿尔茨海默病(AD)大鼠模型学习记忆和皮层、海马细胞凋亡相关基因的影响。方法:应用β-淀粉样蛋白1-40片段(Aβ1-40)注射入大鼠双侧杏仁核建立类AD的动物模型;实验设正常对照组、类AD模型组、TX0201组、调心方组、阳性药安理申组,均采用灌胃给药20 d;用Morris水迷宫法测试大鼠学习记忆能力;RT-PCR法检测大鼠脑部皮层和海马的细胞凋亡相关基因Bax mRNA,Bcl-2 mRNA。结果:TX0201、调心方和安理申均能够改善类AD大鼠的学习记忆能力,调心方能全面改善模型鼠脑部皮层和海马异常表达的Bax mRNA和Bcl-2 mRNA,TX0201可改善模型鼠皮层和海马异常表达的BaxmRNA,安理申组改善模型鼠皮层异常表达的Bax mRNA。结论:TX0201可通过改善模型鼠脑内的Bax mRNA来抑制细胞凋亡,从而改善模型鼠的学习记忆。 展开更多
关键词 阿尔茨海默病 Β-淀粉样蛋白 TX0201 学习记忆
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烷基糖苷对赤潮生物的抑制与灭杀作用的实验 被引量：11
6
作者 龚良玉 王修林 +3 位作者 李雁宾 梁生康 韩秀荣 祝陈坚 《海洋环境科学》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期1-4,共4页
以赤潮生物具齿原甲藻0201 01(Prorocentrumdentatum0201 01)和赤潮异湾藻(Heterosigmaakashiwo)为材料,研究了烷基糖苷对不同起始密度藻细胞的抑制和灭杀作用。结果表明:烷基糖苷在一定浓度范围内对这两种赤潮生物的生长有明显抑制作用... 以赤潮生物具齿原甲藻0201 01(Prorocentrumdentatum0201 01)和赤潮异湾藻(Heterosigmaakashiwo)为材料,研究了烷基糖苷对不同起始密度藻细胞的抑制和灭杀作用。结果表明:烷基糖苷在一定浓度范围内对这两种赤潮生物的生长有明显抑制作用,进一步增大烷基糖苷的用量,可以使藻细胞丧失运动性,细胞破裂乃至溶解消失。可见,烷基糖苷作为除藻剂在赤潮治理中具有一定应用前景。 展开更多
关键词 具齿原甲藻 赤潮异湾藻 烷基糖苷 抑制 灭杀
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人Ⅱ型胶原的HLA-A~＊0201限制性CTL表位的预测及初步鉴定 被引量：6
7
作者 陈晓玲 方勇飞 +4 位作者 尚小云 王书峰 高乐女 王莉 吴玉章 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期755-758,763,共5页
目的预测和初步鉴定类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)主要自身抗原Ⅱ型胶原(CollagenⅡ,CⅡ)的HLA-A*0201限制性细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocytes,CTL)表位,为基于CⅡ抗原表位的特异性免疫治疗奠定基础。方法选取BIMAS... 目的预测和初步鉴定类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)主要自身抗原Ⅱ型胶原(CollagenⅡ,CⅡ)的HLA-A*0201限制性细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocytes,CTL)表位,为基于CⅡ抗原表位的特异性免疫治疗奠定基础。方法选取BIMAS、SYFTEPITHI、IEDB、SVMHC、AntiJen预测工具预测该抗原HLA-A*0201限制性结合肽;人工合成待测表位肽,利用T2细胞株通过直接免疫荧光法测定各肽与HLA-A*0201分子的结合力。利用酶联免疫斑点检测(enzyme-linked immunospotassay,ELISPOT)方法检测候选肽刺激关节滑液单个核细胞(synovial fluid mononuclear cell,SFMC)分泌IFN-γ的能力。结果综合BIMAS、SYFTEPITHI、IEDB、SVMHC、AntiJen预测结果筛选出来可能与HLA-A*0201结合的5条肽。MHC亲和力实验表明,在候选的5条肽中,P1261、P1365及P1399具有与HLA-A*0201分子结合的能力,平均荧光强度分别为:1.35、2.53、1.78。ELISPOT试验结果表明,P1365具有刺激SFMC分泌IFN-γ的能力。结论表位预测结果与初步鉴定结果具有一致性,两者联合应用初步认为P1365是HLA-A*0201限制性CTL表位的可能性最大,为下一步表位鉴定及基于人CⅡ抗原表位的特异性免疫治疗奠定理论基础。 展开更多
