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筛选差异表达基因和蛋白质的方法进展 被引量:19
1
作者 王吉村 药立波 赵忠良 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2001年第1期33-36,共4页
分离和鉴定差异表达基因和蛋白质不仅有助于发现基因和蛋白质的功能 ,更有助于揭示某些疾病的发生机理 .目前筛选差异表达基因的方法主要有差异显示PCR方法 (differentialdisplayRT PCR ,DDRT PCR)、消减杂交法 (subtractivehybridizati... 分离和鉴定差异表达基因和蛋白质不仅有助于发现基因和蛋白质的功能 ,更有助于揭示某些疾病的发生机理 .目前筛选差异表达基因的方法主要有差异显示PCR方法 (differentialdisplayRT PCR ,DDRT PCR)、消减杂交法 (subtractivehybridization ,SH )、基因芯片技术 (DNAchiptechnique)和基因表达的系统分析 (serialanalysisofgeneexpression ,SAGE)等 ,其中消减杂交法中又先后建立了代表性差异分析技术 (representationaldifferenceanalysis ,RDA)、抑制消减杂交法 (suppressionsubtractivehybridization ,SSH)和获得全长基因的消减杂交法 (full length gene obtainablesubtractivehybridization) .筛选差异表达蛋白质的方法主要有双向电泳技术(two dimentionalgelelectrophoresis)和噬菌体全套抗体库技术 (phagedisplayantibodyrepertoirelibrarytechnique) .这些方法各有特点 ,各有利弊 ,研究者可根据自己的需要选择适合于自己的方法 . 展开更多
关键词 筛选 差异表达基因 差异表达蛋白质
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Proteomic analysis reveals molecular biological details in varioliform gastritis without Helicobacter pylori infection 被引量:22
2
作者 Lin Zhang Yan-Hong Hou +2 位作者 Kai Wu Jun-Shan Zhai Nan Lin 《World Journal of Gastroenterology》 SCIE CAS CSCD 2010年第29期3664-3673,共10页
AIM:To investigate and elucidate the molecular mechanism underlying varioliform gastritis for early detection,prevention and intervention of gastric cancer.METHODS:A combination of two-dimensional gel electrophoresis ... AIM:To investigate and elucidate the molecular mechanism underlying varioliform gastritis for early detection,prevention and intervention of gastric cancer.METHODS:A combination of two-dimensional gel electrophoresis and mass spectrometry was used to detect the differentially expressed proteins between varioliform gastritis and matched normal mucosa.The selected proteins were confirmed by Western blotting and reverse transcription polymerase chain reaction(RT-PCR) in additional samples and the function of some proteins in varioliform gastritis was analyzed by bio-method preliminarily.RESULTS:We identified 21 differentially expressed proteins in varioliform gastritis,and compared them with matched normal mucosa.Eleven proteins were upregulated and ten downregulated in varioliform gastritis when compared with the same proteins in individualmatched normal gastric mucosa.These proteins are related to