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人血红蛋白及其片段体内外抗菌活性研究 被引量:10
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作者 周新娥 欧阳运薇 +7 位作者 潘小玲 何跃东 李恒 石艳娥 彭媛媛 赵媛 黄宁 《四川大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期355-359,共5页
目的分离人血红蛋白及其片段,进行体外抗菌活性分析和比较,并对血红蛋白体内抗菌活性进行初步探讨。方法利用阳离子交换及分子筛分离人血红蛋白α、β链;溴化氰法裂解α/β链,反相高效液相色谱技术纯化其片段;琼脂糖弥散法抑菌实验检测... 目的分离人血红蛋白及其片段,进行体外抗菌活性分析和比较,并对血红蛋白体内抗菌活性进行初步探讨。方法利用阳离子交换及分子筛分离人血红蛋白α、β链;溴化氰法裂解α/β链,反相高效液相色谱技术纯化其片段;琼脂糖弥散法抑菌实验检测抗菌活性;构建大鼠大肠埃希菌阴道感染模型,设立实验组(血红蛋白组)和对照组,观察各组大鼠阴道组织形态学变化。结果体外抑菌实验示:血红蛋白、α/β链及其片段有抑菌作用,但其主要针对的是革兰阴性菌大肠埃希菌;而且除α1~32的抑菌作用较弱外,血红蛋白、α/β链及其片段三者抑菌活性比较,其效能基本相似。大鼠体内抗菌实验示:与基质对照组(感染后不治疗)比,血红蛋白组阴道复层扁平上皮表层较平滑,固有层内炎细胞浸润明显减少,且组织内充血明显减轻。结论人血红蛋白及其片段具有体外抑菌活性,而且血红蛋白在大鼠体内能减轻大肠埃希菌阴道感染炎症程度。 展开更多
关键词 人血红蛋白 片段 抑菌 大鼠 大肠埃希菌性阴道感染
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LPS刺激对人结肠癌SW480、肺癌A549细胞HMGB1以及HBD-1表达的影响 被引量:2
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作者 陈善泽 +7 位作者 黄宁 吴桂 曹玥 范波 李夏 赵静 韩琴 高祥 《西部医学》 2010年第5期785-787,共3页
目的观察脂多糖(LPS)刺激对SW480、A549细胞HMGB1、HBD-1表达的影响。方法以浓度为5、10、50和100 ng/μl LPS刺激SW480、A549细胞24 h后,提取细胞RNA,并用RT-PCR法检测HMGB1以及HBD-1基因mRNA的表达水平。结果SW480以及A549细胞,HMGB1... 目的观察脂多糖(LPS)刺激对SW480、A549细胞HMGB1、HBD-1表达的影响。方法以浓度为5、10、50和100 ng/μl LPS刺激SW480、A549细胞24 h后,提取细胞RNA,并用RT-PCR法检测HMGB1以及HBD-1基因mRNA的表达水平。结果SW480以及A549细胞,HMGB1以及HBD-1均有较高的表达。在SW480细胞中,不同的LPS刺激浓度下,5ng/μl LPS即可上调HMGB1基因mRNA的表达,但其表达量并不随LPS浓度的增高而有所增加;而同样刺激条件下HBD-1基因mRNA表达水平未见明显变化(P>0.05)。在A549细胞中,不同的LPS刺激浓度下HMGB1以及HBD-1基因mRNA表达量未见明显变化(P>0.05)。结论HMGB1及HBD-1固有表达于肠道及呼吸道上皮细胞。LPS能上调SW480细胞HMGB1的表达,其表达量无浓度依赖性,但LPS不能上调HBD-1的表达。在A549细胞,LPS不能诱导HMGB1以及HBD-1的表达。 展开更多
关键词 脂多糖 SW480细胞 A549细胞 HMGB1
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利用同源重组构建人肺鳞状细胞癌旁组织的酵母双杂交cDNA文库 被引量:1
