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骨组织工程中干细胞的研究与应用 被引量：8
1
作者 王晓锋 吴岩 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2013年第19期3558-3565,共8页
背景:是否可以通过改进对已知的可以分化成骨的干细胞的培养方式或者寻找到新的干细胞,为骨组织工程找到更为合适的种子细胞。目的:从干细胞的分离培养、生物学特性及标志物等方面对各类干细胞的在骨组织工程中的应用进行综述。方法:以... 背景:是否可以通过改进对已知的可以分化成骨的干细胞的培养方式或者寻找到新的干细胞,为骨组织工程找到更为合适的种子细胞。目的:从干细胞的分离培养、生物学特性及标志物等方面对各类干细胞的在骨组织工程中的应用进行综述。方法:以英文检索词为"bone tissue engineering,seed cells,stem cell,osteoblast differentiation"及中文检索词为"骨组织工程,种子细胞,干细胞,成骨分化",由第一作者检索1995年至2012年PubMed数据库及中国知网中文科技数据库,查阅近年种子细胞相关文献,最终保留50篇文献,从分离培养方法、基本特性及在骨组织工程中的应用3方面进行综述。结果与结论:文章分别对各类干细胞(包括:胚胎干细胞、骨髓间充质干细胞、滑膜间充质干细胞、脐带间充质干细胞和脐带血间充质干细胞、外周血来源的多潜能间充质干细胞、脂肪干细胞、子宫内膜基质干细胞、人羊膜基质细胞、牙髓干细胞)的分离方法、生物学特性、标志物等相关实验研究进行了探讨。目前用于分离纯化骨髓间充质干细胞的方法主要有4种:密度梯度离心法、全骨髓贴壁培养法、流式细胞仪分离法和免疫磁珠法。研究证实各类干细胞在特定条件下均有分化成骨的能力。 展开更多
关键词 干细胞 干细胞学术探讨 骨髓间充质干细胞 滑膜间充质干细胞 脐带间充质干细胞 脐血间充质干 细胞 外周血来源的多潜能间充质干细胞 脂肪干细胞 子宫内膜基质干细胞 人羊膜基质细胞 牙髓 干细胞 骨组织工程 种子细胞 成骨分化 省级基金
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人脂肪间充质干细胞和滑膜间充质干细胞协同抑制炎性软骨细胞的退变 被引量：9
2
作者 宋卓悦 王洋 +2 位作者 连晓磊 丁康 李广恒 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2018年第17期2661-2668,共8页
背景:将具有目的功能的细胞通过注射的方法注入关节腔内来改变病变的微环境,作用于早期骨性关节炎的炎性软骨细胞,通过发挥植入细胞本身的特性来影响疾病的进程。目的:探讨联合应用人膝关节脂肪来源间充质干细胞及滑膜来源间充质干细胞... 背景:将具有目的功能的细胞通过注射的方法注入关节腔内来改变病变的微环境,作用于早期骨性关节炎的炎性软骨细胞,通过发挥植入细胞本身的特性来影响疾病的进程。目的:探讨联合应用人膝关节脂肪来源间充质干细胞及滑膜来源间充质干细胞对炎性软骨细胞的退变是否具有协同抑制作用。方法:原代培养脂肪来源间充质干细胞、滑膜来源间充质干细胞和炎性软骨细胞。体外二维培养条件下,采用MTS细胞增殖实验检测3种细胞的增殖情况,定量PCR及免疫荧光分析3种贴壁细胞成软骨标志物基因水平及蛋白水平的差异。体外3D混合培养条件下分3组:脂肪来源间充质干细胞+炎性软骨细胞组(A+C组),滑膜来源间充质干细胞+炎性软骨细胞组(S+C组),脂肪来源间充质干细胞+滑膜来源间充质干细胞+炎性软骨细胞组(A+S+C组)。收集3组混合培养的细胞团块,进行阿尔新蓝染色、番红O染色及Ⅱ型胶原免疫组化染色,并做定量分析。采用定量PCR检测成软骨分化标志物的基因水平差异。收集培养液上清通过酶联免疫吸附技术检测促炎因子及抗炎因子的分泌情况。结果与结论:(1)体外二维培养条件下,脂肪来源间充质干细胞的增殖速率高于炎性软骨细胞和滑膜来源间充质干细胞,差异有显著性意义(P<0.05);炎性软骨细胞的成软骨标志物Ⅱ型胶原、蛋白聚糖m RNA表达量以及Ⅱ型胶原蛋白表达量明显高于脂肪来源间充质干细胞和滑膜来源间充质干细胞(P<0.01);(2)体外3D混合培养条件下,A+S+C组的成软骨分化特异性染色阳性区域面积百分比均明显高于S+C组和A+C组(P<0.05);A+S+C组成软骨分化标志物蛋白聚糖及Ⅱ型胶原表达量明显高于S+C组和A+C组(P<0.05);S+C组促炎因子白细胞介素1、白细胞介素6、肿瘤坏死因子α水平明显高于A+C组及A+S+C组(P<0.05),A+C组及A+S+C组抗炎因子白细胞介素10水平明显高于 展开更多
关键词 脂肪组织 滑膜 间质干细胞 软骨细胞 共同培养技术 骨关节炎 组织工程 骨性关节炎 脂肪间充质干细胞 滑膜间充质干细胞 炎性软骨细胞 三维培养 软骨退变 软骨再生 炎症反应 成软骨分化 干细胞 国家自然科学基金
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滑膜间充质干细胞及其在组织工程中的应用 被引量：10
3