metabolism,oxidation,cytoskeleton,apoptosis,signal transduction and other aspects of cells.Two novel proteins,thioredoxin domain-containing protein 5(TXNDC5) upregulated in varioliform gastritis,and neuropolypeptide h3 [phosphatidylethanolamine-binding protein 1(PEBP1)] downregulated in varioliform gastritis,were further investigated.Their expressions were validated by Western blotting and RT-PCR in 12 cases of varioliform gastritis which was matched with normal mucosa.The expression level of PEBP1 in varioliform gastritis was significantly lower(P<0.05) while that of TXNDC5 was significantly higher than that in matched normal gastric mucosa(P<0.05).CONCLUSION:There are some changes of protein expression in varioliform gastritis.Downregulation of PEBP1 and upregulation of TXNDC5 are involved in the development of varioliform gastritis. 展开更多
关键词 differentially expressed proteins Varioliform gastritis Proteomic study Helicobacter pylori
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红芪多糖对脑微血管内皮细胞氧化损伤保护作用的差异蛋白质研究 被引量:19
3
作者 杨杰 卫东锋 +2 位作者 李晓东 张占军 吕晓云 《中药药理与临床》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期113-118,共6页
目的:研究红芪多糖(Hedysari Radix polysaccharides,HRP)对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人脑微血管内皮细胞(Human bain microvascular endothelial cells,HBMEC)氧化损伤模型的保护作用及对其蛋白表达谱的影响。方法:采用50μg/ml ... 目的:研究红芪多糖(Hedysari Radix polysaccharides,HRP)对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人脑微血管内皮细胞(Human bain microvascular endothelial cells,HBMEC)氧化损伤模型的保护作用及对其蛋白表达谱的影响。方法:采用50μg/ml ox-LDL建立HBMEC氧化损伤模型,使用红芪多糖对细胞模型进行干预,药物作用24h后,采用MTT检测细胞存活率,倒置相差显微镜观察细胞形态。以40μg/ml的红芪多糖干预HBMEC氧化损伤模型24h后,使用细胞裂解液提取细胞总蛋白并纯化。应用双向凝胶电泳分离纯化后的细胞总蛋白,考马斯亮蓝染色后扫描细胞总蛋白图谱,使用PD Quest 8.0软件分析药物组与模型组间的差异蛋白点,应用质谱技术鉴定差异明显的蛋白点。结果:与氧化损伤模型组比较,红芪多糖组(40μg/ml)细胞存活率明显升高,细胞数目明显增多,细胞形态较模型组明显改善。红芪多糖组(40μg/ml)HBMEC细胞蛋白表达谱发生明显改变,分析得出11个差异蛋白点,采用质谱方法成功鉴定了7个差异蛋白质,分别为热休克蛋白70、谷胱甘肽合成酶、网腔钙结合蛋白、26S蛋白酶调节亚基、γ-烯醇酶、40S核糖体蛋白和78k Da葡萄糖调节蛋白,其中5个蛋白高表达,2个蛋白低表达。结论:红芪多糖对ox-LDL诱导的HBMEC氧化损伤模型具有明显保护作用,其机制与调节内质网应激及能量代谢、清除自由基、抑制细胞凋亡及抗氧化应激密切相关。 展开更多
关键词 红芪多糖 脑微血管内皮细胞 抗氧化应激 差异蛋白质
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低温下东农冬麦1号地下茎处差异蛋白的分析 被引量:13
4
作者 王晓楠 付连双 +5 位作者 李卓夫 李文滨 孙艳丽 刘灿 王金伟 陈禹兴 《麦类作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期484-490,共7页
