期刊文献+
任意字段
题名或关键词
题名
关键词
文摘
作者
第一作者
机构
刊名
分类号
参考文献
作者简介
基金资助
栏目信息
共找到116篇文章
< 1 2 … 6 >
每页显示 20 50 100
已选择0条
导出题录 引用分析
参考文献
引证文献
 统计分析
检索结果
已选文献
显示方式：
迟钝爱德华氏菌鞭毛蛋白的提取与分析 被引量：10
1
作者 张晓佩 龚晖 +2 位作者 陈如敬 杨金先 林天龙 《福建农业学报》 CAS 2008年第1期35-38,共4页
采用不同的方法提取迟钝爱德华氏菌鞭毛蛋白(Edwardsiella Tardaflagellin,ETF),选出合适的方法提取ETF,同时制备了ETF的鼠抗血清和迟钝爱德华氏菌菌株ETY全菌的鼠抗血清,通过ELISA法和Western blottig法分析了ETF的抗原性和免疫原性。... 采用不同的方法提取迟钝爱德华氏菌鞭毛蛋白(Edwardsiella Tardaflagellin,ETF),选出合适的方法提取ETF,同时制备了ETF的鼠抗血清和迟钝爱德华氏菌菌株ETY全菌的鼠抗血清,通过ELISA法和Western blottig法分析了ETF的抗原性和免疫原性。试验结果表明,酸化高速离心法可获得高纯度分子量约为44 kDa的ETF,该蛋白可被爱德华氏菌的全菌鼠抗血清识别,同时由ETF制备的鼠抗血清除了能特异识别该蛋白之外,也可识别爱德华菌菌体裂解产物中44 kDa的蛋白,证实爱德华氏菌鞭毛蛋白具有抗原性和免疫原性,可作为亚单位疫苗的候选抗原。 展开更多
关键词 鞭毛蛋白 迟钝爱德华氏菌 提取 抗血清
下载PDF
柯萨奇病毒A组16型多克隆抗体的制备及其在检定中的应用 被引量：3
2
作者 谢天宏 杨婷 +8 位作者 宋霞 李华 岳磊 刘正玲 龙润乡 杨蓉 罗芳宇 朱凡丽 谢忠平 《中国预防医学杂志》 CAS CSCD 2017年第7期497-500,共4页
目的评价CV-A16-K168免疫血清对CV-A16不同毒株的中和抗体效价,确定完全中和不同病毒量所需的最低血清量,为CV-A16疫苗毒种检定中的鉴别试验和病毒外源因子检查提供参考。方法将CVA16病毒抗原辅以弗氏佐剂以皮下多点注射方式免疫新西兰... 目的评价CV-A16-K168免疫血清对CV-A16不同毒株的中和抗体效价,确定完全中和不同病毒量所需的最低血清量,为CV-A16疫苗毒种检定中的鉴别试验和病毒外源因子检查提供参考。方法将CVA16病毒抗原辅以弗氏佐剂以皮下多点注射方式免疫新西兰大白兔,多次免疫后取血清,采用微量细胞病变法进行中和抗体效价检测和对15株不同CV-A16毒株的中和效价检测,并用CV-A16-4V和CV-A16-10R两个毒株分析中和不同量病毒所需的抗体量。结果浓缩抗原作为免疫原获得的兔抗CV-A16血清中和抗体效价可达1∶2 048;该免疫血清对15株CV-A16不同毒株的几何平均滴度(genomic mean titer,GMT)为1∶3 118;完全中和7.5lgCCID50/ml CV-A16病毒所需的最低血清量为128U,当病毒量在4.0~7.0lgCCID50/ml时,完全中和所需的最低血清量为48U,当病毒量低于4.0lgCCID50/ml时,1U的血清即可完全中和本病毒。结论 CV-A16-K168株作为免疫原可获得高效价的抗血清;用不同毒株检测得到的抗体效价存在差异;完全中和病毒所需的最低血清量与病毒量呈正相关;病毒量与测得的血清中和效价呈负相关。 展开更多
关键词 柯萨奇病毒A组16型 免疫血清 中和能力 疫苗检定
原文传递
延长大鼠异种心脏移植后存活时间的实验研究
3
作者 杜成友 姚榛祥 +2 位作者 郑军 董蒲江 周洪伟 《中华器官移植杂志》 CAS CSCD 2000年第2期100-102,共3页
