昆虫气味受体的研究方法与进展 被引量：13

1

作者 白鹏华 王冰 +1 位作者 张仙红 王桂荣 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期364-385,共22页

昆虫气味受体(odorant receptors,ORs)在外周嗅觉系统识别气味信号过程中起着关键作用,参与昆虫取食、交配和产卵等重要生命活动过程。随着测序技术飞速发展以及生物信息学研究的深入,昆虫气味受体基因实现了大规模鉴定。本文详述了昆... 昆虫气味受体(odorant receptors,ORs)在外周嗅觉系统识别气味信号过程中起着关键作用,参与昆虫取食、交配和产卵等重要生命活动过程。随着测序技术飞速发展以及生物信息学研究的深入,昆虫气味受体基因实现了大规模鉴定。本文详述了昆虫气味受体基因的研究方法及其原理和优缺点,归纳总结了自2015年以来已发表文章中采用不同分析方法进行ORs鉴定和功能研究的数量和比例,列举了重要害虫气味受体的研究进展。2015-2019年利用基因组和转录组测序技术分别鉴定了2543和5111个OR基因。基因表达和蛋白定位研究有助于分析OR基因在不同组织以及不同发育阶段的表达特异性,荧光原位杂交和免疫组织化学方法常用于分析细胞和组织定位;半定量反转录PCR(semi-quantitative reverse transcription PCR,RT-PCR)技术和实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)技术常用于研究OR基因的时空表达模式。利用冷冻电镜技术解析昆虫OR蛋白的超微晶体结构,以明确OR关键氨基酸残基与配体化合物互作规律。ORs功能研究手段不断丰富,体外异源表达系统在2015-2019年间的占比为75.76%,以爪蟾卵母细胞Xenopus oocytes系统结合双电极电压钳技术(two-electrode voltage clamp,TEVC)为主(占比43.94%),辅以转基因果蝇异源表达系统结合单感器记录技术以及细胞系异源表达ORs结合钙离子成像技术;体内功能研究方法包括RNA干扰(RNAi)技术和CRISPR/Cas9基因编辑技术,后者在ORs功能研究中取得了突破性进展并具有广泛的应用前景。最后本文对今后的研究方向提出了以下建议:(1)开展更多重大害虫及天敌昆虫嗅觉识别机制研究;(2)阐明昆虫性信息素和寄主植物挥发物协同作用的内在机理;(3)解析气味受体蛋白超微晶体结构并揭示ORs与气味分子特异性识别机制;(4)基于RNAi技术开发新型昆虫行为调节剂。 展开更多

关键词 气味受体 基因鉴定 表达定位 双电极电压钳 单感器记录 rna干扰 基因编辑技术

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青光眼滤过泡瘢痕化临床药物治疗的基础研究 被引量：13

2

作者 骆玮 李静敏 《临床眼科杂志》 2010年第2期184-186,共3页

青光眼滤过手术是目前治疗青光眼的主要方式之一,而青光眼滤过泡术后瘢痕化是术后眼压失控、手术失败的主要原因。近年来,随着生物化学、分子生物学等学科的发展,青光眼术后抗瘢痕化的方法有了很大的进展,由以往单纯的药物治疗、细胞因... 青光眼滤过手术是目前治疗青光眼的主要方式之一,而青光眼滤过泡术后瘢痕化是术后眼压失控、手术失败的主要原因。近年来,随着生物化学、分子生物学等学科的发展,青光眼术后抗瘢痕化的方法有了很大的进展,由以往单纯的药物治疗、细胞因子治疗发展为多种治疗方法方式相结合,为抗青光眼术后瘢痕化提供了更广阔的空间及前景。 展开更多

关键词 青光眼 滤过手术 滤过泡 瘢痕 细胞因子 基因治疗 rna干扰技术

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RNA干扰技术的研究进展 被引量：10

3

作者 张鑫 郝玉琴 《中国麻风皮肤病杂志》 2016年第2期119-122,共4页

RNA干扰技术具有高特异性、高效性等显著优势,近年在医学领域广泛应用,包括基因组研究、病毒性疾病治疗、肿瘤治疗、自身免疫性疾病治疗及新药开发等。本文就RNAi技术的研究现状作一综述。

