马链球菌兽疫亚种类M蛋白的基因克隆、序列分析及其在猪源链球菌的检测 被引量：15

1

作者 范红结 陆承平 唐家琪 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期617-620,共4页

根据已发表的马链球菌兽疫亚种 (Streptococcusequisubsp .zooepidemicus)马源株的类M蛋白基因序列 ,设计和合成一对引物 ,以兽疫亚种猪源ATCC35 2 4 6株的基因组DNA为模板 ,通过PCR技术 ,扩增出类M蛋白基因并定向克隆至表达载体pET_32a... 根据已发表的马链球菌兽疫亚种 (Streptococcusequisubsp .zooepidemicus)马源株的类M蛋白基因序列 ,设计和合成一对引物 ,以兽疫亚种猪源ATCC35 2 4 6株的基因组DNA为模板 ,通过PCR技术 ,扩增出类M蛋白基因并定向克隆至表达载体pET_32a(+)中 ,测定其序列 ,GenBank接收号为AY2 6 3781。类M蛋白基因含一个完整的开放阅读框 ,全长为 1137bp ,编码 379个氨基酸残基。经DNAStar软件分析 ,ATCC35 2 4 6株类M蛋白基因与兽疫亚种马源W6 0株、马亚种的类M蛋白基因及A群化脓链球菌的M蛋白基因的同源性分别为 86 9%、30 8%、2 9 4 % ;推导的氨基酸序列的同源性分别为 84 3%、2 1 9%、2 3 4 %。但ATCC35 2 4 6株类M蛋白的C末端细胞膜锚定区与M蛋白、马亚种类M蛋白高度同源。用上述设计的引物进行PCR试验 ,检测 34株猪源链球菌类M蛋白基因 ,发现所有 16株C群猪源链球菌均能检测出类M蛋白基因 ,而所有猪链球菌 (Streptococcussuis) 1型和 2型菌株及S群、B群、D群链球菌共 13株均不能检出类M蛋白基因 ,而 5株未鉴定的猪源链球菌中 3株能检测出类M基因。 展开更多

关键词 马链球菌兽疫亚种 类M蛋白基因 克隆 检测

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马链球菌兽疫亚种类M基因和猪链球菌2型mrp基因片段的融合表达及仔猪免疫试验 被引量：13

2

作者 范红结 陆承平 唐家琪 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期78-81,共4页

将含猪链球菌 2型mrp及马链球菌兽疫亚种类M基因融合片段的重组质粒转化大肠杆菌BL 2 1,经异丙基硫代 β D 半乳糖苷 (IPTG)诱导 ,表达了相对分子质量为 6 0 0 0 0左右的融合蛋白。利用组氨酸亲和层析柱 ,获得了纯化的融合蛋白 ,质量... 将含猪链球菌 2型mrp及马链球菌兽疫亚种类M基因融合片段的重组质粒转化大肠杆菌BL 2 1,经异丙基硫代 β D 半乳糖苷 (IPTG)诱导 ,表达了相对分子质量为 6 0 0 0 0左右的融合蛋白。利用组氨酸亲和层析柱 ,获得了纯化的融合蛋白 ,质量浓度为 4 2 μg·mL-1。以纯化的融合蛋白、宿主菌BL 2 1经IPTG诱导表达后的超声波破碎上清、马链球菌兽疫亚种ATCC 35 2 4 6株和猪链球菌 2型HA 980 1株制备的二联灭活苗为免疫原 ,分别免疫 30头仔猪。初次免疫 1月后 ,以同样的剂量再次免疫 ,3周后以 5×LD50 的ATCC 35 2 4 6和HA 980 1强毒株进行攻击。结果 ,纯化融合蛋白免疫组的免疫保护率达 6 0 % ,BL 2 1上清免疫组的免疫保护率为 5 0 % ,全菌二联灭活菌苗的免疫保护率达 90 %。 展开更多

关键词 马链球菌兽疫亚种M基因 猪链球菌2型mrp基因 融合表达 仔猪 免疫试验 链球菌病 二联疫苗

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链球菌猪主要致病种和型多重PCR检测方法的建立 被引量：16

3

作者 邹君 王楷宬 +3 位作者 田莉莉 王旭远 曾巧英 范伟兴 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期701-706,共6页

