基因治疗的发展现状、问题和展望 被引量：35

1

作者 邓洪新 田聆 魏于全 《生命科学》 CSCD 2005年第3期196-199,共4页

基因治疗是一种新的治疗手段,可以治疗多种疾病,包括癌症、遗传性疾病、感染性疾病、心血管疾病和自身免疫性疾病。癌症基因治疗是基因治疗的主要应用领域。过去几年里,全球基因治疗临床试验取得了很大的进步。实际上,基因治疗也遇到了... 基因治疗是一种新的治疗手段,可以治疗多种疾病,包括癌症、遗传性疾病、感染性疾病、心血管疾病和自身免疫性疾病。癌症基因治疗是基因治疗的主要应用领域。过去几年里,全球基因治疗临床试验取得了很大的进步。实际上,基因治疗也遇到了很多困难。未来,基因治疗的主要目标是发展安全和高效的基因导入系统,它们能将外源遗传物质靶向性地导入到特异的细胞。本文主要综述基因治疗所取得的突出进展、所遇到的困难和发展前景。 展开更多

关键词 基因治疗 导入系统 安全 高效

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肿瘤基因治疗的研究现状和展望 被引量：26

2

作者 邓洪新 魏于全 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期170-176,共7页

基因治疗(gene therapy)是随着DNA重组技术、基因克隆技术等的成熟而发展起来的最具革命性的医疗技术之一,它是以改变人的遗传物质为基础的生物医学治疗手段。经过近三十年的发展,基因治疗已经由最初用于单基因遗传病的治疗扩大到恶性... 基因治疗(gene therapy)是随着DNA重组技术、基因克隆技术等的成熟而发展起来的最具革命性的医疗技术之一,它是以改变人的遗传物质为基础的生物医学治疗手段。经过近三十年的发展,基因治疗已经由最初用于单基因遗传病的治疗扩大到恶性肿瘤、感染性疾病、心血管疾病、自身免疫性疾病、代谢性疾病等多种重大疾病的治疗,其中针对恶性肿瘤的基因治疗临床试验方案占了总数的2/3。本文将主要聚焦全球基因治疗的发展历史和我国肿瘤基因治疗的发展现状,重点介绍肿瘤基因治疗所用的表达载体、基因导入系统、临床试验、重点产品的研发和产业化发展以及近年来基因治疗在恶性肿瘤、重大遗传性疾病等治疗领域所取得的重点突破。此外,还从基因的体内递送、基因治疗的安全性、新技术用于肿瘤的基因治疗、肿瘤基因治疗与其他治疗方法的联合应用、基因检测技术与基因治疗相结合等五个方面,对未来肿瘤基因治疗所面临的发展机遇和挑战进行重点阐述。有理由相信,随着肿瘤基因治疗关键技术的不断突破,未来几年将是肿瘤基因治疗产品上市的重要时期,将为恶性肿瘤的临床治疗提供更多的新选择。 展开更多

关键词 肿瘤 基因治疗 现状 展望

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植物基因克隆的策略和方法 被引量：13

3

作者 邓洪新 余懋群 《西南农业学报》 CSCD 2001年第3期78-82,共5页

植物基因克隆是当前植物学研究的前沿和热点。经过近 2 0年的发展 ,已经形成了一些克隆植物基因的方法 ,主要有功能克隆 ,PCR扩增 ,转座子或T DNA标签 ,定位克隆 ,差别杂交和减法杂交 ,mRNA差异显示和人工合成克隆。本文对这些技术的工... 植物基因克隆是当前植物学研究的前沿和热点。经过近 2 0年的发展 ,已经形成了一些克隆植物基因的方法 ,主要有功能克隆 ,PCR扩增 ,转座子或T DNA标签 ,定位克隆 ,差别杂交和减法杂交 ,mRNA差异显示和人工合成克隆。本文对这些技术的工作原理 。 展开更多

关键词 植物基因克隆 功能克隆 PCR扩增克隆 转座子 T-DNA标签 MRNA差异显示 减法杂交

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易变山羊草抗禾谷孢囊线虫基因中核苷酸结合位点区(NBS)的克隆及序列分析 被引量：7

