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血管紧张素转化酶2(ACE2)的基因克隆及在仔猪体内的表达分布 被引量:8
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作者 王珊珊 黄瑜 +1 位作者 张树坤 张源淑 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第10期1579-1583,共5页
克隆验证了血管紧张素转化酶2(ACE2)基因的核苷酸序列,采用RT-PCR和免疫组化的方法在mRNA和蛋白水平上明确ACE2在仔猪各组织中的表达和分布。RT-PCR显示:ACE2在仔猪体内分布广泛;尤其在肾脏、胃底、回肠、十二指肠、空肠中都有较高水平... 克隆验证了血管紧张素转化酶2(ACE2)基因的核苷酸序列,采用RT-PCR和免疫组化的方法在mRNA和蛋白水平上明确ACE2在仔猪各组织中的表达和分布。RT-PCR显示:ACE2在仔猪体内分布广泛;尤其在肾脏、胃底、回肠、十二指肠、空肠中都有较高水平的表达;免疫组化结果显示:ACE2在胃底部、小肠各部位的肠上皮细胞刷状缘均有显著表达,但在结肠上皮细胞没有ACE2表达。ACE2在胃肠道中有较高水平的表达,提示ACE2可能参与了断奶仔猪胃肠道的生长发育。 展开更多
关键词 血管紧张素转化酶2 仔猪 基因克隆 分布 表达
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新冠病毒受体蛋白ACE2结构与功能的生信分析及原核表达 被引量:2
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作者 徐本锦 陈晓聪 +7 位作者 宣焱 杜淼 范蕾 李卓禧 李璟 刘玲 宋彬妤 侯艳香 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期1230-1237,共8页
目的:构建ACE2原核表达载体并对其进行结构与功能的生物信息学分析,探究其介导SARS-CoV-2入侵人体的分子机制。方法:采用Protparam、ProtScale、NetPhos3.1、SignaIP 4.1、YinOYang 1.2 Server、NetNGlyc 1.0 Server、SOPMA、SWISS-MODE... 目的:构建ACE2原核表达载体并对其进行结构与功能的生物信息学分析,探究其介导SARS-CoV-2入侵人体的分子机制。方法:采用Protparam、ProtScale、NetPhos3.1、SignaIP 4.1、YinOYang 1.2 Server、NetNGlyc 1.0 Server、SOPMA、SWISS-MODEL、Blast、Clustal X2和MEGA7.0等对ACE2的生物学特性、同源性及进化性进行系统分析。采用分子克隆技术构建pET-22b-ACE2,在大肠杆菌中进行表达。结果:ACE2全长805个残基,呈酸性,分子量为92.5 kD,pI=5.36,共含77个潜在的磷酸化位点和14个糖基化位点,是一种亲水性较强的跨膜蛋白。ACE2主要散布于内质网膜、高尔基体和胞质膜,二级结构组成以α-螺旋为主。原核表达结果显示,细菌裂解后,沉淀中ACE2表达多于上清与全菌,为疫苗研发提供了理论依据。多序列比对和进化分析显示,倭黑猩猩与智人亲缘关系最近。结论:本研究为ACE2蛋白的纯化及研究奠定了基础,有助于阐明ACE2介导SARS-CoV-2入侵人体的分子机制,对SARS-CoV-2感染治疗和跨物种传播提供了新的见解,为研究广谱抗病毒药物、治疗SARS-CoV-2和其他致命冠状病毒株的有效分子靶点提供了依据。 展开更多
关键词 SARS-CoV-2 载体构建 ace2蛋白 生信分析 原核表达
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TMPRSS2 Polymorphism and Its Correlation with SARS-CoV-2 Susceptibility - A Secondary Publication
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作者 Saleem Awan Anum Siraj +3 位作者 Amber Khan Arifa Anwar Muhammad Naeem Kiani Saira Yahya 《Journal of Clinical and Nursing Research》 2024年第5期329-335,共7页
