蜡状芽孢杆菌好氧反硝化特性研究 被引量：35

1

作者 杨希 刘德立 +6 位作者 邓灵福 朱德锐 高强 魏艳红 刘松 邹煜平 熊丽 《环境科学研究》 EI CAS CSCD 北大核心 2008年第3期155-159,共5页

从湖北省洪湖、仙桃等地采集的活性污泥和土壤中分离得到32株好氧反硝化细菌,对其进行反硝化能力测定,其中3株菌的反硝化能力较强,能以NaNO3为唯一氮源生长,分别命名为HS-N25,HS-MP12和HS-MP13.这3株菌可以分别在18,15和12 h内将特定培... 从湖北省洪湖、仙桃等地采集的活性污泥和土壤中分离得到32株好氧反硝化细菌,对其进行反硝化能力测定,其中3株菌的反硝化能力较强,能以NaNO3为唯一氮源生长,分别命名为HS-N25,HS-MP12和HS-MP13.这3株菌可以分别在18,15和12 h内将特定培养基SC中起始浓度为10 mmol/L的NO3-完全降解.通过菌株形态观察、生理生化及16S rDNA分子鉴定,菌株HS-N25,HS-MP12及HS-MP13与蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)亲缘关系最为接近,同源性达99%.初步鉴定这3株菌为蜡状芽孢杆菌. 展开更多

关键词 蜡状芽孢杆菌 好氧反硝化 16s RDNA 分离鉴定

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邻苯二甲酸二乙基己酯(DEHP)对金鲫鱼脑细胞DNA的损伤 被引量：21

2

作者 陈莉 李学彬 +2 位作者 杨光涛 邓灵福 丁书茂 《生态毒理学报》 CAS CSCD 2008年第2期144-148,共5页

为了研究邻苯二甲酸二乙基己酯(DEHP)对金鲫鱼(Carassius auratu)脑细胞DNA的损伤作用,采用不同浓度的DEHP溶液(0、25、50、100、200mg·L-1)对体外培养脑细胞进行染毒,应用单细胞凝胶电泳(彗星实验)检测脑细胞DNA的损伤效应.结果表... 为了研究邻苯二甲酸二乙基己酯(DEHP)对金鲫鱼(Carassius auratu)脑细胞DNA的损伤作用,采用不同浓度的DEHP溶液(0、25、50、100、200mg·L-1)对体外培养脑细胞进行染毒,应用单细胞凝胶电泳(彗星实验)检测脑细胞DNA的损伤效应.结果表明,染毒1.5h后,与对照组相比,DEHP各染毒组细胞尾部DNA百分率(Tail DNA%)和尾矩(Tail Moment)均显著升高(p<0.01),即DEHP染毒引起了脑细胞DNA的严重断裂;随着DEHP浓度的增加,DNA损伤程度加剧,细胞尾部DNA百分率及尾距与DEHP染毒浓度呈明显的剂量-效应关系.以上结果表明,DEHP可导致金鲫鱼脑细胞DNA损伤。 展开更多

关键词 DEHP 单细胞凝胶电泳 DNA损伤 金鲫鱼 脑细胞

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单增李斯特菌不同PCR快速检测方法比较 被引量：17

3

作者 李盛丰 赵姣 +5 位作者 钟名华 夏国亮 邓灵福 张筱丽 冯莹颖 罗勤 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期1021-1023,共3页

目的比较3种PCR快速检测方法在检测单核细胞增生李斯特菌时的特异性和灵敏度方面的差异。方法针对单核细胞增生李斯特菌的毒力基因iap和prfA基因,分别设计引物,进行单个PCR、多重PCR、套式PCR等3种方法检测。结果3种PCR方法均具有较强... 目的比较3种PCR快速检测方法在检测单核细胞增生李斯特菌时的特异性和灵敏度方面的差异。方法针对单核细胞增生李斯特菌的毒力基因iap和prfA基因,分别设计引物,进行单个PCR、多重PCR、套式PCR等3种方法检测。结果3种PCR方法均具有较强的特异性;套式PCR的灵敏度为102cfu/ml,高于单个PCR(103cfu/ml)和多重PCR(104cfu/ml)。结论多重PCR在特异性检测方面具有优势,而在灵敏度方面,套式PCR要明显优于单个及多重PCR方法。 展开更多

