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基于CyclinD1/CDK4/E2F1信号通路与氧化应激探讨艾灸治未病延缓大鼠子宫组织衰老的机制 被引量:6
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作者 段浩茹 欧阳夏荔 +6 位作者 金琪 罗雪 韩丽 赵百孝 赵思雨 张高钰 王中钰 《针灸临床杂志》 2021年第9期59-63,共5页
目的:探讨艾灸“关元”穴对衰老进程中大鼠子宫组织细胞周期相关蛋白CyclinD1、CDK4、E2F1、SOD和CAT含量的影响,进一步探究艾灸延缓子宫衰老的机制。方法:选取SPF级12月龄Wistar雌性大鼠14只,随机分为对照组与艾灸组,SPF级3月龄Wistar... 目的:探讨艾灸“关元”穴对衰老进程中大鼠子宫组织细胞周期相关蛋白CyclinD1、CDK4、E2F1、SOD和CAT含量的影响,进一步探究艾灸延缓子宫衰老的机制。方法:选取SPF级12月龄Wistar雌性大鼠14只,随机分为对照组与艾灸组,SPF级3月龄Wistar雌性大鼠7只作为青年组。其中艾灸组大鼠对“关元”穴进行20 min温和灸刺激,每日1次,连续治疗40 d;对照组和青年组大鼠进行同样的抓取与固定。实验结束后取大鼠子宫组织,以酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测细胞周期相关蛋白CyclinD1、CDK4、E2F1、SOD和CAT含量。结果:与青年组比较,对照组大鼠子宫组织中SOD、CAT、CyclinD1、CDK4和E2F1含量降低,差异具有统计学意义(P<0.05);而与对照组比较,艾灸组上述蛋白含量明显上升,差异具有统计学意义(P<0.05);各组大鼠子宫组织中CyclinD1含量与SOD、CAT含量均无相关性(P>0.05)。结论:艾灸“关元”穴可上调衰老进程中大鼠子宫组织中SOD、CAT含量,提高其抗氧化能力;可调节子宫组织细胞周期相关蛋白CyclinD1、CDK4的表达,促进E2F1的释放,使细胞加速通过G1期,进而对抗细胞衰老。艾灸的抗衰老作用可能是通过以上两条途径分别进行的。 展开更多
关键词 艾灸 细胞周期相关蛋白 抗衰老 抗氧化
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胃癌高表达转录本1对胃癌细胞株AGS增殖、周期的影响及其机制 被引量:4
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作者 万颖 严芝强 +4 位作者 韦四喜 夏英 刘娟娟 周春欢 黄海 《山东医药》 CAS 2018年第11期18-21,共4页
目的观察胃癌高表达转录本1(GHET1)对胃癌细胞株AGS增殖、周期的影响,并探讨其机制。方法将干扰序列si-GHET1、阴性对照序列si-NC、空白对照序列转染进AGS细胞中(分别计为干扰组、阴性组、空白组),采用real-time PCR法检测各组细胞GHET1... 目的观察胃癌高表达转录本1(GHET1)对胃癌细胞株AGS增殖、周期的影响,并探讨其机制。方法将干扰序列si-GHET1、阴性对照序列si-NC、空白对照序列转染进AGS细胞中(分别计为干扰组、阴性组、空白组),采用real-time PCR法检测各组细胞GHET1,CCK-8法检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞周期,Western blotting法检测细胞周期相关蛋白。结果干扰组、阴性组、空白组GHET1相对表达量分别为0.42±0.06、1、1.15±0.19,干扰组与其余两组比较,P均<0.05;48 h细胞OD450值分别为0.57±0.04、0.93±0.05、1.03±0.06,72 h细胞OD450值分别为0.69±0.10、1.54±0.08、1.58±0.14,干扰组与其余两组比较,P均<0.05;G0/G1期细胞比例分别为62.01%±4.56%、47.03%±3.36%、44.65%±3.44%,S期细胞比例分别为20.34%±3.29%、32.25%±1.78%、32.96%±2.58%,干扰组与其余两组比较,P均<0.05;CDK2相对表达量分别为0.60±0.08、0.81±0.07、0.81±0.02,CDK4相对表达量分别为0.57±0.03、0.89±0.08、0.87±0.06,CDK6相对表达量分别为0.62±0.09、0.86±0.07、0.92±0.07,Cyclin D相对表达量分别为0.58±0.03、0.74±0.02、0.70±0.04,Cyclin E相对表达量分别为0.33±0.03、0.39±0.01、0.39±0.01,干扰组与其余两组比较,P均<0.05。结论 GHET1可促进AGS细胞增殖,缩短细胞周期,其机制可能通过上调细胞周期相关蛋白表达来实现。 展开更多
关键词 胃肿瘤 胃癌 长链非编码RNA 胃癌高表达转录本1 细胞增殖 细胞周期 细胞周期相关蛋白