Background:Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2(SARS-CoV-2)virus affected more people than SARS-CoV-1 and related coronaviruses.Human genetic factors,besides respiratory droplets and direct exposure to the ... Background:Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2(SARS-CoV-2)virus affected more people than SARS-CoV-1 and related coronaviruses.Human genetic factors,besides respiratory droplets and direct exposure to the virus,are found highly responsible for transmitting SARS-CoV-2 infection.Aim:The objective of this study was to determine the plasma levels of the TMPRSS2 gene and its role in SARS-CoV-2 susceptibility.Methodology:A total of 100 patients,i.e.50 SARS-CoV-2 positive patients as the case group and 50 SARS-CoV-2 negative samples as the control group,were selected randomly and included in this case-control study to determine the association between TMPRSS2 gene and susceptibility to SARS-CoV-2 infection and severity of coronavirus disease 2019(COVID-19).The TMPRSS2 levels of case and control samples were measured through an enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA).Following the genomic DNA extraction,a set of reverse and forward primers of human TMPRSS2 gene primers were used for the amplification of the TMPRSS2 gene.Results:In the control group,the ratio of men to women was more or less the same while in the case group 62%of the population were women.The TMPRSS2 level was found to be 4.70±7.7 ng/ml in case samples while it was 4.73±5.7 ng/ml in control samples.Conclusion:The levels of TMPRSS2 in plasma samples of both controls and cases were found to be the same indicating that the entry of SARS-CoV-2 is not dependent on the plasma levels of this protein. 展开更多
关键词 TMPRSS2 SARS-CoV-2 ace2 Gene COVID-19 expression
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FXR inhibition: an innovative prophylactic strategy against SARS-CoV-2 infection 被引量:1
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作者 Zhe Li Shuai Wang Fangfang Zhou 《Signal Transduction and Targeted Therapy》 SCIE CSCD 2023年第4期1346-1347,共2页
A recent study by Brevini et al.was published in Nature and proposed a critical role of farnesoid X receptor(FXR)signaling in controlling ACE2 expression.Inhibitors of FXR signaling,ursodeoxycholic acid(UDCA)and z-gug... A recent study by Brevini et al.was published in Nature and proposed a critical role of farnesoid X receptor(FXR)signaling in controlling ACE2 expression.Inhibitors of FXR signaling,ursodeoxycholic acid(UDCA)and z-guggulsterone(ZGG),have been proven to reduce ACE2 expression and susceptibility to SARS-CoV-2 infection in human tissues,providing an innovative strategy for SARS-CoV-2 treatment and prevention. 展开更多
