目的构建转染人口腔鳞状细胞癌细胞株4-1-BBL基因，探讨其体外诱导抗肿瘤免疫的能力。方法通过脂质体法将重组载体pEGFP-4-1-BBL转染人口腔鳞状细胞癌细胞Tca8113，经G-418筛选及有限稀释后获得稳定高表达克隆，分别用反转录聚合酶链反...目的构建转染人口腔鳞状细胞癌细胞株4-1-BBL基因，探讨其体外诱导抗肿瘤免疫的能力。方法通过脂质体法将重组载体pEGFP-4-1-BBL转染人口腔鳞状细胞癌细胞Tca8113，经G-418筛选及有限稀释后获得稳定高表达克隆，分别用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）和蛋白质印迹法检测转染细胞中人4-1-BBL mRNA和蛋白的表达。制备肿瘤细胞疫苗。用淋巴细胞分离液分离纯化人外周血T淋巴细胞，用抗CD-3单抗预处理T细胞后，与转染及未转染人4-1-BBL的Tca8113疫苗混合培养。用CCK-8比色法检测细胞毒性T淋巴细胞（cytotoxic T lymphocytes，CTL）的杀伤活性；锥虫蓝计数法检测T细胞增殖，酶联免疫吸附实验检测培养上清液中白细胞介素（IL）-2、干扰素γ分泌水平。结果转基因Tca8113细胞能够稳定高表达人4-1-BBL。与野生型的Tca8113细胞相比较，转染人4-1-BBL的Tca8113细胞PCR扩增产物的大小约271bp，能够显著增强T细胞增殖，促进IL-2、干扰素γ分泌，并能有效地诱导CTL产生对Tca8113细胞的特异性杀伤作用。结论转染4-1-BBL基因既能增强野生型Tca8113细胞的免疫原性，也能诱导T细胞产生有效的抗肿瘤免疫应答。展开更多
文摘目的构建转染人口腔鳞状细胞癌细胞株4-1-BBL基因，探讨其体外诱导抗肿瘤免疫的能力。方法通过脂质体法将重组载体pEGFP-4-1-BBL转染人口腔鳞状细胞癌细胞Tca8113，经G-418筛选及有限稀释后获得稳定高表达克隆，分别用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）和蛋白质印迹法检测转染细胞中人4-1-BBL mRNA和蛋白的表达。制备肿瘤细胞疫苗。用淋巴细胞分离液分离纯化人外周血T淋巴细胞，用抗CD-3单抗预处理T细胞后，与转染及未转染人4-1-BBL的Tca8113疫苗混合培养。用CCK-8比色法检测细胞毒性T淋巴细胞（cytotoxic T lymphocytes，CTL）的杀伤活性；锥虫蓝计数法检测T细胞增殖，酶联免疫吸附实验检测培养上清液中白细胞介素（IL）-2、干扰素γ分泌水平。结果转基因Tca8113细胞能够稳定高表达人4-1-BBL。与野生型的Tca8113细胞相比较，转染人4-1-BBL的Tca8113细胞PCR扩增产物的大小约271bp，能够显著增强T细胞增殖，促进IL-2、干扰素γ分泌，并能有效地诱导CTL产生对Tca8113细胞的特异性杀伤作用。结论转染4-1-BBL基因既能增强野生型Tca8113细胞的免疫原性，也能诱导T细胞产生有效的抗肿瘤免疫应答。