为研究小麦品种的抗寒机理,以东农冬麦1号为材料,根据连续三年的冬小麦低温驯化及越冬期的气温资料,当小麦长至6叶期时,设定不同温度处理,分析不同温度下植株地下茎处蛋白质的变化。结果表明,4个降温处理`中小麦植株地下茎处共有17个蛋... 为研究小麦品种的抗寒机理,以东农冬麦1号为材料,根据连续三年的冬小麦低温驯化及越冬期的气温资料,当小麦长至6叶期时,设定不同温度处理,分析不同温度下植株地下茎处蛋白质的变化。结果表明,4个降温处理`中小麦植株地下茎处共有17个蛋白点发生显著变化。在这4次降温过程中重复出现的8蛋白点分别参与26 S蛋白水解途径、呼吸代谢、三羧酸循环、叶绿素合成,其中有一个位点是抗性蛋白。通过这8个蛋白点在不同温度下表达量的变化及蛋白点的功能对东农冬麦1号地下茎处抗寒性做了初步的推测。 展开更多
关键词 冬小麦 低温 地下茎 差异蛋白
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红果肉与白果肉杨梅花青苷和糖代谢途径的差异蛋白研究 被引量:13
5
作者 张泽煌 陈义勇 +5 位作者 钟秋珍 王玲霞 林旗华 林永祥 龚慧文 陈伟 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期2391-2400,共10页
以红果肉杨梅‘大叶梅’和白果肉杨梅‘水晶’为研究材料,运用2-DE和MALDI-TOF-TOF质谱技术,比较分析两个品种成熟期果肉花青苷和糖代谢途径相关蛋白的差异表达,共获得41个2倍差异表达蛋白,其中33个差异蛋白得到质谱鉴定。与白果肉的‘... 以红果肉杨梅‘大叶梅’和白果肉杨梅‘水晶’为研究材料,运用2-DE和MALDI-TOF-TOF质谱技术,比较分析两个品种成熟期果肉花青苷和糖代谢途径相关蛋白的差异表达,共获得41个2倍差异表达蛋白,其中33个差异蛋白得到质谱鉴定。与白果肉的‘水晶’相比,有3个蛋白质在红果肉的‘大叶梅’中特异表达,29个蛋白质上调表达,1个下调表达。将这些差异蛋白按照功能进行分类,大部分涉及花青苷代谢(12%)、糖和能量代谢(30%)、蛋白质代谢(18%)、防御应答(15%)等生理过程。发现花青素合酶(ANS)、苯基丙氨酸解氨酶(PAL)、查尔酮合酶11(CHS11)、二磷酸尿核苷葡萄糖︰类黄酮3–O–葡糖基转移酶(UFGT)是花青苷合成密切相关的关键酶,这些酶在红果肉的‘大叶梅’中明显上调表达;同时,还发现9个糖代谢相关蛋白在红果肉的‘大叶梅’中也显著上调表达。花青苷和糖代谢途径关键蛋白对杨梅果肉花青苷合成和颜色的形成起到重要作用。 展开更多
关键词 杨梅 花青苷 糖代谢 差异蛋白
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红芪多糖对人肺腺癌A549细胞蛋白表达图谱影响的研究 被引量:12
6
作者 李菲 卫东锋 +3 位作者 张俊英 程晨 程卫东 苏刚 《中药药理与临床》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期54-59,共6页
目的:研究红芪多糖(Hedysari Radix polysaccharide,HRP)对人肺腺癌A549细胞蛋白双向电泳图谱的影响。方法:以300μg/ml红芪多糖体外作用于A549细胞后提取细胞总蛋白,使用丙酮沉淀法和2-DE Cleanup Kit对蛋白进行纯化。采用双向凝胶电... 目的:研究红芪多糖(Hedysari Radix polysaccharide,HRP)对人肺腺癌A549细胞蛋白双向电泳图谱的影响。方法:以300μg/ml红芪多糖体外作用于A549细胞后提取细胞总蛋白,使用丙酮沉淀法和2-DE Cleanup Kit对蛋白进行纯化。采用双向凝胶电泳分离纯化后的细胞总蛋白,银染显色并扫描凝胶图片,使用PDQuest 8.0图像分析软件对不同处理组双向凝胶电泳图谱进行对比分析,筛选出差异蛋白点,并分析差异蛋白的理论等电点和分子量。结果:应用双向电泳方法建立了A549细胞分辨率较高和重复性较好的蛋白表达图谱。红芪多糖处理可使A549细胞2-DE图谱中35个蛋白点发生明显变化,其中24个表达上调,8个表达下调,3个仅在对照组中表达,并分析得出了35个蛋白点的理论等电点和分子量。结论:红芪多糖可使人肺腺癌蛋白表达图谱发生明显改变,应用蛋白质组学筛选出的35差异蛋白点可能是红芪多糖抑制人肺腺癌A549细胞增殖及凋亡的关键调控蛋白质。 展开更多
关键词 红芪多糖 A549细胞 双向电泳 蛋白表达谱 差异蛋白质
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不同时段电针对急性脊髓损伤大鼠作用机制的蛋白质组学分析 被引量:11
7
作者 苑晓晨 宋金玲 +2 位作者 田贵华 时素华 李志刚 《针刺研究》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期75-82,共8页
目的:检测电针急性脊髓损伤(ASCI)大鼠6、24、48h差异蛋白变化情况,初步分析其作用机制。方法:105只SD大鼠随机分为正常组、6h模型组、6h电针组、24h模型组、24h电针组、48h模型组和48h电针组,每组15只。采用自制的Allen’s打击装置造A... 目的:检测电针急性脊髓损伤(ASCI)大鼠6、24、48h差异蛋白变化情况,初步分析其作用机制。方法:105只SD大鼠随机分为正常组、6h模型组、6h电针组、24h模型组、24h电针组、48h模型组和48h电针组,每组15只。采用自制的Allen’s打击装置造ASCI模型。电针"大椎""命门"。取脊髓损伤区脊髓组织对样本蛋白进行提取、定量、蛋白双向电泳图像分析,找出差异点进行质谱分析和数据库检索。结果:本研究共鉴定出了10个丰度变化大于1.5倍的差异蛋白。