目的了解佛波酯-12-肉豆蔻酸酯-13-乙酸酯（PMA）分化的THP-1（人单核细胞白血病肿瘤细胞）上巨噬细胞标记特征,评估其作为人源巨噬细胞的替代品的可行性。方法用PMA诱导分化THP-1细胞72 h（活化组）,并同步分离随机健康O型献血者的新...目的了解佛波酯-12-肉豆蔻酸酯-13-乙酸酯（PMA）分化的THP-1（人单核细胞白血病肿瘤细胞）上巨噬细胞标记特征,评估其作为人源巨噬细胞的替代品的可行性。方法用PMA诱导分化THP-1细胞72 h（活化组）,并同步分离随机健康O型献血者的新鲜外周血单个核细胞（PBMC）,其中一部分PBMC用人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）培养7 d（7 d PBMC）,而未处理的THP-1作为未活化组,分别用流式细胞仪分析这4组细胞的CD14、CD16、HLA-Ⅰ、HLA-DR等细胞表型,并分析Fc受体CD32、CD32b的组成;并用已知含人源HLA-Ⅰ、Ⅱ类抗体、抗-E、健康献血者血浆各1份以及6种未确定抗体特异性但免疫血液学试验检出疑有不规则抗体的血浆与活化THP-1和新鲜PBMC细胞共培养,观察CD14、CD16、HLA-I、HLA-DR等变化;制备O型IgG致敏红细胞和非致敏红细胞,分别用活化THP-1和PBMC细胞与致敏、非致敏红细胞共培养,进行单核细胞单层试验（MMA）。结果观察到THP-1细胞未活化组为CD14~＋CD16^-,活化组为CD14~＋CD16^（＋d）,缺乏PBMC中CD14^-CD16~＋以及非经典CD14^（＋h） CD16~＋,后者在7 d PBMC中明显增加;未活化THP-1表达HLA-Ⅰ类、CD32分子,但HLA-Ⅱ类和CD32b较弱,在PMA刺激后这些抗原或标记分子均升高。发现活化THP-1细胞CD14、CD16分子可被人源性血浆吸附而致下降,而6例未确定抗体特异性的血浆有4例明显降低HLA-Ⅰ类表达。活化THP-1和PBMC均可成功作为单核细胞单层试验的反应细胞,诱导红细胞调理性吞噬。结论 THP-1可替代人单核巨噬细胞作为人源PBMC来源单核巨噬细胞的替代,细胞群落比较少;但是需要注意其与PBMC来源单核巨噬细胞的不同,并具有HLA抗原特异性,因此其应用范围可能比较局限。展开更多
文摘目的了解佛波酯-12-肉豆蔻酸酯-13-乙酸酯（PMA）分化的THP-1（人单核细胞白血病肿瘤细胞）上巨噬细胞标记特征,评估其作为人源巨噬细胞的替代品的可行性。方法用PMA诱导分化THP-1细胞72 h（活化组）,并同步分离随机健康O型献血者的新鲜外周血单个核细胞（PBMC）,其中一部分PBMC用人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）培养7 d（7 d PBMC）,而未处理的THP-1作为未活化组,分别用流式细胞仪分析这4组细胞的CD14、CD16、HLA-Ⅰ、HLA-DR等细胞表型,并分析Fc受体CD32、CD32b的组成;并用已知含人源HLA-Ⅰ、Ⅱ类抗体、抗-E、健康献血者血浆各1份以及6种未确定抗体特异性但免疫血液学试验检出疑有不规则抗体的血浆与活化THP-1和新鲜PBMC细胞共培养,观察CD14、CD16、HLA-I、HLA-DR等变化;制备O型IgG致敏红细胞和非致敏红细胞,分别用活化THP-1和PBMC细胞与致敏、非致敏红细胞共培养,进行单核细胞单层试验（MMA）。结果观察到THP-1细胞未活化组为CD14~＋CD16^-,活化组为CD14~＋CD16^（＋d）,缺乏PBMC中CD14^-CD16~＋以及非经典CD14^（＋h） CD16~＋,后者在7 d PBMC中明显增加;未活化THP-1表达HLA-Ⅰ类、CD32分子,但HLA-Ⅱ类和CD32b较弱,在PMA刺激后这些抗原或标记分子均升高。发现活化THP-1细胞CD14、CD16分子可被人源性血浆吸附而致下降,而6例未确定抗体特异性的血浆有4例明显降低HLA-Ⅰ类表达。活化THP-1和PBMC均可成功作为单核细胞单层试验的反应细胞,诱导红细胞调理性吞噬。结论 THP-1可替代人单核巨噬细胞作为人源PBMC来源单核巨噬细胞的替代,细胞群落比较少;但是需要注意其与PBMC来源单核巨噬细胞的不同,并具有HLA抗原特异性,因此其应用范围可能比较局限。
文摘[目的]观察煤尘通过单核细胞源性巨噬细胞致人胚肺成纤维细胞MRC-5纤维化改变过程中,胸腺分化抗原-1(Thy-1)表达及其DNA甲基化变化。[方法]用含500 nmol/L佛波酯的1640培养液培养人单核细胞,24 h诱导分化后成巨噬细胞;收集100μg/m L煤尘刺激巨噬细胞24 h的培养上清,再刺激MRC-5 24、48、72 h,对照组分别为正常巨噬细胞和正常人胚肺成纤维细胞。酶联免疫分析法测定巨噬细胞上清液中IL-6、TGF-β1蛋白表达水平和MRC-5中TGF-β1蛋白表达水平,实时荧光定量PCR法检测胶原蛋白-I、胶原蛋白-III、α-SMA、Thy-1、DNA甲基化转移酶(DNMTs)1、3a、3b m RNA的表达,巢式降落式特异性PCR检测Thy-1DNA甲基化。[结果]煤尘组巨噬细胞上清中IL-6、TGF-β1蛋白表达水平与对照组比较明显增加[(5.542±0.953)ng/m Lvs(2.498±0.456)ng/m L,(462.435±56.620)ng/L vs(329.971±17.911)ng/L](P<0.05);巨噬细胞染尘后上清刺激MRC-5 24、48、72 h,TGF-β1蛋白表达[(223.813±5.723),(263.757±17.254),(326.720±11.263)ng/L]和胶原蛋白I m RNA表达(3.38±0.37,3.87±0.28,4.40±0.10)、胶原蛋白III m RNA表达(1.65±0.12,2.37±0.19,2.66±0.28)、α-SMA m RNA表达(2.41±0.47,4.76±0.10,4.23±0.63)均升高;且均存在时间效应关系,r值分别为0.965,0.876,0.899,0.667(P<0.05);煤尘组MRC-5中Thy-1m RNA表达均低于对照组,随着巨噬上清液作用时间的增加,其表达逐渐降低(0.634±0.014,0.448±0.055,0.352±0.044),呈负相关(r=-0.945,P<0.05);煤尘组MRC-5中DNMTs m RNA表达均较对照组升高(DNMT1:1.57±0.12,2.51±0.33,7.00±0.71;DNMT3a:0.74±0.09,2.89±0.52,3.31±0.53;DNMT3b:1.46±0.18,2.25±0.44,5.33±0.16),且均存在时间效应关系,r值分别为0.924,0.890,0.937(P<0.05);煤尘组Thy-1 DNA甲基化水平较对照组升高(0.506±0.014,0.536±0.017,0.570±0.032),存在时间效应关系(r=0.682,P<0.05)。[结论]煤尘通过单核细胞源性巨噬细胞致人胚肺成纤维细胞纤维化发生,在此过程中Thy-1 DNA发生甲基�
