多房棘球绦虫重组BCG-EmⅡ/3疫苗构建及其表达效率 被引量：25

1

作者 李文桂 王鸿 朱佑明 《中国地方病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期490-493,共4页

目的 构建多房棘球绦虫（Em）重组卡介苗（BCG—EmⅡ／3）疫苗，分析EmⅡ／3分子在该疫苗中的表达效率。方法 超声粉碎泡球蚴组织提取总RNA，通过RT-PCR扩增EmⅡ／3的抗原编码基因；将该基因定向克隆到大肠埃希菌-分枝杆菌穿梭表达载体p... 目的 构建多房棘球绦虫（Em）重组卡介苗（BCG—EmⅡ／3）疫苗，分析EmⅡ／3分子在该疫苗中的表达效率。方法 超声粉碎泡球蚴组织提取总RNA，通过RT-PCR扩增EmⅡ／3的抗原编码基因；将该基因定向克隆到大肠埃希菌-分枝杆菌穿梭表达载体pBCG，构建重组质粒pBCG—EmⅡ／3；电穿孔法转化BCG，构建多房棘球绦虫重组BCG-EmⅡ／3疫苗。免疫印迹分析重组BCG-EmⅡ／3疫苗的表达产物。结果 RT-PCR成功扩增出1680bp的EmⅡ／3抗原编码基因；双酶切证实EmⅡ／3抗原编码基因成功插入pBCG中；PCR证实rBCG—EmⅡ／3疫苗构建成功；免疫印迹分析发现重组BCG—EmⅡ／3疫苗的表达产物在相对分子质量（Mr）约为65×10^3处有明显的目的蛋白表达条带，且能被活动性泡球蚴病鼠血清特异识别。结论 成功构建了多房棘球绦虫重组BCG—EmⅡ／3疫苗，为疫苗的开发和利用打下了坚实的理论基础。 展开更多

关键词 多房棘球绦虫 重组bcg—emⅱ/3疫苗 构建 表达效率

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多房棘球绦虫混合重组BCG-EmⅡ/3和BCG-Em14-3-3疫苗诱导小鼠的免疫保护力观察 被引量：6

2

作者 李文桂 王鸿 朱佑明 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第13期1276-1279,共4页

目的探讨多房棘球绦虫混合重组BCG-EmⅡ/3和BCG-Em14-3-3疫苗免疫鼠后对Em原头节攻击感染的保护性作用。方法将混合重组BCG疫苗采用皮下注射和鼻腔内接种分别免疫BALB/c小鼠,免疫后8周用多房棘球绦虫原头节进行攻击感染,感染后18周剖杀... 目的探讨多房棘球绦虫混合重组BCG-EmⅡ/3和BCG-Em14-3-3疫苗免疫鼠后对Em原头节攻击感染的保护性作用。方法将混合重组BCG疫苗采用皮下注射和鼻腔内接种分别免疫BALB/c小鼠,免疫后8周用多房棘球绦虫原头节进行攻击感染,感染后18周剖杀小鼠,计算减蚴率,测定血清中IgG及其亚类和IgE水平;分离脾细胞,流式细胞仪检测脾CD4+和CD8+T淋巴细胞亚群的百分比,同时设有空载体、BCG和PBS对照。结果疫苗接种组的减蚴率为45·29%～76.47%,血清IgG、IgG2a、IgG2b和IgE水平明显升高,IgG1和IgG3显著降低;疫苗接种组的脾CD4+T细胞亚群显著增加,CD8+T细胞亚群无明显变化,CD4+/CD8+亚群比值明显升高。结论多房棘球绦虫混合重组BCG-EmⅡ/3和BCG-Em14-3-3疫苗鼻腔内接种是一种较好的途径,IgG、IgG2a、IgG2b和IgE以及CD4+T细胞亚群在疫苗诱导的保护力中起重要作用。 展开更多

关键词 多房棘球绦虫 重组bcg-emⅱ/3疫苗 重组bcg-em14-3-3疫苗 保护力

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多房棘球绦虫重组BCG-EmⅡ／3疫苗诱导的保护力观察 被引量：9

3

作者 李文桂 王鸿 朱佑明 《中国地方病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期156-158,共3页