关键词 rna干扰技术 医学应用前景

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百合无症病毒CP基因的克隆及其RNAi载体的构建 被引量：9

4

作者 徐品三 尹雅蕾 李玉花 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期885-890,共6页

以感染百合无症病毒(LSV)的百合叶片总RNA为模板,利用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增出了876bp的LSV CP基因,经Blast比对发现该片段与GenBank上发表的LSVCP基因序列高度同源,同源率98%,由该序列推导出的氨基酸序列相似性达到98%。应... 以感染百合无症病毒(LSV)的百合叶片总RNA为模板,利用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增出了876bp的LSV CP基因,经Blast比对发现该片段与GenBank上发表的LSVCP基因序列高度同源,同源率98%,由该序列推导出的氨基酸序列相似性达到98%。应用Gateway技术将扩增的片段通过BP反应连接到入门载体pDONR201,并进行序列测定,再通过LR反应将目的片段插入到RNAi植物表达载体pH7GWIWG2(Ⅱ),成功构建了适合农杆菌介导的百合转化的RNAi载体。 展开更多

关键词 百合 无症病毒 CP基因 克隆载体 rna干扰 GATEWAY技术

原文传递

siRNA抑制HMGA1基因表达对甲状腺乳头状癌K1细胞增殖的影响 被引量：6

5

作者 周大新 周锐 +8 位作者 李德群 董慧明 张晖 朱金海 马小开 陈春春 马桂凯 陈海龙 王志军 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2016年第6期783-786,共4页

目的研究HMGA1-siRNA基因对甲状腺乳头状癌K1细胞增殖的影响。方法 HMGA1-siRNA组转染HMGA1的小干扰RNA(siRNA);阴性对照组转染HMGA1的无关序列,并转染甲状腺乳头状癌K1细胞。采用CCK-8法检测转染HMGA1-siRNA基因后对K1细胞增殖的影响;R... 目的研究HMGA1-siRNA基因对甲状腺乳头状癌K1细胞增殖的影响。方法 HMGA1-siRNA组转染HMGA1的小干扰RNA(siRNA);阴性对照组转染HMGA1的无关序列,并转染甲状腺乳头状癌K1细胞。采用CCK-8法检测转染HMGA1-siRNA基因后对K1细胞增殖的影响;RT-PCR法检测正常组、HMGA1-siRNA组和阴性对照组的HMGA1-mRNA表达;Western blot法检测三组的HMGA1蛋白表达;Transwell侵袭实验检测三组HMGA1-siRNA基因转染后K1细胞的侵袭能力。结果 HMGA1-siRNA基因对K1细胞的抑制增殖作用明显,呈现时间-剂量依赖关系;HMGA1-siRNA基因在K1细胞中mRNA和蛋白的表达显著低于正常组和阴性对照组;HMGA1-siRNA组K1细胞侵袭能力显著低于正常组和阴性对照组。结论 siRNA可以沉默HMGA1基因,减缓甲状腺乳头状癌K1细胞增殖。 展开更多

关键词 HMGA1-sirna基因 甲状腺乳头状癌 K1细胞 干扰技术rna

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三七中由RNAi介导的CAS基因沉默对三七皂苷含量的影响 被引量：6

6

作者 孙颖 葛锋 +1 位作者 刘迪秋 饶健 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期80-85,共6页

三七总皂苷为三七主要的药用活性成分,但因其产量较低,使其药用价值很难得到推广。三七皂苷和甾醇分别经达玛烯二醇合酶(DS)和环阿屯醇合酶(CAS)的催化共同的前体物质2,3-氧化鲨烯生成。利用Gateway技术建立了CAS基因的RNA干扰(RNAi)表... 三七总皂苷为三七主要的药用活性成分,但因其产量较低,使其药用价值很难得到推广。三七皂苷和甾醇分别经达玛烯二醇合酶(DS)和环阿屯醇合酶(CAS)的催化共同的前体物质2,3-氧化鲨烯生成。利用Gateway技术建立了CAS基因的RNA干扰(RNAi)表达载体,并利用农杆菌介导法将其转移并整合至三七基因组中,由此方法抑制CAS的表达,阻断植物甾醇的合成,间接增加三七皂苷的产量。 展开更多