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作者 彭媛媛 +7 位作者 石艳娥 赵媛 陈军利 王薇 冯云 吴琦 王伯瑶 黄宁 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2008年第28期5490-5493,共4页
背景:酵母双杂交技术是目前应用最成功的研究蛋白质相互作用的技术平台。目的:运用SMART(switching mechanism at5′end of RNA transc-ript)技术构建人肺鳞状细胞癌旁组织的酵母双杂交cDNA文库。设计、时间及地点:单一样本观察,于2006-... 背景:酵母双杂交技术是目前应用最成功的研究蛋白质相互作用的技术平台。目的:运用SMART(switching mechanism at5′end of RNA transc-ript)技术构建人肺鳞状细胞癌旁组织的酵母双杂交cDNA文库。设计、时间及地点:单一样本观察,于2006-07/2007-01在四川大学华西基础医学与法医学院病理生理学感染免疫实验室完成。材料:人肺鳞状细胞癌旁组织由四川大学华西医学中心附属第一医院胸外科提供。方法:运用SMART技术,以纯化的Poly(A)+RNA为模板,用Powerscript逆转录酶进行转录,并在mRNA的5’末端添加一段5’-oligo作为延伸后的模板,从而富集全长cDNA。纯化的双链cDNA与线性化pGADT7-Rec质粒载体共同转化酵母菌株感受态AH109,经胞内同源重组形成环状文库质粒。应用营养缺陷的方法在SD/-Leu平板上筛选并收集所有克隆从而获得酵母双杂交的人肺鳞状细胞癌旁组织cDNA文库。主要观察指标:采用琼脂糖凝胶电泳观察人肺鳞状细胞癌旁组织的cDNA文库构建结果,并进行文库容量及多态性鉴定。结果:①总RNA和mRNA纯度较好,比较完整。②双链cDNA文库大小介于0.5~3kb之间。③共获得1.2×106转化子,重组子不同插入片断大小在0.3~2kb之间,文库具有较好的多样性。结论:在酵母菌株AH109成功构建了用于酵母双杂交的人肺鳞状细胞癌旁组织cDNA文库。 展开更多
关键词 SMART技术 CDNA文库 同源重组 酵母双杂交
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血红蛋白抗大鼠大肠埃希菌阴道感染研究 被引量:2
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作者 周新娥 欧阳运薇 +5 位作者 潘小玲 何跃东 李恒 黄宁 吴琦 《四川生理科学杂志》 2010年第1期1-3,共3页
目的:探讨血红蛋白在大鼠体内是否具有抗菌抑炎作用。方法:构建大鼠阴道感染模型后随机设立实验组和对照组,阴道给予血红蛋白后观察子宫宫颈阴道脏器指数,并采用组织病理切片检测血红蛋白治疗前后各组指标变化。结果:子宫宫颈阴道脏器... 目的:探讨血红蛋白在大鼠体内是否具有抗菌抑炎作用。方法:构建大鼠阴道感染模型后随机设立实验组和对照组,阴道给予血红蛋白后观察子宫宫颈阴道脏器指数,并采用组织病理切片检测血红蛋白治疗前后各组指标变化。结果:子宫宫颈阴道脏器指数经统计学分析示血红蛋白组、模型对照组间无差异(P>0.05),基质对照组与前两组比均有显著性差异(P<0.05),基质对照组的脏器指数增加明显。结论:血红蛋白能减轻大鼠大肠埃希菌阴道感染炎症病变程度。 展开更多
关键词 血红蛋白 抗菌抑炎 大肠埃希菌性阴道炎
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小鼠HMGN2干扰质粒psilence-cmv-4.1-HMGN2构建及体内干扰效果鉴定 被引量:2
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作者 韩琴 +7 位作者 赵静 吴桂 曹玥 范波 李夏 陈善泽 高祥 黄宁 《四川生理科学杂志》 2010年第1期5-8,共4页