关键词 ace2 expression. INFECTION
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高原低氧环境下大鼠RAAS水平及ACE2表达变化 被引量:3
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作者 刘忠 李文华 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期299-301,共3页
目的探讨大鼠血浆肾素-血管紧张素-醛固酮系统(RAAS)在高原低氧习服过程中的作用及其右心室血管紧张素转换酶2(ACE2)表达变化。方法将40只雄性SD大鼠随机分为4组,分别为缺氧1、3、30d组,对照组(西安地区海拔5 m);3个缺氧组动物由西安耗... 目的探讨大鼠血浆肾素-血管紧张素-醛固酮系统(RAAS)在高原低氧习服过程中的作用及其右心室血管紧张素转换酶2(ACE2)表达变化。方法将40只雄性SD大鼠随机分为4组,分别为缺氧1、3、30d组,对照组(西安地区海拔5 m);3个缺氧组动物由西安耗时1 d带到青海格尔木(海拔2 700 m)、3 d带到西藏那曲(海拔4 500 m)及那曲饲养30 d,用放射免疫法测定大鼠血浆肾素(PRA),血管紧张素Ⅱ(ATⅡ),醛固酮(ALD)的浓度,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR),免疫印迹、(western blot)检测各组大鼠心脏右心室心肌ACE2mRNA、蛋白水平的表达变化。结果缺氧1d组血浆PRA含量为每小时(5.15±0.86)ng/mL,ATⅡ、ALD含量分别为(92.10±10.25)、(85.60±29.40)pg/mL;缺氧3、30 d组血浆PRA含量分别为每小时(7.12±0.31)和(5.37±0.28)ng/mL,ATⅡ、ALD含量分别为(160.53±10.84)、(127.45±30.6)和(56.30±25.23)、(82.54±26.78)pg/mL;缺氧30 d组右心室明显肥大伴右心功能明显上调,同时右心室ACE2 mRNA、蛋白合成均有明显增加(P<0.01)。结论高原缺氧大鼠RAAS在高原习服中参与并发挥重要作用,慢性高原低氧环境下大鼠心肌组织ACE2 mRNA、蛋白水平显著上调。 展开更多
关键词 高原低氧 血浆肾素-血管紧张素-醛固酮系统(RAAS) 血管紧张素转换酶2(ace2)表达
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基于公共数据库挖掘的ACE2肺部表达差异及与新型冠状病毒肺炎的相关性的功能预测 被引量:2
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作者 荣健 王文欣 +2 位作者 颉迎新 周笳 王宣 《中华医院感染学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第19期2881-2885,共5页
目的金属肽酶中的血管紧张素转换酶2(Angiotensin-converting enzyme 2,ACE2)被确定为新型冠状病毒的功能性受体。本研究旨在探究ACE2在新型冠状病毒引起肺炎(以下简称"新冠肺炎")中的表达差异。方法对GSE42834数据集获得的11... 目的金属肽酶中的血管紧张素转换酶2(Angiotensin-converting enzyme 2,ACE2)被确定为新型冠状病毒的功能性受体。本研究旨在探究ACE2在新型冠状病毒引起肺炎(以下简称"新冠肺炎")中的表达差异。方法对GSE42834数据集获得的112个新冠肺炎患者的新冠肺炎组织和18个肺炎患者的正常肺组织的测序结果进行差异分析,设定差异分析的条件是logFC绝对值>1,P<0.05。使用人蛋白质数据库进一步验证ACE2在正常肺组织的表达情况。Coexpedia数据库进行ACE2共表达基因的检索。Metascape对共表达基因进行GO和KEGG富集分析,以便进行预测ACE2在机体发挥的功能以及可能参与的信号通路。结果GSE42834数据库获得具有差异性表达的基因共有249个,其中上调的基因有156个,下调的基因有93个。上调变化较大的基因有VNN1,ACE2,OLFM4,CD67,CD64,下调变化较大的基因有GNLY,FGFBP2,CLIC3,D4S234E和KLRB1。差异结果分析可见ACE2属于上调基因。组间表达结果提示与正常肺组织相比,ACE2在新冠肺炎组织中的确表达上调,人蛋白质数据库免疫组化结果提示,ACE2在正常肺组织表达阴性。GO和KEGG富集分析和可视化发现ACE2参与介导I型干扰素信号通路和Toll样受体信号通路。结论ACE2在新冠肺炎患者中可能高表达,有望成为治疗新冠肺炎的新靶点。 展开更多
关键词 金属肽酶中的血管紧张素转换酶2 新型冠状病毒肺炎 信号通路 基因表达
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人血管紧张素转换酶2基因的克隆及其真核表达载体的构建 被引量:2
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作者 肖洪广 高俊 +3 位作者 刘利东 林勇平 黄泽红 李宁 《热带医学杂志》 CAS 2006年第7期776-778,共3页
