Δ~6-脂肪酸脱氢酶的分子生物学研究进展 被引量：30

1

作者 张琦 李明春 +3 位作者 孙红妍 孙颖 马海庭 邢来君 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期319-324,共6页

包括γ_亚麻酸在内的多不饱和脂肪酸由于在人类健康中的重要作用而成为有价值的产品 ,目前市场上对γ_亚麻酸的需求持续增长 ,然而当前来源难以满足市场的需求 ,寻找合适的替代来源将有助于解决这一问题。Δ6 _脂肪酸脱氢酶是多不饱和... 包括γ_亚麻酸在内的多不饱和脂肪酸由于在人类健康中的重要作用而成为有价值的产品 ,目前市场上对γ_亚麻酸的需求持续增长 ,然而当前来源难以满足市场的需求 ,寻找合适的替代来源将有助于解决这一问题。Δ6 _脂肪酸脱氢酶是多不饱和脂肪酸合成途径中的限速酶 ,这里从Δ6 _脂肪酸脱氢酶的基因克隆、结构和功能的研究、系统进化和基因工程应用等方面探讨了Δ6 _脂肪酸脱氢酶的研究进展。 展开更多

关键词 ^△^6-脂肪酸脱氢酶 Γ-亚麻酸 基因工程 系统进化 结构和功能

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深黄被孢霉M_(6-22) Δ~6-脂肪酸脱氢酶基因在酿酒酵母中的表达 被引量：25

2

作者 刘莉 李明春 +2 位作者 胡国武 张丽 邢来君 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期397-401,共5页

应用PCR技术 ,从含有深黄被孢霉Δ6 脂肪酸脱氢酶基因的重组质粒pTMICL6中 ,扩增出 1 38kb的目的片段 ,亚克隆到大肠杆菌和酿酒酵母的穿梭表达载体pYES2 .0 ,在大肠杆菌中筛选到含有目的基因的重组质粒pYMID6,用醋酸锂方法转化到酿酒... 应用PCR技术 ,从含有深黄被孢霉Δ6 脂肪酸脱氢酶基因的重组质粒pTMICL6中 ,扩增出 1 38kb的目的片段 ,亚克隆到大肠杆菌和酿酒酵母的穿梭表达载体pYES2 .0 ,在大肠杆菌中筛选到含有目的基因的重组质粒pYMID6,用醋酸锂方法转化到酿酒酵母的缺陷型菌株INVSc1中 ,在SC Ura合成培养基中 ,选择到酵母工程株YMID6。在合适的培养基及培养条件下 ,加入外源底物亚油酸 ,经半乳糖诱导后 ,收集菌体。通过GC MS对酵母工程株所含的全部脂肪酸进行色谱分析 ,结果表明 ,γ 亚麻酸的含量占酵母总脂肪酸的 8 69%。 展开更多

关键词 深黄被孢霉 酿酒酵母 Γ-亚麻酸 ^△^6-脂肪酸脱氢酶 基因 表达

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γ-亚麻酸的研究进展 被引量：13

3

作者 田歆珍 王贤磊 +1 位作者 孙桂琳 李冠 《生物技术》 CAS CSCD 2008年第1期89-92,共4页

γ-亚麻酸(GLA)是人体必需的具有多种特殊生理功能的多不饱和脂肪酸,它在机体的物质代谢和生理调控上发挥着十分重要的作用,已被世界上许多国家用于医药工业、生产功能性食品和美容护肤品等多种领域。该文综述了GLA的生物活性、动植物... γ-亚麻酸(GLA)是人体必需的具有多种特殊生理功能的多不饱和脂肪酸,它在机体的物质代谢和生理调控上发挥着十分重要的作用,已被世界上许多国家用于医药工业、生产功能性食品和美容护肤品等多种领域。该文综述了GLA的生物活性、动植物来源、微生物资源及应用基因工程技术改造植物、微生物生产GLA的研究进展。提出了目前常用的三种生产GLA的方法存在的问题。认为利用基因工程技术改良油料作物生产GLA的理论和方法已经建立,具有广阔的应用前景。 展开更多

关键词 Γ-亚麻酸 生物活性 发酵 ^△^6-脂肪酸脱氢酶

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少根根霉Δ~6-脂肪酸脱氢酶基因的克隆和表达 被引量：7

4

作者 张琦 李明春 +3 位作者 孙颖 马海庭 任勇 邢来君 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第7期740-749,共10页

