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青海省不同海拔生态区饲用小黑麦生产性能分析 被引量:9
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作者 王东霞 王伟 +3 位作者 李春喜 曹东 刘宝龙 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2020年第18期6216-6228,共13页
为了探究青海省不同海拔生态区3种饲用小黑麦在不同播种时间下的生产性能,本试验设3个不同海拔生态区(乐都生态区,2016 m;湟中生态区,2630 m;同德生态区,3251 m),3个播种时间(早播,适播,晚播)和3个自育品系(ZHS2,ZHSI,GY197),测定和分析... 为了探究青海省不同海拔生态区3种饲用小黑麦在不同播种时间下的生产性能,本试验设3个不同海拔生态区(乐都生态区,2016 m;湟中生态区,2630 m;同德生态区,3251 m),3个播种时间(早播,适播,晚播)和3个自育品系(ZHS2,ZHSI,GY197),测定和分析3个生态区的3个品系小黑麦在不同播种时间后的生育期、群体动态、草产量、穗部性状、籽粒产量和经济系数等指标的差异。结果表明,ZHS2在乐都生态区,3月5日播种综合生产性能最好;ZHS2在湟中生态区,4月10日播种综合生产性能最好;GY197在同德生态区,4月25日播种综合生产性能最好。本研究结果可作为青海农牧交错区高效种植小黑麦研究提供理论依据。 展开更多
关键词 小黑麦(Triticale) 生态区 生产性能
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青海黄绿卷毛菇中核黄素的分离与鉴定 被引量:3
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作者 刘峰 刘宝龙 +4 位作者 李云 曹东 刘玉萍 魏乐 《分子植物育种》 CAS 北大核心 2023年第19期6539-6546,共8页
为了探究黄绿卷毛菇黄色表型的主要化合物成分以及进一步合理开发利用,本研究以黄绿卷毛菇为试验材料,通过水提取法得到核黄素提取物,经高效液相色谱检测发现,在480 nm可见光下提取物于9.728 min时出现的目的峰与核黄素标准品(VB_(2))于... 为了探究黄绿卷毛菇黄色表型的主要化合物成分以及进一步合理开发利用,本研究以黄绿卷毛菇为试验材料,通过水提取法得到核黄素提取物,经高效液相色谱检测发现,在480 nm可见光下提取物于9.728 min时出现的目的峰与核黄素标准品(VB_(2))于9.758 min出现的目的峰可能为同一种物质。根据上述9.728 min目的峰制备所有核黄素提取物,经浓缩干燥后得到核黄素制备品1.18 g,纯度为98.4%。对其进行质谱检测发现在3个特征离子[M+H]^(+)m/z377.1->172.0、[M+H]^(+)m/z377.1->198.0、[M+H]^(+)m/z377.1->243.0条件下核黄素制备品与标准品出峰时间非常相近,并且核黄素制备品的^(1)H-NMR和^(13)C-NMR数据与核黄素标准品相似度高,分子式为C_(17)H_(20)N_(4)O_(6),可以确定该化合物为核黄素。本研究结果将为黄绿卷毛菇营养价值评价、品系培育研究以及进一步开发利用提供参考。 展开更多
关键词 黄绿卷毛菇 核黄素 高效液相色谱 质谱 核磁共振
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转录组学挖掘黑果枸杞中花青素生物合成代谢关键bHLH调控基因 被引量:3
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作者 包雪梅 胡娜 +1 位作者 王洪伦 《分子植物育种》 CAS 北大核心 2023年第6期1864-1873,共10页