目的克隆人血管紧张素转换酶2基因(ACE2),并构建其真核表达载体。方法用Trizol试剂从人肺组织提取总RNA,然后经逆转录得到人ACE2的cDNA。半巢式PCR方法扩增人ACE2基因后,先进行T-A连接,转化感受态大肠杆菌DH5α,接种含IPTG和x-Gal平板... 目的克隆人血管紧张素转换酶2基因(ACE2),并构建其真核表达载体。方法用Trizol试剂从人肺组织提取总RNA,然后经逆转录得到人ACE2的cDNA。半巢式PCR方法扩增人ACE2基因后,先进行T-A连接,转化感受态大肠杆菌DH5α,接种含IPTG和x-Gal平板筛选重组子,并进一步亚克隆至真核表达质粒载体pcDNA3.1(+)。经PCR扩增、酶切和序列测定方法鉴定重组质粒。结果获得了人ACE2的编码基因,并成功构建了其真核表达载体。结论人血管紧张素转换酶2是SARS冠状病毒的功能受体,与SARS冠状病毒Spike蛋白上的受体结合域相结合,在SARS冠状病毒感染和传播中起重要作用,本工作为研究SARS冠状病毒感染及跨种属传播机制奠定了基础。 展开更多
关键词 SARS冠状病毒 血管紧张素转换酶2 真核表达
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人血管紧张素转化酶2(ACE2)BAC转基因小鼠模型的制备及鉴定
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作者 朱孟敏 刘玲玲 +5 位作者 牛博文 彭秀华 陈丽香 秦波音 杨华 李峰 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期230-238,共9页
目的期望获得含有全长hACE2基因序列的hACE2人源化小鼠模型,为心血管疾病、新冠肺炎发病机制研究、药物与疫苗研发提供重要工具。方法将纯化含有hACE2完整编码序列的BAC质粒,利用小鼠受精卵显微注射和输卵管移植技术获得多个首建鼠,分... 目的期望获得含有全长hACE2基因序列的hACE2人源化小鼠模型,为心血管疾病、新冠肺炎发病机制研究、药物与疫苗研发提供重要工具。方法将纯化含有hACE2完整编码序列的BAC质粒,利用小鼠受精卵显微注射和输卵管移植技术获得多个首建鼠,分别育种建系,通过杂交育种获得稳定遗传F2代小鼠品系,进一步对F2代小鼠hACE2基因整合、基因拷贝数、相对荧光定量PCR、Western Blot和免疫荧光进行分析。结果育种获得hACE2-6-9、hACE2-14-3、hACE2-15-1和hACE2-15-2共4个小鼠品系。基因整合结果显示,hACE2-6-9、hACE2-15-1和hACE2-15-2小鼠品系含有完整的hACE2基因座位点及较长的基因调控区,hACE2-14-3含有完整的hACE2基因座位点及3’UTR较短的基因调控区。相对荧光定量PCR和Western Blot检测结果显示,hACE2-6-9、hACE2-15-1和hACE2-15-2品系小鼠肠道中hACE2 mRNA和蛋白表达水平较低,而整合较短调控序列的hACE2-14-3小鼠品系则表达水平较高。免疫荧光染色结果显示hACE2-15-1品系小鼠肾小管和肺血管内皮细胞中均有hACE2表达。结论获得了含有全长基因序列的hACE2人源化BAC转基因小鼠,保留完整的hACE2启动子及基因调控区,从而为心血管疾病、新冠肺炎发病机制研究、hACE2基因表达调控机制研究和药物、疫苗的研发提供重要工具。 展开更多
关键词 ace2 人源化小鼠 细菌人工染色体 基因表达
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Expression pattern and function of SARS-CoV-2 receptor ACE2
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作者 Ruiting Li Chengfeng Qin 《Biosafety and Health》 CSCD 2021年第6期312-318,共7页
Since the outbreak at the end of 2019,SARS-CoV-2 has been spreading around the world for more than one year.Scientists have been intensely conducting research on this newly emerged coronavirus and the disease caused b... Since the outbreak at the end of 2019,SARS-CoV-2 has been spreading around the world for more than one year.Scientists have been intensely conducting research on this newly emerged coronavirus and the disease caused by it.Angiotensin-converting enzyme 2(ACE2),as a receptor mediating the cellular entry of SARSCoV-2,has become a hot spot for researchers.Here,we