在6h段,有5种差异蛋白,与正常组比,模型组4种差异蛋白表达上调,1种下调,电针后4种差异蛋白的表达被逆转;在24h段,有7种差异蛋白,造模后6种差异蛋白上调,1种下调,电针后6种蛋白的表达被逆转;在48h段,有8种差异蛋白,造模后6种差异蛋白上调,2种下调,电针后其中5种差异蛋白的表达变化被逆转。与电针效应有关的蛋白功能涉及细胞能量代谢、信号转导、DNA修复、细胞凋亡、构建细胞骨架等。随着损伤时间的增加,被鉴定出的脊髓内差异表达蛋白也增多。24h组与6h组比较,多了2种差异蛋白:核苷二磷酸激酶及磷酸丙糖异构酶1,造模后其表达上调,电针后下调。48h组与24h组比较,多了3种差异蛋白:二氢硫辛酰胺脱氢酶、苹果酸脱氢酶1及三磷酸甘油醛脱氢酶,这3种蛋白在造模后表达分别上调、下调、上调,电针后均表现为上调,减少了2种蛋白:核苷二磷酸激酶及E2泛素结合酶。结论:电针可逆转急性损伤脊髓内多数差异蛋白表达的变化,其作用可能是通过抑制神经细胞凋亡、改善细胞能量代谢、调节异常蛋白等途径促进脊髓损伤的修复。随着时间和针刺次数的增加,电针可能逐渐侧重于发挥改善细胞能量代谢和抑制其凋亡的作用,而对受损蛋白的调节作用在减弱。 展开更多
关键词 急性脊髓损伤 电针 差异表达蛋白 蛋白组学分析
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红芪多糖3促进小鼠脾淋巴细胞增殖的差异蛋白质点分析 被引量:11
8
作者 李磊强 徐静文 +1 位作者 寇宁 程卫东 《辽宁中医杂志》 CAS 北大核心 2015年第12期2449-2453,共5页
目的:分析红芪多糖3(HPS-3)作用于小鼠脾淋巴细胞后的差异蛋白质点,探讨红芪多糖3调节免疫的分子生物学机制。方法:提取正常小鼠脾淋巴细胞进行体外培养,用MTT法检测红芪多糖对小鼠脾淋巴细胞的刺激增殖作用,ELISA试剂盒测定培养上清中... 目的:分析红芪多糖3(HPS-3)作用于小鼠脾淋巴细胞后的差异蛋白质点,探讨红芪多糖3调节免疫的分子生物学机制。方法:提取正常小鼠脾淋巴细胞进行体外培养,用MTT法检测红芪多糖对小鼠脾淋巴细胞的刺激增殖作用,ELISA试剂盒测定培养上清中的IL-2含量,并运用双向电泳技术对脾淋巴细胞总蛋白进行分离,银染显色,PDQuest软件对凝胶图谱进行差异点分析,找出差异明显的蛋白质点。结果:HPS-3能够提高T淋巴细胞增殖能力和IL-2的分泌,实验所得2-DE凝胶图谱经PDQuest软件分析得出以下结果:HPS-3组中共有16个蛋白点发生明显改变,其中11个蛋白质点高表达,4个蛋白质点消失,1个蛋白质点低表达。结论:HPS-3能促进脾淋巴细胞增殖,显著影响小鼠脾淋巴细胞蛋白质表达。 展开更多
关键词 红芪多糖 蛋白质组学 小鼠脾T淋巴细胞 差异蛋白质
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应用比较蛋白质组学方法筛选鉴定胃癌细胞分化相关蛋白质 被引量:11
9
作者 李勇 檀碧波 +3 位作者 范立侨 赵群 宋振川 王冬 《中华肿瘤杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期179-184,共6页
目的在不同分化的胃癌细胞株中寻找与胃癌分化相关的蛋白质,并对其功能进行初步了解。方法采用双向电泳及基质辅助激光解吸电离一飞行时间质谱鉴定法,对3种分化程度不同的胃癌细胞株MKN28、SGC7901和BGC823进行了研究,并应用Westernb... 目的在不同分化的胃癌细胞株中寻找与胃癌分化相关的蛋白质,并对其功能进行初步了解。方法采用双向电泳及基质辅助激光解吸电离一飞行时间质谱鉴定法,对3种分化程度不同的胃癌细胞株MKN28、SGC7901和BGC823进行了研究,并应用Westernblot法对鉴定出的部分蛋白质在胃癌细胞株及胃癌组织中的表达进行验证。结果在3种分化程度不同的胃癌细胞株MKN28、SGC7901和BGC823中,找到表达差异明显的蛋白质点14个,其中8个蛋白质点得到鉴定,分别为类硫氧还蛋白过氧化物酶、甘油醛-3-磷酸脱氢酶、β-微管蛋白多肽、假定蛋白、锌指蛋白139、蛋白酪氨酸激酶、钙网蛋白前体和原肌球蛋白。这些蛋白质与胃癌细胞信号转导、维持细胞稳态、参与糖酵解及肿瘤药物代谢、抗氧化损伤等功能有关。Westernblot法检测证实,这些蛋白质在胃癌细胞株及胃癌组织中的表达与蛋白质组学所得结果一致。结论分化程度不同的胃癌细胞蛋白质表达存在差异,差异蛋白质主要与胃癌细胞的信号转导、维持细胞稳态、参与糖酵解及肿瘤药物代谢、抗氧化损伤等功能有关。 展开更多
关键词 比较蛋白质组学 差异表达蛋白 胃肿瘤 细胞分化 多药耐药性
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应用iTRAQ结合质谱技术筛选冷应激大鼠血浆差异表达蛋白 被引量:10
10
作者 刘艳芝 郭景茹 +4 位作者 彭梦玲 马莉 甄莉 计红 杨焕民 《中国应用生理学杂志》 CAS CSCD 2015年第5期392-395,400,共5页