目的　研究如何延长大鼠异种心脏移植后的存活时间。方法　实验分为A、B、C、D四组。A组 :移植术前 12、8、4、0d及 10、6、2、0d分别将脾细胞 1× 10 8个 ,抗血清 0 .2ml静脉注入受体大鼠 ;B组 :在A组的基础上 ,加用中华眼镜蛇毒 (... 目的　研究如何延长大鼠异种心脏移植后的存活时间。方法　实验分为A、B、C、D四组。A组 :移植术前 12、8、4、0d及 10、6、2、0d分别将脾细胞 1× 10 8个 ,抗血清 0 .2ml静脉注入受体大鼠 ;B组 :在A组的基础上 ,加用中华眼镜蛇毒 (CCV) 0 .2mg·kg-1·d-1,术前 3d至术日腹腔注射。C组 :在B组的基础上 ,加用环孢素A(CsA) 10mg·kg-1·d-1、环磷酰胺 (Cy) 2 0mg·kg-1·d-1,术前 12d开始至术日腹腔注射。D组 :在C组的基础上 ,加用抗巨噬细胞和抗自然杀伤细胞单克隆抗体 2 5 0 μg·kg-1·d-1,术前 12d开始至术日腹腔注射。结果　A、B、C、D四组移植心脏分别存活 (0 .32± 0 .12 )h ,(2 5 .6± 9.6 )h、(48.6± 10 .4)h和 (72 .4± 2 1.7)h ;术日各组IgG均下降 ,尤以C、D组下降明显 ,与A、B组比较 ,差异有显著性 (P <0 .0 5 )。结论　术前静脉注射供体脾细胞及抗血清 ,尤其与CCV、CsA、Cy合用 ,能显著抑制IgG的产生 ,延长移植心脏的存活时间。 展开更多
关键词 心脏移植 抗体IGG 异种移植 存活时间 实验研究
原文传递
新型番鸭呼肠孤病毒σC蛋白的原核表达及其抗原特性 被引量：11
4
作者 陈海鹏 云涛 +4 位作者 张存 余斌 倪征 华炯钢 崔言顺 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2014年第6期1448-1452,共5页
新型番鸭呼肠孤病毒是近年来新发现的一种引起鸭严重疾病的病原,该病毒与经典MDRV主要在病毒宿主范围、体外培养特性、临床致病性和免疫保护特性上存在显著的差异。通过RT-PCR扩增新型呼肠孤病毒σC基因,经NcoⅠ和XhoⅠ双酶切处理,插入... 新型番鸭呼肠孤病毒是近年来新发现的一种引起鸭严重疾病的病原,该病毒与经典MDRV主要在病毒宿主范围、体外培养特性、临床致病性和免疫保护特性上存在显著的差异。通过RT-PCR扩增新型呼肠孤病毒σC基因,经NcoⅠ和XhoⅠ双酶切处理,插入到p ET-28a(+)原核表达载体,获得重组质粒p ET-28a(+)-σC。将重组阳性质粒转化至BL21(DE3)感受态细胞,诱导表达后经SDS-PAGE电泳对σC蛋白进行初步分析,蛋白分子量约为36 k Da。重组蛋白经纯化后免疫实验兔,获得抗σC蛋白的高效免疫血清。通过Western Blot与间接免疫荧光实验初步表明,新型鸭呼肠孤病毒σC蛋白具有良好的反应活性。 展开更多
关键词 新型呼肠孤病毒 σC基因 原核表达 兔抗血清
下载PDF
人肝癌特异性γ－GTⅡ纯化及抗血清制备 被引量：2
5
作者 王胜 付平平 +1 位作者 李秀 王绍霞 《白求恩医科大学学报》 CSCD 1996年第6期654-655,共2页
以生化技术从人肝癌组织中提取、纯化出肝癌特异性γ－谷氨酰转肽酶（γ－ＧＴⅡ），并以此酶为抗原免疫新西兰兔制备抗γ－ＧＴⅡ血清。应用免疫双扩散法对该抗血清的特异性进行检测。结果显示此抗血清与人肝癌γ－ＧＴⅡ抗原及原发性... 以生化技术从人肝癌组织中提取、纯化出肝癌特异性γ－谷氨酰转肽酶（γ－ＧＴⅡ），并以此酶为抗原免疫新西兰兔制备抗γ－ＧＴⅡ血清。应用免疫双扩散法对该抗血清的特异性进行检测。结果显示此抗血清与人肝癌γ－ＧＴⅡ抗原及原发性肝癌病人血清均具有很好的特异性免疫反应。 展开更多
关键词 肝肿瘤 γ-GTⅡ 抗血清制备 诊断
下载PDF
水产动物6种主要病原菌与抗血清的免疫交叉反应 被引量：22
6