目的探讨多房棘球绦虫（Em）重组卡介苗（BCG-EmⅡ／3）疫苗免疫对Em原头节攻击感染的保护性作用。方法Balb／c小鼠随机分为疫苗皮下注射组、鼻腔接种组、空载体对照组、卡介苗（BCG）对照组和磷酸缓冲液（PBS）对照组。接种免疫8周，... 目的探讨多房棘球绦虫（Em）重组卡介苗（BCG-EmⅡ／3）疫苗免疫对Em原头节攻击感染的保护性作用。方法Balb／c小鼠随机分为疫苗皮下注射组、鼻腔接种组、空载体对照组、卡介苗（BCG）对照组和磷酸缓冲液（PBS）对照组。接种免疫8周，用Em原头节进行攻击感染，感染后18周剖杀小鼠，称取检获泡球蚴质量，计算减蚴率，并用ELISA法测定血清中IgG及其亚类和IgE水平。结果与PBS对照组比较，疫苗皮下注射组和鼻腔内接种组小鼠检获泡球蚴质量均降低（q=2．65、3．68，P〈0．05或〈0．01），疫苗鼻腔内接种组与皮下注射组比较，检获泡球蚴质量降低（q=2．78，P〈0．05），疫苗接种组的减蚴率为63．23％～74．70％；与疫苗鼻腔内接种前比较．接种后和Em原头节攻击后小鼠血清IgG、IgG2a、IgG2b和IgE水平均明显升高（P〈0．05或〈o．01），IsG1降低（P〈0．01），IgG3未见明显改变（P〉0．05）。结论重组BCG-EmⅡ／3疫苗鼻腔内接种是一种较好的途径．IgG、IgG2a、IgG2b和IgE在疫苗诱导的保护力中起重要作用。 展开更多

关键词 棘球蚴病 肝 重组bcg-emⅱ/3疫苗 保护力

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多房棘球绦虫混合重组BCG-EmⅡ/3和BCG-Em14-3-3疫苗免疫小鼠后脾细胞亚群的动态观察 被引量：4

4

作者 李文桂 王鸿 朱佑明 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2007年第7期676-678,共3页

目的:动态观察多房棘球绦虫混合重组BCG-EmⅡ/3和BCG-Em14-3-3疫苗免疫小鼠后脾细胞亚群的变化。方法:将疫苗采用鼻腔内接种免疫BALB/C鼠,在免疫后0、2、4、6、8、10、12、14、16和18周各剖杀4只小鼠取脾,分离脾细胞,流式细胞仪检测脾CD... 目的:动态观察多房棘球绦虫混合重组BCG-EmⅡ/3和BCG-Em14-3-3疫苗免疫小鼠后脾细胞亚群的变化。方法:将疫苗采用鼻腔内接种免疫BALB/C鼠,在免疫后0、2、4、6、8、10、12、14、16和18周各剖杀4只小鼠取脾,分离脾细胞,流式细胞仪检测脾CD_4^+和CD_8^+T淋巴细胞亚群的百分比,同时设有PBS对照。结果:疫苗接种组的脾CD_4^+和CD_8^+T细胞亚群分别在免疫后2～12周和2～18周升高,分别在免疫后6和10周达最高水平。结论:CD_4^+T细胞亚群数目在多房棘球绦虫混合重组BCG-EmⅡ/3和BCG-Em14-3-3疫苗免疫早期(2～6周)显著增加, 展开更多

关键词 多房棘球绦虫 重组bcg-emⅱ/3疫苗 重组bcg-em14-3-3疫苗 脾细胞亚群

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多房棘球绦虫混合重组BCG-EmⅡ/3和BCG-Em14-3-3疫苗诱导小鼠脾脏T细胞亚群的变化 被引量：4

5

作者 唐君 李文桂 +1 位作者 王鸿 朱佑明 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2007年第6期575-577,580,共4页

目的:探讨多房棘球绦虫混合重组BCG-EmⅡ/3和BCG-Em14-3-3疫苗免疫和Em原头节攻击后小鼠脾CD4+和CD8+T淋巴细胞亚群的变化。方法:将混合重组BCG疫苗采用皮下注射和鼻腔内接种分别免疫BALB/C鼠,免疫后8周用多房棘球绦虫原头节进行攻击感... 目的:探讨多房棘球绦虫混合重组BCG-EmⅡ/3和BCG-Em14-3-3疫苗免疫和Em原头节攻击后小鼠脾CD4+和CD8+T淋巴细胞亚群的变化。方法:将混合重组BCG疫苗采用皮下注射和鼻腔内接种分别免疫BALB/C鼠,免疫后8周用多房棘球绦虫原头节进行攻击感染,感染后18周杀鼠取脾,分离脾细胞,流式细胞仪检测脾CD4+和CD8+T淋巴细胞亚群的百分比,同时设有空载体、BCG和PBS对照。结果:疫苗接种组的脾CD4+T细胞亚群显著增加,CD8+T细胞亚群无明显变化,CD4+/CD8+亚群比值明显升高;皮下注射组的CD4+和CD4+/CD8+亚群比值显著高于鼻腔内接种组。结论:CD4+T细胞亚群在多房棘球绦虫重组BCG-Em14-3-3疫苗诱导的小鼠抗Em原头节攻击感染的保护性免疫机制中起一定作用。 展开更多