目的:应用同重同位素相对与绝对定量(iTRAQ)结合质谱技术筛选冷应激大鼠血浆差异表达蛋白。方法:将30只健康SPF级雄性Wistar大鼠随机分为冷应激组A和常温饲养组B,将A、B两组分别随机分为3组,即A1、A2、A3组和B1、B2、B3组(n=5)。常温饲... 目的:应用同重同位素相对与绝对定量(iTRAQ)结合质谱技术筛选冷应激大鼠血浆差异表达蛋白。方法:将30只健康SPF级雄性Wistar大鼠随机分为冷应激组A和常温饲养组B,将A、B两组分别随机分为3组,即A1、A2、A3组和B1、B2、B3组(n=5)。常温饲养温度为(24.0±0.1)℃,冷应激温度为(4.0±0.1)℃。两组实验大鼠经不同温度处理12 h后,用肝素钠抗凝负压管腹主动脉采血,分离血浆,提取血浆蛋白、定量、酶解、iTRAQ标记、强阳离子交换色谱(SCX分离)和质谱分析。结果:共鉴定出1 085个蛋白,筛出39个差异表达蛋白,其中29个表达上调蛋白,10个表达下调蛋白。经生物信息学分析,筛出3个与动物冷应激相关的重要差异表达蛋白,分别为:组织相容性蛋白HA-1、Ras相关蛋白Rap1b、整合蛋白β-1。结论:本实验成功筛出冷应激大鼠血浆差异表达蛋白,iTRAQ技术为筛选大鼠冷应激蛋白诊断标志物提供了一个良好的平台,为深入研究动物冷应激发生机制奠定了良好基础。 展开更多
关键词 冷应激 大鼠 ITRAQ 差异表达蛋白
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基于nano-LC-LTQ/Orbitrap-MS筛选黄芩-黄连药对干预2型糖尿病KKAy小鼠的骨骼肌差异表达蛋白 被引量:9
11
作者 刘彤彤 肖琴 +5 位作者 盛军庆 涂秀英 孙军 魏学鑫 于梅 章常华 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第17期126-131,共6页
目的采用nano-LC-LTQ/Orbitrap.MS鉴定2型糖尿病KKAy小鼠模型组与给药组的骨骼肌差异表达蛋白,推测黄芩-黄连药对(sc)防治2型糖尿病的作用机制。方法:取20只8-10周龄的雄性KKAy小鼠,给予全价高脂饲料,随机等分为2组,分别为黄芩... 目的采用nano-LC-LTQ/Orbitrap.MS鉴定2型糖尿病KKAy小鼠模型组与给药组的骨骼肌差异表达蛋白,推测黄芩-黄连药对(sc)防治2型糖尿病的作用机制。方法:取20只8-10周龄的雄性KKAy小鼠,给予全价高脂饲料,随机等分为2组,分别为黄芩-黄连药对组(27 g·kg^-1)和模型组(灌胃等量水)。2组均连续灌胃8周,于最后1次给药后1 h处死小鼠,取骨骼肌在液氮中进行研磨,加裂解液及蛋白酶抑制剂提取蛋白,测定蛋白浓度,再进行蛋白变性、还原、烷基化、酶解及脱盐,利用nano-LC-LTQ/Orbitrap.MS检测,利用Xcalibur 2.2软件和Proteome Discoverer 1.4.0.288进行数据处理,采用Sievev2.1(×64)进行无标样定量分析寻找相关差异蛋白,筛选并鉴定差异表达蛋白,并对差异表达蛋白进行生物信息学分析。结果:黄芩.黄连药对组与模型组共鉴定出107个差异表达蛋白质,经生物学分析筛选出与糖尿病相关的差异蛋白共5个,其中上调4个(50磷酸腺苷激活的蛋白激酶、脂联素等),下调1个(脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白4)。分析显示差异蛋白质主要涉及炎症反应、信号通路调节等生物过程。结论:通过有效的比较与分析,得到了一些参与胰岛素信号转导等通路的差异表达蛋白质,为研究黄芩一黄连药对防治胰岛素抵抗的分子机制提供了新靶点。 展开更多
关键词 黄芩一黄连 药对 KKAY小鼠 蛋白质组学 差异表达蛋白
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龙眼果实采后果皮褐变过程差异表达蛋白分析 被引量:8
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作者 潘德灼 盖永红 +5 位作者 吕晓杰 蒋雨露 邱智敏 宋晓敏 黄春梅 陈伟 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期542-551,共10页
【目的】探讨龙眼果实采后果皮常温褐变过程的差异表达蛋白变化。【方法】以‘乌龙岭’龙眼为研究对象,龙眼果实采后在常温(28±2)°C下贮藏0、1、3和5 d后,应用双向电泳和MALDI-TOF/TOF-MS技术分析果皮的差异蛋白。【结果】在... 【目的】探讨龙眼果实采后果皮常温褐变过程的差异表达蛋白变化。【方法】以‘乌龙岭’龙眼为研究对象,龙眼果实采后在常温(28±2)°C下贮藏0、1、3和5 d后,应用双向电泳和MALDI-TOF/TOF-MS技术分析果皮的差异蛋白。【结果】在龙眼常温下贮藏0、1、3和5 d等不同时间点,共检测到42个差异蛋白至少发生一次丰度在2倍以上的表达变化,其中38个蛋白被成功鉴定,有14个上调表达,20个下调表达,4个复杂变化。这些蛋白质参与了应激和防御(13.2%)、蛋白折叠、稳定和降解(28.9%)、能量与物质代谢(26.3%)、信号转导(10.5%)和次生代谢(2.6%)等生理过程。【结论】脱氢抗坏血酸还原酶、过氧化氢酶、蛋白质二硫键异构酶的下调表达,可能引起龙眼果实采后果皮细胞内活性氧增加;苹果酸酶和膜联蛋白的下调表达,可能与生物膜系统完整性的破坏有关;另外泛素结合酶、蛋白酶体α亚基和20S蛋白酶体PAF1亚基的下调表达,可能导致对果皮细胞中损伤或失活蛋白的选择性降解速率降低,使细胞内环境平衡失调;而过氧化物酶的上调表达,可能引起酚类物质反应生成褐色物质,致使果皮发生褐变。 展开更多
关键词 龙眼 果皮 褐变 双向电泳 差异蛋白
