黑色素瘤抗原-3基因在肝细胞癌中的研究 被引量：10

1

作者 蔡胜利 赵海涛 +9 位作者 冷希圣 程继华 龚顺友 彭吉润 丛旭 王宇 芮静安 回允中 杜如昱 陈慰峰 《中华外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第9期693-696,I037,共5页

目的　检测黑色素瘤抗原 3(melanomaantigen 3 ,MAGE 3)mRNA在肝细胞癌 (HCC)中的表达 ,探讨用MAGE 3基因编码蛋白作为疫苗对HCC患者进行免疫治疗在理论上的可行性。　方法　用RT PCR方法对 45例HCC患者癌组织和相应癌旁肝组织以及 16... 目的　检测黑色素瘤抗原 3(melanomaantigen 3 ,MAGE 3)mRNA在肝细胞癌 (HCC)中的表达 ,探讨用MAGE 3基因编码蛋白作为疫苗对HCC患者进行免疫治疗在理论上的可行性。　方法　用RT PCR方法对 45例HCC患者癌组织和相应癌旁肝组织以及 16例肝硬化组织和 12例正常肝组织的MAGE 3mRNA表达情况进行研究 ,对 3例RT PCR扩增产物中目的基因片段进行DNA序列测定 ,并以测序证实为MAGE 3基因的cDNA片段为模板合成 [α32 P]标记的探针 ,进行Southern杂交。同时用ELISA方法对其中 43例HCC患者进行HLA 1 A及B位点分型。　结果　 45例HCC患者中 ,35例 (78% )MAGE 3mRNA表达阳性 ,癌旁组织有 6例阳性 (13% ) ,病理检查证实这 6例癌旁组织中都有明显的异型增生 ,而非HCC患者的肝硬化及正常肝组织均不表达 ;DNA测序 ,3例PCR产物中的目的基因片段均证明为MAGE 3cDNA序列 ;Southern杂交结果和RT PCR电泳结果完全一致 ;HCC患者中常见HLA类型为A2 (5 3 5 % ) ,A11(2 5 6 % ) ,A2 4 (2 0 9% ) ,A33(2 0 9% ) ,B13(2 8 3% ) ,B35(2 3 2 % ) ;MAGE 3的表达与肿瘤直径 ,AFP水平等临床指标无相关关系。　结论　MAGE 3在肝细胞癌中呈高比例表达 ,这使得以此抗原用于HCC患者的免疫治疗成为可能 ;一些细胞有异型增生的癌旁组织中表? 展开更多

关键词 肝细胞癌 黑色素瘤抗原-3 序列分析 DNA

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鼻咽癌MAGE-A1、MAGE-A3特异性CTL免疫应答差异与临床相关性 被引量：5

2

作者 董丹宁 王多明 +2 位作者 刘凯 胡云辉 王若峥 《新疆医学》 2016年第11期1368-1372,共5页

目的通过观察肿瘤特异性抗原(TAA)中黑色素瘤抗原A1(MAGE-A1)、黑色素瘤抗原A3(MAGE-A3)抗原表位肽刺激外周血单个核细胞(PBMC)中特异性细胞毒性T细胞(CTL)产生γ干扰素(IFN-γ)的能力,分析鼻咽癌患者的特异性CTL免疫应答差异及其临床... 目的通过观察肿瘤特异性抗原(TAA)中黑色素瘤抗原A1(MAGE-A1)、黑色素瘤抗原A3(MAGE-A3)抗原表位肽刺激外周血单个核细胞(PBMC)中特异性细胞毒性T细胞(CTL)产生γ干扰素(IFN-γ)的能力,分析鼻咽癌患者的特异性CTL免疫应答差异及其临床相关性。方法收集66例新疆医科大学附属肿瘤医院2015年3月至2016年6月确诊鼻咽癌住院患者。用合成的MAGE-A1、MAGE-A3特异性CTL抗原表位肽刺激鼻咽癌患者的PBMC,采用酶联免疫斑点法(ELISPOT)检测分泌IFN-γ的CTL细胞的频率及强度。并分析其与鼻咽癌患者临床特征(性别、年龄、民族、TNM分期)之间的关系。结果 ELISPOT检测结果:(1)鼻咽癌患者外周血中MAGE-A1、MAGE-A3特异性CTL免疫应答阳性率分别为34.7%和22.2%,平均反应强度分别35.0和40.0 SFC/106PBMC。(2)鼻咽癌MAGE-A1特异性抗原多肽反应阳性率在性别、年龄、民族、TNM分期无统计学差异。MAGE-A1平均反应强度:女性组MAGE-A1平均反应强度为50.0 SFC/106PBMC,明显高于男性组32.8 SFC/106PBMC(P=0.044)。(3)鼻咽癌患者MAGE-A3特异性抗原多肽反应阳性率在临床特征间无明显差异。MAGE-A3平均反应强度:汉族组43.3 SFC/106PBMC明显高于维族组21.6 SFC/106PBMC(Ρ=0.031),Ⅲ期组49.5SFC/106PBMC明显高于Ⅳ组26.6 SFC/106PBMC(P=0.018)。结论鼻咽癌患者可对肿瘤特异性抗原MAGE-A1、MAGE-A3多肽产生特异性T细胞免疫反应,为鼻咽癌免疫治疗研究提供线索。 展开更多