关键词 愈伤组织 三七总皂苷 环阿屯醇合酶 rna干扰 Hellsgate 2 GATEWAY技术

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RNA干扰及其在白血病多药耐药方面的研究进展 被引量：5

7

作者 冯敏华 顾静文 《肿瘤研究与临床》 CAS 2006年第3期212-213,共2页

白血病化疗失败的主要原因是白血病细胞的多药耐药,这是困扰临床肿瘤化疗的难题之一。RNAi是新近发展起来的一种全新的基因治疗手段。与常用的反义RNA技术等其他基因方法相比,具有经济、高效、高度特异性、操作简便、快速等优点。该技... 白血病化疗失败的主要原因是白血病细胞的多药耐药,这是困扰临床肿瘤化疗的难题之一。RNAi是新近发展起来的一种全新的基因治疗手段。与常用的反义RNA技术等其他基因方法相比,具有经济、高效、高度特异性、操作简便、快速等优点。该技术为白血病多药耐药的基础和临床研究开辟了新思路,也为新的分子诊断和分子治疗提供可能。 展开更多

关键词 rna干扰 白血病 多药耐药

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RNA干扰技术在胰腺癌基因治疗中的应用 被引量：2

8

作者 王唯一 毛振彪 黄介飞 《国际消化病杂志》 CAS 2007年第4期284-286,共3页

RNA干扰(RNAi)是双链RNA(dsRNA)介导的、由特异性引起的转录后基因沉默现象。RNA干扰技术作为基因沉默的有效手段,在肿瘤治疗方面显示出良好的前景。现就RNA干扰的机制、双链RNA的设计、小干扰RNA(siRNA)的制备方法和RNA干扰技术在胰腺... RNA干扰(RNAi)是双链RNA(dsRNA)介导的、由特异性引起的转录后基因沉默现象。RNA干扰技术作为基因沉默的有效手段,在肿瘤治疗方面显示出良好的前景。现就RNA干扰的机制、双链RNA的设计、小干扰RNA(siRNA)的制备方法和RNA干扰技术在胰腺癌治疗研究中的应用进展作一综述。 展开更多

关键词 胰腺癌 rna干扰技术 基因治疗

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应用现代生物技术防治番木瓜RNA病毒研究进展 被引量：4

9

作者 赵辉 贺萍萍 +2 位作者 郭静远 孔华 郭安平 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2017年第11期4590-4599,共10页

植物病毒几乎都是RNA病毒,所占比例达93.9%,以番木瓜环斑病毒(papaya ringspot virus,PRSV)和番木瓜畸叶嵌纹病毒(papaya leaf-distortion mosaic virus,PLDMV)为代表的RNA病毒是番木瓜生产上的最大限制因子,不抗病的品种几乎绝产。在... 植物病毒几乎都是RNA病毒,所占比例达93.9%,以番木瓜环斑病毒(papaya ringspot virus,PRSV)和番木瓜畸叶嵌纹病毒(papaya leaf-distortion mosaic virus,PLDMV)为代表的RNA病毒是番木瓜生产上的最大限制因子,不抗病的品种几乎绝产。在物理和化学防治措施效果不佳与抗性品种缺乏的情况下,现代生物技术方法被引入番木瓜的防治工作,并取得可喜的成绩。迄今为止,被实际应用的番木瓜抗病毒基因都是来自其病毒本身的基因,这类转基因番木瓜的抗病行为主要是由RNA所诱导的后转录基因沉默(RNAmediated post-transcriptional gene silencing,PTGS)所致,亦即RNA干扰。本研究综述了现代生物技术在防治番木瓜RNA病毒上的主要成果和问题,并展望了利用最新CRISPR技术防治番木瓜RNA病毒的策略。 展开更多