根据GenBank中登录的链球菌属保守基因(EF-TU)、猪链球菌种保守基因(GDH)、C群马链球菌兽疫亚种保守基因(M-like)、猪链球菌型特异性基因(SS1型CPS1I、SS2型CPS2J、SS7型CPS7H和SS9型CPS9H)的序列设计合成7对引物,建立了一次性在属、种... 根据GenBank中登录的链球菌属保守基因(EF-TU)、猪链球菌种保守基因(GDH)、C群马链球菌兽疫亚种保守基因(M-like)、猪链球菌型特异性基因(SS1型CPS1I、SS2型CPS2J、SS7型CPS7H和SS9型CPS9H)的序列设计合成7对引物,建立了一次性在属、种、型3个水平上检测链球菌猪主要致病种和型(C群马链球菌兽疫亚种和猪链球菌1、2、7、9型)的多重PCR方法。结果显示,该多重PCR在退火温度为61℃时可一次性扩增出7条符合预期大小、序列正确的基因条带;特异性试验和准确性试验结果均符合预期,无非特异性、交叉反应、假阳性、假阴性条带出现;对16株临床分离鉴定链球菌的检测结果与细菌学鉴定及单纯PCR鉴定的符合率均为100%;敏感性为0.08ng/μL;5次重复试验的结果也完全一致。结果表明,建立的多重PCR方法具有高度特异性、准确性、敏感性和稳定性,适用于猪场链球菌病的监控和流行病学快速诊断。 展开更多

关键词 链球菌 猪链球菌 马链球菌兽疫亚种 多重PCR

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猪源马链球菌兽疫亚种灭活疫苗对小鼠的免疫效力评价 被引量：9

4

作者 范红结 陆承平 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期613-618,共6页

【目的】评价中国不同地区猪源马链球菌兽疫亚种分离株抗原性的差异,为猪链球菌病疫苗的研制提供指导。【方法】取从国内10省市分离的10株猪源马链球菌兽疫亚种分离株,分别制备灭活疫苗,免疫12周龄ICR小鼠,用同源菌株和ATCC35246株攻击... 【目的】评价中国不同地区猪源马链球菌兽疫亚种分离株抗原性的差异,为猪链球菌病疫苗的研制提供指导。【方法】取从国内10省市分离的10株猪源马链球菌兽疫亚种分离株,分别制备灭活疫苗,免疫12周龄ICR小鼠,用同源菌株和ATCC35246株攻击。【结果】以同源菌株攻击免疫小鼠,除CG-74-63株外,其余菌株的保护率均在90%以上;而以异源菌株ATCC35246进行攻击,免疫小鼠的免疫保护率为80%～100%。【结论】中国不同地区的猪源马链球菌兽疫亚种分离株的抗原性差异不大,单一菌株制备的疫苗具有保护性。 展开更多

关键词 马链球菌兽疫亚种 免疫效力 灭活疫苗

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马链球菌兽疫亚种中国株的类M蛋白基因抗原表位片段的克隆与表达 被引量：6

5

作者 苏良科 陆承平 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2004年第7期633-636,共4页

目的　构建马链球菌兽疫亚种 (Streptococcusequisubsp zooepidemicus)中国株的类M蛋白基因抗原表位片段的重组表达质粒 (pET -Szp) ,并检测表达产物的免疫反应性。 方法　根据GenBank登录的马链球菌兽疫亚种纽约分离株w6 0类M蛋白基因... 目的　构建马链球菌兽疫亚种 (Streptococcusequisubsp zooepidemicus)中国株的类M蛋白基因抗原表位片段的重组表达质粒 (pET -Szp) ,并检测表达产物的免疫反应性。 方法　根据GenBank登录的马链球菌兽疫亚种纽约分离株w6 0类M蛋白基因序列设计和合成引物 ,以该菌中国分离株ATCC35 2 4 6的基因组DNA为模板 ,扩增类M蛋白基因 5’端第 5 83～ 10 6 8bp片段 ,并按正确的阅读框架定向克隆到表达载体pET - 32a(+)中 ,将重组质粒转化大肠杆菌BL2 1株 ,用IPTG诱导表达 ,并通过SDS -PAGE和免疫印迹对表达蛋白进行初步分析。结果　扩增出 4 86bp的马链球菌兽疫亚种ATCC35 2 4 6的类M蛋白基因片段 ,该基因在大肠杆菌表达系统中经诱导 ,得到分子量为 5 0 0 0 0的表达产物 ,免疫印迹表明该产物具有特异的免疫反应性。结论　成功构建了表达马链球菌兽疫亚种中国株类M蛋白片段的重组表达质粒 ,并实现在大肠杆菌中表达 ,为重组类M蛋白亚单位疫苗的研制奠定了基础。 展开更多