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‘紫鹃’茶树紫叶和绿叶差异表达蛋白分析 被引量:8
13
作者 陈伟 吕晓杰 +3 位作者 宋晓敏 邱智敏 梁猛 陈世品 《福建农业学报》 CAS 北大核心 2016年第3期230-235,共6页
为了探索红紫芽茶树中花青素代谢及其调控机制,应用同位素标记相对和绝对定量(iTRAQ)技术比较分析‘紫鹃’茶树同一时期不同发育程度的紫叶与绿叶的差异表达蛋白。结果表明,‘紫鹃’茶树绿叶和紫叶差异表达蛋白共鉴定出798个,其中在紫... 为了探索红紫芽茶树中花青素代谢及其调控机制,应用同位素标记相对和绝对定量(iTRAQ)技术比较分析‘紫鹃’茶树同一时期不同发育程度的紫叶与绿叶的差异表达蛋白。结果表明,‘紫鹃’茶树绿叶和紫叶差异表达蛋白共鉴定出798个,其中在紫叶中上调蛋白有533个,下调蛋白有265个。这些蛋白主要参与了以下生理过程:光合作用(占14.7%)、糖代谢(5.1%)、转录调控(18.5%)、蛋白质合成(11.4%)、细胞结构蛋白(6.9%)、信号转导(6.9%)、氨基酸代谢(3.8%)、花青素代谢(3.6%)、抗氧化胁迫(3.5%)、脂代谢(3.5%)和呼吸作用(0.4%)等。‘紫鹃’茶树紫叶中可溶性总糖含量的降低可能与花青苷大量积累有关。 展开更多
关键词 '紫鹃’茶树 ITRAQ 差异蛋白 花青素
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禽呼肠孤病毒强毒株和弱毒疫苗株感染Vero细胞的蛋白质组学研究 被引量:8
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作者 黄莉 谢芝勋 +8 位作者 谢丽基 邓显文 谢志勤 范晴 罗思思 黄娇玲 曾婷婷 张艳芳 王盛 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期331-339,共9页
为研究在禽呼肠孤病毒(ARV)不同毒力毒株感染后不同时间点宿主细胞中蛋白质组变化,运用双向凝胶电泳技术和质谱鉴定的蛋白质组学方法,对ARV强毒株S1133、弱毒疫苗株aS1133感染Vero细胞和对照细胞在不同时间点的蛋白质样品进行检测。鉴... 为研究在禽呼肠孤病毒(ARV)不同毒力毒株感染后不同时间点宿主细胞中蛋白质组变化,运用双向凝胶电泳技术和质谱鉴定的蛋白质组学方法,对ARV强毒株S1133、弱毒疫苗株aS1133感染Vero细胞和对照细胞在不同时间点的蛋白质样品进行检测。鉴定结果表明,共鉴定出44个差异表达蛋白质,这些蛋白质包括α-烯醇化酶(α-enolase)、过氧化物酶(Prx-4)、hnRNPs、微管蛋白(Tubulin)、蛋白磷酸酶、转录延伸因子等。GO软件分析显示这些差异蛋白质主要参与细胞信号、细胞骨架组成、能量代谢、核酸代谢、蛋白质折叠、细胞增殖及凋亡等生物学功能。荧光定量RT-PCR验证表明,hnRNP和Prx-4在S1133感染细胞中表达水平持续上调,而Tubulin和α-enolase仅分别在48和24h时表达上调,与双向凝胶电泳的结果一致。以上试验数据揭示了ARV不同毒力毒株感染后细胞中蛋白质表达的差异变化,有助于进一步阐明ARV和宿主之间的相互作用。 展开更多
关键词 禽呼肠孤病毒 强毒株 弱毒疫苗株 VERO细胞 差异表达蛋白质
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不同配穴针刺预防应激性胃溃疡的效应比较及差异表达蛋白的筛选 被引量:8
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作者 王朝辉 单纯筱 +2 位作者 周丹 严兴科 王富春 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期441-447,F0002,共8页
目的:观察不同配穴的预防性针刺对应激性胃溃疡大鼠胃组织损伤情况及蛋白质谱的影响,阐明不同配穴针刺预防应激性胃溃疡效果,获得相关差异表达蛋白。方法:120只雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组、捆绑对照组、应激性胃溃疡模型组、募... 目的:观察不同配穴的预防性针刺对应激性胃溃疡大鼠胃组织损伤情况及蛋白质谱的影响,阐明不同配穴针刺预防应激性胃溃疡效果,获得相关差异表达蛋白。方法:120只雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组、捆绑对照组、应激性胃溃疡模型组、募穴组、下合穴组、合募配穴组、背俞穴组和俞募配穴组,每组15只。各组大鼠针刺后采用水浸-束缚法制备应激性胃溃疡模型,观察各组大鼠胃黏膜损伤形态学表现,计算溃疡指数;提取胃组织蛋白,应用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳方法对胃组织匀浆上清液中的蛋白进行梯度分离,采用纳升级电喷雾高效液相仪联合LTQ线性离子阱质谱仪(Eksigent-Thermo LTQ-MS)检测蛋白表达水平。结果:合募配穴组大鼠溃疡指数低于募穴组、下合穴组、背俞穴组和俞募配穴组(P<0.05)。筛选出的感兴趣差异表达蛋白有以下几种:①酶类,包括甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)、碳酸酐酶1(Car1)、碳酸酐酶3(Car3)、乌头合酶(Aco2)、α-烯醇化酶(Eno1)、β烯醇化酶(Eno3)和γ烯醇化酶;②运动(骨架)蛋白质,包括alpha 1肌动蛋白(Actc1)、β肌动蛋白(Actb)、α肌动蛋白(Acta1)和相对分子质量为43 000的蛋白质(Actg2);③运输蛋白质,包括血清铁传递蛋白(TF亚型1)和钙网蛋白(Calr);④热休克蛋白,包括相对分子质量为10 000的热休克蛋白(Hspe1)。结论:合募配穴预防应激性胃溃疡效果优于单穴组及俞募配穴组,机制可能与多种蛋白的表达变化有关。 展开更多