关键词 番木瓜 rna病毒 番木瓜环斑病毒 番木瓜畸叶嵌纹病毒 rna干扰 交叉保护 CRISPR基因编辑技术 转基因技术

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载脂蛋白B在肝细胞癌发生发展中的作用及机制研究

10

作者 刘媛 倪红妙 田华华 《浙江创伤外科》 2023年第7期1202-1206,共5页

目的观察载脂蛋白B(APOB)对肝细胞癌的增殖、迁移的影响及其相关作用机制研究。方法应用RNA干扰技术下调了人肝癌细胞株HepG2中的APOB表达,作为siRNA-APOB组,设计无关序列作为siRNA-NC组。依次应用qPCR验证干扰并筛选出最佳序列;CCK-8... 目的观察载脂蛋白B(APOB)对肝细胞癌的增殖、迁移的影响及其相关作用机制研究。方法应用RNA干扰技术下调了人肝癌细胞株HepG2中的APOB表达,作为siRNA-APOB组,设计无关序列作为siRNA-NC组。依次应用qPCR验证干扰并筛选出最佳序列;CCK-8法及细胞划痕实验分别验证APOB对肝细胞癌增殖、迁移的影响;Western blot法检测干扰APOB后相关蛋白水平变化。结果qPCR验证siRNA-APOB抑制HepG2细胞中APOB表达成功。与siRNA-NC组比较,siRNA-APOB组细胞活力显著提高(P<0.01),即细胞增殖能力增强。与siRNA-NC组比较,siRNA-APOB组细胞愈合率显著提高(P<0.01),即迁移能力增强。与siRNA-NC组比较,siRNA-APOB组p38、LEF1、MITF、β-catenin蛋白表达水平均增加,其中LEF1、MITF、β-catenin蛋白表达水平增加具有统计学意义(P<0.05)。结论下调APOB表达可以促进HepG2细胞的增殖及迁移,还能够增加MITF、LEF1、β-catenin蛋白表达水平,其可能是通过促进Wnt/β-catenin/MITF/LEF1信号通路的激活实现。 展开更多

关键词 载脂蛋白B(APOB) 肝细胞癌 rna干扰技术 增殖 迁移 作用机制

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朱砂叶螨β-COP和Sro基因鉴定及其沉默致死效果 被引量：4

11

作者 敖已倩云 申光茂 +3 位作者 王梦瑶 刘家路 潘宇 何林 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第18期3529-3539,共11页

【目的】明确朱砂叶螨(Tetranychus cinnabarinus)β-COP和Sro两条基因分子生物学信息,并基于优化的RNAi体系评价它们的致死效应,为筛选适用于RNAi防控的靶基因打下基础。【方法】首先克隆目的基因的全长,并通过序列的同源比对、保守区... 【目的】明确朱砂叶螨(Tetranychus cinnabarinus)β-COP和Sro两条基因分子生物学信息,并基于优化的RNAi体系评价它们的致死效应,为筛选适用于RNAi防控的靶基因打下基础。【方法】首先克隆目的基因的全长,并通过序列的同源比对、保守区域及蛋白结构预测以及系统进化树的构建明确其分子生物学信息;其次通过减少ds RNA降解因素、并适时补充ds RNA等方法改进朱砂叶螨的RNAi体系,从而延长干扰时间。利用定量PCR技术检测特定时间点的沉默效率,评价优化RNAi体系后的沉默效果;最后在沉默目的基因β-COP和Sro后,检测朱砂叶螨在各特定时间点的死亡率,评价目的基因在RNAi下的致死效果,并观察相应的致死表型。【结果】β-COP开放阅读框长度为2 688 bp,编码895 aa,属于"WD40 superfamily"及"Coatomer_WDAD superfamily",包含了"WD 40"和"Coatomar_WDAD"的保守区域。Sro的开放阅读框长度为1 119 bp,编码372 aa,具有典型的短链脱氢酶所特有的两个特征,即与NADP+biding结合位点基序"TGxxx Gx"和"Yxxx K"及其上游的天冬氨酸(Asn)、丝氨酸(Ser)活性位点。优化后的RNAi体系可在96 h内能稳定保持50%左右的沉默效率,使用该方法干扰朱砂叶螨β-COP和Sro两条致死基因48 h后试验组与对照组的死亡率均有显著性差异,用β-COP的ds RNA片段干扰雌成螨108 h后,死亡率达57.4%;用Sro的ds RNA片段干扰若螨96 h后,死亡率达28.8%。死亡个体均具有明显的表型,β-COP试验组死亡表型为4对足蜷缩在体侧;Sro试验组则在静伏期死亡或在蜕皮过程中无法蜕皮而死亡。【结论】优化的朱砂叶螨RNAi技术有稳定持续的沉默效果。β-COP和Sro与RNAi技术相结合,验证了这两条目的基因的沉默可对朱砂叶螨产生一定的致死效应,表明此类基因与技术加成的模式极具开发和利用的潜力,为今后基因功能验证和筛选以及开发以RNAi技术为基础的朱砂叶螨防控方法提� 展开更多