关键词 鼻咽癌 黑色素瘤抗原A1 黑色素瘤抗原A3 酶联免疫斑点法

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MAGE-3基因稳定转染的HHCC细胞系的建立及其mRNA的表达 被引量：3

3

作者 张秀敏 隋延仿 +4 位作者 司少艳 李侠 黄杨 胡沛臻 葛伟 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期450-451,453,共3页

目的:构建肿瘤抗原MAGE-3基因的真核表达载体,建立MAGE-3基因稳定转染的人肝细胞癌细胞系(humanhepatocellularcarcinomacellline,HHCC)。方法:利用分子生物学方法,构建带有MAGE-3基因和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因的重组真核表... 目的:构建肿瘤抗原MAGE-3基因的真核表达载体,建立MAGE-3基因稳定转染的人肝细胞癌细胞系(humanhepatocellularcarcinomacellline,HHCC)。方法:利用分子生物学方法,构建带有MAGE-3基因和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因的重组真核表达质粒pIRES2-EGFP-MAGE-3,经脂质体法转染HHCC后,用G418筛选阳性克隆。在荧光显微镜下观察HHCC中EGFP的表达,用RT-PCR法检测HHCC中MAGE-3mRNA的表达。结果:成功地构建了重组真核表达载体pIRES2-EGFP-MAGE-3。以其转染HHCC后,经荧光显微镜及RT-PCR分别检测到MAGE-3mRNA转录和EGFP的表达。结论:建立了1株可稳定转染MAGE-3基因的肝细胞癌HHCC,为进一步应用该基因进行肝癌的免疫治疗提供了实验依据。 展开更多

关键词 黑色素瘤抗原-3 基因转染 绿色荧光蛋白 肿瘤 免疫治疗

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MAGE-3基因的表达、纯化及其抗血清的制备 被引量：3

4

作者 肖刚 张文敏 +3 位作者 张萌 谢丹 郭爱林 文剑明 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期176-179,共4页

【目的】构建MAGE-3的原核表达质粒,表达、纯化蛋白并制备多克隆抗体。【方法】利用RT- PCR方法扩增MAGE-3基因片段.连接入原核表达载体pGEX-4T-1,构建MAGE-3的原核表达质粒pGEX- MAGE-3并测序。将该质粒转化大肠杆菌BL21进行诱导表达,... 【目的】构建MAGE-3的原核表达质粒,表达、纯化蛋白并制备多克隆抗体。【方法】利用RT- PCR方法扩增MAGE-3基因片段.连接入原核表达载体pGEX-4T-1,构建MAGE-3的原核表达质粒pGEX- MAGE-3并测序。将该质粒转化大肠杆菌BL21进行诱导表达,并通过谷胱甘肽巯基转移酶纯化系统进行分离纯化。用纯化的融合蛋白GST-MAGE-3免疫新西兰大白兔,ELISA法测定抗体效价,饱和硫酸铵沉淀法纯化抗体,Western-blot检测抗体活性。【结果】构建了pGEX-MAGE-3原核表达质粒,含有该质粒的大肠杆菌经IPTG诱导后表达-相对分子质量约为72×103的蛋白,经GST融合蛋白纯化系统纯化,得到了MAGE-3的重组蛋白GST-MAGE-3。制备了兔抗GST-MAGE-3抗体。Western blot证实该抗体可与GST-MAGE-3蛋白特异性结合。【结论】获得了肿瘤抗原MAGE-3的纯化重组蛋白及其特异的多克隆抗体,为进一步研究MAGE-3抗原在肿瘤免疫治疗中的作用提供了一件检测工具。 展开更多

关键词 黑色素瘤抗原-3 原核表达 重组蛋白 纯化 抗体

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MAGE-A3在非小细胞肺癌中表达与肿瘤血管生成相关性研究 被引量：1

5

作者 刘帮助 刘小霞 +4 位作者 李茜 鲍姨琴 李世荣 杨刚 黄礼年 《临床肺科杂志》 2022年第11期1711-1717,共7页

目的探讨MAGE-A3在非小细胞肺癌(NSCLC)患者组织中表达与肿瘤血管生成相关性,并评估其预后的价值。方法免疫组化法测145例NSCLC患者组织标本中MAGE-A3、VEGF-A与MVD共表达与血管生成关系;分析M^(+)V^(+)组,M^(+)V^(-)组,M^(-)V^(+)组,M^... 目的探讨MAGE-A3在非小细胞肺癌(NSCLC)患者组织中表达与肿瘤血管生成相关性,并评估其预后的价值。方法免疫组化法测145例NSCLC患者组织标本中MAGE-A3、VEGF-A与MVD共表达与血管生成关系;分析M^(+)V^(+)组,M^(+)V^(-)组,M^(-)V^(+)组,M^(-)V^(-)组的临床特征及预后;构建MAGE-A3基因RNAi慢病毒载体并转染细胞株H1299,MTT法检测细胞增殖;Transwell小室法检测细胞迁移及侵袭能力的影响。结果(1)MAGE-A3与VEGF-A、MVD在NSCLC患者中表达阳性率无统计学差异性(P>0.05);而MAGE-A3表达阳性组患者存在鳞癌表达阳性率高、肿瘤体积大、分化程度低、TNM分期晚和淋巴结转移阳性临床特征(P<0.05)。(2)MAGE-A3与VEGF-A在NSCLC中的表达水平呈正相关;MAGE-A3/VEGF-A在NSCLC患者组织中表达阳性组比阴性组的中位总生存期短,且共表达组分析均短于M-V-组。(3)在体外,下调H1299细胞株中MAGE-A3 mRNA表达后,VEGF-A与MVD蛋白表达水平、细胞的迁移、侵袭及增殖能力均显著降低(P<0.05)。结论MAGE-A3在NSCLC患者组织中表达,具有促肿瘤血管生成作用;可作为判定预后的指标。 展开更多