关键词 合募配穴 针刺 应激性胃溃疡 差异表达蛋白
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基于iTRAQ技术分析牛初乳与常乳乳清差异蛋白质组 被引量:8
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作者 邓微 李韫同 +5 位作者 李墨翰 曹雪妍 郑艳 武俊瑞 岳喜庆 杨梅 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2021年第2期241-246,共6页
为阐明牛初乳、牛常乳乳清蛋白的差异,利用同位素标记相对和绝对定量(isobaric tags for relative and absolute quantitation,iTRAQ)蛋白质组学技术对二者进行蛋白质组差异分析,在得到的599种具有定量信息的乳清蛋白中,鉴定出60种差异... 为阐明牛初乳、牛常乳乳清蛋白的差异,利用同位素标记相对和绝对定量(isobaric tags for relative and absolute quantitation,iTRAQ)蛋白质组学技术对二者进行蛋白质组差异分析,在得到的599种具有定量信息的乳清蛋白中,鉴定出60种差异蛋白。将牛初乳与牛常乳乳清丰度差异蛋白进行生物信息学分析发现,差异蛋白主要参与的生物过程为转运、定位、单一生物作用等;主要参与的分子功能为顶端质膜、细胞外区域、细胞外区域部分等;主要参与的细胞组成为蛋白结合和阴离子结合。丰度差异蛋白中有9种是与信号传导相关,有6种糖基化乳清蛋白。此外,利用蛋白质网络互作分析发现,差异蛋白中存在具有高连接度的关键乳清蛋白因子。本研究采用iTRAO技术对牛初乳与牛常乳乳清差异蛋白进行鉴定及生物信息学分析,为今后改善牛初、常乳品质,开发婴幼儿乳粉以及功能性乳制品提供了一定参考。 展开更多
关键词 牛初乳 牛常乳 乳清 同位素标记相对和绝对定量 差异蛋白
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不同羊毛纤维直径细毛羊皮肤组织差异表达蛋白质研究 被引量:7
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作者 付雪峰 杨涵羽璐 +6 位作者 石刚 徐新明 张恩平 狄江 张艳花 黄锡霞 田可川 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第4期879-891,共13页
试验旨在研究不同纤维直径的细毛羊皮肤组织中毛囊差异表达的蛋白质,探讨与羊毛细度相关的蛋白质功能。应用双向凝胶电泳技术建立细毛羊皮肤组织中毛囊差异表达蛋白质图谱;运用ImageMaster 2DPlatinum软件检测细毛羊毛囊组织差异表达蛋... 试验旨在研究不同纤维直径的细毛羊皮肤组织中毛囊差异表达的蛋白质,探讨与羊毛细度相关的蛋白质功能。应用双向凝胶电泳技术建立细毛羊皮肤组织中毛囊差异表达蛋白质图谱;运用ImageMaster 2DPlatinum软件检测细毛羊毛囊组织差异表达蛋白质;通过质谱鉴定技术和数据库比对等方法开展细毛羊皮肤组织毛囊特异性蛋白质分类和功能鉴定。结果成功鉴定出94个差异蛋白质,其中,相同年龄超细型细毛羊和细型细毛羊皮肤毛囊组织中有73个差异蛋白质;不同年龄的超细型细毛羊毛囊组织中有21个差异蛋白质。按功能属性划分得到了角蛋白、分子伴侣类蛋白、细胞骨架结构类蛋白、14-3-3蛋白、蛋白酶类、肌球蛋白、血清白蛋白和其他蛋白8类功能蛋白。结果提示,应用生物信息学技术分析这些差异蛋白与羊毛纤维直径的内在联系,为优质细毛羊的培育提供直接有效的基因资源信息,对提高羊毛品质具有重要的意义。 展开更多
关键词 细毛羊 双向凝胶电泳 蛋白质组学 差异表达蛋白质
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基于非标记定量蛋白质组学技术鉴定精神分裂症患者血清差异表达蛋白
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作者 张娜 苗云峰 +3 位作者 刘飞虎 张蕊 贺瑞峰 田玉梅 《国际精神病学杂志》 2024年第1期35-41,共7页
目的利用蛋白质组学技术筛选精神分裂症患者血清中表达差异的蛋白质,以探讨精神分裂症致病机制。方法收集13例精神分裂症患者和6例健康志愿者(对照组)血清样本,采用非标记蛋白质组学技术联合液相色谱-质谱分析技术鉴定两组的差异蛋白,... 目的利用蛋白质组学技术筛选精神分裂症患者血清中表达差异的蛋白质,以探讨精神分裂症致病机制。方法收集13例精神分裂症患者和6例健康志愿者(对照组)血清样本,采用非标记蛋白质组学技术联合液相色谱-质谱分析技术鉴定两组的差异蛋白,筛选出表达差异显著的蛋白质,并进行基因本体和京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)富集分析。结果非标记蛋白质组学结果显示精神分裂症患者血清中共筛选出126个显著性差异的蛋白,其中63个上调蛋白,63个下调蛋白。这些差异蛋白主要富集在血液微粒、细胞质囊腔、囊腔、分泌颗粒管腔等细胞组分,分子功能主要表现在肽酶调节活性,主要参与蛋白激活级联、体液免疫应答、血小板脱粒、补体激活、蛋白修饰、急性炎症反应等生物学过程。精神分裂症主要富集的KEGG通路包括补体和凝血级联反应、冠状病毒和全身性红斑狼疮。结论精神分裂症患者血清中差异蛋白主要富集在补体和凝血级联反应通路,揭示该通路在精神分裂症发病过程中发挥重要作用。 展开更多
