摘要
目的探讨HCV编码的NS3-4A蛋白对MMP-9表达的调节作用。方法利用Primer Premier5.0软件设计相关引物,构建在相应的载体上;使用PCR扩增目的基因;PCR产物以及双酶切产物的胶回收;冷氯化钙法制备感受态细胞;YC法转化感受态细胞;进行细胞培养基的配制;之后进行RT-PCR反应。结果在Huh7.5.1细胞内,内源性的MMP-9可以被NS3-4A蛋白上调表达;转染了p CMV-tag2A-NS3-4A质粒的Huh7.5.1细胞与未转染的细胞相比,其内源性MMP-9的表达可以明显被NS3-4A蛋白上调。在Huh7.5.1细胞中,IFN-α可以增促进MMP-9基因mRNA的表达,且这种增强作用呈现出剂量依赖性;在转染了p CMVtag2B-MMP-9质粒的Huh7.5.1细胞中,其内源性IFN-α及其受体IFNAR1和IFNAR2的表达可以被MMP-9蛋白抑制,且对IFN-α及IFNAR1的抑制作用具有较明显的剂量依赖性;向转染了p CMV-tag2B质粒的Huh7.5.1细胞中加入IFN-α可以上调其内源性的PKR和OAS2的表达,而MMP-9又可以抑制这些基因的表达,这反过来也说明MMP-9可以抑制IFN-α及其受体IFNAR1和IFNAR2的表达,进而抑制IFN-α下游PKR和OAS2的表达;IFN-α可以上调Huh7.5.1细胞中内源性的PKR和OAS2的表达,而MMP-9又可以抑制这些基因的表达,这与之前mRNA水平的检测结果相一致。结论在HCV的感染过程中,NS3-4A蛋白可以促进细胞内源性IFN-α的表达,而IFN-α的高表达又会导致MMP-9的高表达,MMP-9反过来又会抑制IFN-α及其受体IFNAR1和IFNAR2的表达水平,进而抑制IFN-α下游的PKR及OAS2基因。
出处
《广东医学》
CAS
北大核心
2015年第20期3132-3136,共5页
Guangdong Medical Journal