summarized the recent progresses on the function,expression and distribution characteristics of ACE2 in human body and among populations.We further discussed the interaction mechanism of ACE2 and SARS-CoV-2 S protein,focusing on key residues that effect interaction and binding ability of SARS-CoV-2 variants.This will facilitate researchers to better understand SARS-CoV-2 infection and transmission route,adaptation mechanism,and designing treatment strategies. 展开更多
关键词 SARS-CoV-2 ace2 expression pattern INTERACTION
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血管紧张素转化酶2和中性氨基酸转运载体BoAT1在不同日龄猪肠道中的表达差异 被引量:8
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作者 权素玉 王睿杰 +2 位作者 孙俊杰 吴昭淳 张源淑 《畜牧与兽医》 北大核心 2015年第4期36-39,共4页
研究了肠道血管紧张素转化酶2(ACE2)和中性氨基酸转运载体B0AT1在不同生长阶段猪小肠各段中的分布表达,探讨其相互关系。研究选取3日龄仔猪、90日龄生长猪和120日龄成年猪十二指肠、空肠和回肠组织,采用体外扩增和荧光定量技术对各肠段... 研究了肠道血管紧张素转化酶2(ACE2)和中性氨基酸转运载体B0AT1在不同生长阶段猪小肠各段中的分布表达,探讨其相互关系。研究选取3日龄仔猪、90日龄生长猪和120日龄成年猪十二指肠、空肠和回肠组织,采用体外扩增和荧光定量技术对各肠段组织中ACE2和B0AT1基因进行了定性和定量分析。结果显示ACE2基因在不同日龄猪小肠各段均有表达,相对表达量随日龄增长显著升高,120日龄猪表达量极显著上调。而肠道中B0AT1相对表达量逐渐下降,120日龄时显著下调。结果提示:ACE2在成年猪肠道组织中有较高表达,B0AT1在仔猪肠道组织中表达较高。 展开更多
关键词 ace2 B0AT1 小肠 表达
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ACE 2在奶牛乳腺中的表达定位及其抗炎性损伤作用的研究 被引量:11
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作者 刘小倩 刘颖 +3 位作者 荣超 王鲲 肖航 张源淑 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期552-560,共9页
本研究旨在通过体内外试验,明确ACE 2在奶牛乳腺中的表达定位,并对其在高精料饲喂致内源性奶牛乳房炎中的抗损伤作用进行初步探讨。体外试验分别选用牛乳腺组织样品和牛乳腺上皮细胞(Mac-T细胞),RTPCR和Western blotting法检测ACE 2在... 本研究旨在通过体内外试验,明确ACE 2在奶牛乳腺中的表达定位,并对其在高精料饲喂致内源性奶牛乳房炎中的抗损伤作用进行初步探讨。体外试验分别选用牛乳腺组织样品和牛乳腺上皮细胞(Mac-T细胞),RTPCR和Western blotting法检测ACE 2在奶牛乳腺组织中的mRNA和蛋白表达;免疫荧光法测定ACE 2蛋白在Mac-T细胞中的定位。体内试验,选用6头健康泌乳期荷斯坦奶牛,随机分为对照组和高精料饲喂组,饲喂20周后,活体采集乳腺组织及乳。测定乳中LPS含量、体细胞数及相关炎性指标;制作乳腺组织学切片;分析乳腺组织中ACE、AT1、ACE2、MasR mRNA表达水平,ELISA法检测Ang II、Ang1-7含量。体外试验结果表明,奶牛乳腺中ACE2在基因和蛋白水平上均有表达,细胞学定位在细胞的胞浆和胞膜。体内试验结果显示,高精料长期饲喂,奶牛乳中体细胞数和LPS含量均明显升高(P<0.01);乳中NAGase和AKP酶活力均显著高于正常对照组(P<0.05),MPO活力两组之间无明显差异;乳腺组织学表现出一定炎性损伤变化;其中Ang1-7含量显著增高(P<0.05),Ang II的含量显著降低(P<0.05);ACE、AT 1、ACE 2、MasR mRNA表达量均显著上升((P<0.05)),ACE2/ACE mRNA比值高于对照组。本研究首次证实奶牛乳腺组织中有ACE 2的存在。在高精料长期饲喂造成奶牛乳房炎性损伤时,乳腺组织中RAS处于激活状态,ACE/ACE2比例失衡,以ACE 2-Ang1-7-MasR轴的活力处于优势状态,即ACE 2的抗损伤作用占优势。ACE 2可能通过降解AngII,产生Ang1-7发挥抗损伤作用,对乳腺组织炎性损伤具有一定的保护作用。 展开更多
关键词 肾素-血管紧张素系统(RAS) 血管紧张素转化酶2(ace 2) 奶牛乳腺组织 表达 抗损伤