目的:构建小鼠HMGN2干扰质粒psilence-cmv-4.1-HMGN2,以进一步明确HMGN2的生物学作用。方法:将HMGN2-shRNA片段退火后与小鼠psilence-cmv-4.1链接,饲养孕小鼠,尾静脉注射法导入shRNA表达质粒,提取8.5d胚胎RNA,用RT-PCR检测胎HMGN2的表... 目的:构建小鼠HMGN2干扰质粒psilence-cmv-4.1-HMGN2,以进一步明确HMGN2的生物学作用。方法:将HMGN2-shRNA片段退火后与小鼠psilence-cmv-4.1链接,饲养孕小鼠,尾静脉注射法导入shRNA表达质粒,提取8.5d胚胎RNA,用RT-PCR检测胎HMGN2的表达量进行鉴定。结果:测序结果显示psilence-cmv-4.1-HMGN2干扰质粒构建成功,RT-PCR结果显示HMGN2在8.5d胎儿表达较高广泛表达,且Psilencer-cmv-4.1-HMGN2尾静脉注射后有明显的抑制效果。结论:成功构建对8.5d胎鼠HMGN2基因具有显著干扰效率的psilencer-4.1-HMGN2干扰质粒,为进一步研究HMGN2基因的功能打下了基础。 展开更多
关键词 HMGN2 Psilencer-cmv-4.1-HMGN2
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HMGN2对大肠埃希氏菌黏附Hela细胞的影响 被引量:1
6
作者 李夏 +7 位作者 吴桂 曹玥 范波 赵静 韩琴 陈善泽 高祥 黄宁 《西部医学》 2010年第5期788-792,共5页
目的探讨HMGN2对大肠埃希氏菌黏附Hela细胞的影响。方法采用Hela细胞模型,光镜以及扫描电镜观察大肠埃希氏菌ATCC25922黏附Hela细胞模型的建立。用以下三组不同方式,观察梯度抑菌浓度下(分别为5、10、15μg/ml)HMGN2对细菌黏附的影响。... 目的探讨HMGN2对大肠埃希氏菌黏附Hela细胞的影响。方法采用Hela细胞模型,光镜以及扫描电镜观察大肠埃希氏菌ATCC25922黏附Hela细胞模型的建立。用以下三组不同方式,观察梯度抑菌浓度下(分别为5、10、15μg/ml)HMGN2对细菌黏附的影响。黏附抑制组:HMGN2、细菌、细胞共同孵育1小时;干扰模型组:细菌、细胞孵育1小时后,PBS洗去未黏附细菌,再加入HMGN2孵育2小时;细菌预处理组:HMGN2、细菌孵育2小时,离心洗去HMGN2,收集细菌,所得细菌再与细胞孵育1小时。用平板菌落计数法观测细胞内、外活菌数,并计算黏附指数以及黏附抑制率。结果光镜及扫描电镜可见细菌黏附于细胞表面,黏附模型构建成功。三组的结果均提示:在HMGN2梯度抑菌浓度下,细菌的黏附指数随着HMGN2的浓度的升高而减小;黏附抑制率则随着其浓度的升高而逐渐增大(P<0.05)。结论抑菌浓度下的HMGN2:对大肠埃希氏菌ATCC25922黏附Hela细胞有明显的抑制作用;可减低已经黏附于细胞表面的细菌的黏附能力;可能直接作用于细菌,导致其黏附能力降低。 展开更多
关键词 HMGN2 细菌 黏附 HELA细胞
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胚胎及生后不同发育时期小鼠肺β-防御素1的表达
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作者 赵静 +7 位作者 黄宁 韩琴 吴桂 曹玥 李夏 范波 陈善泽 高翔 《西部医学》 2010年第10期1793-1795,共3页