关键词 非小细胞肺癌 血管内皮生长因子 微血管密度 黑色素瘤抗原A3

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黑色素瘤抗原-3原核重组质粒的构建及表达

6

作者 裴瑞 陈奎生 +1 位作者 赵国强 张红新 《医药论坛杂志》 2008年第1期17-19,共3页

目的构建MAGE-3目的基因原核重组表达质粒pGEX-4T-1-MAGE-3并检测其在大肠杆菌(E.coli)BL21(DE3)中的表达。方法RT-PCR法制备MAGE-3目的基因,连接入原核表达载体pGEX-4T-1,构建MAGE-3目的基因的原核重组表达质粒pGEX-4T-1-MAGE-3并测序... 目的构建MAGE-3目的基因原核重组表达质粒pGEX-4T-1-MAGE-3并检测其在大肠杆菌(E.coli)BL21(DE3)中的表达。方法RT-PCR法制备MAGE-3目的基因,连接入原核表达载体pGEX-4T-1,构建MAGE-3目的基因的原核重组表达质粒pGEX-4T-1-MAGE-3并测序,将该质粒转化E.coliBL21(DE3)菌株,经IPTG诱导,12%SDS-PAGE和W estern B lot表达鉴定。结果扩增出349bp的MAGE-3目的基因并构建了原核重组表达载体pGEX-4T-1-MAGE-3;测序结果与GenBank收录序列相一致;在E.coli BL21(DE3)中检测到含该重组表达载体的转化菌表达出分子量约35kD的融合蛋白并证实其为目的蛋白。结论成功构建的原核重组表达载体pGEX-4T-1-MAGE-3及其所表达的融合蛋白,为以MAGE-3为基础的肽疫苗及特异诊断试剂的研制提供抗原打下了基础,为后续实验提供了依据。 展开更多

关键词 黑色素瘤抗原-3 原核表达 重组蛋白

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MAGE-3目的基因原核表达载体的构建和表达 被引量：1

7

作者 裴瑞 陈洁 +3 位作者 杨红梅 陈晓玲 杨萍 赵国强 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第21期3264-3267,3273,共5页

目的构建原核表达载体pGEX-4T-1-MAGE-3并检测其在大肠杆菌(E.coli)BL21中的表达,为制备以黑色素瘤抗原-3(MAGE-3)基因片段为基础的肽疫苗及特异诊断试剂提供抗原打下基础。方法通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法制备MAGE-3目的基因,以... 目的构建原核表达载体pGEX-4T-1-MAGE-3并检测其在大肠杆菌(E.coli)BL21中的表达,为制备以黑色素瘤抗原-3(MAGE-3)基因片段为基础的肽疫苗及特异诊断试剂提供抗原打下基础。方法通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法制备MAGE-3目的基因,以pGEM-TEasy为克隆载体,pGEX-4T-1为原核表达载体,将MAGE-3目的基因克隆至pGEM-TEasy载体和亚克隆至pGEX-4T-1载体上。筛选、鉴定阳性克隆并将其转化E.coliBL21.经IPTG诱导,12%SDS-PAGE电泳分离和WesternBlot表达鉴定。结果正确构建了原核重组表达质粒pGEX-4T-1-MAGE-3;在E.coliBL21中检测到含该重组表达质粒的转化菌表达出分子量35kD的融合蛋白;基因测序结果表明,阳性克隆中的MAGE-3目的基因序列与GenBank公布的已知序列完全一致。结论成功构建的原核重组表达载体pGEX-4T-1-MAGE-3及其所表达的融合蛋白,为以MAGE-3目的基因为基础的肽疫苗及特异诊断试剂的研制提供抗原打下了基础;为后续实验提供了依据。 展开更多

关键词 逆转录-聚合酶链反应 黑色素瘤抗原-3 克隆表达 重组蛋白 肿瘤免疫

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黑色素瘤抗原A3 mRNA表达与NSCLC发生发展的关系 被引量：1