黑果枸杞果实中富含花青素,为探究黑果枸杞和白果枸杞的基因表达差异,挖掘控制黑果枸杞黑果性状的主效基因,本研究利用RNA-Seq技术对黑果枸杞和白果枸杞进行转录组测序与生物信息学分析。结果表明,黑果枸杞和白果枸杞中共检测到25 279... 黑果枸杞果实中富含花青素,为探究黑果枸杞和白果枸杞的基因表达差异,挖掘控制黑果枸杞黑果性状的主效基因,本研究利用RNA-Seq技术对黑果枸杞和白果枸杞进行转录组测序与生物信息学分析。结果表明,黑果枸杞和白果枸杞中共检测到25 279个基因差异表达,其中12 381个基因在黑果枸杞表达上调,12 898个基因表达下调。KEGG富集结果显示,共有571个差异表达基因参与植物次生代谢产物合成,尤其是在黄酮类和花青素生物合成代谢通路中差异最为明显。黑果枸杞中共有8个参与花青素合成代谢的结构基因的表达量均高于白果枸杞,说明花青素的生物合成可能与黑果枸杞黑果性状相关。调控花青素生物合成的bHLH转录因子CL8159.Contig5_All的表达水平比白果枸杞增强了2 139.57倍,这个基因很有可能是控制黑果枸杞黑果性状的候选基因。本研究筛选到控制黑果枸杞花青素合成代谢的候选基因,为黑果枸杞的分子遗传机理及进一步的基因功能研究提供了依据。 展开更多
关键词 黑果枸杞 白果枸杞 差异表达 花青素
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当归转录因子AsMYB44的克隆与功能研究 被引量:2
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作者 刘光瑞 +4 位作者 李云 曹东 刘宝龙 包雪梅 李建民 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2023年第6期1253-1264,共12页
为明确AsMYB 44调控次生代谢产物生物合成的功能,从当归(Angelica sinensis)中分离克隆得到MYB转录因子AsMYB 44,对AsMYB 44进行生物信息学分析,利用根癌农杆菌介导的遗传转化体系在Samsun烟草中过表达,并对转基因烟草进行多组学联合分... 为明确AsMYB 44调控次生代谢产物生物合成的功能,从当归(Angelica sinensis)中分离克隆得到MYB转录因子AsMYB 44,对AsMYB 44进行生物信息学分析,利用根癌农杆菌介导的遗传转化体系在Samsun烟草中过表达,并对转基因烟草进行多组学联合分析。结果表明,AsMYB 44基因CDS(coding sequence)全长903 bp,编码300个氨基酸,具有完整的SANT、MYB domains结构域。系统发育树结果表明,AsMYB 44与拟南芥AtMYB 11(AF062863.1)、AtMYB 12(AF062864.1)和丹参SmMYB 97(KF059561.1)同源性较高。AsMYB 44转基因烟草中差异表达基因主要富集在苯丙烷合成代谢途径,其中苯丙氨酸解氨酶基因(PAL)、肉桂酸-4-羟化酶基因(C4H)、4-香豆酸:辅酶A连接酶基因(4 CL)、咖啡酸3-O-甲基转移酶基因(COMT)、肉桂醇脱氢酶基因(CAD)等表达量上调。广泛靶向代谢组学结果显示,转基因烟草中酚酸、脂质、黄酮类化合物、生物碱等代谢产物含量变化显著。AsMYB 44转录因子可正向调控酚酸的代谢合成,这可以为当归酚酸次生代谢物的生物合成机制提供理论基础。 展开更多
关键词 当归 AsMYB44转录因子 基因克隆 转基因烟草 多组学分析 酚酸
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RNA-Seq挖掘黄绿卷毛菇中核黄素合成途径差异表达基因
5
作者 刘峰 曹东 +3 位作者 李云 魏乐 刘宝龙 《分子植物育种》 CAS 北大核心 2024年第1期77-84,共8页
为探究黄绿卷毛菇和双孢蘑菇的基因表达差异,挖掘黄绿卷毛菇核黄素合成途径的主效基因,本研究利用RNA-Seq技术对黄绿卷毛菇和双孢蘑菇进行二代转录组测序与生物信息学分析。结果表明,黄绿卷毛菇和双孢蘑菇中共检测到26 818个基因差异表... 为探究黄绿卷毛菇和双孢蘑菇的基因表达差异,挖掘黄绿卷毛菇核黄素合成途径的主效基因,本研究利用RNA-Seq技术对黄绿卷毛菇和双孢蘑菇进行二代转录组测序与生物信息学分析。结果表明,黄绿卷毛菇和双孢蘑菇中共检测到26 818个基因差异表达,其中11 236个基因在黄绿卷毛菇中表达上调,15 582个基因表达下调。KEGG富集结果显示,共有19 988个差异表达基因参与植物次生代谢产物合成,其中在维生素代谢途径中有813个差异表达基因。在核黄素代谢通路中,黄绿卷毛菇和双孢蘑菇中共有5个参与核黄素合成代谢的结构基因没有产生差异表达,有6个在黄绿卷毛菇中呈现不同程度上调。核黄素转运蛋白MCH5的同源基因CL911.Contig3_ALL(Almch5)在黄绿卷毛菇中特异表达,log_(2)FC值高达12.98,同时Almch5与斑玉蕈(Hypsizygus marmoreus)中核黄素转运蛋白MCH5高度同源,都具有相似的7bp3.1A转运蛋白功能域,表明Almch5可能是转运黄绿卷毛菇中核黄素的主效蛋白,这为黄绿卷毛菇中核黄素合成机制研究提供了新线索。 展开更多