关键词 朱砂叶螨 rna干扰技术 致死效应 综合绿色防控

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功能基因组技术在昆虫抗药性研究中的应用展望 被引量：3

12

作者 陈皓 彭威 韩宝瑜 《植物保护学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期223-233,共11页

目前化学防治仍是植物保护的重要手段,化学杀虫剂通过参与昆虫自然选择,诱导其产生可遗传的基因突变,从而导致昆虫抗药性的增加,近年来随着杀虫剂的广泛使用,抗药性已成为植物保护领域亟需解决的重大问题。利用分子生物学手段对由基因... 目前化学防治仍是植物保护的重要手段,化学杀虫剂通过参与昆虫自然选择,诱导其产生可遗传的基因突变,从而导致昆虫抗药性的增加,近年来随着杀虫剂的广泛使用,抗药性已成为植物保护领域亟需解决的重大问题。利用分子生物学手段对由基因变异引起的昆虫抗药性进行解析已成为可能,在现今大多数昆虫抗药性研究中,功能基因组技术已被广泛用于候选基因调控抗药性机制的研究。本文介绍了双元基因表达技术--GAL4/UAS技术、基因干扰技术--RNAi技术和基因编辑技术--CRISPR/Cas9技术这3种有助于阐明昆虫抗药性分子机制的功能基因组技术,综述了这3种功能基因组技术在近几年昆虫抗药性研究中的应用实例,讨论了其目前的发展状况及其优势和局限性,以期在完善的功能基因组技术支持下为昆虫抗药性研究取得更多突破性进展。 展开更多

关键词 昆虫抗药性 功能基因组技术 GAL4/UAS技术 rna干扰技术 CRISPR/Cas9技术

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利用Gateway技术构建黄瓜HPL基因的RNA干扰载体 被引量：3

13

作者 王聪颖 陈书霞 +5 位作者 陈巧 郝丽宁 孟焕文 万旭花 申晓青 程智慧 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期152-158,共7页

为探讨黄瓜脂氢过氧化物裂解酶基因(HPL)下调表达对黄瓜果实挥发性醛类物质合成的影响,设计1对特异引物,以黄瓜pDONR201-HPL质粒为模板,通过PCR扩增出323bp的片段。利用基于同源重组原理的Gateway技术,将扩增的片段通过BP反应连接到入... 为探讨黄瓜脂氢过氧化物裂解酶基因(HPL)下调表达对黄瓜果实挥发性醛类物质合成的影响,设计1对特异引物,以黄瓜pDONR201-HPL质粒为模板,通过PCR扩增出323bp的片段。利用基于同源重组原理的Gateway技术,将扩增的片段通过BP反应连接到入门载体pDONR201中。对扩增出的323bp的片段进行测序,测序结果显示该序列与原序列同源性为100%。在此基础上,通过LR反应将目的片段插入过表达的植物RNA干涉载体pHellsgate8,构建黄瓜HPL基因的RNAi表达载体pHellsgate8-HPLi,分别经限制性内切酶XhoⅠ、XbaⅠ酶切后获得323bp的片段,与预期结果一致。采用热击法将pHellsgate8-HPLi转化农杆菌GV3101,经菌液PCR扩增获得323bp的目的条带,表明RNAi表达载体pHellsgate8-HPLi已成功转入农杆菌中。 展开更多