作者 战文斌 齐继光 +2 位作者 刘洪明 周丽 邢婧 《中国水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期14-19,共6页
采用ELISA、试管凝集、Western blot等方法,分析了鳗弧菌(Vibrioanguillarum)、哈维氏弧菌(V.harveyi)、溶藻胶弧菌(V.alginolyticus)、副溶血弧菌(V.paraheamolyticus)、迟钝爱德华氏菌(Edwardsiellatarda)和荧光假单胞菌(Psedomonasfl... 采用ELISA、试管凝集、Western blot等方法,分析了鳗弧菌(Vibrioanguillarum)、哈维氏弧菌(V.harveyi)、溶藻胶弧菌(V.alginolyticus)、副溶血弧菌(V.paraheamolyticus)、迟钝爱德华氏菌(Edwardsiellatarda)和荧光假单胞菌(Psedomonasfluorescens)等水产养殖中主要病原细菌与抗血清之间的免疫交叉反应。结果表明,弧菌属细菌之间的交叉反应程度比较大,而与其他两属的细菌之间存在的交叉反应程度小,或不存在交叉反应;Western blot分析结果显示,哈维氏弧菌、溶藻胶弧菌和副溶血弧菌抗血清分别与其他3种弧菌在分子量为135.6kD和121.5kD;95.6kD,48.4kD,39.2kD和34.9kD;55.1kD的蛋白带处存在交叉反应,而这些分子量的蛋白带与其他两属的抗血清均不发生反应。 展开更多
关键词 弧菌 爱德华氏菌 假单胞菌 抗血清 免疫交叉
下载PDF
动物抗血清及其制备技术要点与应用进展 被引量：9
7
作者 王占伟 邵国青 陈笑娟 《江西农业学报》 CAS 2009年第7期149-152,共4页
抗血清对于控制动物疫病具有很重要的作用。综述了动物抗血清的发展历程、产品技术现状、制备技术要点与最新研究应用进展以及面临的问题和解决方案等。
关键词 抗血清 产品 制备 制备技术
下载PDF
大菱鲆血清免疫球蛋白IgM的纯化及应用研究 被引量：7
8
作者 魏鉴腾 陈吉祥 +2 位作者 王淑娴 张晓华 王印庚 《中国海洋大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期932-936,共5页
用硫酸铵分级盐析法纯化大菱鲆血清免疫球蛋白IgM,所得产物用Sepharose-4B和DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子交换层析进一步纯化,以纯化的大菱鲆IgM免疫新西兰大白兔,获得兔抗大菱鲆IgM抗血清。SDS-PAGE电泳显示大菱鲆IgM重链为76 kD,... 用硫酸铵分级盐析法纯化大菱鲆血清免疫球蛋白IgM,所得产物用Sepharose-4B和DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子交换层析进一步纯化,以纯化的大菱鲆IgM免疫新西兰大白兔,获得兔抗大菱鲆IgM抗血清。SDS-PAGE电泳显示大菱鲆IgM重链为76 kD,轻链为27 kD;纯化的大菱鲆IgM重链与特异性抗血清具有较好的反应,而轻链与抗血清反应不明显;以制备的兔抗大菱鲆IgM抗血清为二抗建立了大菱鲆血清特异性抗体的间接ELISA检测方法,用该方法检测了鳗弧菌灭活疫苗免疫后大菱鲆产生特异性抗的变化规律,大菱鲆在免疫后第1周就产生了特异性抗体,在3周时达到峰值,该特异性抗体可维持13周以上。 展开更多
关键词 大菱鲆 IGM 纯化 抗血清 ELISA
下载PDF
兔抗鼠胸腺细胞抗血清的制备及应用 被引量：6
9
作者 张克非 张亮 +2 位作者 张祥贵 于泓 赵士启 《遵义医学院学报》 2003年第1期76-78,共3页