关键词 单核细胞增生李斯特菌 单个PCR 多重PCR 套式PCR 特异性 灵敏度

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甲基对硫磷降解菌的分离鉴定及降解特性研究 被引量：16

4

作者 高强 邓灵福 +4 位作者 郑永良 熊丽 罗勤 肖文精 刘德立 《安全与环境学报》 CAS CSCD 2007年第3期22-25,共4页

从湖北仙桃农药厂附近长期受农药污染的土壤中分离出1株甲基对硫磷降解菌HS-MP12,该菌能利用甲基对硫磷(MP)和对硝基苯酚(PNP)作为唯一的碳源、氮源生长。在24h内,HS-MP12对起始质量浓度为500mg/L和200mg/L的MP降解率分别为86.8%和95.7%... 从湖北仙桃农药厂附近长期受农药污染的土壤中分离出1株甲基对硫磷降解菌HS-MP12,该菌能利用甲基对硫磷(MP)和对硝基苯酚(PNP)作为唯一的碳源、氮源生长。在24h内,HS-MP12对起始质量浓度为500mg/L和200mg/L的MP降解率分别为86.8%和95.7%,对起始质量浓度为200mg/L的PNP的降解率为92.3%,测定条件为:pH值6,温度30℃。HS-MP12经过形态观察、生理生化鉴定、16SrDNA序列测定和同源性分析,初步鉴定HS-MP12菌株为蜡状芽孢杆菌(Bacilluscereus)。实验结果表明,HS-MP12在降解MP时,没有代谢中间产物对硝基苯酚的积累,推测可能存在不同的降解途径。 展开更多

关键词 微生物学 甲基对硫磷 对硝基苯酚 生物降解 动态降解 蜡状芽孢杆菌

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吉祥草中杀灭钉螺化合物的提取分离 被引量：10

5

作者 冯玉文 李文新 +3 位作者 刘实 邓灵福 阿不来提 祁超 《中国血吸虫病防治杂志》 CAS CSCD 2006年第3期178-181,共4页

目的从吉祥草中提取分离杀灭钉螺活性高和对鱼毒性低的化合物。方法使用吉祥草200孔/25.4mm原粉,经甲醇浸提,正丁醇萃取,再经硅胶柱层析和HPLC纯化,分离得到目标化合物。结果吉祥草原粉浸杀钉螺:浓度在17.5mg/L,经72h和120h其死亡率分... 目的从吉祥草中提取分离杀灭钉螺活性高和对鱼毒性低的化合物。方法使用吉祥草200孔/25.4mm原粉,经甲醇浸提,正丁醇萃取,再经硅胶柱层析和HPLC纯化,分离得到目标化合物。结果吉祥草原粉浸杀钉螺:浓度在17.5mg/L,经72h和120h其死亡率分别达到86.0%和100.0%;浓度在130mg/L,经168h鱼死亡率为0。原粉经提取分离得到A组分浓度在10mg/L浸杀钉螺,经144h其死亡率为84.4%,显示A组分对钉螺有较强的毒杀效应。A组分经HPLC分离纯化得到99.98%纯度的RC-I,API2000质谱仪LC/MS联机测定其分子量,结合其他光谱分析推定RC-属甾体化合物。结论吉祥草中有杀螺作用较强的化合物。 展开更多

关键词 吉祥草 钉螺 杀螺化合物 提取分离

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稀有海洋放线菌Salinispora arenicola非核糖体肽合成酶和卤代酶生物合成基因簇核心区的克隆及序列分析 被引量：10

6

作者 马艳玲 邓海 +8 位作者 魏菁菁 郭秀红 刘中来 邓灵福 刘艳丽 郭建军 姚汉超 熊国梅 祁超 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期157-162,共6页

