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采用IMS-RT-PCR方法快速检测肉制品中大肠杆菌O157 被引量：6
1
作者 龙梦瑶 蒋蔚 +6 位作者 陈永军 熊挺 陈芸 韩阳瑞 凌娇 孙卫东 王权 《畜牧与兽医》 北大核心 2018年第3期68-76,共9页
建立免疫磁珠分离法（immunomagnetic separation,IMS）与实时荧光定量PCR（Real-time fluorescent quantitative PCR,RT-PCR）技术相结合快速检测肉制品中肠出血性大肠杆菌（EHEC）O157的方法。利用改良热酚-水法提取EHEC O157的O-特... 建立免疫磁珠分离法（immunomagnetic separation,IMS）与实时荧光定量PCR（Real-time fluorescent quantitative PCR,RT-PCR）技术相结合快速检测肉制品中肠出血性大肠杆菌（EHEC）O157的方法。利用改良热酚-水法提取EHEC O157的O-特异性多糖（O-specific polysaccharides,O-SP）作为筛选抗原,制备抗EHEC O157 O-SP单克隆抗体。将PM 3-50纳米磁珠经3-乙基碳二亚胺（EDC）和N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）活化后,与抗EHEC O157 O-SP单克隆抗体结合,得到偶联量为150μg/mg的免疫磁珠。免疫磁珠的最高捕获量为13748.33 CFU/0.2 mg,在肉制品中特异性捕获的最低检测限为2.2 CFU/m L。根据EHEC 0157血清型的特异性基因rfb E（Gen Bank登录号：S83460）设计引物和荧光探针,将IMS与RT-PCR相结合进行检测EHEC O157。当肉制品中EHEC O157含量≥1 CFU/g（2.5 g样本）,免疫磁珠能捕获,并通过EC肉汤培养基增殖3h后,RT-PCR即可成功检测,全程只需6-7 h。IMS-RT-PCR相结合的检测方法,在大大缩短了检测时间的基础上,再次降低了EHEC O157的检测限,在防范肉制品源性致病性EHEC O157传染方面具有重要意义。 展开更多
关键词 免疫磁珠分离法(IMS) 荧光定量pcr(rt-pcr) 肉制品 肠出血性大肠杆菌O157 O-特异性多糖(O-SP)
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即时痰和体外培养条件下结核分枝杆菌sigma因子表达差异分析 被引量：1
2
作者 江丽娜 穆成 +1 位作者 孙蕊 王春花 《公共卫生与预防医学》 2023年第3期52-55,共4页
目的为了解sigma因子在即时痰的表达情况,探索与致病性结核分枝杆菌毒力关系密切的sigma因子。方法选取2018年1~12月天津市结核病控制中心门诊部确诊的结核病患者,对其痰涂片阳性和xpert阳性确诊的肺结核随机选择20份痰阳性标本进行实... 目的为了解sigma因子在即时痰的表达情况,探索与致病性结核分枝杆菌毒力关系密切的sigma因子。方法选取2018年1~12月天津市结核病控制中心门诊部确诊的结核病患者,对其痰涂片阳性和xpert阳性确诊的肺结核随机选择20份痰阳性标本进行实验。每一例肺结核患者在其开始治疗前收集2份即时痰标本,一份立刻抽提RNA,一份进行体外培养。体外培养的菌株在生长对数期提取RNA。设计13个sigma因子的特异性引物,通过荧光定量PCR(RT-PCR)的方法,分析其在即时痰临床分离株和体外培养株的转录表达差异。以核糖体16s为参照基因,利用2^(ΔCt)分析sigma因子的转录倍数,将稳定表达的sigA作为统计分析的底物,单因素方差ANOVA分析其余sigma因子的表达差异。结果临床分离菌与H37Rv相比,所有的sigma因子统计分析差异均不显著(P均>0.05);临床分离菌与体外培养株相比,只有sigM表达量最高(P<0.05),统计分析差异显著。结论sigM在细菌感染的初级阶段转录水平明显增高,但其具体作用还不清楚,可能参与了宿主免疫系统和细菌逃离机制之间的相互平衡。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 sigma因子 痰液 荧光定量pcr(rt-pcr)