关键词 马链球菌兽疫亚种 类M基因 克隆 表达 重组表达质粒 免疫反应性

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类M蛋白亚单位疫苗的佐剂筛选 被引量：4

6

作者 苏良科 陆承平 《中国兽药杂志》 2004年第1期15-18,共4页

将铝胶、ISA2 0 6和CpG三种佐剂分别与热盐酸提取的马链球菌兽疫亚种 (Streptococcusequisubsp.zooepidemicus)ATCC35 2 4 6株类M蛋白配合 ,制成疫苗接种 2 0日龄的小鼠 ,并设不加佐剂的类M蛋白亚单位疫苗免疫对照组。二次免疫后用ATCC3... 将铝胶、ISA2 0 6和CpG三种佐剂分别与热盐酸提取的马链球菌兽疫亚种 (Streptococcusequisubsp.zooepidemicus)ATCC35 2 4 6株类M蛋白配合 ,制成疫苗接种 2 0日龄的小鼠 ,并设不加佐剂的类M蛋白亚单位疫苗免疫对照组。二次免疫后用ATCC35 2 4 6株活菌攻击 ,铝胶、ISA2 0 6、CpG和对照组的保护率分别为 75 % ( 1 2 /1 6)、81 .2 5 % ( 1 3/1 6)、68.75 % ( 1 1 /1 6)和5 6.2 5 % ( 9/1 6)。试验结果表明ISA2 0 6的免疫增强作用高于其他两种佐剂 ,可望与类M蛋白亚单位疫苗配合 ,用于预防猪链球菌病。 展开更多

关键词 类M蛋白 佐剂 亚单位疫苗 马链球菌兽疫亚种 猪链球菌病

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1株豚鼠源马链球菌兽疫亚种的分离鉴定与耐药性分析 被引量：4

7

作者 孙琼飞 张家瑞 +1 位作者 屈勇刚 梁晏 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期993-997,共5页

为了解引起新疆石河子某动物房实验豚鼠发生死亡的原因,对疑似细菌感染死亡豚鼠进行临床观察、细菌纯化、革兰染色、生化鉴定、16S rDNA序列分析、半数致死量(LD_(50))测定、药敏试验及治疗试验。结果显示,经分离纯化,该菌具有明显的β... 为了解引起新疆石河子某动物房实验豚鼠发生死亡的原因,对疑似细菌感染死亡豚鼠进行临床观察、细菌纯化、革兰染色、生化鉴定、16S rDNA序列分析、半数致死量(LD_(50))测定、药敏试验及治疗试验。结果显示,经分离纯化,该菌具有明显的β溶血环,阳性球菌,常成对或短链状排列,能够发酵精氨酸、PMG、MAG、TMZ、蔗糖、山梨醇、吡咯烷酮、乳糖、水杨素,不能发酵VP、DPP、七叶苷、蕈糖、甘露醇、棉实糖;该分离株与马链球菌兽疫亚种(MK614224)同源性高达98.80%。利用MEGA 7.0构建系统发育树分析,该分离株与马链球菌兽疫亚种(MK614224、JQ740199、AB104843)亲缘关系最为接近;9 h内可以引起小鼠精神不振、扎堆、呼吸急促、死亡等,LD_(50)为1.45×10^(4)CFU/mL;豚鼠致病性试验发现会引起豚鼠死亡。对头孢曲松、青霉素、头孢氨苄、庆大霉素、氯霉素、氟苯尼考、恩诺沙星、氧氟沙星、万古霉素、呋喃唑酮敏感。经选用恩诺沙星治疗,同时结合饲养管理,连续治疗5 d,患病豚鼠基本恢复正常。本试验结果确定了马链球菌兽疫亚种是引起实验豚鼠死亡的病原,为后期豚鼠马链球菌兽疫亚种的防治提供了的参考依据。 展开更多

关键词 豚鼠 马链球菌兽疫亚种 耐药性 半数致死量

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马链球菌马亚种与马链球菌兽疫亚种联合免疫小鼠效果分析 被引量：2

8

作者 马陈 常建新 +4 位作者 马晓慧 易鸳鸯 佘明江 甫哈拉.纳吾夏拜 苏艳 《新疆农业大学学报》 CAS 北大核心 2017年第2期99-105,共7页

为比较与评价马链球菌马亚种ZZM3-M株和马链球菌兽疫亚种ZZM2-S株联合免疫效果,本研究选取ZZM3-M株和ZZM2-S株分离菌株作为免疫原菌株,对两株菌灭活并免疫昆明白小鼠,通过对小鼠抗体效价、抗体分型检测、攻毒保护力、菌体载量及病理组... 为比较与评价马链球菌马亚种ZZM3-M株和马链球菌兽疫亚种ZZM2-S株联合免疫效果,本研究选取ZZM3-M株和ZZM2-S株分离菌株作为免疫原菌株,对两株菌灭活并免疫昆明白小鼠,通过对小鼠抗体效价、抗体分型检测、攻毒保护力、菌体载量及病理组织学观察实验评价联合免疫后的保护效果。结果显示,ZZM3-M+ZZM2-S联合免疫组及ZZM3-M、ZZM2-S单独免疫组均可诱导特异性抗体产生,且联合免疫组抗体效价可达1∶8100,联合免疫组对ZZM3-M和ZZM2-S的免疫保护率分别为90%和100%,优于这两种菌株单独免组,联合免疫诱导的抗体亚型以IgG1为主,菌体载量检测显示联合免疫组可有效减少脏器的损伤,病理组织学观察显示联合免疫可显著减轻改善这两种菌引起的病理损伤。 展开更多