4

作者 邓洪新 杨晓娟 +1 位作者 邓光兵 余懋群 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期751-755,共5页

大部分已克隆的植物抗病基因都包含有核苷酸结合位点区 (NBS)和富含亮氨酸的重复序列区 (LRR) .利用来自节节麦的抗禾谷孢囊线虫基因Cre3位点NBS区保守序列设计特异引物 ,从含有来自易变山羊草的抗禾谷孢囊线虫基因的小麦品系E 10的基... 大部分已克隆的植物抗病基因都包含有核苷酸结合位点区 (NBS)和富含亮氨酸的重复序列区 (LRR) .利用来自节节麦的抗禾谷孢囊线虫基因Cre3位点NBS区保守序列设计特异引物 ,从含有来自易变山羊草的抗禾谷孢囊线虫基因的小麦品系E 10的基因组中PCR扩增得到一条约 5 30bp的单一条带 .将扩增条带克隆和序列分析发现 ,该克隆 (Rccn4 )的编码区长 5 2 8bp ,含一个不完整的开放读码框 ,没有起始密码子、终止密码子和内含子结构 ,它编码一个 176个氨基酸残基的蛋白质 ,分子量为 2 0 4kD .Rccn4含有NBS LRR类抗病基因NBS区共有的保守模体I(V)LDD、T(T S)R、G(L S)PLA(A I L)、RCF(A L)Y ,并且与Cre3基因的NBS编码区核苷酸和氨基酸同源性分别为99 4 %和 98% . 展开更多

关键词 小麦品系E-10 抗禾谷孢囊线虫基因 核苷酸结合区 克隆 序列分析 易变山羊草 抗虫性

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鸡tie-2受体胞外片段重组蛋白的制备及其抗血管生成作用的研究 被引量：4

5

作者 罗彦 文艳君 +10 位作者 田聆 吴扬 刘继彦 李秋 李炯 毛咏秋 邓洪新 阚兵 何秋明 杨金亮 魏于全 《中华医学遗传学杂志》 CAS CSCD 2004年第2期101-105,共5页

目的　设法调控血管的生长发育 ,从而达到治疗疾病的目的。方法　用 PCR方法从既往构建含鸡 tie- 2受体胞外段基因的表达质粒中扩增目的片段 ,构建 p QE质粒原核表达载体并诱导目的蛋白的表达 ;将目的蛋白进一步纯化、复性并免疫小鼠 ,... 目的　设法调控血管的生长发育 ,从而达到治疗疾病的目的。方法　用 PCR方法从既往构建含鸡 tie- 2受体胞外段基因的表达质粒中扩增目的片段 ,构建 p QE质粒原核表达载体并诱导目的蛋白的表达 ;将目的蛋白进一步纯化、复性并免疫小鼠 ,获得抗血清 ,用 EL ISA和 Western印迹检测抗血清中抗体的存在 ;分离纯化抗体 ,用流式细胞仪体外观察其对血管内皮细胞生长情况的影响用体内藻酸盐包裹肿瘤细胞实验和肿瘤内微血管 CD31免疫组化观察其对血管生成情况的影响。结果　经酶切分析及测序鉴定表明获得了鸡 tie- 2受体胞外目的片段的p QE原核表达载体 ,且高效表达目的蛋白 ,其免疫小鼠可产生抗重组蛋白的抗体 ;体外细胞培养结果显示免疫后产生的抗体明显的诱导血管内皮细胞凋亡 ;藻酸盐包裹实验表明此抗体能显著降低肿瘤新生血管的形成 ;CD31微血管计数显示此抗体能明显减少肿瘤内微血管数。结论　用原核表达的方法成功制备了鸡 tie- 2受体胞外片段 (配体结构域 )的蛋白疫苗 ,且此疫苗能明显产生抗血管生成作用。 展开更多

关键词 TIE-2受体 重组蛋白 制备 抗血管生成 原核表达

原文传递

一种新的双元表达质粒pCMV-Myc-IRES-EGFP的构建及其表达 被引量：10

6

作者 严飞 赵新宇 +1 位作者 邓洪新 魏于全 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期423-428,共6页