克隆稀有海洋放线菌Salinispora arenicola的非核糖体肽合成酶(NRPS)和卤代酶生物合成基因簇核心区基因片段。根据已发表的放线菌NRPS和卤代酶生物合成基因簇核心区的核苷酸序列保守区设计两对简并性引物,采用PCR的方法扩增NRPS和卤代... 克隆稀有海洋放线菌Salinispora arenicola的非核糖体肽合成酶(NRPS)和卤代酶生物合成基因簇核心区基因片段。根据已发表的放线菌NRPS和卤代酶生物合成基因簇核心区的核苷酸序列保守区设计两对简并性引物,采用PCR的方法扩增NRPS和卤代酶生物合成基因簇核心区基因片段,使用分子生物学软件进行序列分析。获得两段大小分别为662bp和557bp的基因片段,编码220个和185个氨基酸。这两段序列与海洋放线菌Salinispora arenicola CNS-205的NRPS和卤代酶生物合成基因簇核心区基因核苷酸序列的同源性分别为99%和98%。成功地获得了稀有海洋放线菌Salinispora arenicola的NRPS和卤代酶生物合成基因簇核心区基因片段,该基因片段的获取将为分离全长基因簇以及研究该基因簇在生物合成中的功能奠定基础。 展开更多

关键词 Salinispora arenicola 腺苷酰化结构域 色氨酸卤代酶 系统进化

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SPR棱镜传感器测量液体折射率的原理 被引量：8

7

作者 郭守月 单士军 邓灵福 《物理实验》 2006年第11期39-42,共4页

推导了消失波函数的表达式,介绍了衰减全反射现象及SPR传感器测量液体折射率的原理,并利用SPR传感器测量了牛奶样品的反射系数及折射率与脂肪等主要成分含量的关系曲线.

关键词 消失波 SPR传感器 液体折射率

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富贵草杀灭钉螺效应研究 被引量：8

8

作者 王莹莹 李文新 +3 位作者 王庆 邓灵福 祁超 阿布来提 《武汉植物学研究》 CSCD 北大核心 2007年第3期294-297,共4页

以富贵草(Pachysandra terminalis Sieb.et Zucc.)(以下简称PT)为实验材料,采用开放式浸杀法研究其植物原粉及提取物(PT-Ⅰ)对钉螺的杀灭效果和对鱼类的毒性作用。结果表明PT原粉浓度为17.5 mg/L时,钉螺72 h死亡率为93.4%,120 h死亡率达... 以富贵草(Pachysandra terminalis Sieb.et Zucc.)(以下简称PT)为实验材料,采用开放式浸杀法研究其植物原粉及提取物(PT-Ⅰ)对钉螺的杀灭效果和对鱼类的毒性作用。结果表明PT原粉浓度为17.5 mg/L时,钉螺72 h死亡率为93.4%,120 h死亡率达100.0%;其24、72、120、168 h的LC50分别为42.28、7.20、4.20、3.17 mg/L。PT原粉浓度为75.0 mg/L时,经168 h鱼死亡率为0。使用浓度为35.0、17.5、8.75、4.38 mg/L的PT原粉,分别浸泡1、2、18、42 h时,抑制钉螺上爬率均达到100%。原粉经提取分离得到PT-Ⅰ组分,以1.40 mg/L的PT-Ⅰ组分分别浸杀钉螺24、48、72、96、120 h,钉螺死亡率分别为36.7%、73.3%、96.7%、96.7%、100.0%。表明PT具有很好的杀灭钉螺、抑制钉螺上爬效果,且对鱼毒性较低,是一种较有研究价值的灭螺植物。 展开更多

关键词 富贵草 生物碱 植物杀螺剂 钉螺

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吉祥草中杀灭钉螺有效成分的分离及结构解析 被引量：8

9

作者 李文新 黄雪英 +2 位作者 陈新苗 邓灵福 祁超 《农药》 CAS 北大核心 2008年第2期97-99,共3页

吉祥草为新发现的灭螺化合物,从水相提取物中分离出了杀螺有效成分晶体,进行了熔点、晶体衍射、元素分析、核磁共振C谱(13CNMR)、气-质谱等测定晶体性质的测试,证明为环己六醇。环己六醇的质量浓度为2.50mg/L,72h浸杀钉螺死亡率达93.3%... 吉祥草为新发现的灭螺化合物,从水相提取物中分离出了杀螺有效成分晶体,进行了熔点、晶体衍射、元素分析、核磁共振C谱(13CNMR)、气-质谱等测定晶体性质的测试,证明为环己六醇。环己六醇的质量浓度为2.50mg/L,72h浸杀钉螺死亡率达93.3%;当杀螺成分质量浓度为5.00mg/L时,72h浸杀,其死亡率达100%。 展开更多