关键词 马链球菌马亚种 马链球菌兽疫亚种 二联灭活菌苗 免疫效果

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豚鼠源马链球菌兽疫亚种的分离鉴定

9

作者 李艳红 白和平 +5 位作者 信玉春 郭柯宇 王金锋 夏力亮 吴同垒 史秋梅 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2024年第4期86-91,共6页

为了查明河北省唐山市某豚鼠养殖场发病豚鼠感染的病原菌,本试验采集发病豚鼠的眼角脓性分泌物,采用细菌分离纯化、革兰染色、生化鉴定、16S rRNA基因PCR扩增方法对分离菌进行鉴定,通过K-B试纸法检测分离菌株对24种抗菌药的敏感性,试管... 为了查明河北省唐山市某豚鼠养殖场发病豚鼠感染的病原菌,本试验采集发病豚鼠的眼角脓性分泌物,采用细菌分离纯化、革兰染色、生化鉴定、16S rRNA基因PCR扩增方法对分离菌进行鉴定,通过K-B试纸法检测分离菌株对24种抗菌药的敏感性,试管二倍稀释法测定19种中药对该分离菌株的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC),并通过动物回归试验检测该分离菌株的致病性。结果显示,分离菌株在血琼脂培养基培养24 h生长为针尖状透明菌落、呈β溶血,革兰染色为阳性圆球状、3~5个连接呈短链状,生化特性与马链球菌兽疫亚种相符,将其命名为MLQJ-1;16S rRNA序列比对结果显示,MLQJ-1与马链球菌兽疫亚种同源性高达99.72%,在系统进化树中处于同一分支,鉴定为马链球菌兽疫亚种;MLQJ-1对24种抗菌药的敏感性不同,对青霉素、头孢曲松和阿莫西林等8种抗菌药敏感,对阿米卡星、新霉素和卡那霉素等10种抗菌药耐药;苦地丁、苦参、黄芩和千里光对MLQJ-1的MIC值介于1.9~15.6 mg/mL,MBC值介于1.9~31.2 mg/mL;小鼠腹腔接种MLQJ-1菌液后24 h内全部死亡。结果表明,马链球菌兽疫亚种为本次发病豚鼠的病原菌,青霉素、头孢曲松和苦地丁等药物对该菌具有较强的抑菌效果。 展开更多

关键词 豚鼠 马链球菌兽疫亚种 分离鉴定 药敏试验

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基于组学分析优化兽疫链球菌的透明质酸发酵生产

10

作者 胡云箫 吴俊俊 +2 位作者 赵北辰 王阳 康振 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期10-16,共7页

透明质酸具有保湿、润滑等多种生理功能,广泛应用于食品、医药和化妆品领域。目前透明质酸主要依赖于兽疫链球菌发酵生产。然而,遗传背景不清晰等问题,限制了兽疫链球菌作为底盘细胞的相关改造以及透明质酸发酵水平的提升。该研究首先... 透明质酸具有保湿、润滑等多种生理功能,广泛应用于食品、医药和化妆品领域。目前透明质酸主要依赖于兽疫链球菌发酵生产。然而,遗传背景不清晰等问题,限制了兽疫链球菌作为底盘细胞的相关改造以及透明质酸发酵水平的提升。该研究首先对兽疫链球菌WSH-24的全基因组和转录组数据进行了测序分析,发现该菌株具有高效的糖酵解和乳酸合成能力,以及不完整的三羧酸循环和多种氨基酸合成途径的缺失。结合生长曲线分析,进一步明确该菌株为缬氨酸、谷氨酰胺、精氨酸和色氨酸4种氨基酸缺陷型。在此基础上,通过外源添加对应的氨基酸使透明质酸产量达到(2.65±0.02)g/L。其次,结合转录组测序数据,确定了维生素B5、维生素B7和维生素B12相关合成基因的转录水平过低。通过外源添加对应的维生素有效提高透明质酸的合成,使其产量达到(2.46±0.07)g/L。最后,通过培养基优化,在3 L发酵罐上透明质酸发酵质量浓度达到5.63 g/L,生产强度为0.31 g/(L·h),相较优化前提高了33.33%。该研究为进一步改造兽疫链球菌WSH-24奠定了基础,为透明质酸的产量提升提供了支撑。 展开更多