关键词 黄绿卷毛菇 双孢蘑菇 差异表达 核黄素
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基于Tail-PCR分析AN2基因上游启动子活性
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作者 韦国 +2 位作者 石光禹 刘宝龙 包雪梅 《热带亚热带植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期257-263,共7页
黑果枸杞(Lycium ruthenicum)富含花青素,AN2基因是调控黑果枸杞花青素合成代谢的主效基因。为解析AN2基因启动子的活性差异,采用Tail-PCR方法分别克隆了黑果枸杞和红果枸杞(L.barbarum)AN2基因起始密码子上游约1686 bp(LrAN2p)和1495 b... 黑果枸杞(Lycium ruthenicum)富含花青素,AN2基因是调控黑果枸杞花青素合成代谢的主效基因。为解析AN2基因启动子的活性差异,采用Tail-PCR方法分别克隆了黑果枸杞和红果枸杞(L.barbarum)AN2基因起始密码子上游约1686 bp(LrAN2p)和1495 bp(LbAN2p)的序列。PlantCARE预测表明,LbAN2p和LrAN2p中分别有133和137个的顺式作用元件,其中,参与光调控的顺式元件分别有11和15个;参与激素响应相关的顺式元件分别有13和16个。构建AN2启动子植物表达载体pKGWFS7:LbAN2p和pKGWFS7:Lr AN2p,利用农杆菌介导的烟草遗传转化体系获得转基因烟草。GUS染色结果表明,LrAN2p能够驱动GUS在烟草中的表达,叶片呈现蓝色,具有较LbAN2p更强的启动活性,qRT-PCR结果表明,LrAN2p转基因烟草中GUS基因具有更高的转录水平,这可能会使AN2基因在黑果枸杞中具有更高的表达,激活黑果枸杞花青素合成代谢通路。这为解析枸杞果色形成及AN2基因的表达调控机制奠定了理论基础。 展开更多
关键词 黑果枸杞 花青素 AN2 启动子 GUS染色
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西伯利亚白刺NsMYB5调控果实花青素生物合成
7
作者 包雪梅 +2 位作者 胡娜 刘宝龙 王洪伦 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第8期1215-1222,共8页
基于西伯利亚白刺红果、黑果果皮转录组数据,本研究筛选并克隆获得一个与西伯利亚白刺果实花青素和原花青素合成代谢相关的R2R3-MYB转录因子,命名为NsMYB5。该基因ORF为840 bp,编码279个氨基酸,NsMYB5具有完整的SANT、MYB domain及HLH-M... 基于西伯利亚白刺红果、黑果果皮转录组数据,本研究筛选并克隆获得一个与西伯利亚白刺果实花青素和原花青素合成代谢相关的R2R3-MYB转录因子,命名为NsMYB5。该基因ORF为840 bp,编码279个氨基酸,NsMYB5具有完整的SANT、MYB domain及HLH-MYB domain结构域,属于R2R3-MYB转录因子,与调控花青素和原花青素合成相关的香雪兰FhMYB5同源性较高。过表达NsMYB5烟草花瓣和雄蕊积累大量花青素,呈现深紫色,而叶片和茎仅有少量花青素积累,局部呈现淡紫色。转基因株系中花的花青素和原花青素含量均显著高于野生型(P<0.05)。结果表明,NsMYB5可以正向调控花青素和原花青素的合成,这为西伯利亚白刺果实果皮呈色的分子遗传机理提供了理论依据。 展开更多
关键词 西伯利亚白刺 NsMYB5 花青素 原花青素
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黑果枸杞中调控花青素合成代谢的MYB基因克隆与序列分析 被引量:4
8
作者 朱雪冰 刘宝龙 +1 位作者 曹东 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2019年第10期3208-3213,共6页