关键词 HLA-A＊0201 CTL 结合肽 表位 限制性
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调心方有效部位对类AD大鼠脑组织凋亡信号转导分子Caspase-3及凋亡相关基因bcl-2、bax mRNA表达的影响 被引量：8
8
作者 杨戈 林水淼 +6 位作者 赵伟康 金红姝 徐品初 周如倩 郁志华 张钦传 王健 《中国中西医结合杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期147-151,共5页
目的研究调心方有效部位(TX0201)对Aβ2535所致类AD模型大鼠脑组织凋亡相关基因调节作用机制的异同。方法采用双侧杏仁核注射Aβ2535造成类AD大鼠模型,观察大鼠Morris水迷宫空间记忆能力,并分别通过RTPCR和免疫组化方法研究类AD大鼠神... 目的研究调心方有效部位(TX0201)对Aβ2535所致类AD模型大鼠脑组织凋亡相关基因调节作用机制的异同。方法采用双侧杏仁核注射Aβ2535造成类AD大鼠模型,观察大鼠Morris水迷宫空间记忆能力,并分别通过RTPCR和免疫组化方法研究类AD大鼠神经元细胞凋亡相关基因bax、bcl2mRNA,特异的凋亡信号转导分子Caspase3和Aβ阳性神经元变化以及TX0201的影响。结果类AD模型大鼠Morris水迷宫测试出现空间记忆能力下降,App695mRNA表达提高,Caspase3和bax/bcl2上升。TX0201能有效控制以上病理变化。结论TX0201提高模型大鼠定向学习记忆能力,可能通过降低bax/bcl2、下调Caspase3而减轻神经细胞凋亡而发挥作用。提示通过有效调节神经元凋亡相关基因是TX0201的重要作用机制之一。 展开更多
关键词 调心方有效部位 β-淀粉样蛋白 细胞凋亡 β-淀粉样蛋白前体蛋白
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MHCⅠ类分子BF2*0201递呈ALV-J表位结构和递呈机制解析
9
作者 贾玉生 李易霖 +2 位作者 马露露 廖明 代曼曼 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期3132-3142,共11页
MHC B2单倍型鸡对禽白血病病毒感染有较强抗性,这种抗病性可能与被MHC分子递呈的表位刺激活化的T细胞产生的免疫应答有关。本研究拟阐明MHCⅠ类分子BF2*0201递呈ALV-J表位结构和递呈机制。利用凝胶过滤层析筛选出能与MHCⅠ稳定结合的肽... MHC B2单倍型鸡对禽白血病病毒感染有较强抗性,这种抗病性可能与被MHC分子递呈的表位刺激活化的T细胞产生的免疫应答有关。本研究拟阐明MHCⅠ类分子BF2*0201递呈ALV-J表位结构和递呈机制。利用凝胶过滤层析筛选出能与MHCⅠ稳定结合的肽。利用晶体初筛试剂盒在体外培育肽和MHCⅠ的二元复合物晶体,并利用COOT、CCP4和PYMOL等软件对该晶体结构进行解析和分析。在这项研究中,作者发现二个与BF2*0201稳定结合的ALV-J CTL表位FVDFANRLI和SALQAFREV。得到一个优质晶体BF2*0201-SALQAFREV(SV9),其生长条件为1.0 mol·L^(-1)丁二酸(pH 7.0),0.1 mol·L^(-1)HEPES(pH 7.0),1%聚乙二醇单甲醚2000。解析高分辨率(1.72?)的BF2*0201-SV9复合物结构后发现BF2*0201抗原结合槽整体呈现弱负电性。保守的残基多位于抗原结合槽的两端,特异性氨基酸赋予BF2*0201中等大小的抗原结合槽。B、C和F口袋起着较重要的锚定作用,口袋残基和水分子与抗原多肽形成氢键作用,将其固定在抗原结合槽中。SV9表位构象中突出的P4-Gln和P7-Arg残基的构象特征表明该位点有被特异性TCR潜在识别的特性。BF2*0201-SV9复合物晶体结构特征有助于阐明B2单倍型MHCⅠ类分子BF2*0201递呈ALV-J表位的机制,有助于解释B2单倍型鸡对ALV存在抗性的原因,为抗病育种工作奠定理论基础。 展开更多
关键词 MHC BF2*0201 ALV-J 递呈机制 晶体结构
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军用装备0201元件的组装工艺研究
10
作者 邴继兵 巫应刚 +2 位作者 杨伟 黎全英 毛久兵 《电子质量》 2023年第2期63-68,共6页
随着电子产品向小型化、高集成度方向发展,片式元件也在进一步地小型化。作为这一趋势的结果,0201无源元件成为了无数电子产品选择的解决方案,因为它在产品小型化与功能方面提供了极大的改善。为了满足军工电子产品小型化需求,开展了020... 随着电子产品向小型化、高集成度方向发展,片式元件也在进一步地小型化。作为这一趋势的结果,0201无源元件成为了无数电子产品选择的解决方案,因为它在产品小型化与功能方面提供了极大的改善。为了满足军工电子产品小型化需求,开展了0201封装电阻、电容焊接工艺技术研究。对0201封装元器件焊接合格率的影响因素如焊盘设计、钢网设计、回流焊接参数和焊膏选择等展开了试验探索,运用交叉验证方法,对设计样件进行了工艺方案验证和数据分析,最后得出了0201封装元器件的最佳焊接工艺。 展开更多
关键词 0201元件 组装工艺 电阻 电容 焊盘设计 钢网设计 回流焊接 交叉验证
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调心方有效部位TX0201对类AD模型大鼠脑内APP mRNA与Caspase-3表达的影响 被引量：4
11
作者 王东建 林水淼 郁志华 《上海中医药大学学报》 CAS 2010年第4期51-54,共4页
目的:观察调心方有效部位TX0201对Aβ1-40双侧杏仁核注射所致的类阿尔茨海默病(AD)模型大鼠脑内APP mRNA、Caspase-3表达的影响。方法:应用β淀粉样蛋白1-40片段(Aβ1-40)注射入大鼠双侧杏仁核建立类AD的动物模型。实验设正常对照组、... 目的:观察调心方有效部位TX0201对Aβ1-40双侧杏仁核注射所致的类阿尔茨海默病(AD)模型大鼠脑内APP mRNA、Caspase-3表达的影响。方法:应用β淀粉样蛋白1-40片段(Aβ1-40)注射入大鼠双侧杏仁核建立类AD的动物模型。实验设正常对照组、类AD模型组、TX0201组、调心方组、安理申组,均采用灌胃给药20 d;分别用RT-PCR法、免疫组化法检测大鼠脑部皮层和海马的APP mRNA、Caspase-3表达。结果:TX0201和调心方均能明显降低大鼠皮层、海马APP(MPI)mRNA和APP(KPI)mRNA的表达。模型大鼠大脑海马CA2区和皮层Caspase-3蛋白阳性细胞表达明显增多,调心方和TX0201均能明显调低Caspase-3蛋白阳性细胞的表达。结论:TX0201可能通过降低皮层、海马部位APP mRNA的表达,下调Caspase-3,减轻神经细胞凋亡,从而发挥保护神经元作用。 展开更多
关键词 调心方 有效部位(TX0201) 阿尔茨海默病 Β-淀粉样前体蛋白 半胱氨酸蛋白酶-3
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sHLA-A*020-1抗原肽复合物的构建 被引量：3
12
作者 陈浩 吴雄文 +4 位作者 梁智辉 翁秀芳 韩军艳 黄亚非 龚非力 《现代免疫学》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期232-234,共3页