关键词 透明质酸 兽疫链球菌 全基因组 转录组 发酵优化

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猪源马链球菌兽疫亚种分离鉴定 被引量：4

11

作者 邓汝森 张海龙 +3 位作者 颜广智 陈盛楠 顾万军 黄良宗 《畜牧与兽医》 北大核心 2021年第9期66-70,共5页

为确诊广东省江门市某规模化猪场保育仔猪发生脑膜炎死亡的病因,本研究通过临床解剖观察、细菌分离培养、革兰染色镜检、溶血性观察、生化鉴定、小鼠毒力试验和药敏试验、16S rRNA及M蛋白(SzP)基因序列分析进行鉴定。结果:从发病猪脑顶... 为确诊广东省江门市某规模化猪场保育仔猪发生脑膜炎死亡的病因,本研究通过临床解剖观察、细菌分离培养、革兰染色镜检、溶血性观察、生化鉴定、小鼠毒力试验和药敏试验、16S rRNA及M蛋白(SzP)基因序列分析进行鉴定。结果:从发病猪脑顶叶分离到1株致病菌,命名为SEZ20180618,分离菌在鲜血平板上生长出微隆起、圆滑湿润的小菌落,呈β溶血,革兰染色阳性、呈链状排列的球菌;16S rRNA基因序列分析显示,分离菌与马链球菌兽疫亚种处于同一分支,同源性在97%以上;SzP氨基酸序列与马链球菌兽疫亚种CT株、Cxy012株、SH00166株等参考菌株的相应序列同源性为100%。分离菌株SEZ20180618对BALB/c小鼠具有较强的毒力,对BALB/c小鼠的半数致死量为1.54×10^(6 )CFU;分离菌对阿莫西林、青霉素、庆大霉素等14种临床常用抗菌药物均敏感,对阿米卡星和复方新诺明2种药物中度敏感。 展开更多

关键词 马链球菌兽疫亚种 分离鉴定 药敏试验 猪

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新疆伊犁地区不同马场马腺疫病原菌的分离及鉴定

12

作者 买占海 周轲 +2 位作者 沙娅·奴尔兰 魏彦明 况玲 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2023年第3期205-212,共8页

本文通过对新疆伊犁地区3个马场中疑似马腺疫病例进行病料采集、培养、生化实验及同源性分析,进一步确定伊犁地区不同马场马腺疫病原菌的种属差异。根据患病马匹临床症状对疑似马腺疫病例进行实验室细菌学检查及血常规检查。结果表明,... 本文通过对新疆伊犁地区3个马场中疑似马腺疫病例进行病料采集、培养、生化实验及同源性分析,进一步确定伊犁地区不同马场马腺疫病原菌的种属差异。根据患病马匹临床症状对疑似马腺疫病例进行实验室细菌学检查及血常规检查。结果表明,采集的40份样品中检测出7株疑似马链球菌,通过fneB基因扩增后发现其中6株菌的核苷酸同源性达90%~99%,确诊为马链球菌马亚种;而另1株菌其氨基酸同源性为76%~85%,推测可能为马链球菌兽疫亚种。血常规结果表明,患病马白细胞总数极显著升高(P<0.01),粒细胞数和淋巴细胞数显著升高(P<0.05)。本研究结果提示,新疆伊犁地区马场可能有兽疫亚种与马亚种混合感染的病例,为今后临床防控马腺疫疾病提供参考依据。 展开更多

关键词 马腺疫 fneB基因 马链球菌马亚种 马链球菌兽疫亚种

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基于新型佐剂的驴流产沙门菌病-兽疫链球菌病二联灭活苗的制备及其安全性和免疫原性 被引量：1

13

作者 刘明 孙长江 +2 位作者 顾敬敏 董建宝 韩文瑜 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期1187-1193,1202,共8页