为了研究基因的特征、理化特性及其功能机制,通常需要构建多个真核表达载体,涉及到多次的引物设计、酶切、连接和鉴定等繁琐的亚克隆过程。构建携带易于多种实验研究的多用或通用载体是基因工程载体的发展方向。为此,利用pIRES载体为骨... 为了研究基因的特征、理化特性及其功能机制,通常需要构建多个真核表达载体,涉及到多次的引物设计、酶切、连接和鉴定等繁琐的亚克隆过程。构建携带易于多种实验研究的多用或通用载体是基因工程载体的发展方向。为此,利用pIRES载体为骨架质粒,在A和B多克隆位点上分别插入c-Myc标签蛋白序列和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)序列,从而构建了一个包含c-Myc标签蛋白序列并携带有核糖体结合位点(IRES)介导的增强型绿色荧光蛋白的真核表达载体pCMV-Myc-IRES-EGFP。通过荧光检测和免疫印迹实验证实该载体能在哺乳细胞中表达。该载体可用于监测细胞的转染效率、分选稳定表达的阳性细胞群体、体外转录和翻译、检测或纯化目的蛋白以及捕获相关作用蛋白等多种实验研究,为基因功能研究提供了便利。 展开更多

关键词 载体构建 绿色荧光蛋白 核糖体结合位点

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肿瘤免疫基因治疗进展 被引量：5

7

作者 杨亚利 邓洪新 魏于全 《国外医学（生理病理科学与临床分册）》 2005年第2期98-101,共4页

肿瘤免疫基因治疗包括肿瘤细胞疫苗、免疫细胞疫苗、多肽疫苗、病毒细菌载体疫苗和DNA疫苗等。构建新型载体、提高治疗的靶向性、寻找新的靶基因、正确评价临床疗效及简化疫苗的制备过程是今后可能发展的方向。

关键词 免疫基因治疗 肿瘤 免疫治疗

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肿瘤治疗性疫苗的研发现状与展望 被引量：3

8

作者 石刚 邓洪新 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第7期541-551,共11页

近年来,随着对肿瘤抗原和抗肿瘤免疫反应机制的深入认识,肿瘤治疗性疫苗发展迅速,有望成为临床肿瘤治疗的重要手段。同时,随着新抗原的筛选、疫苗设计、疫苗递送系统、佐剂等关键技术的突破,进一步加速了这一领域的发展。在产品研发方面... 近年来,随着对肿瘤抗原和抗肿瘤免疫反应机制的深入认识,肿瘤治疗性疫苗发展迅速,有望成为临床肿瘤治疗的重要手段。同时,随着新抗原的筛选、疫苗设计、疫苗递送系统、佐剂等关键技术的突破,进一步加速了这一领域的发展。在产品研发方面,众多国际大型的医药企业和新兴的生物科技公司正在布局不同的肿瘤治疗性疫苗项目,多个肿瘤治疗性疫苗获批上市,但临床效果欠佳。尽管目前肿瘤治疗性疫苗大多处于临床前和临床试验阶段,但展现出了良好的临床应用前景和市场价值。本文论述了国内外肿瘤治疗性疫苗的研发现状(主要聚焦当前发展迅速的个性化新抗原疫苗、DC疫苗和mRNA疫苗),总结了目前所面临的挑战并展望了其发展前景,为未来肿瘤治疗性疫苗的研究和产品研发提供了新思路。 展开更多

关键词 肿瘤治疗性疫苗 新抗原疫苗 DC疫苗 mRNA疫苗 肿瘤免疫微环境

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肿瘤生物治疗研究进展 被引量：4

9

作者 邓洪新 魏于全 《世界科技研究与发展》 CSCD 2004年第2期1-6,共6页

生物治疗是应用生物技术对各种疾病 (诸如恶性肿瘤、先天性遗传病、传染性疾病、心血管疾病、风湿免疫性疾病等 )进行治疗的一种新的治疗手段。生物治疗研究范围非常广泛 ,主要包括基因治疗、免疫治疗 (过继免疫治疗、疫苗治疗、抗体治... 生物治疗是应用生物技术对各种疾病 (诸如恶性肿瘤、先天性遗传病、传染性疾病、心血管疾病、风湿免疫性疾病等 )进行治疗的一种新的治疗手段。生物治疗研究范围非常广泛 ,主要包括基因治疗、免疫治疗 (过继免疫治疗、疫苗治疗、抗体治疗、细胞因子治疗等 )、抗血管生成治疗、干细胞治疗、诱导分化及凋亡、内分泌治疗等 ,下面主要就肿瘤基因治疗。 展开更多