根据真菌Δ6 脂肪酸脱氢酶保守的氨基酸序列设计简并引物进行RT PCR ,获得一个 5 93bp的cDNA片段 ,再根据获得的部分序列设计基因特异性引物 ,通过cDNA末端扩增技术 (RACE)获得该cDNA的 3′和 5′序列 ,从而得到全长为 14 82bp的cDNA序... 根据真菌Δ6 脂肪酸脱氢酶保守的氨基酸序列设计简并引物进行RT PCR ,获得一个 5 93bp的cDNA片段 ,再根据获得的部分序列设计基因特异性引物 ,通过cDNA末端扩增技术 (RACE)获得该cDNA的 3′和 5′序列 ,从而得到全长为 14 82bp的cDNA序列。序列分析结果表明 ,该序列具有一个长度为 1377bp、编码 4 5 8个氨基酸的开放阅读框 ,所编码蛋白质的大小为 5 2kD。与报道的Δ6 脂肪酸脱氢酶一样 ,推测的氨基酸序列具有膜整合脂肪酸脱氢酶特异性的 3个组氨酸保守区和疏水结构 ,在其氨基酸序列的N 末端具有类似于细胞色素b5的血红素结合区。该序列为一个新的编码Δ6 脂肪酸脱氢酶的基因 ,为了验证其功能 ,把开放阅读框序列RAD6亚克隆到表达载体 pYES2 0 ,构建重组表达载体pYRAD6 ,并转化到酿酒酵母的缺陷型菌株INVScl进行表达。通过气相色谱(GC)和气相色谱 /质谱 (GC MS)分析表明 ,该序列在酿酒酵母中获得表达。所编码的酶具有Δ6 脂肪酸脱氢酶活性 ,能将外源性的底物亚油酸转化为γ 亚麻酸 ,γ 亚麻酸的含量占酵母总脂肪酸的 3 85 %。 展开更多

关键词 少根根霉 ^△^6-脂肪酸脱氢酶 Γ-亚麻酸 cDNA末端扩增 酿酒酵母 表达

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功能性γ-亚麻酸代谢研究的进展 被引量：10

5

作者 徐焰 肖瀛 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2005年第8期508-512,共5页

本文综述γ-亚麻酸的生理功能和代谢途径中△6-脂肪酸脱氢酶相关研究的进展,并提出可采用代谢工程的原理和方法对γ-亚麻酸做进一步深入探讨的观点。

关键词 r-亚麻酸(GLA) 生理功能 ^△^6-脂肪酸脱氢酶 r-亚麻酸 酸代谢 代谢途径 代谢工程

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卷枝毛霉Δ~6-脂肪酸脱氢酶基因的克隆及在酿酒酵母中的高效表达(英文) 被引量：3

6

作者 郝彦玲 王颖 +2 位作者 朱本忠 栾春光 罗云波 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第3期303-308,共6页

为获得产高γ 亚麻酸的酿酒酵母工程菌株,应用RT PCR技术,从卷枝毛霉中扩增出△6 脂肪酸脱氢酶 基因,亚克隆到大肠杆菌和酿酒酵母的穿梭表达载体pYES2.0,在大肠杆菌中筛选到含有目的基因的重组质粒 pYES412,用醋酸锂方法转化到酿酒... 为获得产高γ 亚麻酸的酿酒酵母工程菌株,应用RT PCR技术,从卷枝毛霉中扩增出△6 脂肪酸脱氢酶 基因,亚克隆到大肠杆菌和酿酒酵母的穿梭表达载体pYES2.0,在大肠杆菌中筛选到含有目的基因的重组质粒 pYES412,用醋酸锂方法转化到酿酒酵母缺陷型菌株INVScI中,在SC ura合成培养基中筛选到转化酵母,在合适 的培养基及培养条件下,加入外源底物亚油酸,经半乳糖诱导后,收集菌体,通过气相色谱对转化酵母进行脂肪酸 色谱分析,结果表明:γ 亚麻酸占总脂肪的50.07%。迄今为止,这是国内外△6 脂肪酸脱氢酶基因在酿酒酵母表 达量最高的报道。 展开更多

关键词 ^△^6—脂肪酸脱氢酶 卷枝毛霉 γ—亚麻酸 酿酒酵母

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向大豆导入深黄被孢霉△^6—脂肪酸脱氢酶基因的初步研究 被引量：7