8

作者 何宗林 杜先智 +1 位作者 邓嘉 张国越 《实用癌症杂志》 2020年第10期1612-1614,共3页

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的黑色素瘤抗原A3 mRNA(MAGE-A3 mRNA)表达及其意义。方法应用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)技术,检测80例NSCLC组织及其对应的癌旁组织中的MAGE-A3 mRNA表达水平,并分析不同病理学参数的患者组... 目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的黑色素瘤抗原A3 mRNA(MAGE-A3 mRNA)表达及其意义。方法应用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)技术,检测80例NSCLC组织及其对应的癌旁组织中的MAGE-A3 mRNA表达水平,并分析不同病理学参数的患者组织中MAGE-A3 mRNA表达的差异。结果NSCLC组织中的MAGE-A3 mRNA表达水平显著高于癌旁组织,差异具有统计学意义(P<0.05);在不同TNM分期、是否发生淋巴结转移的NSCLC组织中MAGE-A3 mRNA表达水平比较,差异具有统计学意义(P<0.05);在不同年龄、性别、病理学类型、肿瘤分化程度、不同病灶直径、是否吸烟患者NSCLC组织中MAGE-A3 mRNA表达水平比较,差异均不具有统计学意义(P>0.05)。结论NSCLC组织中的MAGE-A3 mRNA呈高表达,并且与TNM分期增高、发生淋巴结转移具有一定的关系。 展开更多

关键词 非小细胞肺癌 黑色素瘤抗原A3 实时荧光定量聚合酶链反应

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黑色素瘤抗原-3基因片段真核表达质粒的构建

9

作者 裴瑞 赵国强 +3 位作者 杨红梅 陈洁 陈晓玲 杨萍 《北京医学》 CAS 2006年第1期30-32,共3页

目的构建真核重组表达质粒pcDNA-3.1-MAGE-3,为制备肿瘤核酸疫苗及探讨相关的免疫治疗提供实验依据。方法采用逆转录!聚合酶链反应(RT-PCR)法从肝癌组织中制备出含BamHI、EcoRI酶切位点的黑色素瘤抗原-3(MAGE-3)目的基因;pGEM!TEasy为... 目的构建真核重组表达质粒pcDNA-3.1-MAGE-3,为制备肿瘤核酸疫苗及探讨相关的免疫治疗提供实验依据。方法采用逆转录!聚合酶链反应(RT-PCR)法从肝癌组织中制备出含BamHI、EcoRI酶切位点的黑色素瘤抗原-3(MAGE-3)目的基因;pGEM!TEasy为克隆载体,pcDNA3.1为真核表达载体,将目的基因分别先后定向克隆至其上;根据氨苄青霉素(Amp)抗性、蓝白筛选实验、引物T7/SP6PCR扩增方法鉴定阳性克隆,并对其中的插入序列进行DNA测序。结果成功扩增出目的基因;经鉴定得到重组质粒pGEM-T-MAGE-3和pcDNA3.1-MAGE-3;DNA测序后与GenBank中MAGE!3相应序列比较完全一致。结论成功构建pcDNA3.1!MAGE!3肿瘤核酸疫苗,可为免疫治疗提供实验依据。 展开更多

关键词 黑色素瘤抗原-3 克隆 重组质粒 肿瘤免疫治疗

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MAGE-3在非小细胞肺癌中的表达及对转移、预后的影响

10

作者 董艳 高美华 《滨州医学院学报》 2013年第2期100-101,96,共3页

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)组织中黑色素瘤抗原-3(MAGE-3)的表达水平与NSCLC转移、预后之间的关系。方法应用免疫组化LSAB法检测74例NSCLC和15例癌旁组织中MAGE-3的表达水平。结果 NSCLC组织中MAGE-3的表达水平均显著高于癌旁肺组织(P... 目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)组织中黑色素瘤抗原-3(MAGE-3)的表达水平与NSCLC转移、预后之间的关系。方法应用免疫组化LSAB法检测74例NSCLC和15例癌旁组织中MAGE-3的表达水平。结果 NSCLC组织中MAGE-3的表达水平均显著高于癌旁肺组织(P<0.05)。MAGE-3在肺腺癌中的表达水平显著高于肺鳞癌(P<0.05)。MAGE-3阳性组的复发、转移率高于阴性组,但P>0.05。腺癌中不同MAGE-3表达组间复发、转移率差异有统计学意义(P<0.05)。结论检测NSCLC中MAGE-3的表达水平有助于预测肺癌的预后,指导肺癌的多学科综合治疗。 展开更多

关键词 肺癌 黑色素瘤抗原-3 预后 免疫组化

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MAGE-3基因疫苗的构建及其免疫活性的实验研究

11

作者 方耀敏 陈玉丙 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期1322-1325,共4页

目的:构建肿瘤抗原MAGE-3基因疫苗,观察其诱导免疫应答的能力。方法:构建带有目的基因MAGE-3基因和报告基因FGFP的重组表达质粒pEGFP-MAGE3,酶切鉴定后经脂质体法转染LA795后,用G418筛选阳性克隆。在荧光显微镜下观察FGFP的表达,用RT-PC... 目的:构建肿瘤抗原MAGE-3基因疫苗,观察其诱导免疫应答的能力。方法:构建带有目的基因MAGE-3基因和报告基因FGFP的重组表达质粒pEGFP-MAGE3,酶切鉴定后经脂质体法转染LA795后,用G418筛选阳性克隆。在荧光显微镜下观察FGFP的表达,用RT-PCR法检测LA795中MAGE-3 mRNA表达。将重组质粒pEGFP-MAGE3肌肉注射接种C57BL/6J小鼠,间隔10天,共3次,末次免疫7天后利用乳酸脱氢酶法检测脾淋巴细胞CIL杀伤活性、ELISA法脾细胞培养上清IL-2、IFN-γ浓度。结果:成功地构建了重组pEGFP-MAGE3质粒。转染LA795后,经荧光显微镜及RT-PCR分别检测到MAGE-3和EGFP的表达。杀伤实验结果显示,免疫组小鼠脾细胞对B16的杀伤率明显高于对照组(P<0.05)。脾细胞培养上清中Th1类细胞因子IFN-γ、IL-2水平明显升高。结论:成功地构建了MAGE-3基因疫苗,该疫苗能够有效地诱导特异性免疫应答,为进一步应用该基因进行免疫治疗提供了实验依据。 展开更多

关键词 黑色素瘤抗原-3 基因疫苗 免疫应答

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MAGE-3目的基因真核表达载体的构建

12

作者 裴瑞 杨红梅 +3 位作者 陈洁 陈晓玲 杨萍 赵国强 《山东医药》 CAS 北大核心 2005年第28期21-22,共2页

目的构建黑色素瘤抗原-3(M AGE-3)目的基因真核重组表达载体pcDNA 3.1-M AGE-3。方法用RT-PCR法从肝癌组织制备含B amHⅠ、E coRⅠ酶切位点的M AGE-3目的基因,采用DNA重组技术将目的基因克隆至pGEM-T E asy载体和亚克隆至pcDNA 3.1载体... 目的构建黑色素瘤抗原-3(M AGE-3)目的基因真核重组表达载体pcDNA 3.1-M AGE-3。方法用RT-PCR法从肝癌组织制备含B amHⅠ、E coRⅠ酶切位点的M AGE-3目的基因,采用DNA重组技术将目的基因克隆至pGEM-T E asy载体和亚克隆至pcDNA 3.1载体上,根据氨苄青霉素(Am p)抗性、蓝白筛选实验、引物扩增等方法筛选、鉴定阳性克隆,并对其中的插入序列M AGE-3目的基因进行DNA测序。结果扩增出M AGE-3目的基因;重组质粒pcDNA 3.1-M AGE-3中的插入片段经DNA测序后与G enB ank中M AGE-3相应序列比较,结果完全一致。结论成功构建了真核重组表达载体pcDNA 3.1-M AGE-3,为肿瘤免疫治疗提供了条件。 展开更多

关键词 黑色素瘤抗原-3 克隆 重组质粒 肿瘤免疫治疗

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MAGE-3原核重组表达载体的构建和表达

13

作者 裴瑞 赵利萍 +2 位作者 杨红梅 陈洁 赵国强 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期405-408,共4页

目的构建原核重组表达载体pGEX-4T-1-MAGE-3并检测其在大肠杆菌(E.coli)BL21中的表达。方法RT-PCR法制备MAGE-3目的基因,采用DNA重组技术将其克隆至pGEM-TEasy和亚克隆至pGEX-4T-1载体,转化E.coliBL21株,经IPTG诱导,12%SDS-PAGE电泳分离... 目的构建原核重组表达载体pGEX-4T-1-MAGE-3并检测其在大肠杆菌(E.coli)BL21中的表达。方法RT-PCR法制备MAGE-3目的基因,采用DNA重组技术将其克隆至pGEM-TEasy和亚克隆至pGEX-4T-1载体,转化E.coliBL21株,经IPTG诱导,12%SDS-PAGE电泳分离和Western Blot表达鉴定。结果扩增出349bp的MAGE-3目的基因并构建了原核重组表达载体pGEX-4T-1-MAGE-3;测序结果与Gen Bank收录序列相一致;在E.coli BL21中检测到含该重组表达载体的转化菌表达出分子量约35kD的融合蛋白并证实其为目的蛋白。结论成功构建的原核重组表达载体pGEX-4T-1-MAGE-3及其所表达的融合蛋白,为以MAGE-3为基础的肽疫苗及特异诊断试剂的研制提供抗原打下了基础,为后续实验提供了依据。 展开更多

关键词 逆转录-聚合酶链反应 黑色素瘤抗原-3 克隆表达 重组蛋白

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MAGE-A3多克隆抗体的制备及在胃癌细胞检测中的应用 被引量：3

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作者 蔡一奇 程开 +8 位作者 陈旭东 陈孝冬 岑丹维 张婵琼 宋易玲 毛姗姗 叶晓鲜 张丽芳 朱冠保 《温州医科大学学报》 CAS 2017年第5期318-324,共7页