旨在研制预防以马流产沙门菌(S.abortus equi)和马链球菌兽疫亚种(SEZ)感染引起的孕驴流产和新生驴驹腹泻的驴流产沙门菌病-兽疫链球菌病二联灭活疫苗,并进行安全性与免疫原性评价。从山东某驴场分离和鉴定出的S.abortus equi、SEZ分离... 旨在研制预防以马流产沙门菌(S.abortus equi)和马链球菌兽疫亚种(SEZ)感染引起的孕驴流产和新生驴驹腹泻的驴流产沙门菌病-兽疫链球菌病二联灭活疫苗,并进行安全性与免疫原性评价。从山东某驴场分离和鉴定出的S.abortus equi、SEZ分离株为疫苗候选菌株,经甲醛灭活,分别与氢氧化铝佐剂和角鲨烯佐剂制备驴流产沙门菌病-兽疫链球菌病二联灭活苗。首先,检测灭活疫苗对BALB/c小鼠的安全性,比较2种不同佐剂诱导免疫保护的效果;以驴流产沙门菌病-兽疫链球菌病二联角鲨烯佐剂灭活疫苗免疫驴,凝集试验检测免疫血清的总抗体水平及血清杀菌试验检测功能性抗体水平,进一步评价二联灭活疫苗的免疫原性。结果显示,以氢氧化铝佐剂二联灭活苗免疫对5倍LD_(50)S.abortus equi和SEZ攻击BALB/c小鼠的保护率分别达到62.5%(5/8)和75.0%(6/8),而角鲨烯佐剂二联灭活疫苗对2种病原的攻击保护率均达到100%(8/8);以角鲨烯佐剂制备的二联灭活疫苗免疫驴的血清中抗流产沙门菌(10^(8)CFU/mL)的抗体凝集效价几何平均值可达1∶32,功能性抗体对S.abortus equi和SEZ的血清杀菌效价为1∶16(杀菌效率68.99%)和1∶4(杀菌效率65.47%)。S.abortus equi和SEZ 2种抗原免疫不会产生免疫干扰,角鲨烯配方佐剂与抗原结合诱导的抗S.abortus equi和SEZ致死剂量攻毒产生的保护作用强于氢氧化铝佐剂,且该二联灭活疫苗在小鼠和驴体内具有较强的保护效力与免疫原性,且安全性良好。本研究为该基于新型疫苗佐剂二联疫苗的研发奠定了坚实的基础。 展开更多

关键词 马流产沙门菌 马链球菌兽疫亚种 灭活疫苗 角鲨烯佐剂 免疫原性和安全性

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猪源马链球菌兽疫亚种类 M蛋白原核表达及其小鼠免疫保护力分析 被引量：2

14

作者 周俊明 何孔旺 +10 位作者 倪艳秀 祝昊丹 俞正玉 茅爱华 吕立新 温立斌 张雪寒 王小敏 汪伟 李彬 郭容利 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2015年第3期590-594,共5页

为了原核表达猪源马链球菌兽疫亚种去除信号肽的类M蛋白质,并分析该蛋白质对小鼠的免疫保护力,克隆了马链球菌兽疫亚种CY菌株去除信号肽的类M蛋白质基因Szp,并将Szp基因插入p ET28a表达载体,IPTG诱导,获得重组类M蛋白质,弗氏佐剂乳化重... 为了原核表达猪源马链球菌兽疫亚种去除信号肽的类M蛋白质,并分析该蛋白质对小鼠的免疫保护力,克隆了马链球菌兽疫亚种CY菌株去除信号肽的类M蛋白质基因Szp,并将Szp基因插入p ET28a表达载体,IPTG诱导,获得重组类M蛋白质,弗氏佐剂乳化重组类M蛋白质后,3次免疫小鼠,用同源菌株CY攻击。诱导获得分子量约5.8×104的重组蛋白质,免疫印迹结果表明该重组类M蛋白质能够被马链球菌兽疫亚种猪多抗识别。类M蛋白质免疫小鼠的存活率为60%,弗氏佐剂乳化灭活CY免疫小鼠的存活率为70%,PBS对照组小鼠攻毒后6 d内全部死亡。表达的类M蛋白质可以给予ICR小鼠部分的免疫保护力,保护效果略低于CY全菌灭活苗,提示可以对马链球菌兽疫亚种多种免疫保护性抗原进行联合,从而进一步提高对动物的免疫保护力。 展开更多

关键词 马链球菌兽疫亚种 类M蛋白质 原核表达 疫苗

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马源马链球菌兽疫亚种3株新疆分离株基因型的鉴定及MLST分析 被引量：2

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作者 张泽华 张欢 +5 位作者 汪丽 古丽米热·对山巴依 吕芬芬 蒲小峰 张宝江 苏艳 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第12期4742-4755,共14页