目的研究小鼠在胚胎及生后发育不同阶段肺β-防御素1(mBD-1)的表达。方法孕鼠随机分成2组:对照组和实验组。实验组于胚胎提取及出生前24h腹腔注射LPS,对照组以等剂量生理盐水代替。各组分别于14.5、17.5 dpc(days post coition,交配后天... 目的研究小鼠在胚胎及生后发育不同阶段肺β-防御素1(mBD-1)的表达。方法孕鼠随机分成2组:对照组和实验组。实验组于胚胎提取及出生前24h腹腔注射LPS,对照组以等剂量生理盐水代替。各组分别于14.5、17.5 dpc(days post coition,交配后天数)、生后0d、生后4d取肺组织进行石蜡包埋、连续切片,并进行mBD-1的免疫组化染色,用图像分析系统进行定量分析,并进行统计学处理。结果对照小鼠从14.5d胚胎至出生后4 d各时期肺组织中均存在mBD-1阳性表达,且呈增加趋势(P<0.05);而同一时间点实验组阳性表达略高于对照组,但与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论本实验表明不同发育阶段小鼠肺组织均表达mBD-1,且其表达呈上升趋势,提示该分子可能是肺组织天然抵抗微生物感染的一个重要分子基础。 展开更多
关键词 mBD-1 小鼠 发育
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兔胸腺HMGN2的分离纯化鉴定 被引量:1
8
作者 石艳娥 李恒 +4 位作者 彭媛媛 周新娥 赵媛 黄宁 《四川生理科学杂志》 2008年第1期1-2,共2页
目的:分离纯化鉴定兔高迁移率非组蛋白N2(High mobility group chromosomal protein N2,HMGN2)。方法:利用液氮研磨和5%高氯酸从新鲜兔胸腺组织获得酸溶性萃取物,经反相高效液相色谱(RP-HPLC)分离得到HMGN2,经过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳... 目的:分离纯化鉴定兔高迁移率非组蛋白N2(High mobility group chromosomal protein N2,HMGN2)。方法:利用液氮研磨和5%高氯酸从新鲜兔胸腺组织获得酸溶性萃取物,经反相高效液相色谱(RP-HPLC)分离得到HMGN2,经过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和Western-blotting对HMGN2进行分子量测定和特异性鉴定。并利用琼脂糖弥散抑菌实验对其杀菌活性进行鉴定。结果:利用上述方法分离纯化出高纯度的兔HMGN2。对大肠埃希菌临床分离株54080、大肠埃希菌ATCC25922有明显杀菌活性。结论:建立简单分离高纯度的HMGN2的方法。 展开更多
关键词 兔胸腺 HMGN2 分离
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防御素HNP-3成熟肽酵母双杂交诱饵质粒的构建及自激活和毒性检测 被引量:1
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作者 马生秀 +8 位作者 罗林 彭媛媛 路会侠 张敏 熊文碧 冯云 吴琦 王伯瑶 黄宁 《航天医学与医学工程》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期151-153,共3页
目的用含防御素HNP-3成熟肽cDNA片段构建酵母双杂交诱饵质粒,进行自激活和毒性检测。方法培养HL-60细胞,提取RNA,RT-PCR扩增含防御素HNP-3成熟肽的cDNA片段,克隆入pBlue-script-SK-II质粒,经测序鉴定后,再亚克隆到人酵母双杂交诱饵载体p... 目的用含防御素HNP-3成熟肽cDNA片段构建酵母双杂交诱饵质粒,进行自激活和毒性检测。方法培养HL-60细胞,提取RNA,RT-PCR扩增含防御素HNP-3成熟肽的cDNA片段,克隆入pBlue-script-SK-II质粒,经测序鉴定后,再亚克隆到人酵母双杂交诱饵载体pGBKT7中,PCR及测序鉴定。重组诱饵质粒用缺陷培养基筛选方法进行自激活和毒性检测。结果构建的重组质粒pBluescript-SK-II-HNP-3,经测序鉴定,插入片段为HNP-3成熟肽的cDNA序列。亚克隆构建的重组诱饵质pGBKT7-HNP-3,测序鉴定表明其插入目的基因序列无误。重组诱饵质粒自激活和毒性检测显示无自激活现象发生,对酵母细胞AH109无毒性作用。结论成功构建了防御素HNP-3成熟肽的酵母双杂交诱饵载体;为用酵母双杂交技术研究与防御素HNP-3成熟肽相互作用蛋白质打下了基础。 展开更多