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BDNF对诱导分化的SH-SY5Y细胞G_1期相关蛋白表达的影响 被引量:3
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作者 李学礼 李艳娜 +4 位作者 吕立夏 高景霞 何露 李静琪 徐磊 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期71-76,共6页
研究不同浓度的脑源性神经营养因子(BDNF)在体外诱导SH-SY5Y细胞分化时对G1期细胞周期相关蛋白表达的影响。采用全反式维甲酸(RA)和低(1ng/ml)、中(10ng/ml)、高(100ng/ml)三种不同浓度BDNF在无血清培养液中相继诱导SH-SY5Y细胞分化,形... 研究不同浓度的脑源性神经营养因子(BDNF)在体外诱导SH-SY5Y细胞分化时对G1期细胞周期相关蛋白表达的影响。采用全反式维甲酸(RA)和低(1ng/ml)、中(10ng/ml)、高(100ng/ml)三种不同浓度BDNF在无血清培养液中相继诱导SH-SY5Y细胞分化,形成均一的具有神经元形态的细胞。以实时定量RT-PCR法检测G1期细胞周期相关蛋白(包括cdk4,cdk6,cyclin D1,Cyclin E,p16和p27)的mRNA水平的表达变化。结果显示:不同浓度的BDNF处理后,Cdk4mRNA的表达水平均低于未分化细胞组(P<0.05);Cdk6和Cyclin D1的mRNA表达水平与RA组比较显著降低(P<0.05),Cyclin E和p16的mRNA表达水平仅在高浓度BDNF处理后明显降低,与未分化组比较P<0.05,p27的mRNA表达水平无显著变化。以上结果提示BD-NF在诱导SH-SY5Y细胞分化的同时无意促使其再进入细胞周期。同时,用RA预处理5d后改换BDNF培养SH-SY5Y细胞,可使细胞展现出成熟神经细胞的形态,是体外研究某些脑疾病的理想细胞模型。 展开更多
关键词 BDNF 细胞周期相关蛋白 细胞分化
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Effects of brain-derived neurotrophic factor on induced differentiation of SH-SY5Y cells in vitro
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作者 Jiao Li Jingqi Li Xueli Li Lixia Lu Lei Xu 《Neural Regeneration Research》 SCIE CAS CSCD 2009年第12期1062-1067,共6页
BACKGROUND: Previous studies have demonstrated that brain-derived neurotrophic factor (BDNF) promotes neural differentiation. However, the mechanisms involved in cell cycle-related protein regulation, which highly ... BACKGROUND: Previous studies have demonstrated that brain-derived neurotrophic factor (BDNF) promotes neural differentiation. However, the mechanisms involved in cell cycle-related protein regulation, which highly correlates to neural proliferation and apoptosis, remain poorly understood. OBJECTIVE: To investigate the effects of various concentrations of BDNF on cycle-related protein mRNA expression in induce-differentiated SH-SY5Y cells in vitro prior to and following G2 phase, and to analyze the neuroprotective effects of BDNF. DESIGN, TIME AND SETTING: A comparison, observational study, based on cell biology, was performed at the Department of Biochemistry, Medical College of Tongji University, from March 2005 to October 2006. MATERIALS: SH-SY5Y cells were provided