关键词 多房棘球绦虫 重组bcg-emⅱ/3疫苗 bcg-em14-3-3疫苗 脾细胞亚群

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多房棘球绦虫重组BCG-EmⅡ/3疫苗诱导小鼠脾细胞凋亡的研究 被引量：5

6

作者 李文桂 王鸿 朱佑明 《中国地方病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期636-638,共3页

目的探讨多房棘球绦虫(Em)重组卡介苗(BCG-EmⅡ/3)疫苗免疫对Em原头节攻击小鼠脾细胞凋亡的影响。方法Balb/c小鼠随机分为疫苗皮下注射组、鼻腔接种组、空载体对照组、卡介苗(BCG)对照组和PBS对照组。免疫8周时用Em原头节攻击感染,感染... 目的探讨多房棘球绦虫(Em)重组卡介苗(BCG-EmⅡ/3)疫苗免疫对Em原头节攻击小鼠脾细胞凋亡的影响。方法Balb/c小鼠随机分为疫苗皮下注射组、鼻腔接种组、空载体对照组、卡介苗(BCG)对照组和PBS对照组。免疫8周时用Em原头节攻击感染,感染后18周剖杀小鼠,计算减蚴率;取脾分离脾细胞,流式细胞仪检测脾细胞的凋亡发生率。结果与PBS对照组相比,疫苗皮下注射组和鼻腔内接种组小鼠检获泡球蚴质量均降低(q=2.65、3.68,P<0.05或P<0.01),疫苗鼻腔内接种组与皮下注射组比较,检获泡球蚴质量明显降低(q=2.78,P<0.05),疫苗接种组的减蚴率为63.23%～74.70%;疫苗接种组的脾细胞凋亡发生率明显低于PBS对照组(P<0.01);皮下注射组的脾细胞凋亡发生率明显低于鼻腔内接种组(P<0.01)。结论泡球蚴感染可引起小鼠脾细胞发生凋亡。多房棘球绦虫重组BCG-EmⅡ/3疫苗接种可抑制感染鼠脾细胞凋亡。 展开更多

关键词 小泡棘球蚴病 重组bcg-emⅱ/3疫苗 脾 细胞凋亡 多房棘球绦虫 疫苗

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多房棘球绦虫重组BCG-EmⅡ/3疫苗促进小鼠脾细胞因子的分泌 被引量：3

7

作者 李文桂 王鸿 朱佑明 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2007年第9期966-969,共4页

目的动态观察多房棘球绦虫重组BCG—EmⅡ／3疫苗免疫小鼠后脾细胞因子的变化。方法采用鼻腔内接种疫苗免疫BALB／C鼠，在免疫后0、2、4、6、8和10周各剖杀4只小鼠取脾，分离脾细胞，用EmAg或ConA刺激培养，收集脾细胞培养上清液，检测... 目的动态观察多房棘球绦虫重组BCG—EmⅡ／3疫苗免疫小鼠后脾细胞因子的变化。方法采用鼻腔内接种疫苗免疫BALB／C鼠，在免疫后0、2、4、6、8和10周各剖杀4只小鼠取脾，分离脾细胞，用EmAg或ConA刺激培养，收集脾细胞培养上清液，检测脾细胞培养上清液中的IL-2、IFN-γ、TNF-α和IL-4水平，同时设有PBS对照。结果疫苗接种组中IL-2、IFN-γ、TNF-α和IL-4分别在免疫后2～6、2～6、2—10和8～10周升高，分别在免疫后4、4、8和10周达最高水平。结论多房棘球绦虫重组BCG-EmⅡ／3疫苗在免疫早期（2～8周）即可诱导小鼠产生一个TH1型保护性免疫反应。 展开更多

关键词 多房棘球绦虫 重组bcg—emⅱ/3疫苗 细胞因子

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多房棘球绦虫混合重组BCG-EmⅡ／3和BCG-Em14-3-3疫苗诱导的保护力观察 被引量：2

8

作者 蒋光琼 李文桂 +1 位作者 王鸿 朱佑明 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2008年第7期780-783,共4页