关键词 生物治疗 肿瘤 基因治疗 免疫治疗 抗新生血管生成治疗

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靶向EGFR的RNA干扰诱导非小细胞肺癌细胞A549凋亡的研究 被引量：4

10

作者 游佳 赵新宇 +2 位作者 陈县城 徐宁 邓洪新 《中华肿瘤防治杂志》 CAS 2008年第16期1205-1209,共5页

目的:探讨短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)介导的靶向EGFR基因的RNA干扰(RNA interference,RNAi)对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞A549的凋亡诱导作用。方法:构建靶向人EGFR基因的表达shRNA的质粒(pShEGFR)... 目的:探讨短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)介导的靶向EGFR基因的RNA干扰(RNA interference,RNAi)对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞A549的凋亡诱导作用。方法:构建靶向人EGFR基因的表达shRNA的质粒(pShEGFR),转染A549细胞,应用RT-PCR分析EGFR mRNA的表达情况,采用MTT法检测A549细胞的生长状况,通过流式细胞仪以及PI染色法进行细胞凋亡的定量检测和形态学分析。结果:pShEGFR转染组A549细胞中EGFR mRNA的表达水平,较转染同一载体连接无关序列的对照组(pShNEG组)、单纯脂质体组及PBS阴性对照组A549细胞均明显降低,F=425.640,P=0.000,其中较PBS阴性对照组细胞降低了74.5%。转染pShEGFR的A549细胞与3种不同对照组细胞相比,生长受到明显抑制,F=107.428,P=0.000,生长抑制率达54.9%,而转染pShNEG组和单纯脂质体组的A549细胞生长抑制率则分别为20%和3.1%。流式细胞仪检测结果显示,pShEGFR组细胞存在32.8%的凋亡率,PI荧光染色可见pShEGFR组细胞呈现出典型的凋亡形态学变化。结论:质粒介导的靶向人EGFR基因的pShEGFR能够有效地干扰NSCLC细胞系A549中EGFR基因的表达,进而抑制肿瘤细胞的生长,诱导肿瘤细胞的凋亡。 展开更多

关键词 癌 非小细胞肺 受体 表皮生长因子 RNA干扰 细胞凋亡

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模式生物——爪蟾在生物医学上的应用 被引量：4

11

作者 来松涛 魏于全 +1 位作者 邓洪新 杨寒朔 《自然科学进展》 北大核心 2006年第9期1074-1078,共5页

随着生物医学的发展,模式生物——爪蟾研究系统在生物医学研究领域的应用越来越广泛．与其他模式生物相比,模式生物——爪蟾具有许多不可比拟的优点,适合建立多种人类疾病模型进行疾病发病机制和治疗等相关研究；还可以结合生物信息学... 随着生物医学的发展,模式生物——爪蟾研究系统在生物医学研究领域的应用越来越广泛．与其他模式生物相比,模式生物——爪蟾具有许多不可比拟的优点,适合建立多种人类疾病模型进行疾病发病机制和治疗等相关研究；还可以结合生物信息学分析进行高通量药物筛选及药物开发等研究；另外在发育生物学和基因功能研究方面也发挥重要作用．因此,爪蟾已经成为生物医学研究中的一种重要的模式生物,在医学基础及临床研究和药物筛选等研究领域中占有非常重要的地位．文中综述了爪蟾作为模式生物在生物医学研究中发挥的作用． 展开更多

关键词 爪蟾 模式生物 生物医学 疾病动物模型 药物筛选模型

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小鼠血管内皮生长因子受体2胞外片段重组蛋白的制备及其初步应用 被引量：3