目的 应用大鼠胸腺细胞悬液免疫新西兰大白兔,制备兔抗大鼠胸腺细胞抗血清(ATS)。方法 初次免疫采用大鼠胸腺细胞悬液与福氏完全佐剂乳化混合后作为免疫原液,于大白兔皮下多点注射;加强免疫分别采取静脉注射和皮下多点注射的方法。并用... 目的 应用大鼠胸腺细胞悬液免疫新西兰大白兔,制备兔抗大鼠胸腺细胞抗血清(ATS)。方法 初次免疫采用大鼠胸腺细胞悬液与福氏完全佐剂乳化混合后作为免疫原液,于大白兔皮下多点注射;加强免疫分别采取静脉注射和皮下多点注射的方法。并用间接免疫荧光的方法对抗血清效价进行测定。结果 皮下加静脉注射免疫法制得ATS效价达1:2000,皮下注射免疫法制得ATS效价为1:1000。结论 两种免疫方法均可诱导产生满意的ATS。高效价的ATS为系膜增殖性肾炎动物模型的研究提供了方法学基础。 展开更多
关键词 抗血清 胸腺细胞 实验方法 大鼠
下载PDF
大白鼠血清IgG的提纯及其抗血清的制备 被引量：3
10
作者 孙玮红 李树清 徐红 《动物检疫》 1994年第1期11-12,共2页
经硫酸铵及DEAE纤维素柱层析提纯的大白鼠血清IgG免疫家兔制备兔抗鼠IgG高免血清，双向琼指扩散效价为1：64，免疫电泳出现一条特异性沉淀线。其纯度和含量均符合实验要求。
关键词 大白鼠 血清IGG 抗原 制备 检疫
下载PDF
碱性MAGE家族新成员restin在大肠杆菌中的表达和抗体制备 被引量：3
11
作者 路凡 杨辉 +4 位作者 王孝功 蒲勤 李毅 赵文明 赵忠良 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期309-311,共3页
目的:从维甲酸诱导的白血病细胞系HL60中,克隆编码219个氨基酸的新基因restin,构建原核表达载体、制备抗血清并进行初步应用。方法:采用PCR技术,以维甲酸诱导的白血病细胞的cDNA为模板,扩增出restin的编码区。将其克隆入大肠杆菌表达载... 目的:从维甲酸诱导的白血病细胞系HL60中,克隆编码219个氨基酸的新基因restin,构建原核表达载体、制备抗血清并进行初步应用。方法:采用PCR技术,以维甲酸诱导的白血病细胞的cDNA为模板,扩增出restin的编码区。将其克隆入大肠杆菌表达载体中。经过温度诱导获得restin表达蛋白。利用SDS-PAGE纯化的目的蛋白免疫新西兰大白兔,制备该蛋白的抗血清。以该抗体做间接免疫荧光,初步观察restin在COS-7细胞内的表达分布。结果:大肠杆菌中表达的restin蛋白的Mr为26000。将其初步纯化后免疫新西兰白兔制备的抗血清,用Westernblot检测其效价为1∶800。间接免疫荧光显示,restin蛋白主要分布在细胞核内。结论:成功地制备抗restin的抗体,为进一步研究restin蛋白在组织中的表达、细胞内亚定位以及信号转导通路提供了前提条件。 展开更多
关键词 细胞静息相关因子(restin) 抗血清 表达 间接免疫荧光
下载PDF
分子佐剂C3d3增强hCGβ蛋白疫苗免疫原性及其抗血清中和hCG生物学活性的作用 被引量：3
12
作者 王秀丽 李大金 +3 位作者 袁敏敏 王明雁 朱影 孟毅 《实验生物学报》 CSCD 北大核心 2004年第4期255-261,共7页
本文观察分子佐剂C3d3增强hCGβ蛋白避孕疫苗体液免疫效力的能力。采用分子生物学技术以phCMV1为载体分别构建分泌型、带有6个组氨酸纯化标签的真核表达质粒phCMV1-6His-hCGβ-C3d3和phCMV1-6His-hCGβ,在CHO 细胞中获得重组蛋白的稳定... 本文观察分子佐剂C3d3增强hCGβ蛋白避孕疫苗体液免疫效力的能力。采用分子生物学技术以phCMV1为载体分别构建分泌型、带有6个组氨酸纯化标签的真核表达质粒phCMV1-6His-hCGβ-C3d3和phCMV1-6His-hCGβ,在CHO 细胞中获得重组蛋白的稳定、高效表达,并用镍柱和凝胶过滤层析对其进行分离、纯化。分别用hCGβ-C3d3融合蛋白、hCGβ+弗氏佐剂和单用hCGβ免疫生育期雌性BALB/c 小鼠,共免疫两次,间隔4周。ELISA 测定血清中抗hCGβ抗体滴度,并对各组小鼠产生的抗血清中和hCG 生物学活性的能力进行比较。结果表明hCGβ单独免疫组在加强免疫后才见抗体生成,其抗体滴度比hCGβ-C3d3融合蛋白免疫组低1995倍,C3d3的佐剂能力是弗氏佐剂的10倍(初次免疫)-32倍(再次免疫),并且hCGβ-C3d3融合蛋白免疫小鼠产生的抗血清具有很强的中和hCG 生物学活性的作用。实验证明通过分子佐剂C3d3可以大幅提高机体对hCGβ的体液免疫应答能力。 展开更多