作者 赵文君 邢国胜 于顺禄 《中国修复重建外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第12期1504-1507,共4页
目的对滑膜间充质干细胞(synovium-derived mesenchymal stem cells,SMSCs)的研究进展及在组织工程中的应用进行综述。方法查阅近年SMSCs相关文献,从分离培养方法、基本特性及在组织工程中的应用三方面进行综述。结果 SMSCs具有分离方... 目的对滑膜间充质干细胞(synovium-derived mesenchymal stem cells,SMSCs)的研究进展及在组织工程中的应用进行综述。方法查阅近年SMSCs相关文献,从分离培养方法、基本特性及在组织工程中的应用三方面进行综述。结果 SMSCs具有分离方法简便、增殖能力及多分化能力较强的特点,已有研究将其应用于软骨、肌腱、韧带及骨组织工程领域。结论 SMSCs是MSCs家族的新成员,可能会成为组织工程领域新的种子细胞,还需要进一步深入研究。 展开更多
关键词 滑膜间充质干细胞 组织工程 种子细胞
原文传递
滑膜间充质干细胞与软骨细胞移植修复膝关节软骨缺损 被引量：8
4
作者 胡鑫 尹小朋 +8 位作者 龚忠诚 邵博 凌彬 刘慧 克热木.阿巴斯 王冰 胡露露 王玥 林兆全 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2017年第9期1408-1413,共6页
背景:膝关节软骨损伤后修复较困难。有研究发现将关节软骨细胞和滑膜间充质干细胞混合培养接种于壳聚糖支架材料中,均可以形成软骨基质。目的:观察滑膜间充质干细胞与软骨细胞与壳聚糖/Ⅰ型胶原复合支架材料对膝关节软骨缺损的修复情况... 背景:膝关节软骨损伤后修复较困难。有研究发现将关节软骨细胞和滑膜间充质干细胞混合培养接种于壳聚糖支架材料中,均可以形成软骨基质。目的:观察滑膜间充质干细胞与软骨细胞与壳聚糖/Ⅰ型胶原复合支架材料对膝关节软骨缺损的修复情况。方法:将大鼠膝关节滑膜间充质干细胞及软骨细胞按1∶2比例共培养于壳聚糖/Ⅰ型胶原复合支架材料中,将此复合材料移植于膝关节软骨缺损模型大鼠膝关节缺损处进行修复。结果与结论:(1)组织学变化:苏木精-伊红染色、甲苯胺蓝染色及番红O染色显示,植入后4,8,12周,大鼠膝关节软骨细胞逐渐增多;(2)软骨样组织标记物Ⅱ型胶原表达:免疫组织化学染色显示,移植后4,8,12周,大鼠膝关节软骨组织细胞及细胞基质可见Ⅱ型胶原阳性表达。(3)结果证实,滑膜间充质干细胞与软骨细胞混合培养于壳聚糖/Ⅰ型胶原复合支架材料中,在体内环境下能够形成软骨样组织,有利于损伤膝关节软骨缺损的修复。 展开更多
关键词 组织工程 软骨细胞 滑膜 干细胞 移植 干细胞移植 软骨组织工程 滑膜间充质干细胞 共培养技术 Ⅱ型胶原 蛋白聚糖 国家自然科学基金
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三维环境下软骨细胞诱导滑膜间充质干细胞向软骨样细胞的分化 被引量：8
5
作者 杨萌 邵博 +10 位作者 龚忠诚 宁晓婷 刘慧 克热木·阿巴斯 凌彬 尹小朋 王冰 胡露露 王玥 胡鑫 林兆全 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2016年第11期1544-1550,共7页
背景:体外环境下软骨细胞与滑膜间充质干细胞共培养能够使滑膜间充质干细胞向软骨分化,关于体内环境下细胞共培养诱导干细胞分化的研究很少。目的:拟将滑膜间充质干细胞/软骨细胞与壳聚糖/Ⅰ型胶原复合支架材料植入大鼠背部皮下,了解细... 背景:体外环境下软骨细胞与滑膜间充质干细胞共培养能够使滑膜间充质干细胞向软骨分化,关于体内环境下细胞共培养诱导干细胞分化的研究很少。目的:拟将滑膜间充质干细胞/软骨细胞与壳聚糖/Ⅰ型胶原复合支架材料植入大鼠背部皮下,了解细胞复合支架在体内向软骨分化的情况。方法:取SD大鼠膝关节滑膜组织及软骨组织,用酶消化法获得滑膜间充质干细胞及软骨细胞分别进行培养。实验设单纯软骨细胞组,单纯滑膜间充质干细胞组,滑膜间充质干细胞︰软骨细胞为1︰2组,无细胞材料组,取第3代滑膜间充质干细胞及第2代软骨细胞培养于壳聚糖/Ⅰ型胶原复合支架材料中移植于SD大鼠皮下,4,8周时取材进行苏木精-伊红染色、甲苯胺蓝染色和免疫组织化学检测。结果与结论:植入4,8周后,细胞支架材料保持圆盘状,单纯软骨细胞组、滑膜间充质干细胞︰软骨细胞为1︰2组可见细胞及细胞基质Ⅱ型胶原阳性表达,单纯软骨细胞组、滑膜间充质干细胞︰软骨细胞为1︰2组蛋白聚糖阳性表达,结果表明两种细胞混合培养于壳聚糖/Ⅰ型胶原复合支架材料中,在体内环境下能够形成软骨样组织。 展开更多
关键词 滑膜 间质干细胞 软骨细胞 共同培养技术 胶原Ⅱ型 组织工程 组织构建 软骨组织工程 滑膜间充质干细胞 共培养技术 Ⅱ型胶原 蛋白聚糖 国家自然科学基金
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滑膜间充质干细胞修复膝关节软骨损伤的应用与进展 被引量：7
6
作者 陈琦 廖文波 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2015年第36期5886-5891,共6页