12

作者 刘继彦 杨莉 +7 位作者 刘芬 邓洪新 田聆 侯建梅 姜愚 吴扬 胡兵 魏于全 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 2002年第24期21-24,共4页

目的 :用基因工程方法获得小鼠VEGFR - 2 (Flk - 1)胞外段与配体结合区域的重组蛋白 ,并对其应用进行初步的探讨。方法 :将经PT -PCR扩增的目的序列组建到原核表达载体并诱导目的蛋白的表达 ,经纯化后的重组蛋白制备成疫苗 ,免疫兔 ,获... 目的 :用基因工程方法获得小鼠VEGFR - 2 (Flk - 1)胞外段与配体结合区域的重组蛋白 ,并对其应用进行初步的探讨。方法 :将经PT -PCR扩增的目的序列组建到原核表达载体并诱导目的蛋白的表达 ,经纯化后的重组蛋白制备成疫苗 ,免疫兔 ,获得抗血清 ,用ELISA和Westernblot方法对抗血清进行分析。结果 :目的蛋白在原核表达系统中得到了高效的表达 ,该疫苗能刺激兔产生抗重组蛋白和天然Flk - 1的抗体。结论 :该抗血清可用于Flk - 1的免疫学检测 ,也为该疫苗用于抗肿瘤血管生成治疗奠定了基础。 展开更多

关键词 重组蛋白 应用 制备 小鼠血管内皮生长因子受体2 胞外片段

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鼻咽癌相关抗原的血清学筛选与鉴定 被引量：2

13

作者 谢可 田聆 +4 位作者 魏于全 邓洪新 赵霞 李炯 文艳君 《实用医院临床杂志》 2004年第2期27-29,共3页

目的　有关鼻咽癌肿瘤抗原的研究还仍然集中于研究EB病毒与鼻咽癌的相互关系上 ,而有关鼻咽癌细胞本身的肿瘤抗原的研究到目前为止还几乎是空白。采用SEREX技术筛选与鉴定鼻咽癌相关肿瘤抗原。方法　从鼻咽癌肿瘤组织中提取mRNA ;构建... 目的　有关鼻咽癌肿瘤抗原的研究还仍然集中于研究EB病毒与鼻咽癌的相互关系上 ,而有关鼻咽癌细胞本身的肿瘤抗原的研究到目前为止还几乎是空白。采用SEREX技术筛选与鉴定鼻咽癌相关肿瘤抗原。方法　从鼻咽癌肿瘤组织中提取mRNA ;构建鼻咽癌cDNA表达文库 ;利用SEREX技术筛选鼻咽癌cDNA表达文库 ;对阳性克隆进行测序、生物信息学分析。结果　①构建的鼻咽癌cDNA表达文库大小为 1.9× 10 8个重组子。②筛选出 10个阳性克隆。③测序 :有 8个阳性结果。④生物信息学分析 :除了一些已知的抗原如MAGE外 ,发现一个热休克蛋白基因家族的新成员 ,其在染色体水平上与HSPCB有 84 %的同源性 ,在氨基酸水平上有 97%的同源性。 展开更多

关键词 鼻咽癌 抗原 血清学 筛选 鉴定 CDNA表达文库

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纳升超高效液相色谱-飞行时间质谱检测斑马鱼胚胎中小分子多肽的初步研究 被引量：4

14

作者 杨寒朔 汤明海 +1 位作者 邓洪新 杨金亮 《四川大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期1033-1036,共4页

目的探讨纳升超高效液相色谱-飞行时间质谱（nano—UPLC—TOF—MS）检测斑马鱼胚胎中小分子多肽的方法。方法收集受精后发育24h的斑马鱼胚胎，去除外层胶膜，采用机械力破碎法去除斑马鱼早期胚胎中的卵黄，并用显微镜和聚丙烯酰胺凝胶... 目的探讨纳升超高效液相色谱-飞行时间质谱（nano—UPLC—TOF—MS）检测斑马鱼胚胎中小分子多肽的方法。方法收集受精后发育24h的斑马鱼胚胎，去除外层胶膜，采用机械力破碎法去除斑马鱼早期胚胎中的卵黄，并用显微镜和聚丙烯酰胺凝胶电泳检测去除效果，然后用小分子肽提取液获得肽液样品后，用nano—UPLC—TOF—MS检测小分子肽相对分子质量。结果经处理的胚胎卵黄几乎完全被去除，nano．UPLC—TOF—MS结果显示在22～24．5min处有一明显的样品峰，单质量／电荷比（m／z）显示，绝大部分肽段峰位于800～1400m／z范围内。结论Nano—OPLC—MS是检测小分子多肽的有效方法，早期斑马鱼胚胎中存在着小分子多肽，其相对分子质量集中在800～1400范围内。 展开更多