目的:探讨多房棘球绦虫(Echinococcus multilocularis,Em)混合重组BCG-EmⅡ/3和BCG-Em14-3-3疫苗免疫小鼠后对Em原头节攻击感染的保护性作用。方法:将混合重组BCG疫苗采用皮下注射和鼻腔内接种分别免疫BALB/c鼠,免疫后8周用多房棘球绦... 目的:探讨多房棘球绦虫(Echinococcus multilocularis,Em)混合重组BCG-EmⅡ/3和BCG-Em14-3-3疫苗免疫小鼠后对Em原头节攻击感染的保护性作用。方法:将混合重组BCG疫苗采用皮下注射和鼻腔内接种分别免疫BALB/c鼠,免疫后8周用多房棘球绦虫原头节进行攻击感染,感染后18周剖杀小鼠,计算减蚴率,测定血清中IgG及其亚类和IgE水平,同时设有空载体、BCG和PBS对照。结果:混合疫苗接种组的减蚴率为45.29%～76.47%,血清IgG、IgG2a、IgG2b和IgE水平明显升高,IgG1和IgG3显著降低。结论:多房棘球绦虫混合重组BCG-EmⅡ/3和BCG-Em14-3-3疫苗鼻腔内接种是一种较好的途径,IgG、IgG2a、IgG2b和IgE在疫苗诱导的保护力中起重要作用。 展开更多

关键词 多房棘球绦虫 重组bcg—emⅱ/3疫苗 重组bcg—em14—3—3疫苗 保护力

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多房棘球绦虫混合重组BCG-EmⅡ/3和BCG-Em14-3-3疫苗免疫小鼠后脾细胞因子的动态观察 被引量：2

9

作者 李文桂 王鸿 朱佑明 《中国病原生物学杂志》 CSCD 2008年第7期502-505,共4页

目的动态观察多房棘球绦虫混合重组BCG-EmⅡ／3和BCG-Em14-3-3疫苗免疫小鼠后脾细胞因子的变化。方法将混合疫苗采用鼻腔内接种免疫BALB／c鼠，在免疫后0、2、4、6、8和10周各剖杀4只小鼠，取脾，分离脾细胞，用EmAg或ConA刺激培养，收... 目的动态观察多房棘球绦虫混合重组BCG-EmⅡ／3和BCG-Em14-3-3疫苗免疫小鼠后脾细胞因子的变化。方法将混合疫苗采用鼻腔内接种免疫BALB／c鼠，在免疫后0、2、4、6、8和10周各剖杀4只小鼠，取脾，分离脾细胞，用EmAg或ConA刺激培养，收集脾细胞培养上清液，测定IL-2、IFN-7、TNF-α和IL-4水平。试验设有PBS对照。结果疫苗接种组小鼠脾细胞IL-2、IFN-γ、TNF-α和IL-4分别在免疫后2～10周、4～8周、6～10周和4～6周升高，分别在免疫后6、6、8和4周达最高水平，含量分别为10．0pg／ml、（75．0±6．6）pg／ml、（245．0±83．0）pg／ml和（187．5±16．5）pg／ml。结论多房棘球绦虫混合重组BCG-EmII／3和BCG-Em14—3—3疫苗在免疫早期（2～8周）即可诱导小鼠产生TH1和TH2混合型免疫反应。 展开更多

关键词 多房棘球绦虫 重组bcg-emⅱ/3疫苗 重组bcg-em14-3-3疫苗 细胞因子

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多房棘球绦虫重组BCG—EmⅡ／3疫苗诱导小鼠脾细胞亚群变化的研究 被引量：4

10

作者 李文桂 王鸿 朱佑明 《中国地方病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期408-410,共3页

目的 探讨多房棘球绦虫重组BCG—EmⅡ／3疫苗免疫和多房棘球绦虫（Em）原头节攻击后小鼠脾CD4^＋和CD8^＋T淋巴细胞亚群的变化。方法 Balb／c小鼠随机分为疫苗皮下注射组、鼻腔接种组、空载体对照组、卡介苗（BCG）对照组和磷酸缓冲液（... 目的 探讨多房棘球绦虫重组BCG—EmⅡ／3疫苗免疫和多房棘球绦虫（Em）原头节攻击后小鼠脾CD4^＋和CD8^＋T淋巴细胞亚群的变化。方法 Balb／c小鼠随机分为疫苗皮下注射组、鼻腔接种组、空载体对照组、卡介苗（BCG）对照组和磷酸缓冲液（PBS）对照组。疫苗免疫8周时用Em原头节进行攻击，感染后18周杀鼠取脾，分离脾细胞，流式细胞仪检测脾CD4^＋和CD8^＋T淋巴细胞亚群的百分比。结果 疫苗皮下注射组和鼻腔接种组的脾CD4^＋T细胞亚群比值分别为0．345±0．018、0．314±0．014，与PBS对照组（0．216±0．027）比较明显增高（q值分别为3．93、3．76，P〈0．01）；CD8^＋T细胞亚群比值分别为0．091±0．005、0．083±0．007，与PBS对照组（0．085±0．018）比较无明显变化（q值分别为0．92、0．89，P〉0．05）；CD4^＋／CD8^＋亚群比值分别为3．81±0．30、3．80±0．44，与PBS对照组（2．75±1．08）比较明显增高（q值分别为3.25、3．06，P〈0．01）。皮下注射组的CD4^＋和CD8^＋T细胞亚群数目显著高于鼻腔内接种组（q值分别为3．52、2．63，P〈0．01或〈0．05）。结论 CD4^＋T细胞亚群在多房棘球绦虫重组BCG-EmⅡ／3疫苗诱导的小鼠抗Em原头节攻击感染的保护性免疫机制中起关键作用。 展开更多