by Shanghai Institute of Cytology, Chinese Academy of Science; BDNF by Alomone Labs, Israel; all-trans retinoic acid (ATRA) by Sigma-Aldrich, USA. METHODS: SH-SY5Y cells were randomly divided into three groups: blank control [cells were treated in Insulin-Transferrin-Selenium (ITS) solution for 7 days], ATRA (cells were treated with ITS solution containing 10 μmol/L ATRA for 7 days), and BDNF (cells were treated identical to the ATRA group for 5 days, and then respectively treated in ITS solution containing 1, 10, and 100 μg/L BDNF for 2 days). The experiment was repeated three times for each group. MAIN OUTCOME MEASURES: mRNA expression levels of cyclin A1, B1, B2, cyclin-dependent kinase 1, and 5 were detected using quantitative real-time RT-PCR; percentage of cells in G1, S, and G2 phases were detected using fluorescence-activated cell sorting. RESULTS: mRNA expression levels of cyclin A1 in the high-dose BDNF group was significantly less than the ATRA group (P 〈 0.05).mRNA expression levels of cyclin B1 was significantly less in the different BDNF concentration groups compared with the control and ATRA groups (P 〈 0.05 or P 〈 0.01). mRNA expression levels of cyclin B2 and cyclin-dependent kinas 展开更多
关键词 brain-derived neurotrophic factor induced differentiation cell cycle-related protein quantitative real-time RT-PCR fluorescence-activated cell sorting SH-SY5Y cell line
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脑源性神经营养因子在体外诱导SH-SY5Y细胞分化过程中的作用 被引量:1
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作者 李学礼 吕立夏 +3 位作者 张红娟 高景霞 李静琪 徐磊 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期687-691,共5页
目的探讨不同浓度的脑源性神经营养因子(BDNF)在体外诱导SH-SY5Y细胞分化时,对G2期及其前后细胞周期相关蛋白mRNA表达的影响。方法采用全反式维甲酸(RA)和低(1μg/L)、中(10μg/L)、高(100μg/L)3种不同浓度BDNF在无血清培养液中相继诱... 目的探讨不同浓度的脑源性神经营养因子(BDNF)在体外诱导SH-SY5Y细胞分化时,对G2期及其前后细胞周期相关蛋白mRNA表达的影响。方法采用全反式维甲酸(RA)和低(1μg/L)、中(10μg/L)、高(100μg/L)3种不同浓度BDNF在无血清培养液中相继诱导SH-SY5Y细胞分化,形成均一的具有神经元形态的细胞。以一步法实时定量RT-PCR检测其G2期细胞周期相关蛋白mRNA的表达,荧光激活细胞分类术(FACS)检测各组细胞时相。结果在各浓度BDNF组中周期蛋白B1(cyclinB1)的mRNA含量与对照组及RA组比较均明显降低(P<0.05);仅高浓度组cyclinB2和周期蛋白依赖性激酶1(Cdk1)的mRNA含量显著降低(P<0.05),;低浓度和中浓度BDNF组Cdk5 mRNA含量均高于RA组(P<0.05)。BDNF各浓度组处于G1期的细胞百分率均显著高于RA和对照组(P<0.01),而处于S期的细胞百分率均显著低于对照组(P<0.01),且低浓度及高浓度组同时低于对照组(P<0.01)。结论提示BDNF在有效促进SH-SY5Y细胞进一步分化的同时,没有引起G2期及其前后细胞周期相关蛋白mRNA表达的异常升高,BDNF无诱导细胞凋亡的危险,可能有减缓AD进程的作用,并且呈剂量依赖性。 展开更多