关键词 免疫避孕 分子佐剂 C3D3 hCGβ蛋白疫苗 避孕疫苗 抗血清
下载PDF
小麦ATG8的原核表达及其抗血清制备 被引量：3
13
作者 吴洪波 刘刚 +1 位作者 张路路 王冬梅 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2013年第1期101-105,共5页
提取小麦品种L10的总RNA,进行反转录,其产物用于探究自噬基因ATG8的生物学功能。用PCR方法克隆ATG8,将克隆的ATG8亚克隆至表达载体PMD19-T,酶切后切胶回收,然后把产物测序鉴定,转化宿主菌E.coliRosetta-gami B(DE3),构建原核表达系统,... 提取小麦品种L10的总RNA,进行反转录,其产物用于探究自噬基因ATG8的生物学功能。用PCR方法克隆ATG8,将克隆的ATG8亚克隆至表达载体PMD19-T,酶切后切胶回收,然后把产物测序鉴定,转化宿主菌E.coliRosetta-gami B(DE3),构建原核表达系统,将融合蛋白纯化后制备其兔抗血清,然后利用Western Blotting技术对兔抗血清进行检测,鉴定了该抗血清的结合特异性。ATG8抗体的成功制备,为小麦中ATG8基因和自噬功能的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 ATG8 免疫印迹 抗血清 融合蛋白 原核表达
下载PDF
青霉素酶特异性抗血清间接ELISA方法的建立 被引量：3
14
作者 严兵 彭开松 +4 位作者 薛秀恒 涂健 王强 何东旭 祁克宗 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2010年第9期47-50,共4页
以青霉素酶为抗原,免疫健康獭兔,自行制备青霉素酶特异性抗血清(PcAb),并建立间接酶联免疫吸附试验(ELISA)的测定方法,优化试验条件,测定制备的青霉素酶特异性抗血清效价。结果表面抗原最佳包被浓度为10μg/mL,酶标二抗最佳稀释度为1∶2... 以青霉素酶为抗原,免疫健康獭兔,自行制备青霉素酶特异性抗血清(PcAb),并建立间接酶联免疫吸附试验(ELISA)的测定方法,优化试验条件,测定制备的青霉素酶特异性抗血清效价。结果表面抗原最佳包被浓度为10μg/mL,酶标二抗最佳稀释度为1∶2 000,阳性血清最佳稀释度为1∶2 000,抗原最佳包被条件为4℃过夜,血清最佳反应时间为37℃1 h,酶标二抗反应最佳时间为37℃1 h,与底物作用的最佳时间为20 min。 展开更多
关键词 青霉素酶 抗血清 间接ELISA
下载PDF
AtPCS1基因的原核表达及多抗血清的制备 被引量：2
15
作者 王鸣刚 赵宏 +2 位作者 刘左军 吴亦亮 陈亮 《兰州大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期37-40,共4页
利用RT-PCR扩增拟南芥螯合肽合成酶(AtPCS1)基因全序列,构建原核表达载体pET28a- AtPCS1并测序.将该载体转化大肠杆菌BL21,用0.75 mmol/LIPTG诱导融合蛋白AtPCS1-His的表达,纯化该融合蛋白.用纯化的融合蛋白免疫小鼠,ELISA法测定抗血清... 利用RT-PCR扩增拟南芥螯合肽合成酶(AtPCS1)基因全序列,构建原核表达载体pET28a- AtPCS1并测序.将该载体转化大肠杆菌BL21,用0.75 mmol/LIPTG诱导融合蛋白AtPCS1-His的表达,纯化该融合蛋白.用纯化的融合蛋白免疫小鼠,ELISA法测定抗血清的效价可达1:2 000.抗血清与融合蛋白及拟南芥总蛋白的western-blot结果表明:制备的抗血清具有较高的活性和特异性. 展开更多