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山羊血管紧张素转换酶2基因的克隆表达与生物信息学分析 被引量:7
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作者 杨维维 许媛媛 +2 位作者 荣超 权素玉 张源淑 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期120-126,共7页
[目的]血管紧张素转换酶2(ACE2)是RAS系统的关键调控酶,在动物上的研究较少,本试验研究了山羊ACE2的相关理化性质和功能。[方法]利用同源克隆及RT-PCR技术,根据牛的ACE2基因mRNA序列设计引物,从山羊肾脏组织中扩增出ACE2基因编码区的... [目的]血管紧张素转换酶2(ACE2)是RAS系统的关键调控酶,在动物上的研究较少,本试验研究了山羊ACE2的相关理化性质和功能。[方法]利用同源克隆及RT-PCR技术,根据牛的ACE2基因mRNA序列设计引物,从山羊肾脏组织中扩增出ACE2基因编码区的特异性片段,TA克隆到p MD19-T载体并转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞,对生长出的单菌落进行验证后测序分析。根据测序分析结果设计引物,经PCR扩增和酶切连接,构建原核表达载体p ET-28a-ACE2,经过验证后转化大肠杆菌BL21(DE3)并用IPTG诱导表达ACE2蛋白。[结果]山羊ACE2基因c DNA编码区共包括2 415个核苷酸,编码804个氨基酸残基。同源性比对发现,山羊ACE2基因核苷酸序列同源性与绵羊ACE2最高,为99%,与斑马鱼最低,仅为60%。遗传进化分析也表明该ACE2基因与绵羊的遗传距离最近,与斑马鱼处在两个不同的分支上。蛋白结构及理化性质分析预测该山羊ACE2蛋白属于稳定型蛋白,蛋白信号肽序列位于第1氨基酸(aa)~18氨基酸(aa)之间,蛋白跨膜螺旋预测为Ⅰ型跨膜蛋白。成功构建山羊ACE2蛋白胞外部分(19~738 aa)表达载体,表达出的蛋白相对分子质量约为90×10^3,主要以包涵体的形式在BL21(DE3)中表达。[结论]本试验首次成功克隆了山羊ACE2基因编码区(基因序列号:KF921008.1),并对其蛋白结构及理化性质进行了初步预测,同时在大肠杆菌中高效表达了其胞外区蛋白。 展开更多
关键词 山羊 血管紧张素转换酶2 基因克隆 生物信息学 表达
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真核表达质粒pcDNA.3.1(+)-ACE2的构建及其在CHO细胞中的表达 被引量:4
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作者 肖航 王凯 +2 位作者 王换换 王鲲 张源淑 《畜牧与兽医》 北大核心 2018年第1期54-58,共5页
为了构建pcDNA.3.1(+)-血管紧张素转化酶2(ACE2)真核表达质粒并检测在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中的表达,从羊肾脏中提取总RNA,经RT-PCR扩增出ACE2基因,后将其与pcDNA3.1载体进行连接重组,构建pcDNA3.1(+)-ACE2真核表达质粒,经H... 为了构建pcDNA.3.1(+)-血管紧张素转化酶2(ACE2)真核表达质粒并检测在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中的表达,从羊肾脏中提取总RNA,经RT-PCR扩增出ACE2基因,后将其与pcDNA3.1载体进行连接重组,构建pcDNA3.1(+)-ACE2真核表达质粒,经HindⅢ、XhoⅠ限制性内切酶双酶切及DNA序列测序分析等方法验证后,通过Lipofectamine 3000脂质体介导转染至CHO细胞,Western blot法检验ACE2基因在蛋白质水平上的表达。结果显示:RT-PCR扩增出大小约为2 200 bp特异ACE2基因片段,连接获得的pcDNA3.1(+)-ACE2重组体经HindⅢ、XhoⅠ酶切后分别出现约2 200 bp和5 000 bp片段,测序分析与Gen Bank上公布的结果完全一致,表明成功克隆了重组pcDNA3.1(+)-ACE2真核表达质粒,Western blot检测显示该pcDNA3.1(+)-ACE2能在CHO细胞中表达。本研究成功构建了pcDNA3.1(+)-ACE2真核表达质粒,并证实其能在CHO中表达,为后续探究ACE2蛋白活性及其作用的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 血管紧张素转化酶2(ace 2) 真核表达质粒 转染 CHO细胞
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血管紧张素转换酶2(ACE2)基因在家猫不同组织中的表达差异分析
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作者 昂艳芬 汪娅媛 +3 位作者 严涵 田仰清 张学峰 严玉霖 《云南农业大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期228-233,共6页