关键词 脑源性神经营养因子 细胞周期相关蛋白 诱导分化 实时定量RT-PCR 荧光激活细胞分类术 SH—SY5Y细胞系
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阿霉素对大肠癌SW480细胞周期及周期相关蛋白表达的影响
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作者 孟永亮 孙彦 《山东医药》 CAS 2014年第20期9-11,16,共4页
目的探讨阿霉素对大肠癌SW480细胞周期及周期相关蛋白表达的影响。方法体外培养SW480细胞,随机分为A(空白对照组)、B、C、D、E组,阿霉素浓度分别为0、2.5、5、10、20μg/mL。采用MTT法测定各组细胞培养12、24、48、72 h后的细胞生长抑制... 目的探讨阿霉素对大肠癌SW480细胞周期及周期相关蛋白表达的影响。方法体外培养SW480细胞,随机分为A(空白对照组)、B、C、D、E组,阿霉素浓度分别为0、2.5、5、10、20μg/mL。采用MTT法测定各组细胞培养12、24、48、72 h后的细胞生长抑制率;流式细胞术分析各组细胞培养48 h后细胞周期;Western blot法测定各组细胞培养48 h后SW480细胞周期相关蛋白Cyclin B1、Cyclin A表达水平。结果阿霉素抑制SW480细胞增殖具有浓度和时间依赖性。不同浓度阿霉素作用于SW480细胞48 h后,D、E组G0/G1期细胞百分率低于A、B、C组,SubG1期细胞百分率、凋亡指数(AI)高于A、B、C组,P均<0.05;与A组比较,B、C组Cyclin B1表达量增高(P均<0.05),D、E组表达量下降(P均<0.05);随着阿霉素浓度增加,Cyclin A的表达量逐渐降低(P<0.05)。结论阿霉素可将SW480细胞周期阻滞于G0/G1期,影响细胞周期及Cyclin B1、Cyclin A的表达。 展开更多
关键词 大肠肿瘤 阿霉素 SW480细胞 细胞周期 周期相关蛋白
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过表达miR-1182抑制脑胶质瘤细胞恶性表型的机制研究
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作者 翟志浩 罗斌 +3 位作者 练晓文 陈建良 钟远强 游恒星 《中华神经医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第10期973-980,共8页
目的探讨微小RNA(miR)-1182在脑胶质瘤中的表达情况及其过表达对脑胶质瘤细胞恶性表型的调控作用及机制。方法(1)从中国脑胶质瘤基因组图谱计划(CGGA)官方网站中下载198例脑胶质瘤标本的miR-1182表达水平数据及患者的生存期信息,比较不... 目的探讨微小RNA(miR)-1182在脑胶质瘤中的表达情况及其过表达对脑胶质瘤细胞恶性表型的调控作用及机制。方法(1)从中国脑胶质瘤基因组图谱计划(CGGA)官方网站中下载198例脑胶质瘤标本的miR-1182表达水平数据及患者的生存期信息,比较不同病理类型、不同WHO分级脑胶质瘤组织间miR-1182表达水平的差异,并采用Kaplan-Meier生存曲线分析miR-1182的表达水平与患者生存期的关系。(2)体外常规培养人脑胶质瘤细胞系A172、LN229、T98G、U87、U251及人正常星形胶质细胞系NHA,采用实时定量PCR(qPCR)法检测各组细胞中miR-1182的表达水平。(3)将U87、U251细胞分别分为miR-1182转染组与阴性序列转染组,分别转染miR-1182模拟物和miR-1182阴性序列,转染48 h后采用5-乙炔基-2'-去氧尿苷(EdU)染色检测2组细胞的增殖能力,流式细胞仪检测2组细胞的凋亡水平,Transwell实验检测2组细胞的迁移能力,Western blotting实验检测2组细胞中周期蛋白(c-Myc、c-JUN、CCND1、P21)及磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)、上皮-间充质转化(EMT)通路相关蛋白[PI3K、磷酸化(p)-PI3K、Akt、p-Akt、N-钙黏蛋白、β-连环蛋白、波形蛋白]的表达水平。结果(1)WHOⅢ、Ⅳ级脑胶质瘤组织中miR-1182的表达水平均明显低于WHOⅡ级,差异均有统计学意义(P<0.05)。miR-1182低表达脑胶质瘤患者的中位生存期[(701.00±11.14)d]明显短于miR-1182高表达患者[(1812.00±23.21)d],差异有统计学意义(P<0.05)。(2)与NHA细胞比较,A172、LN229、T98G、U87、U251细胞中miR-1182的表达水平均明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05),其中U87、U251细胞降低最明显。(3)与阴性序列转染组比较,miR-1182转染组U87、U251细胞的增殖能力明显减弱,细胞凋亡率明显升高,穿膜细胞数明显减少,c-Myc、c-JUN、CCND1蛋白的表达水平明显降低,P21蛋白的表达水平明显升高,PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt蛋白的表达水平明显降低,N 展开更多