关键词 吉祥草 灭螺剂 分离 结构

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依赖PrfA转录调控的单核细胞增生李斯特菌毒力基因inlC启动子结构特点的初步研究(英文) 被引量：7

10

作者 罗勤 周青春 +2 位作者 邓灵福 高强 刘德立 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期22-28,共7页

为了研究单核细胞增生李斯特菌毒力基因启动子的结构特点与转录调控因子PrfA蛋白之间的关系,应用PCR定点突变和重组PCR技术缺失了该菌毒力基因inlC启动子上可能与PrfA蛋白结合以及诱发转录起始相关的碱基序列,构建了一系列突变启动子与l... 为了研究单核细胞增生李斯特菌毒力基因启动子的结构特点与转录调控因子PrfA蛋白之间的关系,应用PCR定点突变和重组PCR技术缺失了该菌毒力基因inlC启动子上可能与PrfA蛋白结合以及诱发转录起始相关的碱基序列,构建了一系列突变启动子与lacZ报告基因融合表达质粒,使lacZ基因的表达置于inlC突变启动子下,并分别电转化单核细胞增生李斯特菌野生株P14、PrfA蛋白高表达突变株P14a和prfA基因等位缺失突变株A42中,检测相应的β-半乳糖苷酶活性。结果表明:位于inlC启动子转录起始点下游22bp处的一段17bp的类似PrfA蛋白结合序列TTAACAGCGTTTGTTAA并没有增强和抑制PrfA转录调控活性的功能;甚至将其改造成“完美的”PrfA蛋白结合序列TTAACATTTGTTAA后,也不影响inlC依赖于PrfA的转录活性地表达;但是,如果缺失inlC启动子上原始的PrfA蛋白结合序列,则使inlC依赖于PrfA的转录活性完全丧失;另外,单核细胞增生李斯特菌毒力基因inlC和plcA依赖于PrfA的转录活性的表达也与启动子上PrfA蛋白结合区(PrfA-box)距离-10区的碱基个数有关:最适为22或23bp,长于23bp或短于22bp的突变启动子的依赖PrfA的转录活性大大降低,甚至没有活性。说明除PrfA蛋白结合序列外,受PrfA调控的毒力基因启动子上还可能存在其它尚未阐明的结构和序列影响PrfA蛋白的结合以及启动转录表达。 展开更多

关键词 单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocywgenes) inlC启动子 PrfA PrfA蛋白结合区(PrfA-box) 转录调控

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黄果茄果实的灭螺活性及其有效成分的提取分离 被引量：7

11

作者 李娟娟 祁超 +3 位作者 刘实 邓灵福 王张杰 李文新 《农药》 CAS 北大核心 2009年第9期644-646,649,共4页

测定黄果茄(Solanum xanthocarpum,SX)果实原粉浸杀钉螺和斑马鱼的活性,并提取分离其有效成分。研究结果:水温25℃,13μmSX原粉浸泡96h,钉螺和斑马鱼的LC50值分别为7.61、54.4mg/L(P<0.05);酸水提取与CCL分离得到碱性物SXⅠ、Ⅱ、Ⅲ,... 测定黄果茄(Solanum xanthocarpum,SX)果实原粉浸杀钉螺和斑马鱼的活性,并提取分离其有效成分。研究结果:水温25℃,13μmSX原粉浸泡96h,钉螺和斑马鱼的LC50值分别为7.61、54.4mg/L(P<0.05);酸水提取与CCL分离得到碱性物SXⅠ、Ⅱ、Ⅲ,HPLC检测其纯度分别为97.89%、98.71%、96.12%,熔点仪测定其熔点分别为310.0、301.7、256.5℃,MS分析其相对分子质量分别为883、867、721;用其浸泡24h抑杀钉螺100%的剂量分别为100.0、8.0、200.0mg/L。结果表明SX果实原粉具有灭螺活性高和对鱼毒性低的生物效应且含有抑杀钉螺高活性的生物碱。 展开更多