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深圳市流感样病例中鼻病毒流行特征分析 被引量：2
3
作者 骆秋云 郑晓晨 +3 位作者 曾细嫦 肖锦晖 谷素英 刘灵辉 《中国热带医学》 CAS 2017年第10期1035-1037,共3页
目的研究深圳市流感样病例中鼻病毒(HRV)流行特征。方法收集2015—2016年深圳市宝安区两家医院门诊流感样病例的咽拭子及相关资料,采用RT-PCR检测HRV RNA。结果 HRV RNA阳性率为8.27%(47/568),其中男性检出率11.34%(28/247),女性检出率5... 目的研究深圳市流感样病例中鼻病毒(HRV)流行特征。方法收集2015—2016年深圳市宝安区两家医院门诊流感样病例的咽拭子及相关资料,采用RT-PCR检测HRV RNA。结果 HRV RNA阳性率为8.27%(47/568),其中男性检出率11.34%(28/247),女性检出率5.92%(19/321),检出率差异有统计学意义(P<0.05)。HRV感染集中在7岁以下儿童,构成比46.81%(22/47),各年龄组间检出率差异有统计学意义(P<0.05)。HRV感染呈现春、秋两季检出率高,夏、冬两季低的趋势,不同季节的检出率差异有统计学意义(P<0.05)。患者症状发热以中高热、咳嗽、咽痛为主,全身症状(如全身酸痛)出现较少。结论深圳地区HRV呈秋季高发、7岁以下儿童高发的流行特征。 展开更多
关键词 荧光定量pcr(rt-pcr) 鼻病毒 流感样病例 流行特征
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microRNA21在大肠癌中的表达及临床意义
4
作者 陈凯荣 张自强 +2 位作者 李勇 陈亚茹 沈志香 《徐州医学院学报》 CAS 2013年第12期877-879,共3页
目的 检测microRNA21在大肠癌组织中的表达,并分析其临床意义.方法 采用荧光定量实时聚合酶链反应（RT-PCR）检测60例大肠癌组织标本、20例腺瘤组织及60例正常组织标本中microRNA21表达水平;并分析大肠癌中microRNA21表达量与临床分期... 目的 检测microRNA21在大肠癌组织中的表达,并分析其临床意义.方法 采用荧光定量实时聚合酶链反应（RT-PCR）检测60例大肠癌组织标本、20例腺瘤组织及60例正常组织标本中microRNA21表达水平;并分析大肠癌中microRNA21表达量与临床分期之间的关系.结果 microRNA21在大肠癌组织中相对表达水平显著高于腺瘤及正常组织（P＜0.01）,与临床分期及预后有一定的关系.结论 microRNA21在大肠癌组织中表达上调,高表达的microRNA21可能预示着肿瘤的恶性程度及不良预后. 展开更多
关键词 microRNA21 荧光定量pcr(rt-pcr) 大肠癌 肿瘤分期
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食管癌和良性食管疾病患者血浆miRNA-21和miRNA-143检测的临床应用研究 被引量：10
5
作者 肖小平 张熊 秦光明 《现代检验医学杂志》 CAS 2017年第4期72-75,139,共5页
目的探讨血浆微小RNA(microRNA,miRNA)-21,miRNA-143水平在鉴别早期食管癌和良性食管疾病中的临床应用。方法收集27例早期食管癌患者(食管癌组)和25例良性食管疾病患者(良性食管疾病组)的血液及临床资料,并设立健康对照组,采用实时荧光... 目的探讨血浆微小RNA(microRNA,miRNA)-21,miRNA-143水平在鉴别早期食管癌和良性食管疾病中的临床应用。方法收集27例早期食管癌患者(食管癌组)和25例良性食管疾病患者(良性食管疾病组)的血液及临床资料,并设立健康对照组,采用实时荧光定量PCR(real-time-PCR,RT-PCR)技术检测研究对象血浆miRNA-21,miRNA-143水平的表达,采用电化学发光技术检测血浆CEA和CA72-4水平,探讨两标志物的变化与食管癌和良性食管疾病之间的关系。