关键词 神经胶质瘤 miR-1182 恶性表型 细胞周期蛋白 磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B通路 上皮-间充质转化通路
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CREPT在肾癌组织中的表达及其与预后的关系 被引量:6
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作者 刘军 曹庆飞 +6 位作者 叶雄俊 陈伟男 赵海岳 佟明 王银银 黄晓波 常智杰 《首都医科大学学报》 CAS 北大核心 2020年第4期552-557,共6页
目的探讨肾癌组织中肿瘤细胞周期相关蛋白(cell-cycle-related and expression-elevated protein in tumor,CREPT)的表达与临床病理特征和生存率的关系。方法纳入90例于2014至2016年间在北京大学人民医院接受了根治性肾切除术并经组织... 目的探讨肾癌组织中肿瘤细胞周期相关蛋白(cell-cycle-related and expression-elevated protein in tumor,CREPT)的表达与临床病理特征和生存率的关系。方法纳入90例于2014至2016年间在北京大学人民医院接受了根治性肾切除术并经组织学证实的肾癌患者,运用免疫组织化学方法检测这些患者的癌组织和癌旁组织中CREPT的表达,并结合临床病理资料分析CREPT表达水平与患者TNM分期和Fuhrman分级的关系。通过Kaplan-Meier生存分析及多因素COX回归分析CREPT表达与预后的关系。结果46.7%(42/90)的患者癌组织中CREPT表达为高水平,而在癌旁组织中所有患者CREPT表达均为低水平,组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。CREPT的表达水平与TNM分期(P=0.001)和Fuhrman分级(P<0.001)有关联,但与性别(P=0.149)、年龄(P=0.605)、肿瘤大小(P=0.673)和组织学类型(P=0.756)无关。截至2018年12月,有85例患者完成随访。Kaplan-Meier分析显示,CREPT高表达患者总生存时间和无瘤生存时间均低于CREPT低表达患者,差异有统计学意义(P<0.05)。多因素COX回归分析显示,患者总生存时间及无瘤生存时间与CREPT的表达水平有关(P<0.05)。结论CREPT在肾癌组织中呈高表达,表达水平与临床分期、分级以及患者预后密切相关。 展开更多
关键词 肾细胞癌 肿瘤细胞周期相关蛋白 预后
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CREPT对胶质瘤U251细胞增殖、侵袭和迁移的影响及机制 被引量:4
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作者 张刚 董新亚 史航宇 《中国临床神经外科杂志》 2020年第11期763-766,770,共5页
目的探讨肿瘤高表达细胞周期相关蛋白(CREPT)对胶质瘤U251细胞增殖、侵袭和迁移的影响及可能机制。方法体外培养人胶质瘤细胞株U373、U251、A172、U87-MG、SHG44,并构建过表达或沉默CREPT的U251细胞;免疫印迹法检测蛋白表达水平;CCK-8... 目的探讨肿瘤高表达细胞周期相关蛋白(CREPT)对胶质瘤U251细胞增殖、侵袭和迁移的影响及可能机制。方法体外培养人胶质瘤细胞株U373、U251、A172、U87-MG、SHG44,并构建过表达或沉默CREPT的U251细胞;免疫印迹法检测蛋白表达水平;CCK-8法检测细胞增殖能力;Transwell实验检测细胞侵袭能力;细胞划痕实验检测细胞迁移能力。结果U251细胞CREPT蛋白表达水平最高,SHG44细胞最低。沉默CREPT后,U251细胞增殖、侵袭和迁移能力明显下降(P<0.05),p-Wnt和p-β-catenin蛋白表达水平下降(P<0.05)。过表达CREPT后,U251细胞增殖、侵袭和迁移能力明显增强(P<0.05),p-Wnt和p-β-catenin蛋白水平明显升高(P<0.05)。Wnt/β-catenin通路抑制剂KYA1797K可逆转过表达CREPT对细胞增殖、侵袭和迁移的影响(P<0.05)。结论CREPT可能通过激活Wnt/β-catenin通路促进胶质瘤U251细胞的增殖、侵袭和迁移。 展开更多