关键词 黄果茄 钉螺 提取分离 生物碱

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稀有海洋放线菌Salinispora arenicola大片段DNA基因组文库的构建 被引量：6

12

作者 马艳玲 邓海 +3 位作者 刘中来 邓灵福 刘艳丽 祁超 《生物技术》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期1-3,共3页

目的:构建稀有海洋放线菌S.arenicola基因组文库。方法:以稀有海洋放线菌S.arenicola为实验材料,随机剪切提取的总DNA,5′-磷酸末端补平回收40kb左右的DNA片段,与pWEBTM载体连接,经包装蛋白包装成噬菌体后侵染宿主细胞E.coliEPI100,构... 目的:构建稀有海洋放线菌S.arenicola基因组文库。方法:以稀有海洋放线菌S.arenicola为实验材料,随机剪切提取的总DNA,5′-磷酸末端补平回收40kb左右的DNA片段,与pWEBTM载体连接,经包装蛋白包装成噬菌体后侵染宿主细胞E.coliEPI100,构建该菌株的基因组文库,并对该文库进行质量鉴定。结果:成功构建了稀有海洋放线菌S.arenicola的基因组文库,效价达6.5×104CFU/mL,得到3000个阳性克隆子,远远大于按覆盖率为99%计算至少所需的657个阳性克隆子数,且平均插入片段长度为36kb,重组率100%。阳性克隆子保存于96孔板中,-80℃保存。结论:所构建文库的各项指标均达到要求,为了进一步评估S.arenicola所能合成的所有潜在天然产物,还需要进一步检测该文库中包含有生物合成基因簇的大肠杆菌的表达情况。 展开更多

关键词 海洋放线菌S.arenicola 基因组文库 噬菌体

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基于虚实结合的光合作用电子传递实验教学改革探索与实践 被引量：5

13

作者 秦丽玮 戴国政 +6 位作者 张中春 雷明 邓灵福 万建 阮君 龚思颖 李兵 《实验技术与管理》 CAS 北大核心 2020年第12期179-183,188,共6页

光合作用电子传递是植物生理实验教学中的重要环节,受实验电子传递微观不可见、过程迅速以及数据分析难的影响,电子传递实验教学效果不佳。利用3D Studio Max平台建立了逼真的虚拟实验场景、形象的PSⅡ三维仿真结构和生动的电子传递动画... 光合作用电子传递是植物生理实验教学中的重要环节,受实验电子传递微观不可见、过程迅速以及数据分析难的影响,电子传递实验教学效果不佳。利用3D Studio Max平台建立了逼真的虚拟实验场景、形象的PSⅡ三维仿真结构和生动的电子传递动画,仿真了叶绿素荧光诱导动力学曲线,开发出具有良好沉浸感和交互性的虚拟实验。华中师范大学植物生理教学团队采用引导式、讨论式、研究式的教学方法,将虚拟仿真同实体实验有机结合,优势互补。经实践和调研后发现,虚拟仿真实验有助于提高学生的学习主动性,提升光合作用电子传递实验的教学效果。 展开更多

关键词 虚拟仿真 光合电子传递 实验教学

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螺吡喃的合成与光谱性质 被引量：4

14

作者 邓灵福 钟少锋 涂海洋 《华中师范大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 2008年第2期232-234,共3页

合成了一系列新型的含羟基螺吡喃光致变色化合物,并用核磁共振、红外光谱、质谱、元素分析等对目标化合物进行了表征,并将其中的含硝基化合物制成聚合物单体,讨论了不同反应条件对反应产率的影响.通过UV-Vis光谱对化合物在乙醇中的光致... 合成了一系列新型的含羟基螺吡喃光致变色化合物,并用核磁共振、红外光谱、质谱、元素分析等对目标化合物进行了表征,并将其中的含硝基化合物制成聚合物单体,讨论了不同反应条件对反应产率的影响.通过UV-Vis光谱对化合物在乙醇中的光致变色性能进行了研究,结果显示光致变色现象明显. 展开更多