关键词 棘球蚴病 肝 重组bcg—emⅱ/3疫苗 T淋巴细胞亚群

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多房棘球绦虫重组BCG-EmⅡ/3疫苗免疫小鼠后IgG及其亚类和IgE的动态观察 被引量：3

11

作者 李文桂 王鸿 朱佑明 《中国病原生物学杂志》 CSCD 2007年第3期197-199,共3页

目的动态观察多房棘球绦虫重组BCG-EmⅡ/3疫苗免疫小鼠后IgG及其亚类和IgE的变化。方法将疫苗采用鼻腔内接种方法免疫BALB/c鼠，免疫后0、2、4、6、8、10、12、14、16和18周各剖杀4只小鼠，眼球取血，常规ELISA测定血清IgG及其亚类和Ig... 目的动态观察多房棘球绦虫重组BCG-EmⅡ/3疫苗免疫小鼠后IgG及其亚类和IgE的变化。方法将疫苗采用鼻腔内接种方法免疫BALB/c鼠，免疫后0、2、4、6、8、10、12、14、16和18周各剖杀4只小鼠，眼球取血，常规ELISA测定血清IgG及其亚类和IgE水平，同时设有PBS对照。结果疫苗免疫组的血清IgG、IgG2a和IgG2b水平均在免疫后2-18周升高，分别在免疫后10、4和4周达最高水平，ELISA A值分别为0.097±0.030、0.024±0.003和0.022±0.003;血清IgG1和IgE水平均在免疫后2-18周显著降低，分别在免疫后4周和18周达最低水平，A值分别为0.022±0.005和0.181±0.011;血清IgG3水平在免疫后10-12周增加，在免疫后12周达最高水平，A值为0.212±0.008。结论多房棘球绦虫重组BCG-EmⅡ/3疫苗在免疫早期即可诱导小鼠产生一个TH1型保护性免疫反应。 展开更多

关键词 多房棘球绦虫 重组bcg-emⅱ/3疫苗 IGG及其亚类 IGE

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多房棘球绦虫重组BCG-EmⅡ/3疫苗免疫小鼠后脾细胞亚群的动态观察 被引量：4

12

作者 李文桂 朱佑明 王鸿 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期641-643,共3页

目的动态观察多房棘球绦虫重组BCG-EmⅡ/3疫苗免疫小鼠后脾细胞亚群的变化。方法将疫苗采用鼻腔内接种免疫Balb/c鼠,在免疫后0、2、4、6、8、10、12、14、16周和18周各剖杀4只小鼠取脾,分离脾细胞,流式细胞仪检测脾CD4+和CD8+T淋巴细胞... 目的动态观察多房棘球绦虫重组BCG-EmⅡ/3疫苗免疫小鼠后脾细胞亚群的变化。方法将疫苗采用鼻腔内接种免疫Balb/c鼠,在免疫后0、2、4、6、8、10、12、14、16周和18周各剖杀4只小鼠取脾,分离脾细胞,流式细胞仪检测脾CD4+和CD8+T淋巴细胞亚群的百分比,同时设有PBS对照。结果疫苗接种组的脾CD4+和CD8+T细胞亚群分别在免疫后2～10周和2～18周升高,分别在免疫后4周和10周达最高水平。结论多房棘球绦虫重组BCG-EmⅡ/3疫苗可诱导小鼠脾CD4+和CD8+T细胞亚群的增殖。 展开更多

关键词 多房棘球绦虫 重组bcg-emⅱ/3疫苗 脾细胞亚群

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多房棘球绦虫重组BCG-EmⅡ／3疫苗诱导小鼠脾细胞因子变化的研究 被引量：4

13

作者 李文桂 王鸿 朱佑明 《中国地方病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期276-279,共4页