7

作者 卜云萍 李明春 +2 位作者 胡国武 王广科 邢来君 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期11-17,共7页

通过农杆菌介导法 ,将深黄被孢霉△6-脂肪酸脱氢酶基因导入到栽培大豆吉育 4 3、黑农36、黑农 37等品种。采用多种外植体和感染方法 ,从子叶节和胚轴诱导出丛生芽与再生植株。经过在含 5 0mg L卡那霉素的筛选培养基中连续筛选 ,获得一... 通过农杆菌介导法 ,将深黄被孢霉△6-脂肪酸脱氢酶基因导入到栽培大豆吉育 4 3、黑农36、黑农 37等品种。采用多种外植体和感染方法 ,从子叶节和胚轴诱导出丛生芽与再生植株。经过在含 5 0mg L卡那霉素的筛选培养基中连续筛选 ,获得一批转基因植株。经PCR检测和DNA分子杂交分析 ,初步证明外源基因已导入并整合到大豆基因组中。 展开更多

关键词 大豆 深黄被孢霉 ^△^6-脂肪酸脱氢酶 农杆菌介导法 转基因植株

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转译起始密码子周边序列的改变对Δ~6-脂肪酸脱氢酶基因表达的影响 被引量：5

8

作者 张琦 李明春 +4 位作者 孙颖 马海庭 邢来君 孙红妍 任勇 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期536-539,共4页

将少根根霉中Δ6_脂肪酸脱氢酶基因 (RAD6 )的起始密码子周边序列作适当的修改 ,并把修改后获得的片段(RAD6_1 )亚克隆到表达载体pYES2 0 ,构建重组表达载体pYRAD6_1。经测序验证 ,把pYRAD6_1转化到酿酒酵母的缺陷型菌株INVScl进行表... 将少根根霉中Δ6_脂肪酸脱氢酶基因 (RAD6 )的起始密码子周边序列作适当的修改 ,并把修改后获得的片段(RAD6_1 )亚克隆到表达载体pYES2 0 ,构建重组表达载体pYRAD6_1。经测序验证 ,把pYRAD6_1转化到酿酒酵母的缺陷型菌株INVScl进行表达分析 ,同时以空载体pYES2 0和出发序列所构建的pYRAD6作为对照。通过气相色谱 (GC)和气相色谱 质谱 (GC_MS)分析表明 ,在pYRAD6和pYRAD6_1转化的酿酒酵母中生成γ_亚麻酸 ,而pYES2 0中没有检测到。其中 ,pYRAD6_1转化的酿酒酵母γ_亚麻酸表达量占细胞总脂肪酸含量的 5 2 3% ,而对照pYRAD6转化的酿酒酵母中表达量只占 2 6 4 %。 展开更多

关键词 ^△^6-脂肪酸脱氢酶 基因 表达 酿酒酵母 少根根霉 转译起始密码子

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高山被孢霉△~6-脂肪酸脱氢酶基因在大豆中的表达 被引量：6

9

作者 卜云萍 李明春 +1 位作者 胡国武 邢来君 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2004年第8期1104-1109,共6页

将从高山被孢霉中克隆的△6-脂肪酸脱氢酶基因与植物表达载体pBI121连接,构建了重组质粒pBMICL6,采用农杆菌介导的大豆子叶节转化系统成功地将该基因导入到栽培大豆吉林35、吉林43、吉林47、绥农10、绥农14和黑农37等品种中,获得了一批... 将从高山被孢霉中克隆的△6-脂肪酸脱氢酶基因与植物表达载体pBI121连接,构建了重组质粒pBMICL6,采用农杆菌介导的大豆子叶节转化系统成功地将该基因导入到栽培大豆吉林35、吉林43、吉林47、绥农10、绥农14和黑农37等品种中,获得了一批转基因植株。经PCR检测和Southern杂交分析,证明外源基因已导入并整合到大豆的基因组中。Northern杂交结果表明,该基因在转基因大豆的mRNA水平上获得表达。通过气相色谱(GC-MS)对大豆种子进行脂肪酸成分分析,发现转基因大豆产生了γ-亚麻酸,其含量最高可达25.165％。 展开更多

关键词 高山被孢霉 ^△^6-脂肪酸脱氢酶 大豆 基因表达

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Δ~6-脂肪酸脱氢酶研究进展 被引量：4

10

作者 白义春 康相涛 +2 位作者 孙桂荣 田亚东 黄艳群 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2008年第2期9-12,共4页