目的:通过原核表达系统制备人黑色素瘤抗原A3(MAGE-A3)蛋白,制备其多克隆抗体,经鉴定后用于胃癌细胞检测。方法:将MAGE-A3全长核酸序列经原核密码子优化后全基因序列合成,克隆至原核表达载体pET21a(+),构建pET21a(+)/MAGE-A3重组质粒,... 目的:通过原核表达系统制备人黑色素瘤抗原A3(MAGE-A3)蛋白,制备其多克隆抗体,经鉴定后用于胃癌细胞检测。方法:将MAGE-A3全长核酸序列经原核密码子优化后全基因序列合成,克隆至原核表达载体pET21a(+),构建pET21a(+)/MAGE-A3重组质粒,转化至大肠杆菌BL21(DE3),经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达MAGE-A3蛋白,并经SDS-PAGE及Western blot分析鉴定;纯化后的MAGE-A3蛋白免疫日本大耳白兔制备多克隆血清抗体,用ELISA、Western blot、免疫荧光技术分析该多克隆抗体的特异性,并用免疫组织化学技术鉴定MAGE-A3兔多克隆抗体在人胃癌细胞免疫检测应用中的可行性。结果:成功构建重组质粒pET21a(+)/MAGE-A3,并经原核表达系统表达MAGE-A3蛋白。SDS-PAGE显示目的蛋白分子质量大小约为48 k Da,与预期蛋白大小一致,并以His单抗进行Western blot鉴定,出现了特异性的单一条带。MAGEA3蛋白免疫日本大耳白兔,可诱导兔产生特异性抗体,免疫后第8周达到高峰,经Western blot检测显示多克隆血清可特异性识别靶蛋白,出现阳性单一条带;经免疫荧光检测显示,在MAGE-A3阳性细胞A-375(黑色素瘤细胞株)和SGC-7901细胞(胃癌细胞株)的胞浆内出现荧光团块。表明兔多克隆抗体可特异性识别天然的MAGE-A3蛋白。结合免疫荧光结果后经ELISA检测,可认为该多克隆Ig G抗体效价可达1:40 000;免疫组织化学检测显示在A-375和SGC-7901肿瘤组织的胞浆内出现团块状棕黄色颗粒样沉淀,而在BGC-823肿瘤组织中呈阴性,表明制备的MAGE-A3兔多克隆抗体能够特异性地识别肿瘤组织中MAGE-A3蛋白。结论:通过原核表达系统制备了MAGE-A3蛋白,并免疫兔制备了MAGE-A3蛋白特异性兔多克隆抗体,同时可以特异性地识别人胃癌细胞中的MAGE-A3蛋白,可作为免疫诊断用抗原。 展开更多

关键词 人黑色素瘤抗原A3 原核表达系统 多克隆抗体 胃肿瘤

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腺病毒转染黑色素瘤抗原基因3的树突状细胞疫苗抗胃癌的免疫效应 被引量：2

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作者 何宋兵 汪良 张雁云 《中华肿瘤杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期330-334,共5页

目的研究趋化因子巨噬细胞炎症蛋白1α（MIP-1α）动员的树突状细胞（DC），经黑色素瘤抗原基因3（MAGE-3）腺病毒转染后对胃癌细胞的免疫效应。方法615小鼠尾静脉注射MIP-1α，分选得到B220^-CD11c^＋细胞，加入细胞因子连续培养，检... 目的研究趋化因子巨噬细胞炎症蛋白1α（MIP-1α）动员的树突状细胞（DC），经黑色素瘤抗原基因3（MAGE-3）腺病毒转染后对胃癌细胞的免疫效应。方法615小鼠尾静脉注射MIP-1α，分选得到B220^-CD11c^＋细胞，加入细胞因子连续培养，检测其细胞表面标志和混合淋巴细胞反应（MLR）。收集培养后的B220^-CD11c^＋细胞，加入编码MAGE-3的重组腺病毒进行转染，制备表达肿瘤抗原的DC疫苗，以荷载小鼠前胃癌（MFC）全肿瘤细胞抗原制备的DC疫苗作为阳性对照。采用二苯基溴化四氮唑蓝（MTT）法，检测活化的T淋巴细胞在体外对MFC细胞的杀伤作用。采用酶联免疫吸附试验（ELISA），检测γ干扰素（INF-γ）的分泌情况。DC疫苗皮下注射MFC荷瘤小鼠，观察小鼠瘤体生长情况和存活时间。结果MIP-1α注射后，外周血中B220-CD11c^＋细胞明显升高。新鲜分离的B220-CD11c^＋细胞在体外经过细胞因子诱导分化后具有典型的DC表面标志，并在MLR中具有极强的刺激T淋巴细胞增殖的能力。腺病毒转染MAGE-3的DC激活的T淋巴细胞表现出对MFC细胞的特异性杀伤作用，产生高水平的INF-γ[（1460．00±16．82）pg／ml]。实验组荷瘤小鼠接受DC疫苗治疗后，肿瘤生长缓慢，观察至MFC细胞接种后的第27天，其肿瘤体积仅为（3．46±1．12）cm^3；实验组小鼠的肿瘤体积与对照组之间的差异有统计学意义（P〈0．01）。实验组小鼠存活时间明显延长，与对照组之间的差异有统计学意义（P〈0．01）。结论注射趋化因子MIP—1α可快速动员并诱导分化为成熟DC。肿瘤抗原基因MAGE-3经腺病毒转染制备的DC疫苗，在体外可以诱导出针对胃癌细胞的特异性杀伤作用，在体内对MFC荷瘤小鼠有明显的免疫治疗作用。 展开更多

关键词 黑色素瘤抗原基因3 树突状细胞 巨噬细胞炎症蛋白-1Α 胃肿瘤

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不同分化程度大肠癌组织中MAGE-3的表达 被引量：6

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作者 白雪娟 许红民 +4 位作者 王强 李宁 余琦 韩永 耿婉如 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期444-445,共2页