关键词 防御素 HNP-3 成熟肽 酵母双杂交
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小鼠胚胎神经系统发育过程中mBD-4的表达 被引量:1
10
作者 韩琴 +7 位作者 黄宁 赵静 吴桂 曹玥 李夏 范波 陈善泽 高祥 《西部医学》 2010年第9期1590-1593,共4页
目的观察β-防御素4(mouseβdefensin 4,mBD-4)在小鼠胚胎神经系统发育不同时期的基因表达及脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导孕鼠后mBD-4在胚鼠神经系统的的表达情况。方法孕鼠分为LPS组(n=10)和正常对照组(n=10),取不同时期(5.5、... 目的观察β-防御素4(mouseβdefensin 4,mBD-4)在小鼠胚胎神经系统发育不同时期的基因表达及脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导孕鼠后mBD-4在胚鼠神经系统的的表达情况。方法孕鼠分为LPS组(n=10)和正常对照组(n=10),取不同时期(5.5、8.5、11.5、17.5天)小鼠胚胎,LPS组于胚胎提取1天前母鼠腹腔注射LPS,正常对照组同时间注射同量的生理盐水,胚胎取出后石蜡包埋切片,免疫组化方法和RT-PCR技术检测mBD-4的阳性表达。结果 mBD-4在小鼠胚胎早期第5.5天的神经组织中未见固有表达,到胚胎第8.5天开始有少量固有表达,到胚胎中晚期,固有表达含量增多;LPS组中胚胎神经组织中自5.5天有阳性表达,且随着胚胎的发育其阳性表达越强。结论①mBD-4在小鼠胚胎神经系统中固有表达,在胚胎第8.5天有少量表达,且随着神经系统的发育成熟,mBD-4在其神经组织中表达含量越多。③mBD-4在LPS的诱导下,其在神经组织中表达明显增高。 展开更多
关键词 Β-防御素 胚胎 小鼠 LPS
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HMGN2对肺炎克雷伯氏杆菌耐药性的影响
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作者 陈军利 王薇 +8 位作者 黄宁 陈善泽 李夏 吴桂 曹玥 范波 赵静 韩琴 《西部医学》 2009年第4期539-542,共4页
目的探讨HMGN2对肺炎克雷伯氏杆菌耐药性的影响。方法分离、纯化并鉴定兔胸腺组织HMGN2。用质粒提取试剂盒提取耐药肺炎克雷伯杆菌中的质粒pMG252,PCR扩增其耐药基因qnrA;凝胶阻滞实验检测HMGN2与耐药质粒pMG252及qnrA基因结合;用不同... 目的探讨HMGN2对肺炎克雷伯氏杆菌耐药性的影响。方法分离、纯化并鉴定兔胸腺组织HMGN2。用质粒提取试剂盒提取耐药肺炎克雷伯杆菌中的质粒pMG252,PCR扩增其耐药基因qnrA;凝胶阻滞实验检测HMGN2与耐药质粒pMG252及qnrA基因结合;用不同浓度的HMGN2刺激培养肺炎克雷伯氏杆菌,然后用试管二倍稀释法测定环丙沙星对其MIC值的改变,微量法测定细菌的生长曲线,检测HMGN2对耐药菌株耐药性的逆转效果;将重组HMGN2及耐药质粒pMG252转化到大肠杆菌DH5α中,检测重组HMGN2对细菌耐药性的影响。结果HMGN2可明显阻滞pMG252质粒及qnrA基因的泳动速率,且随HMGN2浓度增加,qnrA基因的泳动速率逐渐减慢;15μg/ml HMGN2与细菌共孵育后,环丙沙星对耐药肺炎克雷伯氏杆菌的MIC值明显下降,且该耐药株的生长与对照组和低剂量组相比明显的受到抑制;pET-32a-c(+)-HMGN2重组表达质粒可时环丙沙星对大肠杆菌DH5α的MIC值明显小于其对照组,下降到其1/16。结论HMGN2能有效逆转含耐药质粒pMG252的肺炎克雷伯氏杆菌等对喹诺酮类抗生素的耐药性。 展开更多
关键词 HMGN2 耐药性 逆转 耐药性逆转