【背景】马链球菌兽疫亚种(Streptococcus equi subsp.zooepidemicus,SeZ)是引起马腺疫的主要病原,还可引起猪链球菌病,加强该菌的地方株分子流行病学监测对有效防控相关疫病十分必要。【目的】对新疆地区2个马场SeZ分离株进行鉴定和药... 【背景】马链球菌兽疫亚种(Streptococcus equi subsp.zooepidemicus,SeZ)是引起马腺疫的主要病原,还可引起猪链球菌病,加强该菌的地方株分子流行病学监测对有效防控相关疫病十分必要。【目的】对新疆地区2个马场SeZ分离株进行鉴定和药敏特性分析,并分析3株新疆分离株的分子流行与菌株的遗传进化特征。【方法】对分离纯化的3株病原菌(ZHZ113、ZHZ211和ZHZ523)进行染色观察、生化及药敏特性检测,对16S rRNA和SeM基因进行遗传进化分析,以链球菌7个管家基因arcC、nrdE、proS、spi、tdk、tpi和yqiL为目的基因对3株分离菌进行多位点序列分型(Multilocus Sequence Typing,MLST)研究。【结果】3株SeZ的药敏结果显示这3株分离菌对不同抗生素的耐药程度不同,但均对头孢西丁、庆大霉素、链霉素、红霉素、左氧氟沙星、环丙沙星、土霉素等11种药物敏感。16SrRNA基因序列分析显示这3株分离菌均属于Ⅱ群(兽疫链球菌)。3株菌的MLST分型结果分别为ST39、ST419、ST421型,其中ST419和ST421型为SeZ目前尚未见报道的新ST型。SeM基因分析结果显示马源SeZ在不同国家、不同动物和不同时间段上的流行分布存在差异和动态变化的特点。【结论】3株SeZ分离菌分别与美国犬源及马源菌株亲缘关系较近,反映部分SeZ株在新疆地区的基因型分布及分子流行特点。 展开更多

关键词 马链球菌兽疫亚种 16S rRNA基因 SeM基因 多位点序列分型 药敏特性

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马链球菌兽疫亚种PepO蛋白原核表达及其免疫保护试验 被引量：2

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作者 孙莹 尚天甜 +3 位作者 刘旭明 韩莹 摆淑玲 彭婕 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第1期95-99,113,共6页

以马链球菌兽疫亚种(Streptococcus equi subsp.zooepidemicus,SEZ)ATCC35246株基因组为模板,根据NCBI数据库已公布的pepO基因序列设计引物进行扩增,利用同源重组技术连接至pCold-SUMO质粒进行原核表达及纯化,并以纯化的蛋白制备兔抗SEZ... 以马链球菌兽疫亚种(Streptococcus equi subsp.zooepidemicus,SEZ)ATCC35246株基因组为模板,根据NCBI数据库已公布的pepO基因序列设计引物进行扩增,利用同源重组技术连接至pCold-SUMO质粒进行原核表达及纯化,并以纯化的蛋白制备兔抗SEZ PepO多克隆抗体。将兔多克隆抗体与SEZ野生菌株混合后进行mBMEC细胞的被动抗体保护试验,同时以不加抗体组作为对照,结果显示PepO多抗能够在细菌黏附侵袭细胞的过程中对细胞形成有效保护。经纯化后蛋白免疫的BALB/c小鼠腹腔注射5×10^(4)CFUATCC35246菌液(5×LD_(50)),连续观察并记录7日内小鼠的临床表现及存活情况,结果显示PepO免疫组小鼠存活率达到70%。结果表明,SEZ PepO具有良好的免疫保护效力,能够作为SEZ亚单位疫苗的候选抗原。 展开更多

关键词 马链球菌兽疫亚种 PepO 致病机制 免疫保护

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利用遗传算法优化透明质酸发酵培养基 被引量：2

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作者 刘屹然 陈林海 +2 位作者 刘瑞娟 李宗义 秦广雍 《高技术通讯》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期275-280,共6页

运用遗传算法对透明质酸（HA）产生菌——马链球菌兽瘟亚种ATCC39920发酵培养基的6种组份进行了优化研究。每个长度为36位的染色体编码一种培养基配方，以HA产量为适应度函数值对其进行评价。经过4代的进化，各参数的取值范围收敛于最... 运用遗传算法对透明质酸（HA）产生菌——马链球菌兽瘟亚种ATCC39920发酵培养基的6种组份进行了优化研究。每个长度为36位的染色体编码一种培养基配方，以HA产量为适应度函数值对其进行评价。经过4代的进化，各参数的取值范围收敛于最优区域。最终以40个实验样本完成了6种培养基成分、64个浓度水平的优化选择。优化后的培养基的构成为：葡萄糖44．0g／L，酵母膏5．2g／L，蛋白胨8．4g／L，牛肉膏9．8g／L，KH2PO4 1．45g／L，MgSO4 2．8g／L。采用优化培养基的HA产量达0．395g／L，较原培养基提高了31．2％，生产成本也大幅度降低。 展开更多

关键词 透明质酸 马链球菌兽瘟亚种 遗传算法 培养基优化

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猪源马链球菌兽疫亚种感染动物模型的筛选 被引量：2

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作者 孙智远 张旭晖 +7 位作者 付强 甄洪花 刘海侠 王会聪 刘国芳 赵彬 赵茹茜 沈志强 《畜牧与兽医》 北大核心 2018年第12期64-67,共4页