背景:膝关节软骨损伤后很难愈合,是临床上亟需解决的重要课题。目的:总结滑膜间充质干细胞在膝关节软骨损伤治疗上的优越性。方法:用英文主题词"Knee Joint,Cartilage,Synovial Membrane,Tissues,Injuries,Repair"在Pub Med... 背景:膝关节软骨损伤后很难愈合,是临床上亟需解决的重要课题。目的:总结滑膜间充质干细胞在膝关节软骨损伤治疗上的优越性。方法:用英文主题词"Knee Joint,Cartilage,Synovial Membrane,Tissues,Injuries,Repair"在Pub Med数据库中检索2005年8月至2015年8月文献总共625篇。采纳并分析滑膜间充质干细胞治疗膝关节软骨损伤文献48篇。排除其他非滑膜间充质干细胞及非膝关节软骨损伤治疗的相关文章,保留35篇文章进行综述。结果与结论:应用滑膜间充质干细胞治疗膝关节软骨损伤,能够获得更加理想的治疗效果,损伤组织本身固有的间充质干细胞是修复损伤组织的最佳种子细胞。 展开更多
关键词 干细胞 移植 滑膜间充质干细胞 软骨 组织工程 损伤、修复 愈合
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大鼠来源滑膜间充质干细胞的成软骨分化 被引量：7
7
作者 邵博 龚忠诚 +8 位作者 刘慧 凌彬 克热木·阿巴斯 尹小朋 胡露露 王冰 宁晓婷 杨萌 林兆全 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2014年第15期2338-2344,共7页
背景:相比其他组织来源的间充质干细胞,滑膜间充质干细胞有着较强的成软骨特性和克隆能力,因此将是软骨组织工程中最有前景的种子细胞之一。目的:培养及体外扩增SD大鼠滑膜间充质干细胞,鉴定其多向分化潜能及在添加生长因子后三维立体... 背景:相比其他组织来源的间充质干细胞,滑膜间充质干细胞有着较强的成软骨特性和克隆能力,因此将是软骨组织工程中最有前景的种子细胞之一。目的:培养及体外扩增SD大鼠滑膜间充质干细胞,鉴定其多向分化潜能及在添加生长因子后三维立体培养条件下的成软骨能力。方法:无菌条件下获取SD大鼠滑膜组织,Ⅰ型胶原酶消化法分离大鼠滑膜间充质干细胞。体外扩增、培养,取第3代滑膜间充质干细胞进行吉姆萨、生长曲线测定、成脂诱导、成骨诱导和三维条件下成软骨诱导,成软骨诱导21 d后通过甲苯胺蓝染色、Ⅱ型胶原免疫组化染色及RT-PCR对成软骨诱导后产物进行检测。结果与结论:获取的大鼠滑膜细胞具有间充质干细胞的特性,滑膜间充质干细胞在体外培养呈成纤维样形态,并维持着多向分化的能力。使用生长因子诱导软骨细胞21 d后,可见软骨样组织,蛋白聚糖和Ⅱ型胶原可以在甲苯胺蓝染色和Ⅱ型胶原免疫组化染色后被检测到。RT-PCR检测结果显示软骨诱导分化后细胞中Ⅱ型胶原和蛋白聚糖mRNA呈阳性表达。提示大鼠来源的滑膜间充质干细胞具有成软骨能力。 展开更多
关键词 组织构建 软骨组织工程 干细胞 分化 滑膜间充质干细胞 成骨 成脂 成软骨 生长因子 三维培养 国家自然科学基金
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淫羊藿苷含药血清促进3种细胞共培养体系中软骨细胞增殖和干细胞成软骨分化
8
作者 刘琪 李林臻 +3 位作者 李玉生 焦泓焯 杨程 张君涛 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2025年第7期1371-1379,共9页
背景:关节软骨损伤修复能力十分有限,组织工程技术为修复受损软骨提供了新的治疗方案,其中软骨细胞、骨髓间充质干细胞和滑膜间充质干细胞之间的相互影响和诱导作用是自体软骨损伤愈合的基础。目的:构建软骨细胞-骨髓间充质干细胞-滑膜... 背景:关节软骨损伤修复能力十分有限,组织工程技术为修复受损软骨提供了新的治疗方案,其中软骨细胞、骨髓间充质干细胞和滑膜间充质干细胞之间的相互影响和诱导作用是自体软骨损伤愈合的基础。目的:构建软骨细胞-骨髓间充质干细胞-滑膜间充质干细胞共培养体系用以模拟软骨细胞体内微环境,并探究其最佳细胞接种比例,同时观察淫羊藿苷含药血清对该体系中软骨细胞增殖和干细胞成软骨分化的影响。方法:提取、培养、鉴定大鼠膝关节软骨细胞、骨髓间充质干细胞和滑膜间充质干细胞,按不同细胞接种比例构建软骨细胞-骨髓间充质干细胞-滑膜间充质干细胞非接触共培养体系,共培养72 h后观察软骨细胞增殖活性和表型能力,选择综合效应最佳的共培养体系;用淫羊藿苷溶液(0.25 mg/m L)灌胃新西兰大白兔制备淫羊藿苷含药血清,对照组共培养体系用含体积分数为10%胎牛血清、1%双抗的高糖DMEM培养液培养,实验组共培养体系在此基础之上加入体积分数为10%淫羊藿苷含药血清进行干预,24,48 h后检测两组软骨细胞增殖活性和Ⅱ型胶原表达,14 d后采用免疫荧光染色检测骨髓间充质干细胞、滑膜间充质干细胞成软骨分化情况。结果与结论:(1)3种细胞以不同比例共培养时均可正常贴壁生长,当软骨细胞、骨髓间充质干细胞、滑膜间充质干细胞接种比例为2∶1∶1时,共培养体系中软骨细胞表现出最佳增殖活性和表型能力;(2)与对照组相比,实验组培养24 h后软骨细胞增殖活性和Ⅱ型胶原表达显著升高(P<0.01),48 h后两组仍有差异(P<0.05),培养14 d后两组骨髓间充质干细胞和滑膜间充质干细胞出现明显的软骨分化,部分细胞呈现圆形或椭圆形,胞浆Ⅱ型胶原免疫荧光染色为阳性,实验组荧光强度明显高于对照组(P<0.01);(3)结果表明,以非接触共培养方法可以成功建立软骨细� 展开更多