关键词 蛋白质组学 差异蛋白 生物信息学 精神分裂症
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理脾降浊方治疗2型糖尿病的网络药理学和蛋白质组学研究
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作者 潘琳琳 相宏杰 +1 位作者 逯艳婷 刘桂荣 《世界中医药》 CAS 北大核心 2024年第12期1708-1719,共12页
目的:研究理脾降浊方(LPJZF)治疗2型糖尿病(T2DM)的潜在分子机制。方法:首先,基于网络药理学筛选出LPJZF中的活性成分和作用靶点,通过基因表达综合数据库筛选出与T2DM相关的差异表达基因,并运用蛋白质-蛋白质相互作用、基因本体(GO)和... 目的:研究理脾降浊方(LPJZF)治疗2型糖尿病(T2DM)的潜在分子机制。方法:首先,基于网络药理学筛选出LPJZF中的活性成分和作用靶点,通过基因表达综合数据库筛选出与T2DM相关的差异表达基因,并运用蛋白质-蛋白质相互作用、基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)分析LPJZF在治疗T2DM中的作用靶点和通路。其次,用LPJZF对T2DM大鼠进行干预,采用蛋白质组学鉴定差异蛋白,然后用KEGG和GO分析探究LPJZF干预T2DM的潜在机制。最后,运用分子对接技术评估T2DM潜在靶点与LPJZF活性成分之间的结合亲和力。结果:网络药理学分析共筛选出LPJZF干预T2DM的63个有效成分和135个靶点;蛋白质组学共鉴定出LPJZF干预T2DM的964个差异表达蛋白,以及磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K-AKT)、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、核因子κB和叉头框蛋白O(FoxO)等4条关键通路;分子对接结果显示,T2DM相关蛋白细胞周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)、表皮生长因子受体(EGFR)、肿瘤蛋白P53(TP53)、热休克蛋白90 kDa αA类成员1(HSP90AA1)和小鼠双微体2(MDM2)与LPJZF中的黄芩素、芒柄花黄素、山柰酚、汉黄芩素、β-谷甾醇和豆甾醇具有良好的亲和力。结论:LPTZF能有效改善胰岛素抵抗,促进胰腺B细胞再生,是治疗T2DM的有效方剂。 展开更多
关键词 理脾降浊方 2型糖尿病 网络药理学 蛋白质组学 分子对接 活性成分 差异蛋白 胰岛素抵抗
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TMT定量蛋白组学方法筛选乳腺癌腋窝淋巴结转移患者血清差异蛋白 被引量:6
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作者 李曦洲 方敏 +1 位作者 盛湲 于恩达 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期411-416,共6页
目的:分析有腋窝淋巴结转移和无腋窝淋巴结转移的乳腺浸润性导管癌患者血清中的差异蛋白,筛选与乳腺癌转移相关的生物标志物和治疗靶点。方法:本研究采用定量蛋白质组学串联质谱标签(tandem mass tag,TMT)标记技术分别对14例有腋窝淋巴... 目的:分析有腋窝淋巴结转移和无腋窝淋巴结转移的乳腺浸润性导管癌患者血清中的差异蛋白,筛选与乳腺癌转移相关的生物标志物和治疗靶点。方法:本研究采用定量蛋白质组学串联质谱标签(tandem mass tag,TMT)标记技术分别对14例有腋窝淋巴结转移及14例无腋窝淋巴结转移的乳腺癌患者血清蛋白进行检测,并对蛋白质进行定量分析,筛选出发生显著变化的差异蛋白,再搜索Uniprot数据库和用Proteome Discoverer软件分析,进一步进行生物信息学分析。结果:有腋窝淋巴结转移组中共筛选出差异蛋白119个,其中6个表达上调,113个表达下调。基因本体(gene ontology,GO)注释分析和功能聚类分析表明,这些差异蛋白质主要定位于细胞外区,与肿瘤的生物合成、细胞增殖、血管生成相关。Western boltting和qRT-PCR验证了K1C19(下调0.11倍)和PSME2(上调2.02倍)的表达。结论:TMT定量蛋白组学方法能有效筛选有腋窝淋巴结转移的和无腋窝淋巴结转移的乳腺癌患者血清中的差异蛋白。其中,K1C19和PSME2是值得进一步研究的乳腺癌淋巴结转移的候选血清标志物。 展开更多
关键词 乳腺癌 腋窝淋巴结转移 蛋白组学 串联质谱标签 差异蛋白
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