关键词 ^△^6-脂肪酸脱氢酶 长链多不饱和脂肪酸 单不饱和脂肪酸 机体组织 Α-亚麻酸 花生四烯酸 组成成分 大脑发育

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Δ~6-脂肪酸脱氢酶基因克隆及其共转化表达载体的构建 被引量：4

11

作者 张秀春 林俊芳 郭丽琼 《热带作物学报》 CSCD 2004年第4期63-67,共5页

采用RT-PCR的方法从海南玻璃苣中克隆了Δ6-脂肪酸脱氢酶基因(Δ6-dsa)。DNA序列测定结果表明,Δ6-dsa全长1347bp编码448个氨基酸。Δ6-dsa序列在genbank中采用BLAST程序进行同源序列分析,结果表明,Δ6-dsa核苷酸序列与克隆自美国德克... 采用RT-PCR的方法从海南玻璃苣中克隆了Δ6-脂肪酸脱氢酶基因(Δ6-dsa)。DNA序列测定结果表明,Δ6-dsa全长1347bp编码448个氨基酸。Δ6-dsa序列在genbank中采用BLAST程序进行同源序列分析,结果表明,Δ6-dsa核苷酸序列与克隆自美国德克萨斯州的玻璃苣Δ6-脂肪酸脱氢酶基因的核苷酸序列完全相同。Δ6-dsa克隆进T-easyVector后形成质粒pGΔ6-DSA。把质粒pGΔ6-DSA上的Δ6-脂肪酸脱氢酶基因片段克隆进含有T-DNA和35S启动子的质粒pGIN22中,形成含有目的基因的表达载体pGIN23。把表达载体pGIN23与另一个含有T-DNA、启动子、筛选标记基因的表达载体pLPN28进行亚克隆,使得筛选标记基因和Δ6-dsa分别插入到同一质粒的2个相互独立的T-DNA内,构建成共转化表达载体pLIN61。 展开更多

关键词 ^△^6-脂肪酸脱氢酶 表达载体 克隆 共转化 筛选标记基因 酶基因 DNA DSA 质粒 玻璃苣

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匍枝根霉(Rhizopus stolonifer)As3.38△6-脂肪酸脱氢酶基因的克隆与酵母表达 被引量：1

12

作者 陆合 柴友荣 +2 位作者 张学昆 雷天刚 李加纳 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期59-63,共5页

通过气相色谱法(GC)快速分析8种真菌的脂肪酸成分,发现匍枝根霉(Rhizopus stolonifer)具有较高的γ-亚麻酸含量,利用RT-PCR和RACE方法获得了全长为1475bp的匍枝根霉△6-脂肪酸脱氢酶基因的cDNA序列,其中开放阅读框为1380bp,编码459个氨... 通过气相色谱法(GC)快速分析8种真菌的脂肪酸成分,发现匍枝根霉(Rhizopus stolonifer)具有较高的γ-亚麻酸含量,利用RT-PCR和RACE方法获得了全长为1475bp的匍枝根霉△6-脂肪酸脱氢酶基因的cDNA序列,其中开放阅读框为1380bp,编码459个氨基酸。生物信息学分析所克隆的基因具有△6-脂肪酸脱氢酶的典型结构:N端具有细胞色素b5结构、具有3个保守的组氨酸区序列和跨膜结构;把该基因的开放阅读框序列连接到表达载体pYES2.0上,构建重组表达载体pYRnD6D,并将其转入缺陷型酿酒酵母INVScl中进行表达。GC分析表明,该序列在酵母中获得了表达,表达产物表现出△6-脂肪酸脱氢酶的酶学活性,能将底物亚油酸转化为γ-亚麻酸。新生成的γ-亚麻酸占酵母细胞总脂肪酸的12.25%。 展开更多

关键词 Γ-亚麻酸 △6-脂肪酸脱氢酶 匍枝根霉(Rhizopus stolonifer) 酵母表达

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T_5代γ-亚麻酸转基因大豆的遗传稳定性分析 被引量：2

13

作者 陈晟 郭丽琼 +1 位作者 宋景深 林俊芳 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期24-28,共5页