以原核表达的sHLA A 0 2 0 1 BSP为重链 ,β2 m为轻链 ,与人工合成的EBV抗原肽LMP2A (4 2 6 4 34、NH2 CLGGLLTMV COOH )利用稀释法进行共折叠复性 ,形成可生物素化的可溶性HLA A 0 2 0 1抗原肽复合物。并利用仅与天然构象HLAI类分... 以原核表达的sHLA A 0 2 0 1 BSP为重链 ,β2 m为轻链 ,与人工合成的EBV抗原肽LMP2A (4 2 6 4 34、NH2 CLGGLLTMV COOH )利用稀释法进行共折叠复性 ,形成可生物素化的可溶性HLA A 0 2 0 1抗原肽复合物。并利用仅与天然构象HLAI类分子结合的单抗W6 / 32 ,通过Dot ELISA和Westernblot对折叠产物的构象进行鉴定 ,证实复性后成功获得了天然构象的sHLA A 0 2 0 1 抗原肽复合物。为进一步组装可溶性HLA/抗原肽四聚体以及制备人工抗原提呈细胞奠定基础。 展开更多
关键词 sHLA-A＊0201-抗原肽复合物 稀释复性 四聚体
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半导体激光治疗仪辅助治疗三高人群的临床效果观察
13
作者 林洁琼 尹知清 《中文科技期刊数据库（引文版）医药卫生》 2024年第4期0063-0066,共4页
对比分析型号GD10-D的半导体激光治疗仪和型号ZD-SG0201-YN的半导体激光治疗仪对高脂血症、高血压、高粘血症的辅助治疗的临床效果。方法 在本院收集了160例于2020年12月~2023年1月在我院接受治疗的心脑血管疾病的患者为研究对象进行前... 对比分析型号GD10-D的半导体激光治疗仪和型号ZD-SG0201-YN的半导体激光治疗仪对高脂血症、高血压、高粘血症的辅助治疗的临床效果。方法 在本院收集了160例于2020年12月~2023年1月在我院接受治疗的心脑血管疾病的患者为研究对象进行前瞻性随机对照研究,所有入选患者按随机数字表法以相同比例随机分组,两组患者均接受半导体激光治疗仪辅助治疗,其中80例对照组患者治疗应用的仪器为型号为ZD-SG0201-YN的半导体激光治疗仪,80例研究组患者应用型号GD10-D的半导体激光治疗仪。收集并比较两组患者血脂、纤维蛋白原、血液流变学指标及血栓素B2(TXB2)、6-酮前列腺素F1α(6-K-PGF1α)水平变化情况,分析两组患者接受两种半导体激光照射治疗临床症状改善情况。结果 研究组患者治疗纤维蛋白原、血液流变学指标、血脂及TXB2、6-K-PGF1α水平变化与对照组患者基本一致,两组患者临床症状改善效果也基本一致,并发症发生率也一致,比较均无统计学差异(P>0.05)。结论:ZD-SG0201-YN半导体激光治疗仪和GD10-D半导体激光治疗仪都能用于高脂血症、高血压、高粘血症的辅助治疗,有利于缓解高脂血症、高血压、高粘血症引起的临床症状,临床效果和安全性基本上一致。 展开更多
关键词 GD10-D型半导体激光治疗仪 ZD-SG0201-YN型半导体激光治疗仪 高粘血症 临床效果
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大蒜素诱导人胆管癌FRH-0201细胞凋亡的研究 被引量：2
14
作者 丛超 陈宏坤 +3 位作者 孙晋军 张强 张冠中 吴小鹏 《河北医学》 CAS 2008年第6期631-633,共3页
目的:探讨大蒜素对人胆管癌FRH-0201细胞凋亡的影响。方法:MTT法检测大蒜素对FRH-0201细胞生长的影响;光镜和电镜观察FRH-0201细胞形态变化;采用凝胶电泳法、TUNEL法和FCM检测FRH-0201细胞凋亡情况。结果:大蒜素能明显抑制FRH-0201细胞... 目的:探讨大蒜素对人胆管癌FRH-0201细胞凋亡的影响。方法:MTT法检测大蒜素对FRH-0201细胞生长的影响;光镜和电镜观察FRH-0201细胞形态变化;采用凝胶电泳法、TUNEL法和FCM检测FRH-0201细胞凋亡情况。结果:大蒜素能明显抑制FRH-0201细胞的生长,与大蒜素的浓度有关;光镜和电镜观察到FRH-0201细胞发生凋亡;凝胶电泳示实验组DNA梯带(DNA lad-der)形成;TUNEL检测实验组细胞与对照组细胞凋亡记数比较有显著差异(P<0.05);FCM显示,实验组可发现明显的凋亡峰,而对照组则无凋亡峰出现。结论:大蒜素在体外可诱导胆管癌细胞凋亡。 展开更多
关键词 大蒜素 细胞凋亡 胆管癌 FRH-0201
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鼠胰岛素B链HLA-A*0201限制性CTL表位拮抗型改造肽的设计与鉴定 被引量：3