关键词 植物螯合肽合成酶 原核表达 融合蛋白 抗血清
下载PDF
鸡新城疫血凝抑制试验用阳性血清国家标准品的研制 被引量：2
16
作者 李翠 关孚时 +6 位作者 戴志红 张秀英 孙海燕 蒋卉 温芳 陆连寿 王在时 《中国兽药杂志》 2013年第1期10-13,共4页
为制备标定HI试验用的鸡新城疫阳性血清国家标准品,以鸡新城疫La Sota株病毒和灭活疫苗免疫SPF鸡制备鸡新城疫高免血清。将检验合格的鸡新城疫阳性血清以鸡阴性血清稀释为HI效价与国际标准血清完全一致后,用于标准品制备。对该标准品进... 为制备标定HI试验用的鸡新城疫阳性血清国家标准品,以鸡新城疫La Sota株病毒和灭活疫苗免疫SPF鸡制备鸡新城疫高免血清。将检验合格的鸡新城疫阳性血清以鸡阴性血清稀释为HI效价与国际标准血清完全一致后,用于标准品制备。对该标准品进行了物理性状、无菌检验、真空度测定、剩余水分检验、均匀性检测和稳定性试验,检测结果均符合要求。以国际标准品为参比,测定了该标准品的HI效价为1∶60与协作标定结果基本一致。该标准品以国际标准品溯源的国际单位含量为320 IU/mL,为鸡新城疫的相关研究提供了物质基础。 展开更多
关键词 鸡新城疫 阳性血清 国家标准品 HI效价测定
下载PDF
牛布鲁氏菌病阳性血清国家标准品的研制 被引量：2
17
作者 李翠 关孚时 +4 位作者 戴志红 蒋卉 温芳 陆连寿 王在时 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期812-816,共5页
为制备标定凝集试验用的牛布鲁氏菌病阳性血清国家标准品,采集4份田间自然感染牛布鲁氏菌病的阳性血清作为候选物,经过筛选后,选择了3#血清用于标准品制备。对该标准品进行了物理性状、无菌检验、真空度测定、剩余水分检验、均匀性检测... 为制备标定凝集试验用的牛布鲁氏菌病阳性血清国家标准品,采集4份田间自然感染牛布鲁氏菌病的阳性血清作为候选物,经过筛选后,选择了3#血清用于标准品制备。对该标准品进行了物理性状、无菌检验、真空度测定、剩余水分检验、均匀性检测和稳定性试验,检测结果均符合要求。以国际标准品为参比,测定了该标准品的RBT、SAT和CFT效价,结果分别为1∶160"+"、1∶2 400"++"、1∶800"++",与协作标定结果完全一致。该标准品以国际标准品溯源的国际单位含量为4 000 IU/mL。 展开更多
关键词 牛布鲁氏菌病 阳性血清 国家标准品 效价测定 均匀性 稳定性
原文传递
流感病毒聚合酶PA亚单位抗血清的制备 被引量：1
18
作者 葛叶 邓国华 +4 位作者 李雪平 高玉伟 姚秋成 唐艳玲 陈化兰 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期314-317,共4页
本研究采用RT-PCR方法从H5N1亚型禽流感病毒(AIV)A/Duck/Zhejiang/11/00中分段及全长扩增PA基因片段,将目的基因定向克隆至原核表达载体pET-32a,经测序验证正确后,获得重组阳性质粒,将重组质粒转化BL21细菌后诱导,实现质粒在大肠杆菌中... 本研究采用RT-PCR方法从H5N1亚型禽流感病毒(AIV)A/Duck/Zhejiang/11/00中分段及全长扩增PA基因片段,将目的基因定向克隆至原核表达载体pET-32a,经测序验证正确后,获得重组阳性质粒,将重组质粒转化BL21细菌后诱导,实现质粒在大肠杆菌中的表达,重组表达蛋白经Ni+柱纯化后分别与弗氏免疫佐剂乳化成油乳剂苗免疫新西兰大耳白兔,获得抗PA的免疫抗血清。Western blot检测结果表明抗血清与目的蛋白发生特异性反应。同时,将PA全长基因插入真核表达载体pCAGGS,转染293T细胞,通过激光共聚焦显微镜发现,抗血清与PA基因的真核表达产物发生反应,出现特异性荧光,在细胞核与细胞浆中均出现荧光,进一步表明PA亚单位在细胞核与细胞浆均有分布。 展开更多