结果食管癌组血浆miRNA-21,miRNA-143的表达量分别为0.93±0.17和0.27±0.05;两标志物在良性食管疾病组的表达量分别为0.25±0.03和0.99±0.15;两标志物在对照组的表达量分别为0.23±0.03和1.02±0.15。食管癌组miRNA-21,miRNA-143表达量分别与良性食管疾病组比较呈现上调、下调,差异有统计学意义(t=10.87,11.55,均P<0.01),与对照组比较呈现上调、下调,差异有统计学意义(t=9.20,9.07,均P<0.01)。良性食管疾病组血浆miRNA-21,miRNA-143表达量与对照组比较差异则无统计学意义(t=1.39,1.19,均P>0.05)。血浆miRNA-21,miRNA-143分别在食管癌组、良性食管疾病组和对照组的阳性率分别为81.5%(22/27),4.0%(1/25),0(0/24);85.2%(23/27),4.0%(1/25),0(0/24)。食管癌组miRNA-21,miRNA-143阳性率分别与良性食管疾病组和对照组比较增高,差异有统计学意义(X^2=31.59,34.39,均p<0.01;x^2=34.42,37.23,均P<0.01),良性食管疾病组两标志物水平与对照组比较差异则无统计学意义(X^2=0.980,0.980,均p<0.01)。血浆miRNA-21,miRNA-143诊断早期食管癌的敏感度及特异度分别为81.4%,97.9%;85.1%,97.9%。食管癌组miRNA-21,miRNA-143的灵敏度分别与CEA和CA72-4比较明显增高,差异有统计学意义(X^2=12.79,P<0.01;x^2=5.33,P<0.05;X^2=15.03,P<0.01;X^2=6.95,P<0.05)。食管癌组miRNA-21,miRNA-143的特异度分别与CEA和CA72-4比较,差异无统计学意义(X^2=1.043,0.000,均P>0.05,X^2=1.043,0.000,均P>0.05)。采用Spearman相关性分析 展开更多
关键词 食管癌 良性食管疾病 实时荧光定量pcr(rt-pcr) MIRNA-21 miRNA-143
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济宁地区无偿献血者人细小病毒B19感染的相关研究 被引量：5
6
作者 王志效 周贝贝 +1 位作者 张娜 黄海燕 《公共卫生与预防医学》 2015年第3期4-7,共4页
目的为了解济宁地区献血人群中人细小病毒B19(human parvovirus B19,简称HPV B19)感染情况,探讨血浆合并对其检出率的影响情况,降低临床输血风险提供一定依据。方法采用酶联免疫吸附法(ELISA)和实时荧光定量PCR(RTPCR)法对采集的960份... 目的为了解济宁地区献血人群中人细小病毒B19(human parvovirus B19,简称HPV B19)感染情况,探讨血浆合并对其检出率的影响情况,降低临床输血风险提供一定依据。方法采用酶联免疫吸附法(ELISA)和实时荧光定量PCR(RTPCR)法对采集的960份献血员血液样本进行单人份及随机8人份血浆合并样本进行HPV B19-Ig G、Ig M抗体及DNA检测。结果单人份血浆与随机8人份血浆合并样本HPV B19 Ig G抗体、Ig M抗体阳性率分别为36.15%、5.94%、35.83%、12.50%,抗体阳性标本中单人份及血浆合并样本DNA阳性率分别为0.83%、5.00%。其中Ig M抗体阳性组B19 DNA检出率明显高于Ig G阳性组。结论献血人群中存在较高的HPV B19感染率,血浆合并后Ig M抗体及DNA检出率较高,未提示其传播风险降低,应对儿童、老年人、孕妇等免疫功能低下者选择性输注B19-Ig G抗体滴度较高的血液制品。 展开更多
关键词 无偿献血者 人细小病毒B19 血浆合并 实时荧光定量pcr(rt-pcr)
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3种检测方法在出血热病原检测中的应用效果比较 被引量：1
7