关键词 淫羊藿苷含药血清 软骨细胞 骨髓间充质干细胞 滑膜间充质干细胞 共培养 细胞增殖 Ⅱ型胶原 成软骨分化
长链非编码RNA DANCR促滑膜间充质干细胞向软骨细胞分化作用的研究进展 被引量：6
9
作者 杨超 张雷 +1 位作者 周利武 赵建宁 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2016年第8期892-896,共5页
长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)是一类转录本长度大于200 nt,不具有翻译成蛋白质能力的RNA。lncRNA DANCR是一种近年来在肝细胞癌中发现的特异性高表达的长链非编码RNA,具有高度调控细胞分化的作用。最新研究表明,lncRNA DA... 长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)是一类转录本长度大于200 nt,不具有翻译成蛋白质能力的RNA。lncRNA DANCR是一种近年来在肝细胞癌中发现的特异性高表达的长链非编码RNA,具有高度调控细胞分化的作用。最新研究表明,lncRNA DANCR在关节软骨损伤修复中也起着重要的调控作用,并有望成为促进滑膜间充质干细胞(synovium-derived mesenchymal stem cells,SMSCs)向软骨细胞增殖和分化的关键调控位点。文中就近年来DANCR促进SMSCs向软骨细胞增殖和分化过程中的作用及未来可能的研究热点进行综述。 展开更多
关键词 长链非编码RNA DANCR 滑膜间充质干细胞
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人滑膜间充质干细胞的分离培养与鉴定 被引量：6
10
作者 陈松 符培亮 +2 位作者 丛锐军 吴海山 许震宇 《中国骨与关节外科》 2014年第2期146-151,共6页
背景:软骨一旦损伤将很难自我修复,组织工程学修复损伤软骨是目前的研究热点。组织工程学中找到合适的"种子细胞"至关重要。滑膜间充质干细胞(SMSCs)因较其他来源的间充质干细胞成软骨能力、增殖能力更强,且细胞容易获取、对... 背景:软骨一旦损伤将很难自我修复,组织工程学修复损伤软骨是目前的研究热点。组织工程学中找到合适的"种子细胞"至关重要。滑膜间充质干细胞(SMSCs)因较其他来源的间充质干细胞成软骨能力、增殖能力更强,且细胞容易获取、对机体损伤小等优点,越来越受到研究者的青睐。目的:探讨人SMSCs体外分离、培养的方法与步骤,探索对SMSCs进行鉴定的最新方法。方法:关节镜下获取11例行关节镜手术患者的滑膜组织,按照Pei等[6]的方法分离培养滑膜干细胞;从细胞形态学观察、细胞生长曲线分析、CCK-8测定增殖活力、流式细胞仪检测细胞周期和细胞表面抗原、对SMSCs进行成脂/成骨/成软骨诱导、免疫细胞荧光染色以及RT-PCR检测成脂/成骨/成软骨相关基因的表达等方面对SMSCs进行鉴定。结果与结论:按照Pei等的方法可以成功地从人滑膜组织中分离出干细胞,分离出的干细胞具有间充质干细胞特异性表型和多向分化潜能。 展开更多
关键词 滑膜间充质干细胞 分离培养 鉴定 成脂诱导 成骨诱导 成软骨诱导
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长链非编码LncHECW1-IT1对滑膜间充质干细胞成软骨分化的调控机制 被引量：1
11
作者 王彬 范世珍 +2 位作者 郭艳玲 赵硕 林松青 《中国实验诊断学》 2024年第2期191-200,共10页
目的 本文旨在探讨长链非编码RNAHECW1-IT1对滑膜间充质干细胞(SMSCs)成软骨分化的调控机制。方法 选取广州中医药大学深圳医院骨伤科关节镜手术或是关节置换手术患者的膝关节内滑膜,分离培养及诱导软骨分化,利用各种实验室方法,检测滑... 目的 本文旨在探讨长链非编码RNAHECW1-IT1对滑膜间充质干细胞(SMSCs)成软骨分化的调控机制。方法 选取广州中医药大学深圳医院骨伤科关节镜手术或是关节置换手术患者的膝关节内滑膜,分离培养及诱导软骨分化,利用各种实验室方法,检测滑膜间充质干细胞成软骨分化的情况及分化过程中信号通路的表达。结果 从供体的滑膜组织中分离出SMSCs,并通过流式细胞术、RT-qPCR和WB鉴定出SMSCs;通过阿利新蓝染色分析了SMSCs的高软骨分化能力;采用高通量RNA测序技术分析了软骨分化诱导后lncRNA和mRNA的不同表达水平,最终共发现121个lncRNA和2539个mRNA,对所有DEmRNAs进行了GO富集和KEGG通路分析,我们发现MAPK和Wnt信号通路在软骨分化过程中显著富集。通过构建竞争的内源性RNA网络,鉴定发现LncHECW1-IT1和ATF2在SMSCs软骨分化中的重要作用,是治疗及干预骨关节炎的调节因子和重要靶点。结论 LncHECW1-IT1通过上调ATF2的表达来促进人SMSCs的软骨生成分化,LncHECW1-IT1-ATF2轴是调控SMSCs成软骨分化的新机制。 展开更多