目的探讨多房棘球绦虫（Em）重组BCG-EmⅡ／3疫苗免疫和Em原头节攻击后小鼠脾细胞因子的变化。方法将Balb／c小鼠按体质量随机分为3组：疫苗皮下注射组、疫苗鼻腔内接种组、对照组。免疫后8周用Em原头节进行攻击感染，感染后18周杀鼠取... 目的探讨多房棘球绦虫（Em）重组BCG-EmⅡ／3疫苗免疫和Em原头节攻击后小鼠脾细胞因子的变化。方法将Balb／c小鼠按体质量随机分为3组：疫苗皮下注射组、疫苗鼻腔内接种组、对照组。免疫后8周用Em原头节进行攻击感染，感染后18周杀鼠取脾，分离脾细胞，分别用原液、Em抗原（EmAg）、刀豆蛋白A（ConA）或植物血凝素（PHA）培养，酶联免疫吸附（ELISA）法检测脾细胞培养上清液中白细胞介素2（IL-2）、1干扰素（IFN-γ）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素4（IL-4）水平。结果疫苗皮下注射组原液培养条件下IL-2、IFN-γ、TNF-α和IL-4水平分别为（34．6±2．7）、（34．5±2．8）、（265．0±0．0）、（9．8±2．6）ng／L，与对照组[（25．0±1．9）、（30．0±0．0）、（10．0±0．0）、（12．5±2．7）ng／L]比较差异均有统计学意义（P〈0．01或〈0．05）；疫苗鼻腔内接种组原液培养条件下上述4种指标分别为（32．5±2．2）、（33．6±2．7）、（130．0±0．0）、（10．4±2．7）ng／L，与对照组比较差异均有统计学意义（P〈0．01或〈0．05）；疫苗皮下注射组原液培养条件下TNF-α水平明显高于疫苗鼻腔内接种组（P〈0．01）。EmAg、ConA（或PHA）刺激培养条件下，上述4种指标明显高于相同组别的原液培养（P〈0．01），且ConA（或PHA）刺激培养条件下，上述4种指标明显高于相同组别的EmAg刺激培养条件（P〈0．01）。结论多房棘球绦虫重组BCG－EmⅡ／3疫苗诱导小鼠产生辅助T淋巴细胞（Th）1型免疫反应，从而对抗Em原头节攻击感染。 展开更多

关键词 棘球蚴病 肝 重组bcg-emⅱ/3疫苗 细胞因子类

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多房棘球绦虫重组BCG-Em14-3-3疫苗的构建及鉴定 被引量：13

14

作者 王鸿 李文桂 《中国病原生物学杂志》 CSCD 2006年第1期43-46,共4页

目的构建和鉴定多房棘球绦虫重组BCG-Em14-3-3疫苗。方法超声粉碎泡球蚴组织提取总RNA,通过RT-PCR扩增获得Em14-3-3的cDNA,将该基因定向克隆到大肠埃希菌-分枝杆菌穿梭表达载体pBCG的人结核分枝杆菌热休克蛋白(HSP)70启动子下游构建重... 目的构建和鉴定多房棘球绦虫重组BCG-Em14-3-3疫苗。方法超声粉碎泡球蚴组织提取总RNA,通过RT-PCR扩增获得Em14-3-3的cDNA,将该基因定向克隆到大肠埃希菌-分枝杆菌穿梭表达载体pBCG的人结核分枝杆菌热休克蛋白(HSP)70启动子下游构建重组质粒pBCG-Em14-3-3,用电穿孔法将该质粒导入BCG构建多房棘球绦虫重组BCG-Em14-3-3疫苗。将该疫苗接种到含12μg/ml HgCl2的罗氏培养基筛选培养3周。结果重组pBCG-Em14-3-3质粒经酶切证实构建成功,rBCG-Em14-3-3疫苗能在含12μg/ml HgCl2的罗氏培养基上生长繁殖。结论成功构建多房棘球绦虫重组BCG-Em14-3-3疫苗,为泡球蚴病的防治提供了一种新方法。 展开更多

关键词 多房棘球绦虫 重组bcg-em14-3-3疫苗 构建 鉴定

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多房棘球绦虫重组BCG-Em14-3-3疫苗免疫小鼠后脾T细胞亚群的动态观察 被引量：2

15

作者 李文桂 王鸿 朱佑明 《中国病原生物学杂志》 CSCD 2007年第5期347-349,共3页

目的动态观察多房棘球绦虫重组BCG-Em14-3-3疫苗免疫小鼠后脾T细胞亚群的变化。方法将疫苗采用鼻腔内接种方法免疫BALB/c鼠,在免疫后0、2、4、6、8、10、12、14、16和18周各剖杀4只小鼠,取脾,分离脾细胞,流式细胞仪检测脾CD4+和CD8+T淋... 目的动态观察多房棘球绦虫重组BCG-Em14-3-3疫苗免疫小鼠后脾T细胞亚群的变化。方法将疫苗采用鼻腔内接种方法免疫BALB/c鼠,在免疫后0、2、4、6、8、10、12、14、16和18周各剖杀4只小鼠,取脾,分离脾细胞,流式细胞仪检测脾CD4+和CD8+T淋巴细胞亚群的百分比,同时设PBS对照。结果疫苗接种组小鼠脾CD4+和CD8+T细胞亚群分别在免疫后2～12周和2～18周开始升高,分别在免疫后6和10周达最高水平,百分比分别为32.0%±1.6%和8.4%±0.8%。结论CD4+和CD8+T细胞亚群在多房棘球绦虫重组BCG-Em14-3-3疫苗诱导的小鼠抗Em原头节攻击感染的保护性免疫机制中起关键作用。 展开更多