黑果枸杞中富含花青素、蛋白质、多糖等多种对人体有益的营养物质,是一种很好的药用植物。本研究对黑果枸杞cDNA进行Solexa高通量转录组测序并用PCR方法克隆黑果枸杞中MYB基因的转录因子Sl AN2。研究结果表明:该基因全长774 bp,编码257... 黑果枸杞中富含花青素、蛋白质、多糖等多种对人体有益的营养物质,是一种很好的药用植物。本研究对黑果枸杞cDNA进行Solexa高通量转录组测序并用PCR方法克隆黑果枸杞中MYB基因的转录因子Sl AN2。研究结果表明:该基因全长774 bp,编码257个氨基酸,分子量为29 775.84,等电点为7.79,具有两个属于SANT超基因家族的保守区,蛋白具有一定的亲水性,二级结构主要以α-螺旋和不规则卷曲为蛋白质最大量的结构原件,跨膜区分析推测该蛋白质可能不具有跨膜区,主要是在膜外进行作用。进化分析表明:SlAN2基因与番茄、矮牵牛、辣椒等物种的调节基因的亲缘关系很近。本研究为解析黑果枸杞果实中调控花青素合成代谢基因分子遗传机理、为更好的利用花青素提供了科学依据。 展开更多
关键词 黑果枸杞 MYB 基因克隆 生物信息学分析
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当归抽薹关键基因FT和SOC1的生物信息学分析 被引量:3
9
作者 樊世婷 李云 +3 位作者 罗香怡 刘宝龙 李建民 《分子植物育种》 CAS 北大核心 2022年第11期3562-3569,共8页
当归是一种药用价值较高的重要的多年生草本大宗药材,但当归抽薹严重影响其产量和品质,这是限制大规模人工种植栽培当归的关键瓶颈。本研究从当归中克隆到FT和SOC1两个候选基因,并通过序列同源比对分析候选基因与当归抽薹的关联性。结... 当归是一种药用价值较高的重要的多年生草本大宗药材,但当归抽薹严重影响其产量和品质,这是限制大规模人工种植栽培当归的关键瓶颈。本研究从当归中克隆到FT和SOC1两个候选基因,并通过序列同源比对分析候选基因与当归抽薹的关联性。结果表明,FT基因全长为528 bp,编码175个氨基酸,生物信息学分析显示,FT蛋白属于不稳定蛋白,在膜外进行作用,主要二级结构形式为延伸链和无规卷曲。SOC1基因共654 bp,编码217个氨基酸,生物信息学分析显示,SOC1蛋白属于不稳定蛋白,主要二级结构形式为α-螺旋和无规则卷曲。发育树聚类显示本研究克隆的FT基因编码的氨基酸序列与胡萝卜FT基因编码的氨基酸序列和胡萝卜亚种栽培种‘heading date 3A-like’蛋白的氨基酸序列均有较高同源性。SOC1基因编码的蛋白与胡萝卜亚种栽培种MADS-box基因家族中SOC1类似蛋白有较高的同源性。综上推测本研究中分离出的FT和SOC1两个基因很有可能与当归开花性状密切相关。本研究结果对解析当归抽薹相关分子机制提供理论参考,为当归的改良育种提供分子依据。 展开更多
关键词 当归(Angelica sinensis) FT SOC1 基因克隆 生物信息学分析
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黑果枸杞中调控花青素合成代谢的bHLH基因克隆与序列分析 被引量:4
10
作者 赵鑫 李建民 +3 位作者 朱雪冰 郑旭莹 刘宝龙 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2018年第20期6616-6623,共8页
以黑果枸杞为研究对象,利用RT-PCR方法从黑果枸杞cDNA中克隆一个bHLH的转录因子——LrJAF13,通过生物信息学的分析,发现该基因的全长为1 890 bp,编码624个氨基酸的亲水蛋白,其分子式是C3012H4843N853O978S24,分子量为6.94 kD,脂肪指数(A... 以黑果枸杞为研究对象,利用RT-PCR方法从黑果枸杞cDNA中克隆一个bHLH的转录因子——LrJAF13,通过生物信息学的分析,发现该基因的全长为1 890 bp,编码624个氨基酸的亲水蛋白,其分子式是C3012H4843N853O978S24,分子量为6.94 kD,脂肪指数(Aliphatic index)为85.45,等电点pI为5.24,亲水性(Grand average of hydropathicity)为-0.497,不稳定指数(Instability index)为50.13,推断出该基因编码的蛋白位于细胞核中,蛋白质三维结构复杂,包含多个α-螺旋和β-折叠结构,与矮牵牛拟南芥bHLH基因编码的蛋白序列的一致性为88%,进化树的分析表明黑果枸杞的LrJAF13与矮牵牛的bHLH的转录因子petunia_JAF13的亲缘关系比较接近。通过上述分析,为解析黑果枸杞果实中高花青素含量的分子遗传机理、优异资源筛选和新品种选育提供了理论依据。 展开更多