关键词 骨关节炎 长链非编码RNAHECW1-IT1 软骨细胞分化 滑膜间充质干细胞 ATF2
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CD105＋滑膜间充质干细胞的磁珠分选及成软骨能力研究 被引量：5
12
作者 王鹏程 游洪波 +5 位作者 毛泽楷 黄小建 潘其勇 张锐 鲁锐 尚小斌 《中华实验外科杂志》 CSCD 北大核心 2017年第6期921-923,共3页
目的使用磁珠分选技术（MACS）对滑膜间充质干细胞（SMSC）进行分选，对比分选和未分选SMSC的成软骨能力。方法体外培养大鼠原代SMSC，用形态学观察和三系分化进行细胞鉴定。以CD105为一抗进行MACS，对筛选出的细胞进行免疫荧光和流式... 目的使用磁珠分选技术（MACS）对滑膜间充质干细胞（SMSC）进行分选，对比分选和未分选SMSC的成软骨能力。方法体外培养大鼠原代SMSC，用形态学观察和三系分化进行细胞鉴定。以CD105为一抗进行MACS，对筛选出的细胞进行免疫荧光和流式细胞学鉴定。用实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR）检测分选和未分选SMSC诱导后的Ⅱ型胶原（ColⅡ）、蛋白聚糖（Agg）、性别决定区Y框蛋白9（SOX9）等成软骨指标，进行成软骨能力评价。结果体外培养的SMSC可进行成骨、成脂、成软骨三系分化。MACS所得到的细胞免疫荧光和流式细胞学鉴定均为CD105阳性。与未分选组比较，成软骨诱导培养后CD105＋SMSC阿利新蓝染色更深，并且ColⅡ（4．932±0．660比4．016±0．348；t=2．558，P=0．043），Agg（2．965±0．246比2．103±0．388；t=4．144，P=0．006），SOX9（2．836±0．316比2．143±0．347；t=2．953，P=0．026）各项成软骨指标表达均增高，差异有统计学意义。结论磁珠分选法是一种有效分离出CD105＋SMSC的方法，并且分选后的干细胞具有更强的成软骨能力。 展开更多
关键词 CD105 滑膜间充质干细胞 成软骨分化
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小肠黏膜下层与滑膜间充质干细胞的组织相容性 被引量：5
13
作者 符培亮 张雷 +5 位作者 吴宇黎 吴海山 丛锐军 陈松 丁喆如 周琦 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2013年第47期8202-8208,共7页
背景:小肠黏膜下层有抗微生物活性、良好的生物相容性及生物力学性能,能在体内快速降解,与半月板纤维软骨细胞的胞外基质相近。目的:观察小肠黏膜下层与滑膜间充质干细胞是否有良好的组织相容性。方法:先后采用物理方法与化学方法处理... 背景:小肠黏膜下层有抗微生物活性、良好的生物相容性及生物力学性能,能在体内快速降解,与半月板纤维软骨细胞的胞外基质相近。目的:观察小肠黏膜下层与滑膜间充质干细胞是否有良好的组织相容性。方法:先后采用物理方法与化学方法处理猪小肠黏膜下层,并进行苏木精-伊红染色和扫描电镜观察。制备小肠黏膜下层浸提液,行以下实验:①热源实验:在新西兰大白兔耳缘静脉注射小肠黏膜下层浸提液。②皮肤致敏实验:在新西兰大白兔背部皮内分别注射小肠黏膜下层浸提液、多聚甲醛溶液及生理盐水。③全身毒性实验:在新西兰大白兔耳缘静脉分别注射小肠黏膜下层浸提液与生理盐水。将小肠黏膜下层与成骨诱导的兔滑膜间充质干细胞共培养,以小肠黏膜下层单独培养为对照。结果与结论:经物理处理过的小肠黏膜下层表面仍然存在小肠黏膜上皮细胞、脂肪细胞和一些其他细胞黏附;经化学方法处理后其残留的细胞数量明显减少,但主要结构和成分未被改变。小肠黏膜下层黏膜面较肌层面光滑,无细胞残留,表面纤维组织交错形成疏松的三维网状立体结构,孔隙率为80%。小肠黏膜下层是一种无毒、无刺激、无免疫原性,生物相容性很好的生物材料,与兔滑膜间充质干细胞具有良好的组织相容性。 展开更多
关键词 生物材料 细胞外基质材料 小肠黏膜下层 滑膜间充质干细胞 半月板 组织工程 组织相容性 国家自然科学基金
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滑膜间充质干细胞与软骨细胞三维条件下混合培养向软骨细胞的分化 被引量：5
14
作者 宁晓婷 邵博 +7 位作者 龚忠诚 刘慧 凌彬 克热木·阿巴斯 林兆全 杨萌 尹小朋 胡露露 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2014年第34期5434-5440,共7页