关键词 斑马鱼 小分子肽 纳升超高效液相色谱-飞行时间质谱

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荧光原位杂交技术在母血清标记物异常诊断中的应用 被引量：3

15

作者 陈春 邓洪新 +6 位作者 李运星 魏萍 曾兰 秦胜芳 伍志灵 邓艺 叶梦玲 《中国优生与遗传杂志》 2013年第6期45-46,69,共3页

目的应用荧光原位杂交技术对血清标记物产前筛查异常的孕妇进行产前诊断。方法用荧光原位杂交技术对78例羊水间期细胞做检测,以羊水细胞培养及核型分析作为结果验证。结果共检出21-三体两例,超雄综合征(47,XYY)一例,47,XYY/46,XY嵌合体... 目的应用荧光原位杂交技术对血清标记物产前筛查异常的孕妇进行产前诊断。方法用荧光原位杂交技术对78例羊水间期细胞做检测,以羊水细胞培养及核型分析作为结果验证。结果共检出21-三体两例,超雄综合征(47,XYY)一例,47,XYY/46,XY嵌合体核型一例,与羊水细胞核型分析结果完全相符。结论 FISH技术便捷、灵敏、快速、准确,可应用于血清标记物产前筛查异常孕妇的产前诊断,能补充传统细胞遗传学的不足,保证诊断结果,减少孕妇的等待时间。 展开更多

关键词 荧光原位杂交 产前筛查 产前诊断 羊水细胞 染色体异常

原文传递

小鼠凋亡相关新基因PNAS-4真核表达载体的构建、表达及体外抗肿瘤作用 被引量：3

16

作者 袁铸 严飞 +2 位作者 赵新宇 邓洪新 李炯 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第12期1140-1143,共4页

目的:对小鼠凋亡相关新基因PNAS-4(mPNAS-4)进行克隆,构建其真核表达载体,并在小鼠Lewis肺癌细胞系LL2中转染表达;探讨mPNAS-4基因转染LL2细胞过表达所诱导的体外肿瘤细胞凋亡情况。方法:用RT-PCR从小鼠肝脏组织中克隆mPNAS-4编码区cDNA... 目的:对小鼠凋亡相关新基因PNAS-4(mPNAS-4)进行克隆,构建其真核表达载体,并在小鼠Lewis肺癌细胞系LL2中转染表达;探讨mPNAS-4基因转染LL2细胞过表达所诱导的体外肿瘤细胞凋亡情况。方法:用RT-PCR从小鼠肝脏组织中克隆mPNAS-4编码区cDNA,构建重组真核表达载体pcDNA3.1(+)-mPNAS-4;用脂质体将pcDNA3.1(+)-mPNAS-4转染小鼠Lewis肺癌LL2细胞;用RT-PCR检测转染细胞中mPNAS-4的过表达情况;通过MTT、流式细胞术(FCM)及DNALadder分别检测转染细胞的增殖与凋亡情况。结果:从小鼠肝脏组织中克隆到mPNAS-4全长cDNA并成功构建其真核表达载体pcDNA3.1(+)-mPNAS-4,转染小鼠Lewis肺癌LL2细胞可使其mRNA表达明显上调。mPNAS-4过表达能抑制LL2细胞增殖并诱导其凋亡。结论:mPNAS-4过表达对小鼠Lewis肺癌LL2细胞的生长有明显的抑制和诱导凋亡作用。 展开更多