利用PCR检测和标记基因抗性检测对表达γ-亚麻酸转基因大豆第5代植株的外源基因遗传稳定性及目的基因和抗性基因的分离情况进行了分析。结果表明:在20个转基因大豆株系中,有2个转基因大豆株系(TS824和TS825)只含有△6-fad基因而没有bar... 利用PCR检测和标记基因抗性检测对表达γ-亚麻酸转基因大豆第5代植株的外源基因遗传稳定性及目的基因和抗性基因的分离情况进行了分析。结果表明:在20个转基因大豆株系中,有2个转基因大豆株系(TS824和TS825)只含有△6-fad基因而没有bar基因;7个转基因大豆株系(TS81、TS83、TS85、TS87、TS811、TS814、TS818)只含有bar基因而没有△6-fad基因;9个转基因大豆株系(TS88、TS89、TS810、TS813、TS815、TS816、TS817、TS819和TS820)既有△6-fad基因也有bar基因;2个转基因大豆株系(TS82和TS86)既没有△6-fad基因也没有bar基因。因此,△6-fad基因在部分株系中获得了稳定的遗传,同时有2个株系目的基因和抗性基因在后代中分离。 展开更多

关键词 遗传稳定性 转基因大豆 Γ-亚麻酸 △6-脂肪酸脱氢酶

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深黄被孢霉Δ~6-脂肪酸脱氢酶基因在毕赤氏酵母SMD1168中表达的研究

14

作者 王长远 全越 +2 位作者 沈冰蕾 姚笛 于长青 《农产品加工（下）》 2016年第7期1-3,8,共4页

引物根据△6-脂肪酸脱氢酶（D6D）基因以及酵母蛋白表达载体pGAPZctA的多克隆位点进行引物设计，并在上游插入ECoRI位点、下游插入XhoI位点，从深黄被孢霉中克隆D6D基因，构建pMD18-T-D6D载体与pGAPZtxA—D6D载体。将重组质粒线性化，... 引物根据△6-脂肪酸脱氢酶（D6D）基因以及酵母蛋白表达载体pGAPZctA的多克隆位点进行引物设计，并在上游插入ECoRI位点、下游插入XhoI位点，从深黄被孢霉中克隆D6D基因，构建pMD18-T-D6D载体与pGAPZtxA—D6D载体。将重组质粒线性化，并将其电转导入到毕赤氏酵母（PichiapastorisSMD1168）中，Zeocin抗生素筛选高拷贝转化子，对重组菌进行诱导表达。经过Tricine—SDS—PAGE分析和蛋白质免疫印迹（Westernbloting）试验，证明△6-脂肪酸脱氢酶融合蛋白具有免疫学活性。结果成功构建了重组酵母pGAPZdA—SMD1168，为利用基因工程菌生产y-亚麻酸（GLA）奠定理论基础。 展开更多

关键词 深黄被孢霉 △6-脂肪酸脱氢酶 毕赤氏酵母SMD1168 pGAPZctA表达载体

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不同N端序列长度匍枝根霉△6-脂肪酸脱氢酶重组子的表达

15

作者 陆合 张碧波 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期107-110,共4页

克隆并在酵母中表达两个不同N段序列长度的匍枝根霉△6-脂肪酸脱氢酶重组子,其中长序列的重组子LYRnD6D是从匍枝根霉中克隆的△6-脂肪酸脱氢酶基因,编码459个氨基酸,N端序列为MSTLDRQSIFTIKELESISQRIHDG-DEEAMKFIII;短序列重组子SYRnD6... 克隆并在酵母中表达两个不同N段序列长度的匍枝根霉△6-脂肪酸脱氢酶重组子,其中长序列的重组子LYRnD6D是从匍枝根霉中克隆的△6-脂肪酸脱氢酶基因,编码459个氨基酸,N端序列为MSTLDRQSIFTIKELESISQRIHDG-DEEAMKFIII;短序列重组子SYRnD6D是预测的匍枝根霉△6-脂肪酸脱氢酶基因的ORF序列,N端序列为MKFIIIDKKVY,编码430个氨基酸;两个重组子均具有△6-脂肪酸脱氢酶保守的组氨酸序列和HPGG序列,长序列的N端比短序列长29个氨基酸残基(MSTLDRQSIFTIKELESISQRIHDGDE-EA)。两个重组子在缺陷型酵母中均得到了的表达,产生了γ-亚麻酸。利用酶的相对活力比较两个重组子在同一温度下的稳定性,长序列重组子的酶在15℃下反应4h后相对活力仍有74%,而短序列酶的相对活力只有43%,所以长序列重组子酶在低温下比短序列酶稳定性高,是因为长序列多出的氨基酸序列增加了酶的稳定性。 展开更多