15
作者 舒驰 王书峰 +4 位作者 陈晓玲 傅晓岚 姜曼 王莉 吴玉章 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第12期1017-1021,共5页
目的设计并鉴定具有负调致病细胞毒性T细胞(cytotoxic Tlymphocyte,CTL)免疫应答功能的改造肽配体(al-tered peptide ligand,APL),为基于胰岛素自身抗原的I型糖尿病特异性免疫治疗奠定基础。方法利用InSilico技术模拟构建TCR-pMHC(TCR-H... 目的设计并鉴定具有负调致病细胞毒性T细胞(cytotoxic Tlymphocyte,CTL)免疫应答功能的改造肽配体(al-tered peptide ligand,APL),为基于胰岛素自身抗原的I型糖尿病特异性免疫治疗奠定基础。方法利用InSilico技术模拟构建TCR-pMHC(TCR-HLA-A*0201-mInsB5-14)复合物三维结构,根据结构选择改造位点P6;通过保守/不保守单个氨基酸虚拟替换得到若干候选APL;通过自由能变化计算、相对亲和力检测、细胞因子分泌水平检测等体外功能实验,初步鉴定具有拮抗效应的APL。结果筛选得到的APL mInsB5-14H6F(H→F)与天然肽mInsB5-14空间结构相似,能与HLA-A*0201分子结合,其HLA-A*0201分子的相对亲和力与mInsB5-14相近。该APL作用下mInsB5-14刺激CD8+T细胞分泌IFN-γ的水平明显低于天然肽单独刺激下特异性CTL分泌IFN-γ的水平(P<0.05)。结论基于天然自身抗原表位mInsB5-14改造得到的mInsB5-14H6F是HLA-A*0201限制性的APL,该APL通过降低致病CTL特异性分泌IFN-γ的水平,可能诱导HLA-A*0201转基因NOD小鼠的自身耐受,从而为I型糖尿病治疗性疫苗的研发奠定了基础。 展开更多
关键词 I型糖尿病 改造肽配体 mInsB5-14 HLA-A＊0201
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PCR-SSP结合测序分析快速筛选HLA-A*0201亚等位基因 被引量：2
16
作者 郭薇 张建琼 +2 位作者 沈传来 孟凡岩 谢维 《上海免疫学杂志》 CSCD 北大核心 2003年第4期240-243,共4页
建立相对简单经济的检测HLA A 0 2 0 1等位基因的方法 ,以便于从特定人群中快速筛选HLA A 0 2 0 1阳性的个体 ,满足科研的需要。根据第十二届HLA国际联合会提供的标准操作规程和一对HLA A位点特异性的引物 ,从外周血中提取基因组DNA ... 建立相对简单经济的检测HLA A 0 2 0 1等位基因的方法 ,以便于从特定人群中快速筛选HLA A 0 2 0 1阳性的个体 ,满足科研的需要。根据第十二届HLA国际联合会提供的标准操作规程和一对HLA A位点特异性的引物 ,从外周血中提取基因组DNA ,扩增HLA A基因 ;再设计两对HLA A2组特异性引物 ,采用套式PCR分别扩增HLA A基因的 5’端和 3’端 ,如出现特异条带 ,则将后两对引物的PCR产物进行测序分析 ,对照HLA A2组等位基因的第 2和第 3外显子序列图 ,确定是否为HLA A 0 2 0 1 1～ 0 2 0 1 6的 6个等位基因。结果 :以HLA A 0 2 0 1阳性的T2细胞株为阳性对照进行检测 ,结果完全正确 ,并设立非HLA A 0 2 0 1的A2细胞株RML (HLA A 0 2 0 4 )及Raii细胞株 (非A2组 )为对照 ,同时随机检测 30份门诊病人血样 ,其中 7份为HLA A2阳性 ,经测序 ,2例为HLA A 0 2 0 1 1 ,1例为HLA A 0 2 1 1或 0 2 35 ,1例是HLA A 0 2 0 6或0 2 2 1或 0 2 4 1或 0 2 4 4或 0 2 5 1或 0 2 5 4 ,1例是HLA A 0 2 0 5或 0 2 1 4 ,1例是HLA A 0 2 34或 0 2 35 ,1例是 0 2 5 0。本方法利用位点特异性引物进行 2～ 3次PCR扩增 ,结合PCR产物测序便可相对简便经济地检测出HLA A 0 2 0 1的全部 6个亚等位基因 ,为快速检测其他特定HLA等位基因? 展开更多