关键词 光致变色 螺吡喃 合成 吸收光谱

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高中生物教学中培养学生人文素养的途径 被引量：5

15

作者 艾婉婷 邓灵福 祁超 《高等函授学报（自然科学版）》 2010年第2期86-87,共2页

从本次的课程理念、教学目标和教材设计中,反映出了理科学科教育对于人文素养的诉求。生物作为理科学科课程,不仅要让学生掌握生物知识与技能,更要培养学生正确的情感态度和价值观。笔者以本次的课程理念为导向,以高中生物课本为蓝本,... 从本次的课程理念、教学目标和教材设计中,反映出了理科学科教育对于人文素养的诉求。生物作为理科学科课程,不仅要让学生掌握生物知识与技能,更要培养学生正确的情感态度和价值观。笔者以本次的课程理念为导向,以高中生物课本为蓝本,从生物史教学、生物技术教学、生物总结性教学等方面初步探索在生物教学中贯穿人文素养的教学方法。 展开更多

关键词 人文素养 科学史 生物科学

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单核细胞增生李斯特菌毒力基因inlB/actA双缺失突变株的构建 被引量：4

16

作者 王莉 冯飞飞 +4 位作者 张强 冯莹颖 邓灵福 张晓莉 罗勤 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第11期182-185,共4页

单核细胞增生李斯特菌inlB和actA毒力基因的编码产物InlB和ActA是与其致病性相关的重要毒力因子,与该菌在细胞间扩散、传播有着直接的关系,其中肌动蛋白聚集因子ActA是细菌由细胞浆扩散至相邻细胞所必须的因子,而内化素InlB在对肝细胞... 单核细胞增生李斯特菌inlB和actA毒力基因的编码产物InlB和ActA是与其致病性相关的重要毒力因子,与该菌在细胞间扩散、传播有着直接的关系,其中肌动蛋白聚集因子ActA是细菌由细胞浆扩散至相邻细胞所必须的因子,而内化素InlB在对肝细胞的侵袭过程中起着重要作用。本研究中利用同源重组技术在inlB缺失菌株基础上成功构建了毒力基因inlB和actA双缺失的突变株,获得减毒突变株,为构建预防人类和动物疾病的疫苗载体奠定了基础。 展开更多

关键词 单核细胞增生李斯特菌 基因敲除 inlB基因 actA基因 同源重组

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4-羟基-5-嘧啶甲酸乙酯衍生物的合成 被引量：4

17

作者 黄统辉 张爱东 +1 位作者 邓灵福 涂海洋 《化学试剂》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期541-542,547,共3页

由乙氧甲叉基丙二酸二乙酯和相应的脒在碱性条件下合成了4-羟基-5-嘧啶甲酸乙酯和2-甲基-4-羟基-5-嘧啶甲酸乙酯,原料易得、操作步骤简单、反应条件温和,产率可分别达到80%和91%。

关键词 甲叉基丙二酸二乙酯 4-羟基-5-嘧啶甲酸乙酯 合成

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黄果茄生物碱与氯硝柳胺联用的抑螺增效作用 被引量：4

18

作者 李娟娟 李文新 +2 位作者 祁超 邓灵福 余蔚 《农药》 CAS 北大核心 2009年第1期62-63,73,共3页

从黄果茄(Solanum xanthocarpum:SX)果实中提取分离的3种新生物碱SXⅠ、Ⅱ、Ⅲ,其纯度分别为97.89%、98.71%、96.12%,使用浸泡法试验生物碱的抑螺和与氯硝柳胺(niclosamide:NM)联用的抑螺增效作用。在室温(23±1)℃浸泡24h,SXⅠ、... 从黄果茄(Solanum xanthocarpum:SX)果实中提取分离的3种新生物碱SXⅠ、Ⅱ、Ⅲ,其纯度分别为97.89%、98.71%、96.12%,使用浸泡法试验生物碱的抑螺和与氯硝柳胺(niclosamide:NM)联用的抑螺增效作用。在室温(23±1)℃浸泡24h,SXⅠ、Ⅱ、Ⅲ均有抑螺效应,SXⅡ8.0mg/L抑螺率为100%,抑螺活性分别是SXⅠ、Ⅲ的12.5、25倍,NM0.25、0.5、1.0mg/L抑螺率均为0,但在NM的3种质量浓度中分别加入SXⅠ50mg/L时,NM抑螺活性均提高60%;当分别加入SXⅢ67mg/L时,NM抑螺活性均增至100%。试验结果为NM高效低毒新剂型研究提供物质基础。 展开更多