关键词 序列长度 △6-脂肪酸脱氢酶 匍枝根霉 表达 稳定性

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深黄被孢霉△~6-脂肪酸脱氢酶基因的克隆及序列分析 被引量：24

16

作者 李明春 刘莉 +2 位作者 张丽 胡国武 邢来君 《菌物系统》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期44-50,共7页

γ－亚麻酸（ＧＬＡ，Ｃ１８：３△６，９，１２）是由△６－脂肪酸脱氢酶以亚油酸（ＬＡ，Ｃ１８：２△９，１２）为底物，在Ｃ６位脱氢形成的。由于在人体中，γ－亚麻酸是花生四烯酸、前列腺素类和白三烯类等生理活性物质的前体物，... γ－亚麻酸（ＧＬＡ，Ｃ１８：３△６，９，１２）是由△６－脂肪酸脱氢酶以亚油酸（ＬＡ，Ｃ１８：２△９，１２）为底物，在Ｃ６位脱氢形成的。由于在人体中，γ－亚麻酸是花生四烯酸、前列腺素类和白三烯类等生理活性物质的前体物，而深黄被孢霉是目前用于微生物发酵生产γ－亚麻酸的主要菌株。本文根据脂肪酸脱氢酶的保守区设计引物，利用反转录聚合酶链式反应从丝状真菌深黄被孢霉中克隆了编码△６－脂肪酸脱氢酶的ｃＤＮＡ，全长为１３７４个核苷酸，编码４５７ 个氨基酸，但与其他位点的脂肪酸脱氢酶不同的是， △６－脂肪酸脱氢酶在其序列的 Ｎ 端特有细胞色素 ｂ５（Ｃｙｔｂ５）区。这是国际上对深黄被孢霉△６－脂肪酸脱氢酶基因的首次报道。 展开更多

关键词 深黄被孢霉 ^△^6-脂肪酸脱氢酶基因 克隆 真菌

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高山被孢霉ATCC16266Δ~6-脂肪酸脱氢酶基因在酿酒酵母中的表达 被引量：26

17

作者 刘莉 李明春 +4 位作者 胡国武 葛军 张丽 程志晖 邢来君 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期161-164,共4页

Δ6 脂肪酸脱氢酶是形成γ 亚麻酸的关键酶。从含有高山被孢霉Δ6 脂肪酸脱氢酶基因的重组质粒pT MACL6中 ,酶切出 1 4kb的目的片段 ,亚克隆到大肠杆菌和酿酒酵母的穿梭表达载体 pYES2 .0 ,在大肠杆菌中筛选到含有目的基因的重组质粒 pY... Δ6 脂肪酸脱氢酶是形成γ 亚麻酸的关键酶。从含有高山被孢霉Δ6 脂肪酸脱氢酶基因的重组质粒pT MACL6中 ,酶切出 1 4kb的目的片段 ,亚克隆到大肠杆菌和酿酒酵母的穿梭表达载体 pYES2 .0 ,在大肠杆菌中筛选到含有目的基因的重组质粒 pYMAD6 ,用醋酸锂方法转化到酿酒酵母的缺陷型菌株INCSc1中 ,在SC Ura合成培养基中 ,选择得到酿酒酵母工程株YMAD6。在合适的培养基及培养条件下 ,加入外源底物亚油酸 ,经半乳糖诱导后 ,收集菌体。通过GC MS对酵母工程株进行脂肪酸色谱分析 ,结果表明 ,产生了 31 6 %的γ 亚麻酸。这是迄今为止 ,国内外Δ6 脂肪酸脱氢酶基因在酿酒酵母中表达量最高的报道。 展开更多

关键词 ^△^6-脂肪酸脱氢酶基因 Γ-亚麻酸 酿酒酵母 表达 高山被孢霉

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深黄被孢霉Δ~6-脂肪酸脱氢酶基因在大豆中的表达 被引量：22

18

作者 李明春 卜云萍 +2 位作者 王广科 胡国武 邢来君 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第8期858-863,共6页