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HMGN2对大肠埃希氏菌TA系统的作用
12
作者 王薇 陈军利 +8 位作者 黄宁 陈善泽 李夏 吴桂 曹玥 范波 赵静 韩琴 《西部医学》 2009年第4期533-535,共3页
目的研究HMGN2对大肠埃希氏菌TA系统作用。方法用5%高氯酸萃取兔胸腺组织,通过反相高效液相色谱进一步分离纯化蛋白,用Tricine-SDS-PAGE、AU-PAGE和Dot-blot进行鉴定。采用凝胶迁移阻滞试验(EMSA)检测HMGN2对大肠埃希氏菌TA系统的结合作... 目的研究HMGN2对大肠埃希氏菌TA系统作用。方法用5%高氯酸萃取兔胸腺组织,通过反相高效液相色谱进一步分离纯化蛋白,用Tricine-SDS-PAGE、AU-PAGE和Dot-blot进行鉴定。采用凝胶迁移阻滞试验(EMSA)检测HMGN2对大肠埃希氏菌TA系统的结合作用;平板菌落记数法检测TA系统激活或非激活条件下,菌体过表达重组HMGN2和对照组对细菌存活百分率的影响。结果HMGN2可阻滞mazEF基因的泳动速率,且随HMGN2浓度增加,阻滞作用增强。利福平激活TA系统,菌体过表达重组HMGN2后,与对照组比较细菌存活量减少约30%,有统计学差异。而头孢哌酮不能激活TA系统,过表达重组HMGN2组和空质粒组CFU%分别为70.2%、68.9%,两者无明显差异。结论HMGN2可加强mazEF系统介导的细菌程序性死亡;HMGN2对TA系统的作用也可能是其抗大肠埃希氏菌作用的机制之一。 展开更多
关键词 HMGN2 TA系统 抗菌功能
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腹腔注射乳化异氟醚对大鼠气道上皮组织β防御素mRNA表达的影响
13
作者 罗林 +1 位作者 黄宁 朱涛 《航天医学与医学工程》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期25-30,共6页
目的本研究旨在探讨腹腔注射乳化异氟醚对大鼠气道上皮细胞中β防御素BD-1、BD-2以及促炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-8 mRNA表达水平的影响。方法健康清洁级SD大鼠36只随机分成6组,分别为A^F组。A组经腹腔注射生理盐水,B组经腹腔注射30%... 目的本研究旨在探讨腹腔注射乳化异氟醚对大鼠气道上皮细胞中β防御素BD-1、BD-2以及促炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-8 mRNA表达水平的影响。方法健康清洁级SD大鼠36只随机分成6组,分别为A^F组。A组经腹腔注射生理盐水,B组经腹腔注射30%脂肪乳,C^F组分别经腹腔注射0.25、0.5、1.0、1.5倍ED50量8%乳化异氟醚。各组均于注药后1 h处死大鼠,取其气管黏膜组织。从每个组收获的组织中检测β防御素BD-1、BD-2和促炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-8的mRNA表达水平。结果在腹腔注射乳化异氟醚的大鼠气管上皮组织中除BD-1和IL-8 mRNA无变化外,BD-2和促炎症因子TNF-α,IL-1βmRNA表达水平均增加,且随乳化异氟醚用量的增加而增强。结论本实验说明腹腔注射乳化异氟醚能在转录水平上调节大鼠气道上皮组织β防御素及一些促炎症因子mRNA的表达水平,且乳化异氟醚以剂量依赖的方式显著增加大鼠气道上皮细胞的β防御素BD-2以及这些促炎症因子mRNA的表达水平。 展开更多
关键词 乳化异氟醚 防御素 肿瘤坏死因子 白细胞介素
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用CM Sepharose FF柱分离人血红蛋白α、β链