【目的】分析血管紧张素转换酶2(ACE2)基因在家猫不同组织中的相对表达量及特定组织中的蛋白定位,为后续以ACE2基因为受体的疫病防控提供理论基础。【方法】采用qRT-PCR技术检测ACE2基因在家猫8个组织(心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、... 【目的】分析血管紧张素转换酶2(ACE2)基因在家猫不同组织中的相对表达量及特定组织中的蛋白定位,为后续以ACE2基因为受体的疫病防控提供理论基础。【方法】采用qRT-PCR技术检测ACE2基因在家猫8个组织(心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胰腺、小肠和肠系膜淋巴结)中的mRNA相对表达水平,并利用免疫组织化学法检测家猫肾脏、胰腺和小肠中ACE2蛋白的组织定位。【结果】ACE2基因在家猫肾脏、胰腺和小肠组织的表达量极显著高于肺脏组织(P<0.01),在心脏、脾脏和肠系膜淋巴结组织的表达量极显著低于肺脏组织(P<0.01);不同性别家猫的ACE2表达量存在一定差异,但不显著;ACE2蛋白在小肠组织中的表达量最高,其次是肾脏,在胰腺的表达量最低。【结论】家猫ACE2基因在各组织中广泛分布且存在一定的表达差异。 展开更多
关键词 血管紧张素转换酶2 家猫 组织 表达
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白羽肉鸡血管紧张素转换酶2(ACE2)全基因克隆及序列信息分析 被引量:3
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作者 纪晓霞 李帅 +2 位作者 许濛 杨博 张源淑 《畜牧与兽医》 北大核心 2020年第3期38-44,共7页
血管紧张素转换酶2(Angiotensin converting enzyme 2,ACE2)作为血管紧张素系统(Renin-Angiotensin System,RAS)的重要一员,对鸡ACE2的研究尚没有开展。本研究以白羽肉鸡为研究对象,从白羽肉鸡空肠组织中扩增出ACE2基因编码区的特异性片... 血管紧张素转换酶2(Angiotensin converting enzyme 2,ACE2)作为血管紧张素系统(Renin-Angiotensin System,RAS)的重要一员,对鸡ACE2的研究尚没有开展。本研究以白羽肉鸡为研究对象,从白羽肉鸡空肠组织中扩增出ACE2基因编码区的特异性片段,TA克隆到pMD-19T载体并转到大肠杆菌DH5α感受态细胞,对生长出的单菌落进行蓝白斑筛选、菌液PCR、酶切验证后测序,对所得序列进行了生物信息学分析。结果:本研究明确了ACE2在白羽肉鸡体内有存在,分布表达有组织特异性,在消化系统及肾脏有较高表达。并且首次成功克隆了白羽肉鸡ACE2全基因序列,共包括2,444个核苷酸,编码808个氨基酸残基,同源性及遗传进化结果一致。该基因编码ACE2蛋白属不稳定、亲水性蛋白,蛋白信号肽序列位于第1-17aa之间,蛋白跨膜螺旋预测为I型跨膜蛋白。研究所得序列已上传GenBank(基因序列号为MK560199),为ACE2在肉鸡及禽类方面的研究提供了基础资料。 展开更多
关键词 白羽肉鸡 ace2 表达定位 基因克隆 生物信息学
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SARS病毒受体ACE2的克隆、原核表达及其功能区鉴定 被引量:2
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作者 杨国良 费小战 +1 位作者 陈焕春 郭爱珍 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期118-122,共5页
ACE2(angiotensin—converting enzyme 2,ACE2)是SARS冠状病毒(severe acute respiratory syndrome associated coronavirus,SARS-CoV)的主要受体。此研究旨在鉴定ACE2的SARS-CoV受体功能区,为进一步阐明SARS-CoV与细胞间的相互... ACE2(angiotensin—converting enzyme 2,ACE2)是SARS冠状病毒(severe acute respiratory syndrome associated coronavirus,SARS-CoV)的主要受体。此研究旨在鉴定ACE2的SARS-CoV受体功能区,为进一步阐明SARS-CoV与细胞间的相互作用机制及研制抗病毒药物等提供理论依据。利用RT—PCR从Vero-E6细胞的mRNA中分两段扩增ACE2基因,其中N端片段ACE2A1-367(102~1210nt)不包括ACE2的酶活性位点(1223~1237nt,或374~378aa),而C端片段ACE28335-805(1101~2524nt)包括ACE2的酶活性位点。扩增片段克隆入pMD-18T,并进行测序鉴定。进一步构建与GST基因融合表达的原核表达质粒pGEX—ACE2A与pGEX—ACE2B,IPTG诱导表达。表达的融合蛋白分子量为65kD和77kD,主要以包涵体形式存在。Western blot证实表达产物具有免疫学活性。将纯化的包涵体蛋白质复性后进行Western blot分析,证实pGEX—ACE2A表达的蛋白(~65kD)能与SARS-CoV S1蛋白特异结合,而pGEX—ACE2B表达的蛋白(~77kD)不能与S1蛋白结合。结果表明,ACE2的受体活性与酶活性位点无关,受体功能区在ACE2N端367个氨基酸内。 展开更多