关键词 黄瓜 HPL基因 rnai干扰 克隆载体 表达载体 GATEWAY技术

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基于RNAi的转基因作物研发进展 被引量：4

14

作者 张守路 饶力群 汪启明 《现代农业科技》 2018年第21期3-4,6,共3页

转基因技术作为现代生物技术的重要组成部分,在缓解资源匮乏、提高粮食产量、保护生态环境安全、拓展农业功能等方面做出巨大贡献。RNAi是迅速发展起来的一种新兴基因阻断技术,近年来,在作物防治病虫害和品质改良方面取得了显著成效,商... 转基因技术作为现代生物技术的重要组成部分,在缓解资源匮乏、提高粮食产量、保护生态环境安全、拓展农业功能等方面做出巨大贡献。RNAi是迅速发展起来的一种新兴基因阻断技术,近年来,在作物防治病虫害和品质改良方面取得了显著成效,商业化应用已成为现实。因此,基于RNAi的转基因作物研发现状越来越受到人们的关注。本文就已产业化的RNAi转基因产品、RNAi转基因植物的研究进展及对RNAi转基因作物安全评价研究展望进行综述。 展开更多

关键词 核酸干扰技术 转基因作物 基因沉默 安全评价

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靶向ADAM17基因siRNA对食管癌EC109细胞增殖及迁移能力的影响 被引量：2

15

作者 刘宏斌 朱燕 +2 位作者 杨其昌 施超 沈屹 《临床和实验医学杂志》 2019年第18期1930-1933,共4页

目的探讨靶向ADAM17基因的小干扰RNA(siRNA)对EC109食管癌细胞增殖及迁移能力的影响。方法将靶向人ADAM17基因的siRNA分别标记为si257,si258及si259三个序列,转染入EC-109人食管癌细胞;采用Realtime PCR法检测各组癌细胞ADAM17 mRNA的含... 目的探讨靶向ADAM17基因的小干扰RNA(siRNA)对EC109食管癌细胞增殖及迁移能力的影响。方法将靶向人ADAM17基因的siRNA分别标记为si257,si258及si259三个序列,转染入EC-109人食管癌细胞;采用Realtime PCR法检测各组癌细胞ADAM17 mRNA的含量;Cell Counting Kit-8(CCK8)实验用于检测ADAM17沉默后食管癌细胞EC109的细胞增殖能力的变化;Transwell技术检测siRNA干扰后EC109迁移能力的变化。结果三种序列均能够有效抑制EC109中ADAM17的表达,显示有效的基因沉默效果。si259对EC109的增殖能力具有显著抑制作用。未观察到si257对于EC109增殖的抑制作用。迁移实验24 h后,未观察到siRNA的干扰对于EC109迁移有任何影响。结论 siRNA沉默ADAM17基因能够对食管癌细胞增殖产生一定的影响,但未观察到siRNA的干扰对于食管癌细胞迁移的影响,提示ADMA17基因通过某种通道参与了食管癌细胞的增殖活动,并且在食管癌侵袭、转移的活动中可能需要体内外某种介质的信号传导。 展开更多

关键词 rna干扰技术 小干扰rna EC109 增殖 迁移

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青蒿素诱导非小细胞肺癌细胞凋亡及其可能的机制 被引量：3

16

作者 靳彩玲 赵树鹏 +3 位作者 张清琴 王颖 寇小格 路平 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期729-733,共5页