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作者 周新娥 李恒 +3 位作者 熊文碧 黄宁 王伯瑶 《四川生理科学杂志》 2006年第3期99-101,共3页
目的:建立分离纯化血红蛋白α、β链方法。方法:对二氯汞苯甲酸(CPMB)处理的血红蛋白经CM Sepharose FF柱分离出结合有CPMB的α、β链,然后分别过Bio-gel p6柱除去α、β链上结合的CPMB。Tricine SDS-PAGE检测蛋白分子量、纯度,采用琼... 目的:建立分离纯化血红蛋白α、β链方法。方法:对二氯汞苯甲酸(CPMB)处理的血红蛋白经CM Sepharose FF柱分离出结合有CPMB的α、β链,然后分别过Bio-gel p6柱除去α、β链上结合的CPMB。Tricine SDS-PAGE检测蛋白分子量、纯度,采用琼脂糖弥散法监测抑菌效应。结果:该法成功分离出具较高纯度的血红蛋白α、β链,二者均具有杀大肠杆菌活性。结论:本分离程序简单、经济,可得到高纯度的天然α、β链,有助于对其后续的进一步研究。 展开更多
关键词 血红蛋白 对二氯汞苯甲酸 分离 杀菌
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用于酵母双杂交的α-防御素HNP-1成熟肽重组诱饵载体的构建和鉴定
15
作者 彭媛媛 +4 位作者 罗林 冯云 吴琦 王伯瑶 黄宁 《四川生理科学杂志》 2007年第1期11-14,共4页
目的:构建和转化人α-防御素HNP-1成熟肽的酵母诱饵重组质粒,为通过酵母双杂交研究其相互作用蛋白分子打下基础。方法:用RT-PCR扩增HNP-1成熟肽基因,将该基因片断与腺病毒载体pBluescript-SK-II定向重组;用酶切和测序鉴定重组质粒;回收... 目的:构建和转化人α-防御素HNP-1成熟肽的酵母诱饵重组质粒,为通过酵母双杂交研究其相互作用蛋白分子打下基础。方法:用RT-PCR扩增HNP-1成熟肽基因,将该基因片断与腺病毒载体pBluescript-SK-II定向重组;用酶切和测序鉴定重组质粒;回收目的片断,将其连接入酵母表达载体pGBKT7,构建重组诱饵表达质粒pGBKT7-HNP-1,测序鉴定。缺陷培养方法检测重组诱饵载体有无毒性和自激活作用。结果序列分析表明HNP-1成熟肽重组诱饵表达质粒构建成功,重组诱饵表达质粒对酵母细胞无毒性作用,无自激活效应发生。结论构建用于酵母双杂交的α-防御素HNP-1成熟肽重组诱饵载体,为找出与人α-防御素HNP-1成熟肽相互作用蛋白分子打下了基础。 展开更多
关键词 Α-防御素 HNP-1 成熟肽 酵母双杂交
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HNP-3相互作用蛋白的酵母双杂交筛选
16
作者 张伟义 +1 位作者 黄宁 朱涛 《重庆医学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第33期3335-3339,I0001,共6页
目的筛选胎肾上腺cDNA文库中与人中性粒细胞多肽(HNP-3)成熟肽具有相互作用的蛋白分子。方法通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)成功获得HNP-3成熟肽基因,并将其插入酵母表达载体pGBKT7中构建诱饵质粒,转染酵母细胞AH109,而后经缺陷性培... 目的筛选胎肾上腺cDNA文库中与人中性粒细胞多肽(HNP-3)成熟肽具有相互作用的蛋白分子。方法通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)成功获得HNP-3成熟肽基因,并将其插入酵母表达载体pGBKT7中构建诱饵质粒,转染酵母细胞AH109,而后经缺陷性培养基上培养并观察pGBKT7-HNP-3在AH109中的表达情况,检测诱饵载体有无毒性作用和自激活功能。同时收集胎肾上腺,提取RNA,通过自我检测、分析、报告技术(SMART技术)制备人胎肾上腺cDNA文库。并采用Match-maker LexA酵母双杂交系统从胎肾上腺cDNA文库中筛选与HNP-3成熟肽相互作用的蛋白。