关键词 胶质瘤 U251细胞 肿瘤高表达细胞周期相关蛋白 细胞增殖 细胞侵袭 细胞迁移
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CREPT在人脑胶质母细胞瘤组织中的表达及其与病人预后的关系 被引量:3
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作者 王睿健 张文超 尹涛 《中国临床神经外科杂志》 2021年第1期20-22,25,共4页
目的探讨人脑胶质母细胞瘤(GBM)组织肿瘤高表达细胞周期相关蛋白(CREPT)的表达水平及其与病人预后的关系。方法收集2010年1月至2011年1月手术切除的GBM组织104例和2018年1~12月颅脑损伤内减压术中切除的正常脑组织40例,采用免疫组织化... 目的探讨人脑胶质母细胞瘤(GBM)组织肿瘤高表达细胞周期相关蛋白(CREPT)的表达水平及其与病人预后的关系。方法收集2010年1月至2011年1月手术切除的GBM组织104例和2018年1~12月颅脑损伤内减压术中切除的正常脑组织40例,采用免疫组织化学染色法检测CREPT的表达,根据染色情况将GBM分为高表达组和低表达组。GBM病人术后随访截止时间为2019年4月,记录总生存期(OS)和无进展生存期(PFS)。采用多因素Cox比例回归风险模型分析GBM病人生存预后的影响因素。用Kaplan-Meier法绘制生存曲线,采用Log-rank检验。结果GBM组织CREPT高表达率(73.08%,76/104)明显高于正常脑组织(10.00%,4/40;P<0.05)。多因素Cox比例回归风险模型分析结果显示CREPT高表达是GBM病人OS和PFS较短的独立影响因素(P<0.05)。低表达组OS和PFS均明显高于高表达组(P<0.05)。结论人脑GBM组织CREPT呈高表达,与病人不良生存预后和肿瘤进展有关。 展开更多
关键词 胶质母细胞瘤 肿瘤高表达细胞周期相关蛋白 CREPT 预后 基因表达
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抗人CDC7单克隆抗体的制备与鉴定 被引量:1
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作者 李志广 张现伟 +3 位作者 蒋小梅 旷兴林 魏大鹏 章崇杰 《中国当代医药》 2012年第35期13-15,共3页
目的制备抗人CDC7蛋白的单克隆抗体并鉴定其生物学特性。方法以GST-CDC7为免疫原,免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞(SP2/0细胞)融合,经多次筛选及克隆化,建立可以稳定分泌抗人CDC7单克隆抗体的杂交瘤细胞株。用间接ELISA,West... 目的制备抗人CDC7蛋白的单克隆抗体并鉴定其生物学特性。方法以GST-CDC7为免疫原,免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞(SP2/0细胞)融合,经多次筛选及克隆化,建立可以稳定分泌抗人CDC7单克隆抗体的杂交瘤细胞株。用间接ELISA,WesternBlot,免疫细胞化学(ICC)对此抗体特性进行鉴定。结果筛选到1株能稳定分泌抗人CDC7的细胞株1F7D2C9。亚类鉴定为IgG2a,轻链为kappa链,ELISA法鉴定该抗体腹水效价为1:102400,抗体亲和常数为1.558×109L/mol,WesternBlotting分析表明,此抗体能特异识别细胞株的天然CDC7蛋白质。免疫细胞化学进一步显示CDC7分布于细胞核中。结论成功制备了抗人CDC7单克隆抗体,为研究CDC7与细胞癌变的关系建立了基础。 展开更多
关键词 细胞分裂周期蛋白激酶7 单克隆抗体 DNA复制 制备 鉴定
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姜黄素调节HL-60细胞周期蛋白表达的研究 被引量:5
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作者 陈文娟 陈燕 +2 位作者 吴裕丹 何静 李慧玉 《临床血液学杂志》 CAS 2001年第5期215-217,共3页
目的 :探讨姜黄素对 HL- 6 0细胞周期的影响。方法 :选取 HL- 6 0细胞系 ,作细胞培养 ,采用 SABC法测定分化抗原 CD1 1 a和 CD1 4 阳性率 ,用 TU NEL 法判定细胞凋亡 ,用 FCM法分析细胞周期 ,检测 p2 7kip1、p2 1waf1、cyclin D3及 p Rb... 目的 :探讨姜黄素对 HL- 6 0细胞周期的影响。方法 :选取 HL- 6 0细胞系 ,作细胞培养 ,采用 SABC法测定分化抗原 CD1 1 a和 CD1 4 阳性率 ,用 TU NEL 法判定细胞凋亡 ,用 FCM法分析细胞周期 ,检测 p2 7kip1、p2 1waf1、cyclin D3及 p Rb P-表达率。