目的:研究青蒿素(Artemisinin)对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer cell,NSCLC)细胞(ASTC-a-1和A549细胞)凋亡的影响,并初步探讨其作用机制。方法:CCK-8法检测0~150μg/ml的青蒿素处理24 h和100μg/ml青蒿素处理0、6、12、24、4... 目的:研究青蒿素(Artemisinin)对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer cell,NSCLC)细胞(ASTC-a-1和A549细胞)凋亡的影响,并初步探讨其作用机制。方法:CCK-8法检测0~150μg/ml的青蒿素处理24 h和100μg/ml青蒿素处理0、6、12、24、48 h对ASTC-a-1和A549细胞活性的影响;激光共聚焦显微镜观察1μmol/L STS、100μg/ml青蒿素单独或联合5mmol/L活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)清除剂NAC(N-乙酰半胱氨酸)处理细胞24 h对细胞核形态的影响,并用流式细胞术检测青蒿素单独或联合NAC对细胞凋亡的影响;通过RNA干扰技术沉默Bax和Bak基因后,观察青蒿素对细胞活性的影响。结果:青蒿素能够以浓度和时间依赖的方式抑制ASTC-a-1和A549细胞的活性,IC50值约为100μg/ml;经NAC预处理后,青蒿素导致的细胞活性下降程度明显低于未经预处理的细胞,差异有统计学意义(均P<0.01)。STS、青蒿素单独或联合NAC均能引起ASTC-a-1和A549细胞核固缩及细胞凋亡。经NAC预处理后,青蒿素诱导的ASTC-a-1和A549细胞凋亡率分别为(20.4±2.1)%和(17.9±3.8)%,明显低于STS组[(48.2±2.6)%,(39.8±4.9)%]和细胞未经预处理组[(59.6±3.4)%,(50.7±3.8)%]青蒿素引起的凋亡率(均P<0.01)。青蒿素只能引起Bak沉默细胞活性的上升(P<0.01),而对Bax沉默细胞活性没有明显影响(P>0.05)。结论:青蒿素能诱导两种非小细胞肺癌细胞(ASTC-a-1和A549细胞)ROS介导的细胞凋亡,促凋亡因子Bak而不是Bax参与了凋亡过程。 展开更多

关键词 青蒿素 非小细胞肺癌 细胞凋亡 ROS rna基因干扰技术

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豌豆蚜可溶型海藻糖酶基因克隆及RNA干扰效应 被引量：2

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作者 许静静 常永梅 +2 位作者 任梦圆 董艳玲 李永强 《西南大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2022年第11期88-98,共11页

为了明确豌豆蚜可溶型海藻糖酶基因在基于RNA干扰技术的害虫防治中的应用潜力,该研究根据豌豆蚜基因组数据克隆获得了可溶型海藻糖酶基因(ApTre-1),通过在线软件对其氨基酸序列进行了分析,并利用实时荧光定量PCR技术分析了ApTre-1基因... 为了明确豌豆蚜可溶型海藻糖酶基因在基于RNA干扰技术的害虫防治中的应用潜力,该研究根据豌豆蚜基因组数据克隆获得了可溶型海藻糖酶基因(ApTre-1),通过在线软件对其氨基酸序列进行了分析,并利用实时荧光定量PCR技术分析了ApTre-1基因在豌豆蚜不同龄期的表达水平变化;设计合成了2种dsRNA片段(dsApTre-1-1和dsApTre-1-2),采用显微注射法测定了其对靶基因ApTre-1的RNA干扰效率;选取干扰效率较高的dsRNA片段与人工饲料混合后,进一步采用饲喂法测定其对豌豆蚜生长的影响和致死效应.研究结果表明:豌豆蚜ApTre-1基因的开放阅读框全长为1770 bp,编码589个氨基酸,在DNA水平上由9个外显子和8个内含子组成;ApTre-1蛋白的N端含有一段长为20 aa的信号肽序列,具有典型的昆虫海藻糖酶标签序列.荧光定量PCR检测结果表明:ApTre-1基因在豌豆蚜1龄若虫阶段的相对表达量最高.显微注射法测定结果表明:dsApTre-1-1对靶基因ApTre-1具有相对较高的干扰效率.进一步采用饲喂法测定结果表明:豌豆蚜取食dsApTre-1-1后,靶基因表达水平显著下降,豌豆蚜的生长也受到较为明显的抑制,但死亡率较低(17.5%). 展开更多

关键词 豌豆蚜 海藻糖酶基因 表达水平 rna干扰技术 害虫防治

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siRNA靶向沉默COX-2对宫颈癌细胞VEGF、EGFR表达的影响 被引量：3

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作者 陈杰 王莉 +1 位作者 王俊岭 王慧 《癌症进展》 2018年第8期1037-1041,共5页