关键词 黑果枸杞 BHLH 基因克隆 序列分析
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黑果枸杞的营养价值和保健功效 被引量:3
11
作者 赵鑫 李建民 +2 位作者 朱雪冰 刘宝龙 《青海科技》 2017年第1期74-76,共3页
本文介绍了黑果枸杞的生长环境、特征、化学成分和营养价值,表明黑果枸杞具有降血糖血脂、抗肿瘤、保护肝脏、消炎抗菌、延缓衰老和提高记忆力等方面的保健功效。
关键词 营养价值 保健功效 黑果枸杞
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黄枸杞中调控花青素生物合成候选基因AN2相关功能验证 被引量:3
12
作者 刘明慧 席杏媛 +3 位作者 曹东 刘宝龙 魏乐 《青海师范大学学报(自然科学版)》 2019年第4期62-66,共5页
花青素是一种存在于植物中的显色水溶性类黄酮化合物,具有较高的营养价值.黄枸杞果实中色素的大量积累与花青素生物合成代谢密切相关.前人研究发现MYB转录因子LrAN2主要参与调控黑枸杞黑色果实中花青素生物合成代谢途径,而黄枸杞中花青... 花青素是一种存在于植物中的显色水溶性类黄酮化合物,具有较高的营养价值.黄枸杞果实中色素的大量积累与花青素生物合成代谢密切相关.前人研究发现MYB转录因子LrAN2主要参与调控黑枸杞黑色果实中花青素生物合成代谢途径,而黄枸杞中花青素合成代谢的分子机理尚不明确.本研究利用同源克隆的方式分离黄枸杞AN2基因,通过Gateway技术构建植物中过量表达AN2载体PJAM1502:AN2.利用农杆菌侵染的方式将AN2基因转染到模式植物烟草中,得到紫色烟草表型.花青素含量测定发现烟草叶片中花青素含量最高,同时qPCR验证检测出转基因烟草中花青素合成代谢途径中的结构基因都显著上调,其中结构基因ANS最为明显.本研究发现黄枸杞中AN2基因与黄枸杞黄色表型的形成密切相关,为黄枸杞的分子育种研究提供可靠的理论基础. 展开更多
关键词 花青素 黄枸杞 AN2 烟草
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利用Crispr/Cas9技术构建影响先天性心脏病关键基因的表达载体 被引量:3
13
作者 张帆 +2 位作者 马伟 徐登 武建英 《兰州大学学报(医学版)》 CAS 2020年第1期72-76,共5页
目的利用Crispr/Cas9技术构建影响先天性心脏病关键基因表达载体,为后续基因编辑工作做好前期分子实验基础。方法利用NCBI数据库检索调控先天性心脏病关键基因NKX2-5、GATA4、TBX5,通过生物软件在线设计3个基因对应的sgRNA。对慢性病毒... 目的利用Crispr/Cas9技术构建影响先天性心脏病关键基因表达载体,为后续基因编辑工作做好前期分子实验基础。方法利用NCBI数据库检索调控先天性心脏病关键基因NKX2-5、GATA4、TBX5,通过生物软件在线设计3个基因对应的sgRNA。对慢性病毒载体lentiCRISPRv2进行BsmB I单酶切,通过胶回收获得线性化载体。利用T4连接酶将处理后的双链sgRNA和载体连接,通过大肠杆菌转化、质粒提取和测序最终得到lentiCRISPRv2-NKX2-5、lentiCRISPRv2-GATA4、lentiCRISPRv2-TBX5 3种病毒表达载体。结果获得评分最高且碱基数量合适的sgRNA,通过对表达载体的线性化酶切,成功去除载体中2 000 bp左右的置换片段,对连接后的载体测序显示双链sgRNA与病毒表达载体置换片段序列一致。结论利用Crispr/Cas9可成功构建先天性心脏病关键基因NKX2-5、GATA4、TBX5病毒表达载体。 展开更多
关键词 Crispr/Cas9 先天性心脏病 关键基因 表达载体
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Pinb基因启动子生物信息学分析及载体构建 被引量:3
14