结果 :姜黄素呈时间及剂量依赖性抑制 HL- 6 0细胞增殖 ,用 5、10、2 5 μmol/ L 作用 18h,增殖抑制率为 4.7± 1.2 %、18.0± 2 .0 %和 37.5± 2 .4% ;2 4h后抑制率达 6 .3± 1.9%、2 5 .0± 2 .2 %和 43.8±2 .0 % ,可增加 p2 7kip1、p2 1waf1表达 ,降低 cyclin D3表达 ,使去磷酸化 p Rb(p Rb P- )表达量增高 ;用 10 μmol/ L 姜黄素作用 4d,p2 7kip1 、p2 1waf1 、p Rb P- 阳性率为 47.8± 3.6 %、42 .7± 2 .2 %和 2 3.5± 1.5 % ,FCM进一步发现姜黄素作用后 ,p2 7kip1 、cyclin D3荧光强度分别较对照组增高 7倍及降低 74.93%。细胞周期被阻滞于 G0 / G1 和 G2 / M期 ,进而走向凋亡 ,且此能力呈时间及剂量依赖性。结论 :姜黄素能干扰细胞周期进程 ,诱导 HL - 6 0细胞凋亡 ,其作用机制与上调 p2 7kip1 、p2 1waf1 及下调 Cyclin D3蛋白表达 ,增加 p Rb P- 表达水平 ,调控 G1 / S和 G2 / M期检测点功能有关。 展开更多
关键词 HL-60细胞 细胞分化 凋亡 细胞周期蛋白 姜黄素
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穿心莲内酯抑制肝癌细胞生长及其对细胞内周期调控相关蛋白的影响(英文) 被引量:7
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作者 沈凯凯 刘天瑜 +2 位作者 徐冲 季莉莉 王峥涛 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第9期973-979,共7页
本文主要探讨了穿心莲内酯在体外抑制肝癌细胞生长的作用及其机制。实验中采用MTT法检测穿心莲内酯(0~50μmol·L·1)对L-02、Hep3B和HepG2细胞存活率的影响,通过软琼脂克隆形成实验检测穿心莲内酯(0~30μmol·L·1)... 本文主要探讨了穿心莲内酯在体外抑制肝癌细胞生长的作用及其机制。实验中采用MTT法检测穿心莲内酯(0~50μmol·L·1)对L-02、Hep3B和HepG2细胞存活率的影响,通过软琼脂克隆形成实验检测穿心莲内酯(0~30μmol·L·1)与Hep3B和HepG2细胞孵育14d后对其克隆形成率的影响,通过流式细胞技术检测穿心莲内酯对Hep3B细胞周期的影响。同时采用蛋白印迹方法观察穿心莲内酯(50μmol·L·1)作用不同时间后对细胞周期相关蛋白如Cdc-2、磷酸化Cdc-2、Cyclin B和Cyclin D1表达的影响。MTT检测结果显示,穿心莲内酯能明显抑制肝癌细胞株(Hep3B和HepG2细胞)的生长并呈剂量依赖性关系,而对人正常肝细胞L-02无明显作用。同时,穿心莲内酯能够剂量依赖性地降低肝癌细胞株克隆形成率。流式细胞仪检测到穿心莲内酯(50μmol·L·1)作用Hep3B细胞后,G0-G1期细胞比例减少,G2-M期细胞增多,提示穿心莲内酯将细胞阻滞于G2-M期。蛋白印迹实验发现,穿心莲内酯(50μmol·L·1)作用Hep3B细胞不同时间后,细胞内周期调控相关蛋白Cdc-2、磷酸化Cdc-2、Cyclin B和Cyclin D1的表达下调。研究结果表明,穿心莲内酯特异性地剂量依赖性地抑制肝癌细胞生长,并诱导Hep3B细胞G2-M期阻滞,其机制可能与下调Cyclin D1和Cdc2/Cyclin B等周期相关蛋白有关。 展开更多
关键词 穿心莲内酯 肝癌细胞 克隆形成 细胞周期相关蛋白
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CCRK在肝细胞癌组织中的表达及其与HBx的关系 被引量:4
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作者 吴武佳 陈李影慧 +1 位作者 宋晨源 秦东春 《军事医学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期110-113,共4页
目的为了研究肝细胞癌的发病机制,探讨细胞周期相关激酶(CCRK)在肝细胞癌组织中的表达及意义,以及CCRK与乙肝病毒X蛋白(HBx)之间的关系。方法 RT-PCR法和Western印迹法分别从mRNA水平和蛋白质水平检测CCRK和HBx在肝癌组织、癌旁组织和... 目的为了研究肝细胞癌的发病机制,探讨细胞周期相关激酶(CCRK)在肝细胞癌组织中的表达及意义,以及CCRK与乙肝病毒X蛋白(HBx)之间的关系。方法 RT-PCR法和Western印迹法分别从mRNA水平和蛋白质水平检测CCRK和HBx在肝癌组织、癌旁组织和正常组织中的表达情况。结果肝癌组织中CCRK mRNA及蛋白水平均明显高于癌旁肝组织,差异具有统计学意义(P<0.05);CCRK的表达与肝癌患者的性别、年龄,HBsAg,肿瘤大小均无关,而与临床分期有关;CCRK与HBx没有相关性。结论 CCRK在肝癌组织中的表达水平高于癌旁组织,对肝细胞癌的发生发展具有促进作用,但是与HBx没有相关性。 展开更多
