摘要
目的检测长链非编码RNA（lncRNA）结肠癌相关转录物2（CCAT2）在人骨肉瘤中的表达并观察其对人骨肉瘤MG63细胞增殖、侵袭和凋亡能力的影响。方法采用实时定量聚合酶链反应（RT-qPCR）检测20例人骨肉瘤患者癌组织及癌旁组织CCAT2的表达和人骨肉瘤MG63细胞与正常成骨细胞hFOB1.19的CCAT2表达。合成针对CCAT2的特异性小干扰RNA（si-CCAT2），通过脂质体介导，将其转染入MG63细胞，实验分为空白对照组、小干扰RNA（siRNA）-NC组、siRNA-1组和siRNA-2组，后利用RT-qPCR技术检测4组细胞中CCAT2的表达量，验证siRNA沉默效果；细胞计数试剂盒（CCK-8）、Transwell实验和流式细胞术分别检测细胞的增殖、侵袭和凋亡能力。结果CCAT2在人骨肉瘤组织和正常组织中的相对表达水平为2.448±1.013和1.551±0.769，两者差异有统计学意义（t＝3.295，P＝0.002）；在MG63细胞和hFOB1.19细胞的相对表达水平为2.357±0.157和1.329±0.498，两者差异有统计学意义（t＝2.566，P＝0.020）。沉默细胞中CCAT2后，与NC组（1.064±0.092）和空白对照组（1.076±0.135）比较，siRNA-1和siRNA-2组CCAT2表达量（0.499±0.030、0.519±0.097）明显下降（tsiRNA-1组＝7.248，PsiRNA-1组＝0.002；tsiRNA-2组＝5.814，PsiRNA-2组＝0.004）。降低CCAT2的表达后，MG63细胞增殖活性明显下降，siRNA-1组和siRNA-2组平均细胞侵袭个数为（40.00±2.00）、（38.67±2.08）个，较NC组[（65.00±3.61）个]和空白对照组[（65.33±3.51）个]明显减少（tsiRNA-1组＝10.857，PsiRNA-1组＝0.001；tsiRNA-2组＝11.314，PsiRNA-2组＝0.000）；细胞凋亡能力[（44.76±2.49）%、（46.53±2.66）%]较NC组[（5.01±0.20）%]和空白组[（5.43±0.47）%]明显增加（tsiRNA-1组＝26.832，PsiRNA-1组＝0.000；tsiRNA-2组＝26.370，PsiRNA-2组＝0.000）。结论lncRNA CCAT2在人骨肉瘤组织和细胞中表达上调，抑制CCAT2的表达可显著抑制MG63细胞的增殖和侵�
Objective To detect the expression of long chain non -coding RNA （lncRNA） colon cancer associated transcript 2 （ CCAT2 ） in human osteosarcoma （OS） and to investigate the effects of CCAT2 in the human osteosarcoma MG63 cells on proliferation, invasion and apoptosis. Methods The re- al- time quantitative polymerase chain reaction （RT- qPCR） assay was used to quantify the expression levels of CCAT2 in 20 paired human OS tissues and the matched adjacent tissues, and also the human OS MG63 cells and osteoblast cell hFOB1.19. We transfected the specific synthesis for CCAT2 small interfer- ence RNA （ si - CCAT2） into MG63 cells that mediated by liposome, and the cells were divided into four groups： blank control group, small interfering RNA（siRNA） -NC group, siRNA -1 group and siRNA -2 group. Then we used the RT - qPCR assay to detect the expression levels of CCAT2 in the four groups of cells to validate the siRNA silencing efficacy. The cell counting kit （CCK - 8 ） assay （10 μl/2 000 cells） , Transwell assay and flow cytometry （FCM） were respectively used to detect the cell proliferation, invasion, and apoptosis. Results The relative expression of CCAT2 in osteosarcoma tissues and nomlal tissues were （ 2. 448 ± 1. 013 ） and （ 1. 551 ± 0. 769 ） respectively （ t = 3. 295, P = 0. 002 ）, and in MG63 and hFOB1.19 cells were （2. 357 ± 0. 157） and （1. 329 ± 0. 498） respectively （t = 2. 566, P = 0. 020）. After silencing the CCAT2, compared with the NC （ 1. 064 ± 0. 092） and blank control group （ 1. 076 ±0. 135）, the expression of CCAT2 in siRNAs groups （0. 499 ±0. 030, 0. 519 ±0. 097） was sig- nificantly lower （tsiRNA-1 =7. 248, PsiRNA-1 =0. 002; tsiRNA-2 =5. 814, PsiRNA-2=0. 004）. The lowexpres- sion of CCAT2 inhibited cell proliferation, and the invasive ability of MG63 cells in siRNAs groups （40. 00 ± 2. 00, 38.67 ±2. 08） was significantly inhibited （ tsiRNA-1= 10. 857, tsiRNA-1=0. 001 ; tsiRNA-2 = 11. 314, PsiRNA-2 =0. 000） th
出处
《中华实验外科杂志》
CSCD
北大核心
2017年第11期1847-1850,共4页
Chinese Journal of Experimental Surgery
关键词
长链非编码RNA
骨肉瘤
结肠癌相关转录物2
增殖
侵袭
Long chain non -coding RNA
Osteosarcoma
Colon cancer associated transcript 2
Proliferation
Invasion