关键词 多房棘球绦虫 重组bcg-em14-3-3疫苗 脾T细胞亚群

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多房棘球绦虫重组BCG-Em14-3-3疫苗免疫小鼠后脾细胞因子的动态观察 被引量：2

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作者 李文桂 王鸿 朱佑明 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期379-381,共3页

目的:动态观察多房棘球绦虫重组BCG-Em14-3-3疫苗免疫小鼠后脾细胞因子的变化。方法:将疫苗采用鼻腔内接种免疫BALB/C鼠,在免疫后0、2、4、6、8、10、12、14、16和18周各剖杀4只小鼠取脾,分离脾细胞,用EmAg或ConA刺激培养,收集脾细胞培... 目的:动态观察多房棘球绦虫重组BCG-Em14-3-3疫苗免疫小鼠后脾细胞因子的变化。方法:将疫苗采用鼻腔内接种免疫BALB/C鼠,在免疫后0、2、4、6、8、10、12、14、16和18周各剖杀4只小鼠取脾,分离脾细胞,用EmAg或ConA刺激培养,收集脾细胞培养上清液,用试剂盒检测脾细胞培养上清液的IL-2、IFN-γ、TNF-α和IL-4水平,同时设有PBS对照。结果:疫苗接种组的IL-2、IFN-γ、TNF-α和IL-4分别在免疫后4～8周、2～8周、2～8周和6～10周升高,分别在免疫后6、6、4～6和8周达最高水平。结论:多房棘球绦虫重组BCG-Em14-3-3疫苗在免疫早期(2～8周)即可诱导小鼠产生一个TH1型保护性免疫反应。 展开更多

关键词 多房棘球绦虫 重组bcg-em14-3-3疫苗 细胞因子

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多房棘球绦虫重组BCG-Em14-3-3疫苗诱导BALB/c小鼠的保护力观察 被引量：2

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作者 李文桂 王鸿 朱佑明 《中国病原生物学杂志》 CSCD 2008年第8期582-584,共3页

目的探讨多房棘球绦虫(Em)重组BCG-Em14-3-3疫苗免疫后对受攻击感染BALB/c小鼠的囊重和抗体及其亚类的影响。方法将5×106克隆形成单位(CFU)和5×105CFU疫苗分别采用皮下注射和鼻腔内接种免疫BALB/c鼠1次,免疫后8周每鼠用50个E... 目的探讨多房棘球绦虫(Em)重组BCG-Em14-3-3疫苗免疫后对受攻击感染BALB/c小鼠的囊重和抗体及其亚类的影响。方法将5×106克隆形成单位(CFU)和5×105CFU疫苗分别采用皮下注射和鼻腔内接种免疫BALB/c鼠1次,免疫后8周每鼠用50个Em原头节攻击感染,感染后18周剖杀小鼠,分离泡球蚴并称重,计算囊重抑制率;收集鼻腔内接种组鼠血清,测定IgG及其亚类和IgE水平。试验设有空载体、卡介苗(BCG)和磷酸盐缓冲液(PBS)对照组。结果疫苗皮下注射和鼻腔内接种组小鼠的囊重抑制率分别为82.35%和59.41%;疫苗鼻腔内接种组攻击后18周的鼠血清IgG、IgG2a、IgG2b和IgE水平均较接种前高(P<0.05或P<0.01),吸光度(A490)值分别为0.090±0.006、0.026±0.002、0.024±0.003和0.031±0.019,IgG1和IgG3水平低于接种前(P<0.05或P<0.01),A490值分别为0.042±0.011和0.156±0.004。结论多房棘球绦虫重组BCG-Em14-3-3疫苗可诱导小鼠产生较强的保护力,表现为血清IgG、IgG2a、IgG2b、IgE水平升高和棘球蚴生长受抑制。 展开更多

关键词 多房棘球绦虫 重组bcg-em14-3-3疫苗 保护力

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多房棘球绦虫重组BCG-Em14-3-3疫苗免疫和Em原头节攻击后诱导小鼠脾细胞亚群变化的研究 被引量：1

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作者 李文桂 王鸿 朱佑明 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第7期687-689,702,共4页