关键词 HLA分型 PCR-SSP 测序
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HLA-A＊0201-BSP融合基因的构建与原核表达 被引量：1
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作者 孙万军 杜建芳 +6 位作者 徐东刚 邹民吉 王金凤 蔡欣 王颖 王嘉玺 艾辉胜 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2006年第5期976-980,共5页
克隆表达可生物素化的HLA-A*0201的重链胞外区是制备HLA-A*0201-肽四聚体的先决条件。本研究构建重组HLA-A*0201-BSP融合基因的表达载体,以制备HLA-A2四聚体。根据已报道的序列设计特异引物,利用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法从已鉴定... 克隆表达可生物素化的HLA-A*0201的重链胞外区是制备HLA-A*0201-肽四聚体的先决条件。本研究构建重组HLA-A*0201-BSP融合基因的表达载体,以制备HLA-A2四聚体。根据已报道的序列设计特异引物,利用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法从已鉴定为HLA-A*0201基因型的健康人白细胞中克隆HLA-A*0201重链胞外区的基因,拼接上依赖生物素-蛋白连接酶(biotin-proteinligase,BirA)的可生物素化序列(BirAsubstratepep-tide,BSP),构建HLA-A*0201-BSP的原核表达载体,在大肠杆菌DH5α中进行表达。结果表明:成功扩增出HLA-A*0201-BSP融合基因并测序证实,构建的pBV220-HLA-A*0201-BSP可在大肠杆菌DH5α中高效表达HLA-A*0201-BSP融合蛋白,表达量占菌体总蛋白的28%,以包涵体的形式表达,经洗涤、变性后,以SepharcylS-300HR(S-300)柱层析纯化,纯度可达90%以上。结论:获得了高效表达HLA-A*0201-BSP的大肠杆菌工程菌株,建立了简便有效的包涵体纯化方法,为制备HLA-A*0201-肽四聚体奠定了基础。 展开更多
关键词 HLA—A＊0201 HLA—A＊0201-BSP融合基因 HLA—A2四聚体 可生物素化序列
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sHLA-A*0201-抗原肽四聚体的构建与功能检测 被引量：1
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作者 翁秀芳 吴雄文 +4 位作者 梁智辉 蔡蕾 费世江 陈国安 龚非力 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期244-247,251,共5页
目的:构建有功能的sHLA-A*0201-抗原肽四聚体,建立一套HLAⅠ类分子/抗原肽的四聚体制备技术。方法:利用基因工程及体外折叠技术构建sHLA-A*0201-LMP2A426-434复合物分子,并在BirA酶的作用下生物素化,与荧光标记的亲和素衍生物以分子数4... 目的:构建有功能的sHLA-A*0201-抗原肽四聚体,建立一套HLAⅠ类分子/抗原肽的四聚体制备技术。方法:利用基因工程及体外折叠技术构建sHLA-A*0201-LMP2A426-434复合物分子,并在BirA酶的作用下生物素化,与荧光标记的亲和素衍生物以分子数4∶1结合而形成HLA-A*0201-LMP2A426-434四聚体。获得的四聚体对长期混合淋巴细胞培养中增殖的抗原特异性CTL进行检测,同时用细胞毒实验验证。结果:荧光标记的亲和素与生物素化的HLA-A*0201-抗原肽复合物分子正确结合,制备的四聚体能够与长期混合淋巴细胞培养出的特异性T细胞结合。结论:从结构与功能上证实成功地获得有功能的HLA-A*0201-抗原肽复合物四聚体。为进一步研究T细胞识别机制与功能奠定了基础,也为过程复杂的HLA-抗原肽四聚体制备提供了可行的免疫学监控方法。 展开更多