目的研究黑色素瘤抗原3(MAGE3)在不同分化程度大肠癌组织中的表达。方法应用免疫组化法对101例大肠癌组织石蜡标本进行MAGE-3抗原表达测定。分析MAGE-3基因产物的表达与大肠癌组织分化及临床分期的关系。结果MAGE-3仅表达于肿瘤组织,阳... 目的研究黑色素瘤抗原3(MAGE3)在不同分化程度大肠癌组织中的表达。方法应用免疫组化法对101例大肠癌组织石蜡标本进行MAGE-3抗原表达测定。分析MAGE-3基因产物的表达与大肠癌组织分化及临床分期的关系。结果MAGE-3仅表达于肿瘤组织,阳性率为31.7%,正常组织无一例表达,且低分化大肠癌组织的阳性率及阳性强度均高于高分化大肠癌组织(P<0.05)。MAGE-3在大肠癌组织中的表达与Duckes分期无关(P>0.05)。结论MAGE-3基因有可能作为大肠癌组织分化相关分子标志物,其抗原可能作为大肠癌患者免疫治疗的靶抗原。 展开更多

关键词 结直肠肿瘤 黑色素瘤抗原3

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非小细胞肺癌组织MAGE-A3、HIF-1α、MTA1表达与临床病理参数及复发转移的关系研究 被引量：9

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作者 邓万生 孙振 +2 位作者 王伟 郑福爽 曹辉 《现代生物医学进展》 CAS 2021年第5期945-949,共5页

目的:探讨非小细胞肺癌组织黑色素瘤相关抗原-A3(MAGE-A3)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、转移相关蛋白1(MTA1)表达与临床病理参数及复发转移的关系。方法:选择2015年2月至2018年1月我院诊治的130例非小细胞肺癌患者进行临床研究,采用免... 目的:探讨非小细胞肺癌组织黑色素瘤相关抗原-A3(MAGE-A3)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、转移相关蛋白1(MTA1)表达与临床病理参数及复发转移的关系。方法:选择2015年2月至2018年1月我院诊治的130例非小细胞肺癌患者进行临床研究,采用免疫组织化学染色法检测其非小细胞癌组织及癌旁组织中MAGE-A3、HIF-1α、MTA1的表达,分析MAGE-A3、HIF-1α、MTA1的表达与各项临床病理参数的关系。对比不同MAGE-A3、HIF-1α、MTA1表达情况患者的转移率及复发率。结果:130例非小细胞肺癌组织中MAGE-A3、HIF-1α、MTA1阳性率分别为70.77%、74.62%、79.23%,明显高于癌旁组织的25.38%、22.31%、17.69%(P<0.05)。非小细胞肺癌组织中MAGE-A3、HIF-1α、MTA1表达与淋巴结转移和TNM分期相关(P<0.05)。MAGE-A3、HIF-1α、MTA1阳性患者转移/复发率明显高于MAGE-A3、HIF-1α、MTA1阴性患者(P<0.05)。结论:MAGE-A3、HIF-1α、MTA1在非小细胞肺癌中阳性表达率升高,并且均与非小细胞肺癌淋巴结转移、TNM分期和转移复发相关,在非小细胞肺癌的诊断和预后评估中具有一定临床意义。 展开更多

关键词 非小细胞肺癌 黑色素瘤相关抗原-A3 缺氧诱导因子-1Α 转移相关蛋白1 临床病理参数 复发 转移

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MAGE-A1和MAGE-A3在脑胶质瘤组织中的表达及其临床意义 被引量：6

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作者 国丽茹 王淑彬 +3 位作者 桑梅香 陈丽 孟令振 单保恩 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期402-408,共7页

目的:探讨黑色素瘤抗原基因-A1(MAGE-A1)和MAGE-A3在脑胶质瘤组织中的表达及其临床意义。方法:选取2006年1月至2010年1月河北医科大学第四医院神经外科手术切除的78例脑胶质瘤组织标本和15例车祸死亡捐献者的正常脑组织标本。用RT-PCR... 目的:探讨黑色素瘤抗原基因-A1(MAGE-A1)和MAGE-A3在脑胶质瘤组织中的表达及其临床意义。方法:选取2006年1月至2010年1月河北医科大学第四医院神经外科手术切除的78例脑胶质瘤组织标本和15例车祸死亡捐献者的正常脑组织标本。用RT-PCR法检测胶质瘤组织中MAGE-A1和MAGE-A3的表达,分析其表达水平与患者预后的关系;用MSP-PCR术检测MAGE-A1和MAGE-A3基因启动子区的甲基化状态,分析两者表达与甲基化之间的关系;用RT-PCR法检测胶质瘤U251和U87细胞中MAGE-A1和MAGE-A3表达以及经DNA甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)和组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(TSA)联合作用后两者的表达水平。结果:78例胶质瘤组织中MAGE-A1和MAGE-A3 mRNA阳性表达率分别为65.34%和38.46%,而在15例正常脑组织中未发现2种m RNA表达。MAGE-A1阳性组患者5年生存率较阴性组低(P<0.05)。MAGE-A1和MAGE-A3基因启动子区去甲基化水平与其在mRNA水平上的表达均有显著的相关性(均P<0.01)。未经5-Aza-CdR和TSA处理的U87细胞未见MAGE-A1和MAGE-A3 mRNA的表达,U251细胞则有少量表达。单独给予TSA不能引起MAGE-A1和MAGE-A3基因的表达激活,单独给予5-Aza-CdR或与TSA合用可以引起该2个基因的表达激活,且两者合用的作用优于单独给药。结论:脑胶质瘤组织中有不同程度的MAGE-A1和MAGE-A3基因表达,MAGE-A1基因表达与患者的预后不良相关。DNA启动子区甲基化和组蛋白乙酰化是MAGE-A1和MAGE-A3基因表达激活的重要机制。 展开更多