目的探讨多房棘球绦虫重组BCG-Em14-3-3疫苗免疫和Em原头节攻击后小鼠脾CD4+和CD8+T淋巴细胞亚群数量和比值的变化。方法将疫苗采用皮下注射和鼻腔内接种分别免疫BALB/c鼠,免疫后8w用多房棘球绦虫原头节进行攻击感染,感染后18w杀鼠取脾... 目的探讨多房棘球绦虫重组BCG-Em14-3-3疫苗免疫和Em原头节攻击后小鼠脾CD4+和CD8+T淋巴细胞亚群数量和比值的变化。方法将疫苗采用皮下注射和鼻腔内接种分别免疫BALB/c鼠,免疫后8w用多房棘球绦虫原头节进行攻击感染,感染后18w杀鼠取脾,分离脾细胞,流式细胞仪检测脾CD4+和CD8+T淋巴细胞亚群的百分比,同时设有空载体、BCG和PBS对照。结果疫苗接种组的脾CD4+T细胞亚群显著增加,CD8+T细胞亚群无明显变化,CD4+/CD8+亚群比值明显升高;鼻腔内接种组的CD4+和CD4+/CD8+亚群比值显著高于皮下注射组。结论CD4+T细胞亚群在多房棘球绦虫重组BCG-Em14-3-3疫苗诱导的小鼠抗Em原头节攻击感染的保护性免疫机制中起关键作用,疫苗鼻腔内接种是一种较好的免疫途径。 展开更多

关键词 多房棘球绦虫 重组bcg-em14—3—3疫苗 脾细胞亚群

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多房棘球绦虫重组BCG-Em14-3-3疫苗诱导小鼠脾细胞因子变化的研究

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作者 李文桂 王鸿 朱佑明 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2008年第1期9-12,共4页

目的:探讨多房棘球绦虫重组BCG-Em14-3-3疫苗免疫和Em原头节攻击后小鼠脾细胞因子的变化。方法:将疫苗采用皮下注射和鼻腔内接种分别免疫BALB/c鼠,免疫后8周用多房棘球绦虫原头节进行攻击感染,感染后18周杀鼠取脾,分离脾细胞,用EmAg或C... 目的:探讨多房棘球绦虫重组BCG-Em14-3-3疫苗免疫和Em原头节攻击后小鼠脾细胞因子的变化。方法:将疫苗采用皮下注射和鼻腔内接种分别免疫BALB/c鼠,免疫后8周用多房棘球绦虫原头节进行攻击感染,感染后18周杀鼠取脾,分离脾细胞,用EmAg或ConA刺激培养,收集脾细胞培养上清液,用试剂盒检测脾细胞培养上清液的IL-2I、FN-γ、TNF-α和IL-4水平,同时设有空载体、BCG和PBS对照。结果:疫苗接种组的IFN-γ和TNF-α水平升高,IL-4水平降低;鼻腔内接种组的TNF-α水平高于皮下注射组。结论:多房棘球绦虫重组BCG-Em14-3-3疫苗诱导小鼠产生一个TH1型反应,从而对抗Em原头节攻击感染。 展开更多

关键词 多房棘球绦虫 重组bcg-emi4-3-3疫苗 细胞因子

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多房棘球绦虫重组BCG-Em14-3-3疫苗不同接种途径诱导小鼠细胞因子的研究 被引量：2

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作者 李文桂 王鸿 朱佑明 《四川大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期130-132,共3页

目的探讨多房棘球绦虫重组BCG-Em14-3-3疫苗免疫和Em原头节攻击后小鼠脾细胞因子的变化。方法将疫苗通过皮下注射和鼻腔内接种分别免疫BALB/c鼠,免疫后8周用多房棘球绦虫原头节进行攻击感染,感染后18周杀鼠取脾,分离脾细胞,用EmAg或Con... 目的探讨多房棘球绦虫重组BCG-Em14-3-3疫苗免疫和Em原头节攻击后小鼠脾细胞因子的变化。方法将疫苗通过皮下注射和鼻腔内接种分别免疫BALB/c鼠,免疫后8周用多房棘球绦虫原头节进行攻击感染,感染后18周杀鼠取脾,分离脾细胞,用EmAg或ConA刺激培养,收集脾细胞培养上清液,用试剂盒检测脾细胞培养上清液的IL-2、IFN-γ、TNF-α和IL-4水平,同时设有PBS对照。结果疫苗接种组的IFN-γ和TNF-α水平升高,IL-4水平降低;鼻腔内接种组的TNF-α水平高于皮下注射组。结论多房棘球绦虫重组BCG-Em14-3-3疫苗诱导小鼠产生一个TH1型反应,从而对抗Em原头节攻击感染;疫苗鼻腔内接种是一种较好的免疫途径。 展开更多

关键词 多房棘球绦虫 重组bcg—em14—3—3 疫苗 细胞因子

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