关键词 HLA-A＊0201-抗原肽复合物 生物素化 BirA HLA-A＊0201-抗原肽四聚体 抗原特异性CTL
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可溶性HLA-A*0201-PR1复合物的构建与鉴定 被引量：1
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作者 孙万军 徐东刚 +6 位作者 胡海兰 邹民吉 杜建芳 王金凤 蔡欣 王嘉玺 艾辉胜 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2007年第2期352-356,共5页
为制备HLA-A*0201-PR1四聚体,本课题构建了可溶性的HLA-A*0201-PR1复合物。以原核表达的HLA-A*0201-BSP融合蛋白为重链,β2-微球蛋白(β2m)为轻链,与人工合成的HLA-A2限制性抗原肽PR1(蛋白酶3的第169-177氨基酸,VLQELNVTV)进行共折叠复... 为制备HLA-A*0201-PR1四聚体,本课题构建了可溶性的HLA-A*0201-PR1复合物。以原核表达的HLA-A*0201-BSP融合蛋白为重链,β2-微球蛋白(β2m)为轻链,与人工合成的HLA-A2限制性抗原肽PR1(蛋白酶3的第169-177氨基酸,VLQELNVTV)进行共折叠复性,以生成可溶性HLA-A*0201-PR1复合物。应用BirA酶对复性混和物进行生物素化,再经阴离子交换柱纯化,得到生物素化的可溶性HLA-A*0201-PR1复合物。应用凝胶过滤高效液相色谱分析可溶性HLA-A*0201-PR1复合物的生成率。利用HLA-A2构象特异性抗体(BB7.2)及链霉亲和素进行Western blot和ELISA分析,对生物素化的可溶性HLA-A*0201-PR1复合物进行鉴定。结果表明:在折叠体系中,主要含有HLA-A*0201-BSP聚合体、HLA-A*0201-PR1复合物及β2m,其中可溶性复合物生成率约18%。获得的HLA-A*0201-PR1复合物可在BirA酶作用下被有效生物素化。结论:成功地获得了生物素化的可溶性HLA-A*0201-PR1复合物,为进一步制备HLA-A*0201-PR1四聚体创立了基础。 展开更多
关键词 HLA.抗原肽复合物 HLA-A＊0201-PRl复合物 HLA-A＊0201-PRl四聚体
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氨基酸非键作用指数用于HLA-A*0201限制性CTL表位定量预测研究 被引量：2
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作者 张梦军 周鹏 +2 位作者 李声时 肖正华 邓金 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期440-444,448,共6页
目的预测SSX-1和SSX-4抗原HLA-A*0201限制性表位。方法从分子的三维空间结构出发,基于静电、立体、疏水这三类与生物活性直接相关的非键作用方式,经主成分分析技术(PCA)得到了一种新的分子结构表达方法——氨基酸非键作用指数。利用该... 目的预测SSX-1和SSX-4抗原HLA-A*0201限制性表位。方法从分子的三维空间结构出发,基于静电、立体、疏水这三类与生物活性直接相关的非键作用方式,经主成分分析技术(PCA)得到了一种新的分子结构表达方法——氨基酸非键作用指数。利用该指数结合偏最小二乘(PLS)算法对152个HLA-A*0201限制性CTL表位进行了定量构效关系(QSAR)建模,再使用该模型对SSX-1和SSX-4抗原HLA-A*0201限制性表位进行预测。结果预测出8个活性值大于7的九肽表位。结论通过对SSX-1和SSX-4抗原HLA-A*0201限制性表位的预测,从而为SSX-1和SSX-4抗原HLA-A*0201限制性表位的实验探测和鉴定打下了基础。 展开更多
关键词 SSX-1 SSX-4 氨基酸非键作用指数 HLA-A＊0201 CTL表位 定量构效关系
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