作者 叶琳 +3 位作者 曹东 侯秀娟 刘宝龙 魏乐 《青海师范大学学报(自然科学版)》 2017年第4期34-39,共6页
运用生物信息学预测并分析小麦硬度基因Pinb的启动子,利用无缝克隆构建胚乳特异表达载体.采用生物信息学软件预测Pinb基因5’端上游调控区3056bp序列进行启动子预测与分析,克隆启动子,利用无缝克隆技术构建Pinb基因的胚乳特异表达的重... 运用生物信息学预测并分析小麦硬度基因Pinb的启动子,利用无缝克隆构建胚乳特异表达载体.采用生物信息学软件预测Pinb基因5’端上游调控区3056bp序列进行启动子预测与分析,克隆启动子,利用无缝克隆技术构建Pinb基因的胚乳特异表达的重组质粒,重组质粒经测序鉴定构建正确.Pinb基因5’上游-3060bp至-4bp区域内存在启动子活性,在-2419bp至-500bp间启动子活性分值均在0.8以上,其中-550bp至-500bp区启动子片段分值最高,达到0.99.在-2862bp处和-362bp处各有一个转录起始位点.在-544bp处有一个CAAT盒信号,在-541bp处有一个TATA盒信号.在-2362bp至-2256bp、-1704bp至-1559bp和-537bp至-361bp处各有一个CpG岛.取最有可能的757bp(-803bp至-47bp)启动子片段构建重组质粒(LBLV232),质粒经酶切和测序验证正确.最终,成功构建Pinb基因启动子报告基因表达载体,为系统研究该基因启动子活性提供前期基础. 展开更多
关键词 Pinb基因 启动子 生物信息学
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播种密度对青海省饲用小黑麦生产性能的影响 被引量:1
15
作者 王东霞 韩民 +4 位作者 王伟 李春喜 曹东 刘宝龙 《分子植物育种》 CAS 北大核心 2022年第13期4495-4505,共11页
为了探究不同播种密度对青海省不同海拔生态区3个饲用小黑麦品系群体动态、灌浆期株高和草产量、收获期草产量等生产性能的影响,本试验设3个播种密度(3.00×10^(6)株/hm^(2),3.75×10^(6)株/hm^(2),4.50×10^(6)株/hm^(2)),... 为了探究不同播种密度对青海省不同海拔生态区3个饲用小黑麦品系群体动态、灌浆期株高和草产量、收获期草产量等生产性能的影响,本试验设3个播种密度(3.00×10^(6)株/hm^(2),3.75×10^(6)株/hm^(2),4.50×10^(6)株/hm^(2)),3个不同海拔生态区(乐都生态区,2 016 m;湟中生态区,2 630 m;同德生态区,3 251 m)和3个自育品系(ZHS2,ZHS1,GY197)。对各播种密度下不同生态区3个小黑麦品系的生育期、群体动态、草产量、穗部性状、籽粒产量和经济系数等指标进行测定,并对其差异进行分析。结果表明,种植密度对饲用小黑麦生产性能影响较大,在乐都生态区品系ZHS2的分蘖成穗率、鲜草产量和干草产量、籽粒成熟期干草重、籽粒产量和经济系数等指标在播种密度为4.50×10^(6)株/hm^(2)时达最大值;湟中生态区,品系ZHS2的分蘖成穗率、鲜草产量和干草产量、籽粒产量等指标在播种密度为4.50×10^(6)株/hm^(2)时最大;同德生态区,自育品系ZHS2的田间出苗率、鲜草产量和干草产量在播种密度为4.50×10^(6)株/hm^(2)时最大。结合TOPSIS综合分析结果可得,在各生态区,品系ZHS2的播种密度为4.50×10^(6)株/hm^(2)时,综合生产性能最佳。本研究可为青海农牧交错区小黑麦高效栽培技术探究提供理论依据。 展开更多
关键词 小黑麦 生态区 生产性能 种植密度
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枸杞MYB转录因子LrAN2在番茄中的过量表达分析 被引量:2
16
作者 罗香怡 李云 +3 位作者 曹东 魏乐 刘宝龙 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第9期1374-1381,共8页