为在传统的油料作物大豆中产生γ 亚麻酸 ,从深黄被孢霉中克隆的Δ6 脂肪酸脱氢酶基因与植物表达载体pBI12 1连接 ,构建了重组质粒pBMICL6 ,采用农杆菌介导的大豆子叶节转化系统成功的将该基因导入到栽培大豆吉林 35、吉林 4 3、吉林 4 ... 为在传统的油料作物大豆中产生γ 亚麻酸 ,从深黄被孢霉中克隆的Δ6 脂肪酸脱氢酶基因与植物表达载体pBI12 1连接 ,构建了重组质粒pBMICL6 ,采用农杆菌介导的大豆子叶节转化系统成功的将该基因导入到栽培大豆吉林 35、吉林 4 3、吉林 4 7、绥农 10、绥农 14和黑农 37等品种中 ,获得一批转基因植株。经PCR检测和Southern杂交分析 ,证明外源基因已导入并整合到大豆的基因组中。Northern杂交结果表明该基因在转基因大豆的mRNA水平上获得表达。对转基因大豆种子进行脂肪酸成分分析 ,结果表明Δ6 脂肪酸脱氢酶基因获得表达 ,产生了γ 亚麻酸 ,其含量最高可达 2 7 0 6 7% ,这是国内外深黄被孢霉Δ6 展开更多

关键词 ^△^6-脂肪酸脱氢酶基因 大豆 r-亚麻酸 农杆菌介导 深黄被孢霉

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高山被孢霉Δ^6-脂肪酸脱氢酶基因在毕赤酵母中的胞内表达 被引量：19

19

作者 李明春 孙颖 +1 位作者 张琦 邢来君 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期34-38,共5页

γ 亚麻酸 (GLA)作为人体必需的不饱和脂肪酸 ,具有重要的营养和药用价值。Δ6 脂肪酸脱氢酶是γ 亚麻酸合成途径中的关键酶。为了在毕赤酵母中建立一种新的合成γ 亚麻酸的表达体系 ,将高山被孢霉Δ6 脂肪酸脱氢酶基因与胞内表达载体... γ 亚麻酸 (GLA)作为人体必需的不饱和脂肪酸 ,具有重要的营养和药用价值。Δ6 脂肪酸脱氢酶是γ 亚麻酸合成途径中的关键酶。为了在毕赤酵母中建立一种新的合成γ 亚麻酸的表达体系 ,将高山被孢霉Δ6 脂肪酸脱氢酶基因与胞内表达载体pPIC3 5K连接 ,SacⅠ线性化后电击法转化毕赤酵母SMD116 8,获得的转化子经PCR鉴定目的基因已整合到毕赤酵母的基因组中。用甲醇诱导表达 ,通过脂肪酸气相色谱和气相色谱 质谱 (GC MS)联用分析表明高山被孢霉Δ6 脂肪酸脱氢酶基因在毕赤酵母中获得表达 ,γ 亚麻酸含量占总脂肪酸的 16 2 6 %。 展开更多

关键词 高山被孢霉 毕赤酵母 ^Δ^6-脂肪酸脱氢酶基因 胞内表达

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双T-DNA表达载体转化大豆的研究 被引量：14

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作者 张秀春 郭丽琼 +2 位作者 吴坤鑫 林俊扬 林俊芳 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期291-295,共5页

利用含有筛选标记基因和目的基因Δ6-脂肪酸脱氢酶基因的双T-DNA共转化表达载体pLIN61,经农杆菌EHA101介导,采用子叶节转化法转化大豆,使用除草剂Glufosinate作为筛选剂,获得了一批携带有玻璃苣Δ6-脂肪酸脱氢酶基因的转基因大豆,转化... 利用含有筛选标记基因和目的基因Δ6-脂肪酸脱氢酶基因的双T-DNA共转化表达载体pLIN61,经农杆菌EHA101介导,采用子叶节转化法转化大豆,使用除草剂Glufosinate作为筛选剂,获得了一批携带有玻璃苣Δ6-脂肪酸脱氢酶基因的转基因大豆,转化效率为2.0%,共转化频率及实际转化率分别为56.25%、1.12%。PCR检测和Southern杂交结果证明,玻璃苣D6D已经整合到大豆的基因组上。RT-PCR检测结果显示,玻璃苣Δ6-脂肪酸脱氢酶基因在转基因大豆的转录水平上得到了表达。 展开更多

关键词 共转化表达载体 ^△^6-脂肪酸脱氢酶基因 转基因大豆

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