为建立检测西马特罗(CIM)的免疫学方法,本试验采用重氮化法成功合成了人工免疫抗原CIM-BSA,并用人工合成的抗原免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合技术制备抗CIM的单克隆抗体(CIM m Ab),并对其效价、敏感性、特异性和亲和性等免疫学特性进行...为建立检测西马特罗(CIM)的免疫学方法,本试验采用重氮化法成功合成了人工免疫抗原CIM-BSA,并用人工合成的抗原免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合技术制备抗CIM的单克隆抗体(CIM m Ab),并对其效价、敏感性、特异性和亲和性等免疫学特性进行了鉴定。结果表明,免疫的5只小鼠血清效价均达到1∶1×105,IC50均在10ng/m L以下,其中4号、5号小鼠的效价达2×105,IC50小于1ng/m L。融合后筛选出1C8、2G11、2D4共3株分泌抗CIM小分子的高特异、高灵敏的单克隆抗体的细胞株,细胞培养上清ELISA效价分别为1∶1.28×104、1∶6.4×103、1∶3.2×103,腹水效价分别为1∶4.1×105、1∶2.0×105、1∶2.0×105,3株细胞株分泌的抗CIM的单克隆抗体经亚型试剂盒测定均为Ig G1/λ链,亲和常数(Ka)经测定分别为5.5×108、2.4×108、1.0×108(L/mol),其中亲和力最高的细胞株1C8对CIM的IC50为0.288 ng/m L,与CL小分子的CR%为0.576%,与其他类似物的CR%均小于0.02%。本试验获得了灵敏度高、特异性好的CIM m Ab,为CIM残留检测的免疫学方法的建立奠定了基础。展开更多
文摘为建立检测西马特罗(CIM)的免疫学方法,本试验采用重氮化法成功合成了人工免疫抗原CIM-BSA,并用人工合成的抗原免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合技术制备抗CIM的单克隆抗体(CIM m Ab),并对其效价、敏感性、特异性和亲和性等免疫学特性进行了鉴定。结果表明,免疫的5只小鼠血清效价均达到1∶1×105,IC50均在10ng/m L以下,其中4号、5号小鼠的效价达2×105,IC50小于1ng/m L。融合后筛选出1C8、2G11、2D4共3株分泌抗CIM小分子的高特异、高灵敏的单克隆抗体的细胞株,细胞培养上清ELISA效价分别为1∶1.28×104、1∶6.4×103、1∶3.2×103,腹水效价分别为1∶4.1×105、1∶2.0×105、1∶2.0×105,3株细胞株分泌的抗CIM的单克隆抗体经亚型试剂盒测定均为Ig G1/λ链,亲和常数(Ka)经测定分别为5.5×108、2.4×108、1.0×108(L/mol),其中亲和力最高的细胞株1C8对CIM的IC50为0.288 ng/m L,与CL小分子的CR%为0.576%,与其他类似物的CR%均小于0.02%。本试验获得了灵敏度高、特异性好的CIM m Ab,为CIM残留检测的免疫学方法的建立奠定了基础。