为明确黑枸杞LrAN2基因在花青素合成代谢中的调控机制,在与枸杞同属的番茄中做了进一步验证。黑枸杞LrAN2基因参与调控黑色果实花青素生物合成代谢,同时诱导烟草产生紫色表型,受限于枸杞转基因组培技术,选择枸杞亲缘物种番茄进行LrAN2... 为明确黑枸杞LrAN2基因在花青素合成代谢中的调控机制,在与枸杞同属的番茄中做了进一步验证。黑枸杞LrAN2基因参与调控黑色果实花青素生物合成代谢,同时诱导烟草产生紫色表型,受限于枸杞转基因组培技术,选择枸杞亲缘物种番茄进行LrAN2转基因功能分析及其调控机制。基于前期分离的LrAN2开放阅读框序列,通过表达载体构建,荧光定量分析,花青素含量的测定以及液相色谱分析方式对转基因番茄进行检测和分析。结果表明,在番茄材料Maker中过量表达LrAN2基因,得到深绿色番茄植株。转基因番茄的各个组织部位均有不同程度的花青素积累,花、叶和根细胞中都存在颜色较深色素沉着,叶片中花青素含量和LrAN2基因的表达量都是最高。LrAN2的过表达上调DFR和F3′5′H的表达水平,同时激活飞燕草色素和矢车菊色素的积累。说明LrAN2基因能够调控花青素的合成。 展开更多
关键词 番茄 花青素 LrAN2
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利用RNA-seq筛选调控当归抽薹主要候选基因 被引量:2
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作者 郭李智 +2 位作者 席杏媛 李建民 刘宝龙 《分子植物育种》 CAS 北大核心 2021年第2期448-458,共11页
当归提前抽薹严重影响产量,而当归抽薹分子遗传机理尚不清楚。本研究利用RNA-seq技术对连续五代抽薹当归的叶片、茎段、种子、根进行测序,对所有组装后的Unigenes进行功能注释,寻找调控当归抽薹主要候选基因。结果表明:在当归的叶片、... 当归提前抽薹严重影响产量,而当归抽薹分子遗传机理尚不清楚。本研究利用RNA-seq技术对连续五代抽薹当归的叶片、茎段、种子、根进行测序,对所有组装后的Unigenes进行功能注释,寻找调控当归抽薹主要候选基因。结果表明:在当归的叶片、根、种子、茎段转录本中分别得到7.1、7.63、7.23、6.59 Gb数据,通过Nr、Nt、Swissprot、KEGG、KOG、Interpro、GO、Intersection、Overall等蛋白数据库进行蛋白质预测,分别预测了71 024、59 931、49 694、51 832、55 320、46 908、35 598、17 133、79 161个蛋白。所有转录本中80.13%预测蛋白与胡萝卜同源。在KEGG通路中共有2 666个差异表达的基因参与植物信号传导;与拟南芥、胡萝卜、芥菜中参与调控开花相关基因比对,共筛选出56条候选基因,将56条候选基因在NCBI中进行核酸比对,得到与直接控制抽薹AP1转录因子同源的Unigene45683_All、激活AP1转录因子的整合子FT和FD同源的Unigene11264_All、参与拟南芥光周期调控基因CO (CONSTANS)的同源基因Unigene4344_All、在芥菜中促进抽薹整合因子SOC1的表达的AGL24或直接作用于抽薹决定基因LFY的同源基因Unigene46836_All、Unigene7820_All、CL10006.Contig2_All。因此,上述候选基因很有可能参与调控当归抽薹相关分子机制。本研究筛选到与当归抽薹相关的候选基因,有助于了解当归抽薹相关分子机制,为挖掘控制当归抽薹相关基因提供理论依据。 展开更多
关键词 当归(Angelica sinensis) 抽薹 RNA-SEQ 同源基因
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靶向沉默先天性心脏病致病基因NKX2-5 被引量:1
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作者 张帆 +2 位作者 厍广岩 钟浩 武建英 《兰州大学学报(医学版)》 2022年第2期4-8,共5页
目的 了解NKX2-5基因在细胞中的沉默表达模式。方法 构建NKX2-5基因沉默体外表达载体,将载体转染人脐静脉内皮细胞(HUVEC株),利用Western blotting和定量聚合酶链反应技术分析NKX2-5体外表达载体在细胞中的转录水平。结果 慢病毒载体在5... 目的 了解NKX2-5基因在细胞中的沉默表达模式。方法 构建NKX2-5基因沉默体外表达载体,将载体转染人脐静脉内皮细胞(HUVEC株),利用Western blotting和定量聚合酶链反应技术分析NKX2-5体外表达载体在细胞中的转录水平。结果 慢病毒载体在5μg/mL Polybrene条件下阳性细胞比例基本达到高峰,转染效率可达80%以上。Western blotting结果显示实验组PLVE2641表达量低于对照组PLVT7。定量聚合酶链反应结果显示实验组PLVE2641靶基因NKX2-5受到沉默,mRNA表达量显著下降,抑制率> 72%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 成功构建NKX2-5基因体外沉默模型,为进一步研究先天性心脏病形成奠定实验基础,为基因治疗提供理论依据。 展开更多