关键词 PNAS-4 基因转染 真核表达 凋亡

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大鼠睾丸异种抗原的血清学筛选 被引量：3

17

作者 彭枫 田聆 +6 位作者 邓洪新 李玉 杨寒朔 阚兵 赵霞 廖建 魏于全 《四川大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期305-308,共4页

目的　通过重组 c DNA表达文库的血清学分析 (SEREX)技术获得来自大鼠睾丸文库有潜在治疗价值的异种同源抗原的 c DNA序列。方法　将人卵巢癌细胞株免疫兔后收集的抗血清作为筛选血清 ,采用 SEREX技术筛选大鼠睾丸 c DNA文库。结果　通... 目的　通过重组 c DNA表达文库的血清学分析 (SEREX)技术获得来自大鼠睾丸文库有潜在治疗价值的异种同源抗原的 c DNA序列。方法　将人卵巢癌细胞株免疫兔后收集的抗血清作为筛选血清 ,采用 SEREX技术筛选大鼠睾丸 c DNA文库。结果　通过两轮筛选获得 10个阳性克隆。通过生物信息学分析认为这 10个阳性单克隆 c DNA序列编码 7种不同的蛋白 ,其中 OV- 2、OV- 4为肿瘤相关序列 ,OV- 6、OV- 7为编码未知蛋白的序列。结论　用异种免疫血清筛选异种同源肿瘤抗原拓宽了 SEREX技术的应用范围 ,是一种行之有效的方法。 展开更多

关键词 血清学分析 异种同源抗原 CDNA文库

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IP-10质粒联合吉西他滨抗肿瘤作用的实验研究 被引量：2

18

作者 梅开 田聆 +4 位作者 魏于全 李炯 文艳君 阚兵 邓洪新 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第4期397-402,共6页

背景与目的:IP鄄10是α趋化因子家族成员,IP鄄10具有抗肿瘤血管作用,表现为抑制新生血管分化成毛细血管。研究表明,化疗与抗肿瘤血管治疗结合具有协同作用。本研究拟用IP鄄10质粒与化疗药物吉西他滨联合治疗肿瘤,观察其抗肿瘤作用。方法... 背景与目的:IP鄄10是α趋化因子家族成员,IP鄄10具有抗肿瘤血管作用,表现为抑制新生血管分化成毛细血管。研究表明,化疗与抗肿瘤血管治疗结合具有协同作用。本研究拟用IP鄄10质粒与化疗药物吉西他滨联合治疗肿瘤,观察其抗肿瘤作用。方法:质粒pBLAST鄄IP鄄10转化至大肠杆菌中,经扩增后,制备并纯化质粒。采用BALB/c及C57BL/6小鼠,分别建立H22肝癌及Lewis肺癌肿瘤模型。IP鄄10质粒及生理盐水肌肉注射,吉西他滨腹腔注射。收集小鼠血清,ELISA方法检测血清中IP鄄10蛋白表达;观察肿瘤体积变化、小鼠存活期及不良反应;肿瘤组织微血管免疫组化染色,确定微血管密度;TUNEL法检测肿瘤组织中细胞凋亡。结果:IP鄄10质粒肌注后小鼠血清中IP鄄10蛋白表达于第2周达高峰[(16.8±3.6)ng/ml],至第5周仍持续有较高水平表达[(14.0±2.1)ng/ml]。IP鄄10质粒联合吉西他滨组小鼠肿瘤体积较对照组显著受抑甚至消退,在接种肿瘤细胞后第9周联合给药组小鼠存活率为90%,明显高于其他各组(IP鄄10质粒组55%,吉西他滨组以及生理盐水组为0%)(P<0.005);各组小鼠均未出现明显的不良反应。肿瘤组织内微血管密度在联合给药组为15.8±2.4,显著低于其它各组(IP鄄10组45.6±2.0,吉西他滨组50.2±3.5和生理盐水组51.3±3.0)(P<0.01)。在接种肿瘤细? 展开更多

关键词 IP-10质粒 吉西他滨 微血管密度 抗血管生成 肿瘤

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小麦抗禾谷孢囊线虫基因RAPD分子标记 被引量：1

19

作者 邓洪新 杨晓娟 +3 位作者 邓光兵 陈静 潘志芬 余懋群 《四川大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2000年第S1期38-42,共5页