背景:软骨细胞通过自分泌及旁分泌的作用可以为滑膜间充质干细胞向软骨细胞分化提供所需的生长因子及微环境,三维条件下更有利于细胞的黏附增殖与分化。目的:观察滑膜间充质干细胞与软骨细胞混合培养于壳聚糖/Ⅰ型胶原复合支架材料中向... 背景:软骨细胞通过自分泌及旁分泌的作用可以为滑膜间充质干细胞向软骨细胞分化提供所需的生长因子及微环境,三维条件下更有利于细胞的黏附增殖与分化。目的:观察滑膜间充质干细胞与软骨细胞混合培养于壳聚糖/Ⅰ型胶原复合支架材料中向成软骨细胞分化的能力。方法:取SD大鼠滑膜组织及软骨组织,用酶消化法获得滑膜间充质干细胞及软骨细胞分别进行培养。取第3代滑膜间充质干细胞及第2代软骨细胞,将二者以1∶2的比例混合培养负载于壳聚糖/Ⅰ型胶原复合支架材料21 d,进行激光共聚焦扫描及免疫组织化学检测。结果与结论:培养72 h后,扫描电镜观察细胞黏附于支架材料表面,并可见细胞分泌大量基质成分。培养21 d后,激光共聚焦扫描可见细胞在支架表面分布均匀,逐层扫描后细胞逐渐减少。免疫组织化学检测可见基质能被Ⅱ型胶原染色,细胞染色呈现棕黄色。结果表明壳聚糖/Ⅰ型胶原复合支架材料提供三维生长空间,利用软骨细胞分泌生长因子及细胞间的相互作用可以诱导滑膜间充质干细胞向软骨细胞分化。 展开更多
关键词 生物材料 软骨生物材料 滑膜间充质干细胞 软骨细胞 混合培养 生长因子 软骨形成 壳聚糖 Ⅰ型胶原 国家自然科学基金
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软骨细胞上清液诱导滑膜间充质干细胞微团培养成软骨 被引量：4
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作者 邵博 龚忠诚 +7 位作者 刘慧 凌彬 克热木 尹小朋 胡露露 王冰 宁晓婷 林兆全 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2014年第1期100-105,共6页
背景:滑膜间充质干细胞在体外具有多向分化的能力,有望成为软骨组织工程中治疗软骨缺损的种子细胞,在其向软骨细胞分化过程中,合适的生长因子起了重要作用。目的:利用富含生长因子的软骨细胞上清液诱导滑膜间充质干细胞向软骨细胞分化,... 背景:滑膜间充质干细胞在体外具有多向分化的能力,有望成为软骨组织工程中治疗软骨缺损的种子细胞,在其向软骨细胞分化过程中,合适的生长因子起了重要作用。目的:利用富含生长因子的软骨细胞上清液诱导滑膜间充质干细胞向软骨细胞分化,并对其鉴定。方法:采用消化法分别获得SD大鼠滑膜间充质干细胞、软骨细胞。收集软骨细胞上清液离心、过滤冻存备用。培养滑膜间充质干细胞至第3代后离心成微团,并用软骨细胞上清液进行成软骨诱导分化,通过形态学观察、免疫组织化学法、RT-PCR检测进行鉴定。结果与结论:滑膜间充质干细胞使用软骨细胞上清液成软骨诱导21 d后,微团可见似软骨样组织。免疫组化法进行Ⅱ型胶原鉴定,基质能被Ⅱ型胶原染色,细胞染色呈现棕黄色。RT-PCR结果显示诱导后的微团表达软骨特异性基因Ⅱ型胶原和蛋白聚糖。证实软骨细胞分泌的可溶性因子可以诱导大鼠滑膜间充质干细胞向软骨方向分化。 展开更多
关键词 干细胞 诱导 滑膜间充质干细胞 软骨形成 软骨细胞 可溶性因子 生长因子 种子细胞 三维培养 新疆维吾尔自治区自然科学基金
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补肾活血中药对滑膜间充质干细胞成软骨分化的实验研究 被引量：4
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作者 范世珍 林松青 +1 位作者 赵硕 王彬 《新中医》 CAS 2022年第1期1-7,共7页
目的:探究补肾活血中药对滑膜间充质干细胞(SMSCs)成软骨分化的影响。方法:选择1例膝骨关节炎并行全膝关节置换术患者,将手术中分离得到的滑膜组织进行消化培养,经流式细胞仪检测贴壁细胞的表面标志物表达。同时选取20只SPF级雄性SD大鼠... 目的:探究补肾活血中药对滑膜间充质干细胞(SMSCs)成软骨分化的影响。方法:选择1例膝骨关节炎并行全膝关节置换术患者,将手术中分离得到的滑膜组织进行消化培养,经流式细胞仪检测贴壁细胞的表面标志物表达。同时选取20只SPF级雄性SD大鼠,随机分到中药血清组和空白血清组各10只,中药血清组予以补肾活血中药汤剂灌胃,空白血清组予以等量0.9%氯化钠溶液灌胃,7 d后经心脏取血获得含中药血清和空白血清,将SMSCs置于不同浓度的中药血清及空白血清环境下培养24 h、48 h、72 h,CCK-8检测对其细胞活性及毒性作用,获得合适培养浓度血清。通过不同诱导处理分为以下3组:空白组予以含合适浓度的空白血清的完全培养基培养,诱导剂组予以含合适浓度的空白血清的成软骨诱导分化培养基培养,中药诱导剂组予以含合适浓度的中药血清的成软骨诱导分化培养基培养,培养21 d后,观察各组阿利新蓝染色成软骨分化情况,统计并分析成软骨分化指标Ⅱ型胶原(ColⅡ)、蛋白聚糖(AGG)和SOX9的蛋白印迹检测及实时定量基因扩增荧光检测系统(qPCR)检测结果数据。结果:流式细胞仪鉴定获得细胞的表面分子CD90、CD105阳性率分别为99.08%、92.88%,CD31、CD34阳性率0.07%、0.03%,经鉴定为SMSCs。72 h内,10%浓度干预组随时间延长吸光度值逐渐增减;且在72 h时,10%浓度含中药血清干预SMSCs较0%浓度组的吸光度值有明显增长(P<0.05),且30%浓度含中药血清干预SMSCs较10%浓度组的吸光度值有所降低(P<0.05),因此,选用10%的血清浓度作为合适浓度用作后续实验。分组诱导培养21 d后,阿利新蓝染色显示中药诱导组蓝色广泛,呈聚集状态,阳性染色较其空白组及诱导剂组显著;经qPCR检测,中药诱导剂组的成软骨分化指标ColⅡ、AGG、SOX9的基因表达较诱导剂组有明显升高(P<0.05),且均高于空白组(P<0.05)。蛋白印迹检测中药� 展开更多