关键词 RNA干扰 基因沉默 先天性心脏病
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GATA4基因慢病毒载体构建与鉴定 被引量:1
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作者 张帆 厍广岩 +3 位作者 钟浩 马伟 武建英 《山东医药》 CAS 2020年第34期44-47,56,共5页
目的构建锌指转录因子4(GATA4)基因慢病毒载体并鉴定。方法设计2条GATA4基因siRNA干扰序列,与双酶切后的pMGic7.1载体连接。将构建的GATA4基因慢病毒载体转染293T细胞,随机分为实验组、阴性对照组、空白对照组,采用Western bloting法检... 目的构建锌指转录因子4(GATA4)基因慢病毒载体并鉴定。方法设计2条GATA4基因siRNA干扰序列,与双酶切后的pMGic7.1载体连接。将构建的GATA4基因慢病毒载体转染293T细胞,随机分为实验组、阴性对照组、空白对照组,采用Western bloting法检测GATA4蛋白表达,采用RT-qPCR法检测GATA4 mRNA表达。结果pMGic7.1载体可与其中1条siRNA干扰序列正确连接,其基因序列如下:CGAAACACCGGGGACATAATCACTGCGTAATCCTCGAGGATTACGCAGTGATTATGTCCTTTTTTGAATTCGGA(黑体部分为siRNA干扰序列),符合实验要求。空白对照组未添加目的基因,在45 kDa处无蛋白条带;实验组GATA4蛋白相对表达量为0.739±0.056,阴性对照组为0.997±0.001,两组比较P<0.05。实验组GATA4 mRNA相对表达量为0.362±0.024,阴性对照组为0.998±0.001,空白对照组为0.812±0.001,实验组GATA4 mRNA相对表达量明显低于阴性对照组和空白对照组(P均<0.05)。结论成功构建了GATA4基因的慢病毒载体,GATA4基因在体外可被有效抑制。 展开更多
关键词 先天性心脏病 锌指转录因子4 RNA干扰 基因沉默
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调控蓝色大麦花青素合成代谢的MYC基因克隆及序列分析 被引量:1
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作者 丁艳慧 席杏媛 +4 位作者 刘明慧 李国明 魏乐 刘宝龙 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期25-30,共6页
本研究的目的是利用PCR方法克隆了大麦中MYC转录因子HvMYC1。研究结果表明:该基因全长1 668 bp,编码氨基酸555个,分子量为61 333.71,等电点为8.47,有两个属于bHLH超级因家族的保守区,该蛋白具有亲水性,二级结构以α-螺旋(40.90%)和无规... 本研究的目的是利用PCR方法克隆了大麦中MYC转录因子HvMYC1。研究结果表明:该基因全长1 668 bp,编码氨基酸555个,分子量为61 333.71,等电点为8.47,有两个属于bHLH超级因家族的保守区,该蛋白具有亲水性,二级结构以α-螺旋(40.90%)和无规则卷曲(41.44%)为主要部分,Hv MYC1蛋白质不通过跨膜区,在膜外进行作用。蛋白系统进化分析表明,HvMYC1基因与小麦、矮牵牛、水稻等物种中调控花青素合成MYC转录因子同源。本研究为解析蓝粒大麦中调控花青素合成代谢基因分子遗传机理提供科学依据,为大麦花青素的继续深入研究提供参考。 展开更多
关键词 大麦(Hordeum vulgare L.) MYC 基因克隆 生物信息学分析
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