作者 魏卓超 张巍 +2 位作者 隋丹 邓晓丽 王盛 《中华卫生杀虫药械》 CAS 2020年第6期556-559,共4页
目的探究3种检测方法在出血热病原检测中的实际应用效果,为出血热防控提供科学准确的检测数据。方法参照《全国肾综合征出血热监测方案(试行)》中的检测方法,以免疫荧光法(IFA)、酶联免疫吸附实验(ELISA)法、实时荧光定量PCR(RT-PCR)法... 目的探究3种检测方法在出血热病原检测中的实际应用效果,为出血热防控提供科学准确的检测数据。方法参照《全国肾综合征出血热监测方案(试行)》中的检测方法,以免疫荧光法(IFA)、酶联免疫吸附实验(ELISA)法、实时荧光定量PCR(RT-PCR)法对2018—2019年鞍山市国家级监测点采集的宿主动物标本进行检测。结果利用IFA法在400份鼠肺标本中共检出30份鼠肺抗原阳性,带毒率为7.5%;用ELISA法在400份鼠血标本中共检出41份鼠血总抗体阳性,鼠感染率为10.25%;用RT-PCR法检测400份鼠肺标本,检出22株出血热阳性,4份灰区,PCR法阳性率为5.5%;3种方法两两配对卡方检验,对IFA法和ELISA法结果进行比较,差异无统计学意义(χa^2=3.70,P>0.05),将PCR法分别与IFA法和ELISA法的结果比较,差异有统计学意义(χb^2=4.08,χc^2=12.96,P<0.05);对3种方法进行筛选试验,RT-PCR法灵敏度和特异度更高。结论 3种方法各有特点,IFA法适合初步筛查性工作,ELISA法检测时间较短,RT-PCR方法较为精准。 展开更多
关键词 出血热 免疫荧光法 酶联免疫吸附实验(ELISA) 实时荧光定量pcr(rt-pcr)
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蒙古绵羊大卵泡内颗粒细胞ghrelin mRNA的表达
8
作者 宋艳华 刘剑郁 曹贵方 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第9期39-41,共3页
为了探索ghrelin在绵羊卵母细胞成熟过程中的潜在作用，试验采用实时荧光定量PCR（RT—PCR）技术对大卵泡（3乙箩咖）的壁层颗粒细胞和卵丘颗粒细胞ghrelinmRNA相对表达量进行分析。结果表明：壁层颗粒细胞和卵丘颗粒细胞ghrelinmRNA表... 为了探索ghrelin在绵羊卵母细胞成熟过程中的潜在作用，试验采用实时荧光定量PCR（RT—PCR）技术对大卵泡（3乙箩咖）的壁层颗粒细胞和卵丘颗粒细胞ghrelinmRNA相对表达量进行分析。结果表明：壁层颗粒细胞和卵丘颗粒细胞ghrelinmRNA表达水平差异不显著（P〉0．05），ghrelin mRNA的相对表达量在排卵前无明显变化。 展开更多
关键词 蒙古绵羊 卵母细胞 颗粒细胞 实时荧光定量pcr(rt-pcr) GHRELIN
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基于双基因分析的结肠癌标志基因选择 被引量：2
9
作者 李建更 高志坤 +1 位作者 严志 阮晓钢 《中国生物医学工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期691-695,共5页
针对结肠癌标志基因选择问题,引入一种最高得分对(TSP)方法,处理一组包含40个肿瘤和22个正常样本的结肠癌微阵列数据,得到标志基因对(VIP,DARS)并构建双基因分类器。结果显示,该分类器对62例样本的分类准确率可达93.55%。进一步,利用荧... 针对结肠癌标志基因选择问题,引入一种最高得分对(TSP)方法,处理一组包含40个肿瘤和22个正常样本的结肠癌微阵列数据,得到标志基因对(VIP,DARS)并构建双基因分类器。结果显示,该分类器对62例样本的分类准确率可达93.55%。进一步,利用荧光实时定量PCR在10个独立样本上检验所选基因对的分类效果,正确率为100%,表明该方法能有效地选择结肠癌标志基因,对临床诊断有积极的意义。 展开更多
关键词 标志基因 结肠癌 双基因分类器 荧光实时定量pcr(Q-rt-pcr)
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