目的构建表达金黄色葡萄球菌A蛋白(SPA)抗体结合区基因SPA-ZZ的pET-32a-ZZ表达载体,在大肠杆菌BL21中进行高效表达并初步纯化。方法用PCR从pEZZ18中克隆SPA抗体结合区基因ZZ,构建重组表达质粒pET32-ZZ,经酶切和测序确认,将阳性重组质粒...目的构建表达金黄色葡萄球菌A蛋白(SPA)抗体结合区基因SPA-ZZ的pET-32a-ZZ表达载体,在大肠杆菌BL21中进行高效表达并初步纯化。方法用PCR从pEZZ18中克隆SPA抗体结合区基因ZZ,构建重组表达质粒pET32-ZZ,经酶切和测序确认,将阳性重组质粒转化BL21感受态细菌,IPTG诱导表达,表达产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳检测(SDS-PAGE),并用Q-Sephrose Fast Flow柱进行初步纯化。结果得到了高效表达SPA-ZZ的pET32-ZZ表达载体,表达产物经SDS-PAGE检测相对分子质量为41 000,初步纯化后可得到较纯的表达蛋白。结论SPA抗体结合区蛋白ZZ能在大肠杆菌中高效表达,为SPA-ZZ的应用奠定了一定的基础。展开更多
目的建立高效亲和色谱检测抗体融合蛋白质的方法，用于抗体及抗体融合蛋白质生产的过程控制。方法正压匀浆法装填rProtein A Sepharose，用不同pH值缓冲液分步洗脱。结果在25～1000μg／mL浓度范围内，重组人肿瘤坏死因子受体一抗体融...目的建立高效亲和色谱检测抗体融合蛋白质的方法，用于抗体及抗体融合蛋白质生产的过程控制。方法正压匀浆法装填rProtein A Sepharose，用不同pH值缓冲液分步洗脱。结果在25～1000μg／mL浓度范围内，重组人肿瘤坏死因子受体一抗体融合蛋白（TNFR—Fc）浓度和峰面积显著相关，r=0.9996；回收率范围为91％～99％，对表达TNFR—Fc的CHO工程细胞的不同培养阶段的3份上清分别进行3次重复测定，RSD在2％以内。结论该方法适用于抗体及抗体融合蛋白质生产的过程控制。展开更多
文摘目的构建表达金黄色葡萄球菌A蛋白(SPA)抗体结合区基因SPA-ZZ的pET-32a-ZZ表达载体,在大肠杆菌BL21中进行高效表达并初步纯化。方法用PCR从pEZZ18中克隆SPA抗体结合区基因ZZ,构建重组表达质粒pET32-ZZ,经酶切和测序确认,将阳性重组质粒转化BL21感受态细菌,IPTG诱导表达,表达产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳检测(SDS-PAGE),并用Q-Sephrose Fast Flow柱进行初步纯化。结果得到了高效表达SPA-ZZ的pET32-ZZ表达载体,表达产物经SDS-PAGE检测相对分子质量为41 000,初步纯化后可得到较纯的表达蛋白。结论SPA抗体结合区蛋白ZZ能在大肠杆菌中高效表达,为SPA-ZZ的应用奠定了一定的基础。
文摘目的建立高效亲和色谱检测抗体融合蛋白质的方法，用于抗体及抗体融合蛋白质生产的过程控制。方法正压匀浆法装填rProtein A Sepharose，用不同pH值缓冲液分步洗脱。结果在25～1000μg／mL浓度范围内，重组人肿瘤坏死因子受体一抗体融合蛋白（TNFR—Fc）浓度和峰面积显著相关，r=0.9996；回收率范围为91％～99％，对表达TNFR—Fc的CHO工程细胞的不同培养阶段的3份上清分别进行3次重复测定，RSD在2％以内。结论该方法适用于抗体及抗体融合蛋白质生产的过程控制。