关键词 SARS岛V ace2 受体 克隆 表达 功能区
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SARS-CoV-2刺突蛋白受体结合域的可溶性表达及功能鉴定
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作者 杨洵 金佳佩 +2 位作者 马家秀 卢卉双 蔡雪飞 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第8期937-942,共6页
目的可溶性表达严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARSCoV-2)刺突蛋白受体结合域(recepter binding domain,RBD),并对其进行功能鉴定。方法利用生物信息软件对SARS-CoV-2刺突蛋白RBD区DNA... 目的可溶性表达严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARSCoV-2)刺突蛋白受体结合域(recepter binding domain,RBD),并对其进行功能鉴定。方法利用生物信息软件对SARS-CoV-2刺突蛋白RBD区DNA序列中的稀有密码子进行替换优化。人工合成优化的RBD DNA全序列,插入pGEX 6P-1原核表达载体,构建重组表达质粒pGEX 6P-1/RBD,转化大肠埃希菌Rosetta感受态细胞,IPTG诱导表达重组RBD蛋白,并进行亲和层析纯化。采用SDS-PAGE、Western blot、Pull-down试验鉴定重组RBD蛋白,并应用其检测康复期患者的血清中和抗体。结果优化后RBD基因序列在大肠埃希菌中的表达难易值(CAI)由0.215提高至1.0;重组表达质粒pGEX 6P-1/RBD经菌落PCR、双酶切及测序鉴定证明构建正确;获得的重组RBD蛋白为相对分子质量约60000的可溶性蛋白,纯度约为82%,能与血管紧张素转换酶2(angiotensin-converting enzyme 2,ACE2)发生特异性结合,并能测定康复期患者血清中的特异性抗体,且灵敏度较好。结论成功获得了可溶性的重组RBD蛋白,该重组蛋白具备与人ACE2受体结合的功能,可用于中和抗体测定和疫苗接种后的效果评估。 展开更多
关键词 严重急性呼吸综合征冠状病毒2 刺突蛋白 受体结合域 血管紧张素转换酶2 原核表达
原文传递
猫血管紧张素转换酶2的三维结构模拟与真核表达 被引量:1
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作者 郭红燕 王冲 +2 位作者 郭爱珍 颜邦芬 陈焕春 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期6-10,共5页
家猫能自然及人工感染SARS病毒,本研究旨在探讨家猫ACE2潜在的SARS病毒受体功能。以人血管紧张素转换酶2(ACE2)序列为模板,用同源模建法模拟了家猫ACE2的三维空间结构,发现家猫ACE2与人ACE2结构十分相似,其结合严重急性呼吸综合症(SARS... 家猫能自然及人工感染SARS病毒,本研究旨在探讨家猫ACE2潜在的SARS病毒受体功能。以人血管紧张素转换酶2(ACE2)序列为模板,用同源模建法模拟了家猫ACE2的三维空间结构,发现家猫ACE2与人ACE2结构十分相似,其结合严重急性呼吸综合症(SARS)病毒囊膜纤突(S)蛋白的关键氨基酸的同源性很高(15/18)。将家猫血管紧张素转换酶2基因N端1-367 aa对应的基因片段及其跨膜区克隆到真核表达载体pcDNA3.1/myc-his(+)B中,构建了表达质粒pcDNA-mA367,转染HeLa细胞,间接免疫荧光检测表明fACE2的N端片段已在细胞膜上成功表达。 展开更多
关键词 猫血管紧张素转换酶2(face2) 家猫 SARS-COV 受体 真核表达 结构模拟
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ACE2:心血管疾病潜在的功能基因和生物标志物
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作者 刘丹 于汇民 《循证医学》 CSCD 2014年第6期376-380,共5页
肾素-血管紧张素-醛固酮系统在心血管疾病的发生发展中起着重要作用,近来发现的肾素-血管紧张素-醛固酮系统新成员血管紧张素转化酶2在心血管组织中普遍存在,通过拮抗血管紧张素转化酶参与心血管功能调控。循环血管紧张素转化酶2活性水... 肾素-血管紧张素-醛固酮系统在心血管疾病的发生发展中起着重要作用,近来发现的肾素-血管紧张素-醛固酮系统新成员血管紧张素转化酶2在心血管组织中普遍存在,通过拮抗血管紧张素转化酶参与心血管功能调控。循环血管紧张素转化酶2活性水平和组织血管紧张素转化酶2表达水平均与心血管疾病密切相关,血管紧张素转化酶2遗传多态性对心血管疾病的发生发展及治疗都有着重要的影响,血管紧张素转化酶2作为潜在的功能基因和生物标志物,将为心血管疾病的防治提供新的靶点。 展开更多
关键词 血管紧张素转化酶2 心血管疾病 多态性 基因表达 生物标志物
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