作者对在小麦DNA的RAPD扩增中 ,Mg2 + 浓度、TaqDNA聚合酶和模板DNA的用量对扩增结果的影响进行了探讨 ,研究结果发现 ,在Mg2 + 浓度为 2 .0mmol/L ,TaqDNA聚合酶为 2U/2 5μL ,模板DNA为 15～ 2 0ng/2 5μL时 ,对小麦DNA的RAPD扩增结... 作者对在小麦DNA的RAPD扩增中 ,Mg2 + 浓度、TaqDNA聚合酶和模板DNA的用量对扩增结果的影响进行了探讨 ,研究结果发现 ,在Mg2 + 浓度为 2 .0mmol/L ,TaqDNA聚合酶为 2U/2 5μL ,模板DNA为 15～ 2 0ng/2 5μL时 ,对小麦DNA的RAPD扩增结果较好 .实验共使用了 10 0个随机引物 ,对抗禾谷孢囊线虫基因供体亲本易变山羊草、抗性近等基因系 (near isogenicline,NILs)E- 10 和回交亲本寄主品系Lutin进行RAPD扩增 ,发现有 3个引物 :OPB12 ,OPB14和OPB11的扩增产物 ,在抗感NILs材料间揭示了多态性 ,但只有引物OPB12在 4次以上重复中 ,获得稳定相同的结果 ,其多态标记为OPB12 - 1350 ,它只在NILs和抗性供体亲本中出现 ,而回交亲本中未出现 .初步认为该多态性分子标记OPB12 - 1350 展开更多

关键词 RAPD 分子标记 禾谷孢囊线虫抗性 小麦

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阳离子脂质体介导IL-15基因治疗小鼠肺转移模型的实验研究 被引量：3

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作者 滕秀 周西坤 +4 位作者 张印兵 邱吉 毛咏秋 邓洪新 李炯 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期148-152,共5页

目的:用阳离子脂质体(CL)包裹pcDNA3.1-IL15制备阳离子脂质体质粒DNA复合物CL-IL15,观察其抗小鼠B16-F10肺转移瘤的治疗作用,并初步探讨其作用机制。方法:构建hIL-15真核表达载体,测定脂质体-质粒DNA复合物的最佳包封率;将该复合物转染C... 目的:用阳离子脂质体(CL)包裹pcDNA3.1-IL15制备阳离子脂质体质粒DNA复合物CL-IL15,观察其抗小鼠B16-F10肺转移瘤的治疗作用,并初步探讨其作用机制。方法:构建hIL-15真核表达载体,测定脂质体-质粒DNA复合物的最佳包封率;将该复合物转染CHO-K1细胞株,West-ern blott检测体外转染条件下IL-15蛋白的表达情况,MTT法检测细胞转染上清对CTLL-2细胞株的增殖刺激作用;建立B16-F10小鼠黑色素瘤肺转移模型,尾静脉给药,每隔1 d给药1次,共6次,治疗结束24 h后观察各组肿瘤肺转移情况;LDH释放法(乳酸脱氢酶释放法)检测脾淋巴细胞的杀伤作用,冰冻切片免疫荧光法观察NK细胞对肿瘤组织的浸润。结果:成功构建hIL-15表达载体,并验证其与阳离子脂质体的质量比为1∶5时,包裹后形成的复合物具有较好的包封率;可以在体外有效转染并表达具生物活性的分泌型IL-15蛋白;CL-IL15复合物治疗小鼠肿瘤肺转移模型,可以显著减少肿瘤肺转移结节数目,提高脾细胞对肿瘤细胞杀伤活性(P<0.05),增加NK细胞在肿瘤组织中的浸润比例。结论:阳离子脂质体质粒DNA复合物CL-IL15可有效地抑制小鼠B16-F10肺转移瘤,其作用机制可能与IL-15诱导脾细胞对肿瘤细胞的杀伤、激活NK(natural killer)细胞对肿瘤组织的浸润等机制有关。 展开更多

关键词 阳离子脂质体 IL-15 B16-F10 肺转移 基因治疗

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