关键词 禽流感病毒 PA基因 抗血清
下载PDF
猪带绦虫HSP70-4的真核表达及其抗血清的制备 被引量：1
19
作者 殷静 王帅 +2 位作者 刘光学 何伟 才学鹏 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期544-549,共6页
为了研究猪带绦虫(Taenia solium)热休克蛋白70-4(TsHSP70-4)基因序列的特征及其真核表达蛋白的抗原性,参考GeneDB中猪带绦虫基因组注释信息,设计特异性引物,RT-PCR扩增TsHSP70-4 ORF序列。根据毕赤酵母密码子偏好性,对TsHSP70-4基因密... 为了研究猪带绦虫(Taenia solium)热休克蛋白70-4(TsHSP70-4)基因序列的特征及其真核表达蛋白的抗原性,参考GeneDB中猪带绦虫基因组注释信息,设计特异性引物,RT-PCR扩增TsHSP70-4 ORF序列。根据毕赤酵母密码子偏好性,对TsHSP70-4基因密码子进行优化,连接载体pPIC9K,在毕赤酵母中进行诱导表达,通过Western-blot及质谱测序进行蛋白鉴定。将纯化后的TsHSP70-4表达蛋白免疫新西兰大白兔,制备抗血清。结果显示,成功克隆出大小为1 953 bp的TsHSP70-4 ORF序列。在毕赤酵母中进行了高效表达,获得大小约为95ku的重组蛋白。Western-blot检测和质谱鉴定表明,获得的重组蛋白即为TsHSP70-4。免疫新西兰大白兔,制备出效价高达1∶409 600的抗血清。该研究为猪囊尾蚴病新疫苗的研制提供了依据。 展开更多
关键词 猪带绦虫 猪囊尾蚴病 HSP70-4 真核表达 抗血清
原文传递
停乳链球菌内蒙分离株抗原基因MIG的克隆和表达 被引量：1
20
作者 刘金晔 白龙 +1 位作者 郝永清 张爱荣 《内蒙古农业大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2011年第4期42-46,共5页
停乳链球菌是引起奶牛乳房炎的主要病原菌,根据GenBank中登陆的停乳链球菌表面蛋白MIG基因序列,设计一对引物,采用PCR的方法从临床分离的停乳链球菌内蒙分离株基因组DNA中扩增出MIG基因,得到1条1 900bp的片段。将其连入PMD-19T载体中,... 停乳链球菌是引起奶牛乳房炎的主要病原菌,根据GenBank中登陆的停乳链球菌表面蛋白MIG基因序列,设计一对引物,采用PCR的方法从临床分离的停乳链球菌内蒙分离株基因组DNA中扩增出MIG基因,得到1条1 900bp的片段。将其连入PMD-19T载体中,经酶切,PCR及序列测定法进行鉴定。结果表明,MIG基因与Gen-Bank中停乳链球菌MIG基因(AF354651)序列的同源性为95%。构建原核表达载体PET-32a(+)-MIG,随后转化到大肠杆菌BL21(DH5a)中表达。表达产物进行SDS-PAGE分析后,表达的重组蛋白大小为89 ku。将纯化的MIG重组蛋白免疫兔,用ELISA检测其血清抗体。用制备出的抗血清与链球菌全菌进行玻片凝集试验,出现凝集颗粒。结果表明MIG重组蛋白具有较强的免疫原性,为停乳链球菌疫苗的研制奠定基础。 展开更多
关键词 乳房炎停乳链球菌 MIG蛋白 克隆 原核表达 抗血清
下载PDF
已选择0条
导出题录 引用分析
参考文献
引证文献
 统计分析
检索结果
已选文献
上一页 1 2 … 6 下一页 到第 页
使用帮助 返回顶部