关键词 滑膜间充质干细胞 成软骨分化 补肾活血 Ⅱ型胶原 蛋白聚糖 SOX9
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滑膜间充质干细胞成纤维软骨分化条件初步探索 被引量：4
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作者 符培亮 丛锐军 +7 位作者 陈松 张雷 丁喆如 周琦 李林涛 许震宇 吴宇黎 吴海山 《中国修复重建外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期81-91,共11页
目的采用正交实验研究滑膜间充质干细胞(synovial derived MSCs,SMSCs)成纤维软骨分化的条件。方法 5只成年新西兰白兔,活检取滑膜组织。贴壁法获取SMSCs后采用流式细胞仪及成脂、成骨、成软骨诱导分化鉴定。根据预实验与文献综述寻找与... 目的采用正交实验研究滑膜间充质干细胞(synovial derived MSCs,SMSCs)成纤维软骨分化的条件。方法 5只成年新西兰白兔,活检取滑膜组织。贴壁法获取SMSCs后采用流式细胞仪及成脂、成骨、成软骨诱导分化鉴定。根据预实验与文献综述寻找与SMSCs成纤维软骨分化可能相关的条件,采用缺失实验初筛必要条件后,TGF-β1、BMP-2、地塞米松、脯氨酸、柠檬酸(ascorbic acid,ASA)、丙酮酸、胰岛素+转铁蛋白+亚硒酸预混液、牛血清白蛋白、b FGF、间断静水压、BMP-7、IGF纳入正交实验,采用SPSS18.0统计软件设计L60(212)正交实验及表头,定义2水平条件,在SMSCs-三维小肠黏膜下层(small intestinal submucosa,SIS)支架上诱导成纤维软骨分化。使用流式细胞仪计数,检测CD151+/CD44+细胞并记录SMSCs向纤维软骨分化的转换率,采用免疫组织化学染色,结合细胞形态、甲苯胺蓝染色、半定量RT-PCR检测SOX9、聚集蛋白聚糖、Ⅰ型胶原(collagen typeⅠ,ColⅠ)、ColⅡ、ColⅨ基因表达,进一步验证结果。检验指标rate是CD151+/CD44+细胞与高表达ColⅠ细胞的比例乘积。同时采用Pico Green Assay测量细胞总DNA量,以反映细胞扩增情况。正交实验结果采用直观观察和主体间方差分析方法,考虑部分因子间的1阶交互作用,组间差异采用LSD和q检验验证,使用Ⅲ型平方和校正模型,检验水准α=0.05。结果实验获取的细胞为SMSCs,细胞倍增时间为28 h。成纤维软骨分化过程中SMSCs-三维SIS支架体积5 d倍增,14 d后得到甲苯胺蓝染色阳性的细胞-支架复合物。正交实验结果直观分析示,TGF-β1对成纤维软骨分化转化率的作用最明显,BMP-7采用水平2有利于得到更高的转化率,但与BMP-2存在交互作用;其余第1区组水平值加和高于22.5的因子有DEX、ASA、ITS、转铁蛋白、b FGF,模型的相关性好。方差分析校正模型P=0.000,能够满足实验设计;截距P=0.000,说明各因子对因变� 展开更多
关键词 滑膜间充质干细胞 纤维软骨细胞 正交实验 分化条件
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高糖对滑膜间充质干细胞衰老的影响 被引量：4
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作者 谭淑仪 刘宇薇 高海 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2022年第14期1773-1777,共5页
目的探究高糖对大鼠滑膜间充质干细胞(synovial mesenchymal stem cells,SMSCs)衰老的影响,为SMSCs应用于糖尿病患者骨关节炎的治疗提供风险评估依据。方法葡萄糖生理浓度(5.5 mmol/L)作为对照组,高糖(25 mmol/L)作为高糖组,检测大鼠SM... 目的探究高糖对大鼠滑膜间充质干细胞(synovial mesenchymal stem cells,SMSCs)衰老的影响,为SMSCs应用于糖尿病患者骨关节炎的治疗提供风险评估依据。方法葡萄糖生理浓度(5.5 mmol/L)作为对照组,高糖(25 mmol/L)作为高糖组,检测大鼠SMSCs在高糖刺激下的衰老情况,包括细胞增殖活性,β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)表达,衰老相关表型(SASP)IL6、MMP13、TNFα、CXCL1、IFNβ的mRNA表达,细胞内线粒体裂解情况,p21蛋白表达,以及透明质酸的分泌。结果本实验条件下,高糖刺激不影响大鼠SMSCs增殖(P=0.675),SA-β-gal染色阳性细胞增加,SMSCs胞内线粒体裂解增加,线粒体呈碎片化,衰老相关表型SASP的mRNA表达增加,MMP13(P=0.011),TNF、IL-6、INFβ(P=0.000),CXCL1(P=0.003),p21蛋白表达下降(P=0.00),透明质酸释放降低(P=0.002)。结论高糖使大鼠SMSCs进入衰老状态,损害其生物学功能,采用SMCSs治疗糖尿病患者骨关节炎其临床效果有待商榷。 展开更多