最后通过PCR筛选获得阳性克隆并测序,通过回转实验,谷胱甘肽巯基转移酶沉降技术(GST pull down)以及免疫共沉淀实验再次验证二者的相互作用关系。结果成功构建诱饵质粒pGBK-T7-HNP-3以及胎肾上腺cDNA文库并在酵母细胞中正确表达,筛选获得HNP-3成熟肽相互作用的蛋白——促肾上腺皮质激素受体(ACTH-R)2、钙粘着蛋白关联蛋白1(CTNNB1)、低密度脂蛋白受体相关蛋白5(LRP5)、成对样同源域转录因子2(PITX2)等。最终选定ACTH-R作为主要研究对象,且经GST pull down以及免疫共沉淀实验获得了证实二者间具有相互作用的相应的条带。结论从胎肾上腺cDNA文库中成功筛选得到α防御素HNP-3成熟肽相互作用蛋白——ACTH-R。 展开更多
关键词 α防御素 双杂交系统技术 受体 促肾上腺皮质激素 人α 防御素3 胎肾上腺cDNA文库
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HMGN2基因干扰质粒构建及干扰效率测定
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作者 赵静 +7 位作者 韩琴 吴桂 曹玥 李夏 范波 陈善泽 高祥 黄宁 《四川生理科学杂志》 2010年第2期54-56,共3页
目的:构建HMGN2基因的干扰质粒,为深入研究HMGN2基因在信号通路中的作用提供有效手段。方法:根据文献选择两个HMGN2基因的干扰位点,合成两个干扰片段定向克隆到psilencer-4.1的干扰载体并测序验证。将干扰质粒转染至A549细胞,并通过检测... 目的:构建HMGN2基因的干扰质粒,为深入研究HMGN2基因在信号通路中的作用提供有效手段。方法:根据文献选择两个HMGN2基因的干扰位点,合成两个干扰片段定向克隆到psilencer-4.1的干扰载体并测序验证。将干扰质粒转染至A549细胞,并通过检测RT-PCR产物量以获得干扰效率。结果:RT-PCR产物检测结果显示干扰质粒psilencer-4.1-HMGN2-2干扰效率最高,其HMGN2表达量降低了70%左右。结论:成功构建了对HMGN2基因具有显著干扰效率的psilencer-4.1-HMGN2干扰质粒,为进一步研究HMGN2基因的功能打下了基础。 展开更多
关键词 RNA干扰 干扰质粒RT-PCR HMGN2基因
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胡椒碱-阿霉素复合物合成及抗肿瘤研究 被引量:1
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作者 刁依娜 蒋学华 +1 位作者 罗林 《西部医学》 2015年第1期117-120,共4页
目的合成胡椒碱-阿霉素复合物,并探讨其抗肿瘤活性。方法将胡椒碱-阿霉素复合物制备成纳米混悬体冻干制剂,体外培养肿瘤细胞,用MTT法考察胡椒碱-阿霉素复合物纳米混悬液冻干制剂对HEPG-2细胞株、SMMC-7721/ADM细胞株、MCF-7/ADM细胞株、... 目的合成胡椒碱-阿霉素复合物,并探讨其抗肿瘤活性。方法将胡椒碱-阿霉素复合物制备成纳米混悬体冻干制剂,体外培养肿瘤细胞,用MTT法考察胡椒碱-阿霉素复合物纳米混悬液冻干制剂对HEPG-2细胞株、SMMC-7721/ADM细胞株、MCF-7/ADM细胞株、A549细胞株、B16细胞株、Hela细胞株、K562细胞株的抑制作用,并绘制抑制率-药物浓度曲线。结果对7种肿瘤细胞均有抑制作用,且抑制作用比阿霉素组更强。结论胡椒碱-阿霉素复合物对HEPG-2细胞株、SMMC-7721/ADM细胞株、MCF-7/ADM细胞株、A549细胞株、B16细胞株、Hela细胞株和K562细胞株生长有抑制作用,且抑制效果好于阿霉素。 展开更多
关键词 胡椒碱 阿霉素 肿瘤
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