目的探讨siRNA靶向沉默环氧合酶-2(COX-2)基因对宫颈癌HeLa细胞血管内皮生长因子(VEGF)和表皮生长因子受体(EGFR)表达的影响。方法以人宫颈癌HeLa细胞为研究对象,采用COX-2 siRNA转染HeLa细胞作为转染组,以未转染的HeLa细胞作为空白对照... 目的探讨siRNA靶向沉默环氧合酶-2(COX-2)基因对宫颈癌HeLa细胞血管内皮生长因子(VEGF)和表皮生长因子受体(EGFR)表达的影响。方法以人宫颈癌HeLa细胞为研究对象,采用COX-2 siRNA转染HeLa细胞作为转染组,以未转染的HeLa细胞作为空白对照组,以阴性对照siRNA转染HeLa细胞作为阴性对照组。逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测COX-2、VEGF、EGFR基因的表达水平,蛋白质印迹法(Western blot)检测COX-2、VEGF、EGFR蛋白的表达水平,MTT法检测细胞的增殖情况,流式细胞仪检测细胞的凋亡情况,Transwell小室检测细胞的迁移和侵袭能力。结果 RT-PCR结果显示,转染组的COX-2、VEGF、EGFR基因表达水平均低于空白对照组和阴性对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。Western blot结果显示,转染组的COX-2、VEGF、EGFR蛋白表达水平均低于空白对照组和阴性对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。MTT检测结果显示,转染组的细胞增殖抑制率高于空白对照组和阴性对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。流式细胞仪检测结果显示,转染组的细胞凋亡率高于空白对照组和阴性对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。Transwell小室检测结果显示,转染组的细胞穿透率低于空白对照组和阴性对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。结论siRNA靶向沉默COX-2基因能够抑制HeLa细胞中VEGF和EGFR的基因及蛋白表达水平,促进HeLa细胞凋亡,抑制HeLa细胞增殖,降低HeLa细胞的迁移及侵袭能力。 展开更多

关键词 宫颈癌 rna干扰技术 环氧合酶-2基因 血管内皮生长因子 表皮生长因子受体

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高羊茅FaSGR基因RNAi载体构建 被引量：3

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作者 文昭竹 尚丹 +1 位作者 龚梨霞 张志飞 《作物研究》 2016年第3期241-246,共6页

本实验利用Gateway技术构建了Ubiquitin启动子驱动的高羊茅Fa SGR基因的RNAi载体p ANDA-B-870,该载体具有潮霉素抗性,适合于单子叶植物遗传转化。通过电击法将p ANDA-B-870载体转入到根癌农杆菌EHA105感受态细胞中,验证转化成功。Fa SG... 本实验利用Gateway技术构建了Ubiquitin启动子驱动的高羊茅Fa SGR基因的RNAi载体p ANDA-B-870,该载体具有潮霉素抗性,适合于单子叶植物遗传转化。通过电击法将p ANDA-B-870载体转入到根癌农杆菌EHA105感受态细胞中,验证转化成功。Fa SGR基因RNAi载体的构建为进一步探讨Fa SGR基因功能及SGR滞绿基因在高羊茅遗传改良中的应用提供了技术支持。 展开更多

关键词 高羊茅 FaSGR基因 载体构建 rna干扰 GATEWAY技术

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RNA干扰沉默JAK／STAT与支气管哮喘的治疗进展 被引量：1

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作者 黄超群 熊瑛 《国际呼吸杂志》 2010年第23期1447-1450,共4页

RNA干扰是由双链RNA介导的序列特异性转录后的基因沉默现象，是生物界一种古老而进化上高度保守的基因表达调节机制。随着分子生物学理论与技术研究的不断深入，近几年利用RNA干扰技术特异性剔除或关闭特定基因表达而防治疾病成为医学... RNA干扰是由双链RNA介导的序列特异性转录后的基因沉默现象，是生物界一种古老而进化上高度保守的基因表达调节机制。随着分子生物学理论与技术研究的不断深入，近几年利用RNA干扰技术特异性剔除或关闭特定基因表达而防治疾病成为医学界研究的热点。JAK／STAT途径是细胞因子信号转导的重要途径，许多细胞凶子及趋化因子，通过JAK／STAT途径转导信号，在支气管哮喘气道慢性炎症中发挥作用。利用RNA干扰技术沉默STAT基因表达，阻止气道变应性炎症反应，对防治支气管哮喘的发生发展具有重要的临床意义。 展开更多

关键词 rna干扰 rna干扰技术 信号转导及转录激活因子 支气管哮喘

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