关键词 黄果茄 氯硝柳胺 生物碱 抑螺 增效作用

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抗人软骨寡聚基质蛋白单克隆抗体的研制及表位鉴定 被引量：3

19

作者 董佳慧 揭瑞 +6 位作者 余金辉 韩冬 王瑞玲 邓灵福 熊丽 刘德立 耿辉 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期370-376,共7页

目的:为了揭示循环血液中存在的软骨寡聚基质蛋白(Cartilage Oligomeric Matrix Protein,COMP)片段,探索COMP逃避自身免疫耐受的途径及机制,需制备高效、专一的识别COMP不同结构域的单克隆抗体。方法:利用真核表达系统对人COMP进行了一... 目的:为了揭示循环血液中存在的软骨寡聚基质蛋白(Cartilage Oligomeric Matrix Protein,COMP)片段,探索COMP逃避自身免疫耐受的途径及机制,需制备高效、专一的识别COMP不同结构域的单克隆抗体。方法:利用真核表达系统对人COMP进行了一系列的表达、并用亲和层析法结合离子交换层析法进行纯化。纯化的COMP为抗原免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术结合有限稀释传代法筛选得到稳定分泌抗人COMP单克隆抗体的杂交瘤细胞株,用COMP单结构域片段结合生物信息学方法分析鉴定单克隆抗体结合表位。用不同种属来源的COMP分析单克隆抗体结合表位的保守性。结果:COMP及单结构域片段为分泌到细胞外的可溶性分子利于蛋白的纯化,筛选获得4株稳定分泌抗人COMP单克隆抗体细胞株,4株单克隆抗体的亚型为IgG1,经COMP单结构域片段检测证明4株单克隆抗体识别不同的表位,表位预测软件初步确定4株单克隆抗体识别表位所在区域,间接ELISA及免疫组化证实其中3株单克隆抗体与不同种属来源的COMP有较好的结合特性。结论:成功制备了4株识别不同表位的抗COMP单克隆抗体,为揭示血液中存在的COMP片段和进一步研究COMP逃避自身免疫耐受机理提供了研究工具。 展开更多

关键词 软骨寡聚基质蛋白 单克隆抗体 表位 类风湿性关节炎

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玉米黑粉菌cyp51基因结构分析与克隆表达 被引量：3

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作者 韩睿 邓灵福 +6 位作者 黎晨 张青叶 张劼 高强 熊丽 万坚 刘德立 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期1747-1753,共7页

通过生物信息学手段分析cyp51基因结构,并根据GenBank登记的玉米黑粉菌cyp51 DNA序列,设计cyp51引物和两对分别截短不同跨膜区的突变体引物,构建了多种重组表达质粒及突变体重组表达质粒。选用不同宿主菌包括Escherichia coli BL21(DE3)... 通过生物信息学手段分析cyp51基因结构,并根据GenBank登记的玉米黑粉菌cyp51 DNA序列,设计cyp51引物和两对分别截短不同跨膜区的突变体引物,构建了多种重组表达质粒及突变体重组表达质粒。选用不同宿主菌包括Escherichia coli BL21(DE3)、BL21(DE3)pLysS和Rosetta(DE3)诱导表达并优化条件。SDS-PAGE分析结果表明:只有突变体pET32--35能够在E.coli BL21(DE3)中高效表达(30oC,0.5 mmol/L IPTG诱导)。通过与戊唑醇等4种商品化杀菌剂农药和14种XF系列农药先导化合物的紫外结合光谱分析表明:重组蛋白具有生物学活性。其中一种XF系列化合物的结合常数接近商品化杀菌剂,有可能开发为新的杀菌剂,为设计开发新型高效抗真菌新药提供了理论依据。 展开更多

关键词 玉米黑粉菌 cyp51 克隆表达 结合常数

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