关键词 细胞周期相关激酶 肝细胞癌 乙肝病毒X蛋白
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微小RNA-363—3p对胃癌细胞增殖的影响及作用机制 被引量:2
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作者 林振吕 郑建涛 张琳 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期3038-3041,共4页
目的探讨miR-363-3p对胃癌细胞增殖的影响及其作用机制。方法通过反转录聚合酶链反应(RT—PCR)检测miR-363-3p在胃癌细胞株及正常胃黏膜上皮永生化细胞株中的表达;miR-363-3p类似物(mimics)及miR-363-3p阴性对照(NC)转染HGC-27细... 目的探讨miR-363-3p对胃癌细胞增殖的影响及其作用机制。方法通过反转录聚合酶链反应(RT—PCR)检测miR-363-3p在胃癌细胞株及正常胃黏膜上皮永生化细胞株中的表达;miR-363-3p类似物(mimics)及miR-363-3p阴性对照(NC)转染HGC-27细胞48h后,噻唑蓝(MTF)法及Hoechst法检测miR-363-3pmimics对胃癌细胞活力及凋亡的影响;流式细胞术检测miR-363-3pmimics对胃癌细胞周期的影响;Westernblot检测miR-363-3pmimics对胃癌细胞周期蛋白(CyclinD1)、CyclinA、C—myc,细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子p21及p27的表达。结果RT—PcR结果证实miR.363.3p在胃癌细胞株中的表达均低于正常胃黏膜上皮永生花细胞中的表达,且miR-363-3p在HGC-27细胞中的表达最低,因此选用HGC-27作为后续实验细胞株。与miR.363-3pNC组比较,miR-363-3pmimics能显著降低HGC-27细胞活力(1.00±0.10比0.62±0.06,P〈0.01),提高细胞凋广率[(9.04±2.17)%比(42.33±3.06)%,P〈0.01],并使细胞周期阻滞在G1期[(54.83±4.67)%比(64.52±4.34)%,P〈0.01],同时伴随着C—myc(0.62±0.06比0.30±0.03,P〈0.01),CyclinDI(0.50±0.04比0.14±0.02,P〈0.01)及CyclinA(0.48±0.00比0.10±0.01,P〈0.01)表达量的下调,p21(0.53±0.10比2.02±0.06,P〈0.01)及p27(0.32±0.04比1.36±0.03,P〈0.01)表达量的上调。结论miR-363-3p表达量提高后能显著诱导HGC-27胃癌细胞凋亡,使细胞周期阻滞在G1期,与调节细胞周期相关蛋白的表达量有关。 展开更多
关键词 微小RNA-363—3p 胃癌 增殖 细胞周期相关蛋白
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Nec-1对于环孢素A导致的细胞毒性的保护作用与机制研究 被引量:1
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作者 欧阳资章 刘晓萍 +3 位作者 江晟 钟志华 肖诚胤 邓惠容 《中国生化药物杂志》 CAS 2017年第7期34-36,39,共4页
目的探讨Nec-1对于环孢素A导致的细胞毒性的保护作用及其潜在的分子机制。方法以Nec-1和环孢素A共同作用于小鼠肾小管上皮细胞株MRTEpi C、肾小球内皮细胞MGEC、肾小球系膜细胞株MMC,然后采用MTT法、软琼脂克隆形成实验分别检测细胞的... 目的探讨Nec-1对于环孢素A导致的细胞毒性的保护作用及其潜在的分子机制。方法以Nec-1和环孢素A共同作用于小鼠肾小管上皮细胞株MRTEpi C、肾小球内皮细胞MGEC、肾小球系膜细胞株MMC,然后采用MTT法、软琼脂克隆形成实验分别检测细胞的生长曲线变化、克隆形成能力。采用流式细胞术检测细胞凋亡。采用Western blot检测细胞周期蛋白Cyclin D1、CDK4、CDK2、Cyclin E和细胞凋亡相关Caspase3。结果环孢素A作用后,细胞生长能力明显下降,克隆形成能力明显降低,具有统计学意义(P〈0.05)。细胞周期相关蛋白Cyclin D1、CDK4、CDK2、Cyclin E显著升高(P〈0.05),细胞凋亡的比例和Caspase 3的表达无变化。结论 Nec-1通过上调细胞周期相关蛋白Cyclin D1、CDK4、CDK2、Cyclin E对肾小球和肾小管细胞产生细胞毒性作用,而Nec-1具有保护作用。 展开更多
关键词 程序性坏死特异性抑制剂-1(Nec-1) 环孢素A 细胞周期相关蛋白
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