关键词 滑膜间充质干细胞 高糖 衰老 糖尿病 骨关节炎
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滑膜间充质干细胞体内外成骨特性的实验研究 被引量：4
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作者 郑伟伟 杨民 +1 位作者 武成 苏显林 《中国修复重建外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期102-109,共8页
目的探讨大鼠滑膜间充质干细胞(synovium-derived mesenchymal stem cells,SMSCs)生物学特性及诱导成骨的可行性,评估SMSCs复合羟基磷灰石/壳聚糖/聚乳酸(hydroxylapatite/chitosan/poly L-latic acid,HA/CS/PLLA)支架材料在体内异位成... 目的探讨大鼠滑膜间充质干细胞(synovium-derived mesenchymal stem cells,SMSCs)生物学特性及诱导成骨的可行性,评估SMSCs复合羟基磷灰石/壳聚糖/聚乳酸(hydroxylapatite/chitosan/poly L-latic acid,HA/CS/PLLA)支架材料在体内异位成骨能力。方法采用酶消化法和贴壁法分离培养SMSCs,并利用流式细胞仪检测细胞表型,SMSCs成脂及成骨诱导后分别行油红O染色、ALP染色和茜素红染色鉴定。取第3代SMSCs,成骨诱导1、7、14、21、28 d后,采用实时荧光定量PCR检测骨钙素(osteocalcin,OCN)、Ⅰ型胶原、ALP以及Runx-2m RNA表达情况;成骨诱导后1、3、5、7、9、11 d,采用ELISA法检测ALP活性;成骨诱导后7、14、21、28 d,采用茜素红S法检测钙盐沉积;以正常培养SMSCs作为对照组。体内实验:取SD大鼠24只,随机分为实验组和对照组(n=12);取第3代SMSCs接种于HA/CS/PLLA支架材料,体外复合培养72 h后植入实验组大鼠右下肢肌袋,对照组大鼠植入单纯HA/CS/PLLA支架材料;术后4、8周通过X线片及组织学观察分析SMSCs体内成骨情况。结果提纯后SMSCs CD147、CD90、CD105、CD44表达超过95%,而CD117、CD34、CD14、CD45表达低于10%;油红O染色可见红色脂滴形成,茜素红染色可见红色钙化灶,ALP染色可见细胞质呈咖啡样深染。实时荧光定量PCR检测示,SMSCs成骨诱导7 d,Ⅰ型胶原、ALP、Runx-2 m RNA表达显著增加,诱导14 d OCN m RNA表达显著增加。成骨诱导后5、7、9、11 d ALP活性明显高于对照组,7 d时达峰值(P<0.05)。成骨诱导14 d,钙含量显著增加,且随诱导时间延长钙含量逐渐增加(P<0.05),且均高于对照组(P<0.05)。体内实验术后4、8周影像学和组织学观测结果显示,两组均可见新生骨形成,但实验组成骨量明显多于对照组(P<0.05)。结论 SMSCs在体内、体外均可诱导成骨,可成为骨组织工程的种子细胞。 展开更多
关键词 滑膜间充质干细胞 成骨诱导 茜素红 ALP 新骨形成 大鼠
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滑膜间充质干细胞修复软骨损伤的研究进展
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作者 李林臻 刘琪 +1 位作者 焦泓焯 张君涛 《中国矫形外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第16期1486-1491,共6页
软骨是关节的重要结构,在关节腔内起润滑关节、缓冲压力的作用。软骨损伤会导致膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA),严重影响患者的生活质量。目前临床用于治疗KOA的手段并不能修复受损软骨。近年来,滑膜间充质干细胞(synovial mesenc... 软骨是关节的重要结构,在关节腔内起润滑关节、缓冲压力的作用。软骨损伤会导致膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA),严重影响患者的生活质量。目前临床用于治疗KOA的手段并不能修复受损软骨。近年来,滑膜间充质干细胞(synovial mesenchymal stem cells,SMSCs)以其在软骨损伤修复方面的独特优势,成为修复受损软骨的热点研究领域。本文对SMSCs修复软骨损伤的机制及体内外研究进展进行综述,以期推动SMSCs修复软骨损伤向临床转化。 展开更多
关键词 滑膜间充质干细胞 膝骨关节炎 软骨损伤 软骨修复
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