关键词 胶质瘤 U87细胞 U251细胞 黑色素瘤抗原基因-A1 黑色素瘤抗原基因-A3 DNA甲基化 组蛋白乙酰化

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宫颈癌癌组织及外周血单个核细胞中MAGE-A3的表达及其临床意义

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作者 胡美丽 王雅慧 +7 位作者 何海鹏 严凤 杨金兰 刘佳麒 王志芳 赵倩 张珊 张笑笑 《武警医学》 CAS 2024年第6期520-524,共5页

目的探究宫颈癌癌组织及外周血单个核细胞(PBMC)中黑色素瘤相关抗原-A3(MAGE-A3)表达及临床意义。方法通过方便抽样选取2020-05至2022-05保定市妇幼保健院及河北大学附属医院收治的因宫颈病变拟行宫颈锥切术或广泛性子宫切除术患者96例... 目的探究宫颈癌癌组织及外周血单个核细胞(PBMC)中黑色素瘤相关抗原-A3(MAGE-A3)表达及临床意义。方法通过方便抽样选取2020-05至2022-05保定市妇幼保健院及河北大学附属医院收治的因宫颈病变拟行宫颈锥切术或广泛性子宫切除术患者96例,根据术后病理结果分为宫颈癌组和子宫颈鳞状上皮内病变(SIL)组,采用免疫组化法检测病变组织MAGE-A3蛋白表达情况。采用实时荧光定量PCR法检测宫颈病变组织及PBMC中MAGE-A3 mRNA表达水平,分析宫颈癌患者癌组织及PBMC中MAGE-A3mRNA表达与血清肿瘤标志物相关性以及癌组织MAGE-A3蛋白表达与临床病理特征关系。结果宫颈癌癌组织MAGE-A3蛋白表达阳性率与FIGO分期、肿瘤的直径大小、分化程度、淋巴结转移、感染高危型HPV有关(P<0.05),与年龄、病理类型无关(P>0.05)。宫颈癌组癌组织和PBMC中MAGE-A3 mRNA表达水平分别为(1.33±0.46)、(1.70±0.49),均显著高于SIL组(0.59±0.20、0.92±0.33)(P<0.05),血清SCC-Ag[(3.87±1.69)ng/ml]、CA-125[(48.62±15.10)U/ml]均显著高于SIL组[(0.70±0.32)ng/ml、(25.36±8.33)U/ml](P<0.05);宫颈癌组癌组织MAGE-A3蛋白表达阳性率(66.07%)显著高于SIL组(30.00%)(P<0.05);宫颈癌患者癌组织、PBMC中MAGE-A3 mRNA表达水平与血清SCC-Ag、CA-125均呈正相关(P<0.05)。结论宫颈癌患者癌组织及PBMC中MAGE-A3表达均上调,且与患者血清肿瘤标志物水平及病情进展有关,MAGE-A3有望成为早期宫颈癌诊断的重要标志物。 展开更多

关键词 宫颈癌 黑色素瘤相关抗原-A3 外周血单个核细胞 子宫颈鳞状上皮内病变

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MAGE-A3在肝癌组织中的表达及意义 被引量：4

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作者 肖刚 谭敏 +2 位作者 胡少为 石灵春 文剑明 《广东医学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第7期1109-1111,共3页

目的检测黑色素瘤抗原-A3(MAGE-A3)在肝癌组织中的表达,为应用MAGE-A3抗原对肝癌患者进行特异性抗肿瘤免疫治疗及判断预后提供理论依据。方法逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测31例肝癌组织及相应癌旁组织中MAGE-A3基因的表达,应用组织... 目的检测黑色素瘤抗原-A3(MAGE-A3)在肝癌组织中的表达,为应用MAGE-A3抗原对肝癌患者进行特异性抗肿瘤免疫治疗及判断预后提供理论依据。方法逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测31例肝癌组织及相应癌旁组织中MAGE-A3基因的表达,应用组织芯片技术、免疫组织化学方法分析178例肝癌组织及相应癌旁组织中MAGE-A3抗原的表达。结果31例肝癌组织标本中有23例(74.19%)表达MAGE-A3基因,而相应的癌旁组织MAGE-A3基因均不表达。178例肝癌组织中102例表达MAGE-A3抗原(57.30%),相应的癌旁组织MAGE-A3抗原均不表达。MAGE-A3蛋白表达与肿瘤转移有关(P<0.05),而与HBsAg、AFP水平和分化程度均无关(P>0.05)。结论MAGE-A3基因在肝癌组织中有较高表达,这使得以该基因编码蛋白作为肿瘤疫苗用于肝癌的免疫治疗成为可能。表达MAGE-A3的肝癌患者预后较差。 展开更多

关键词 黑色素瘤抗原-A3 肝细胞癌 逆转录-聚合酶链反应 组织芯片 免疫组织化学

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