为筛选出可替代猪的猪源马链球菌兽医亚种(Streptococcus equi subsp.zooepidemicus,SEZ)感染动物模型,采用不同浓度SEZ强毒株C74-63分别感染兔和豚鼠,连续观察7~10 d,观察临床症状和病理变化,同时与本动物猪对比。C74-63株对豚鼠无致病... 为筛选出可替代猪的猪源马链球菌兽医亚种(Streptococcus equi subsp.zooepidemicus,SEZ)感染动物模型,采用不同浓度SEZ强毒株C74-63分别感染兔和豚鼠,连续观察7~10 d,观察临床症状和病理变化,同时与本动物猪对比。C74-63株对豚鼠无致病力;对兔最小致死量为250CFU。感染兔出现神经症状,败血症,体温升高,部分急性死亡;剖解可见兔血液凝固不良,脑膜充血,肝、脾肿大,肺、肝、淋巴结出血等,临床症状随攻毒剂量的增加而加重。猪最小致死量为3 000 CFU,临床症状及病理变化与兔相似。SEZ感染兔发病呈现较好的规律性,可以取代猪SEZ的致病力,为该病动物疫苗的研发提供基础。 展开更多

关键词 猪源马链球菌兽医亚种 感染 动物模型 兔 猪

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构建无抗性标记双拷贝透明质酸合成酶基因工程菌 被引量：1

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作者 蓝小玲 张波 +5 位作者 李学如 李尧 郭泰林 孟涛 任瑶瑶 江南屏 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期396-401,共6页

【目的】探讨一种构建无抗生素选择标记链球菌透明质酸合成酶基因工程菌的方法。【方法】PCR扩增链球菌透明质酸合成酶操纵子hasABC基因,用温度敏感载体pJR700构建携带hasABC基因重组质粒pXL32;电转化pXL32质粒到马链球菌兽疫亚种感受... 【目的】探讨一种构建无抗生素选择标记链球菌透明质酸合成酶基因工程菌的方法。【方法】PCR扩增链球菌透明质酸合成酶操纵子hasABC基因,用温度敏感载体pJR700构建携带hasABC基因重组质粒pXL32;电转化pXL32质粒到马链球菌兽疫亚种感受态细胞,卡那霉素(Kanamycin,kan)平板37℃培养筛选重组子,在不含kan液体培养基中30℃传代,37℃平板分离挑取抗生素敏感菌落,RT-PCR检测工程菌染色体hasABC基因表达,Bitter-Muir法测定菌体透明质酸含量。【结果】在无抗生素选择压力条件下,获得透明质酸产率提高34%的马链球菌兽疫亚种透明质酸合成酶基因工程菌。【结论】用pJR700温度敏感载体系统,构建能提高透明质酸产量的无抗生素选择标记的基因工程菌是可行的。 展开更多

关键词 透明质酸合成酶操纵子 温度敏感质粒 菌透明质酸基因工程菌 马链球菌兽疫亚种

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类M蛋白对HEp-2细胞的黏附作用

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作者 苏良科 范红结 陆承平 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期74-77,共4页

采用通用的模式细胞HEp 2作黏附及黏附抑制试验 ,研究马链球菌兽疫亚种ATCC35 2 4 6株类M蛋白的黏附作用。结果表明 ,ATCC35 2 4 6株可以黏附HEp 2细胞。用重组表达的类M蛋白鼠抗血清处理ATCC35 2 4 6 ,可抑制其对HEp 2细胞的黏附 ,最... 采用通用的模式细胞HEp 2作黏附及黏附抑制试验 ,研究马链球菌兽疫亚种ATCC35 2 4 6株类M蛋白的黏附作用。结果表明 ,ATCC35 2 4 6株可以黏附HEp 2细胞。用重组表达的类M蛋白鼠抗血清处理ATCC35 2 4 6 ,可抑制其对HEp 2细胞的黏附 ,最大抑制率达 81 4 % ;而ATCC35 2 4 6的全菌鼠抗血清在 1∶80 0时能完全抑制它对HEp 2细胞的黏附。此外 ,热酸提取的ATCC35 2 4 6株的类M蛋白和重组表达的类M蛋白可不同程度地抑制该菌株的黏附 ,前者在 16 0μg·mL-1有最大的黏附抑制率 ( 4 0 % ) ,而后者在 6 0 μg·mL-1的黏附抑制率可达最高值 ( 2 3% )。结果显示 ,类M蛋白是ATCC35 2 4 6株的黏附素之一 。 展开更多

关键词 马链球菌兽疫亚种 类M蛋白 HEP-2细胞 黏附 猪链球菌病

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