摘要
目的研究高迁移率族蛋白B1(HMGB1)对内皮细胞通透性的影响,以及HMGB1受体(RAGE)和p38 MAPK通路在此病理过程中的作用。方法 HMGB1(200 ng/m L)与人脐静脉内皮细胞株分别在体外共同培养0、3、6、12和24 h,以0 h为对照检测HMGB1诱导单层内皮细胞通透性Pd改变的时间效应;用电阻法分别在0、3、6、12和24 h测量正常空白对照组(单纯培养基)和HMGB1组(200 ng/m L)的单层内皮细胞电阻值TER,比较两组间在相同时间点电阻值的差别;p38 MAPK抑制剂SB203580(25μmol/L)预先作用1 h,继以HMGB1(200 ng/m L)作用12h,比较不同组间细胞通透性的变化;以HMGB1(200 ng/m L)分别作用0、10、20、30、60 min后观察细胞内p38蛋白表达及磷酸化p38表达的时间效应;转染siRNA下调RAGE表达,或以原代培养野生型和RAGE(-/-)小鼠肺微血管内皮细胞培并继以HMGB1刺激,比较各组细胞内磷酸化p38蛋白表达的变化。通透性检测采用FITC荧光标记右旋糖酐漏出法及跨内皮电阻(TER)测定法,蛋白表达用免疫印迹法检测。结果 HMGB1以时间依赖的方式引起单层内皮细胞通透性Pd的升高,12 h与0 h相比,差异有统计学意义(P<0.05);且可使跨细胞电阻TER降低,在12 h与空白对照组相应时间点相比,差异有统计学意义(P<0.05);也可引发p38蛋白磷酸化水平的升高,与0 min相比,差异有统计学意义(P<0.05);SB203580预处理再以HMGB1刺激后细胞通透性明显降低,与HMGB1单纯刺激组相比,差异有统计学意义(P<0.05);RAGE siRNA转染后以HMGB1刺激细胞p38磷酸化水平显著下调,与HMGB1组相比,差异有统计学意义(P<0.05);HMGB1刺激野生型小鼠PMVECs可诱导p38磷酸化,而RAGE(-/-)小鼠PMVECs则无此效应(P<0.05)。结论 HMGB1通过结合RAGE来激活p38诱导血管内皮细胞通透性的增高。
Objective To investigate the effects of high mobility group protein B1 （ HMGB1） on the permeability of endothelial cells, as well as the roles of receptor for advanced glycation end products （ RAGE） and p38 MAPK pathway in this pathological process.Methods Human umbilical vein endothelium cells （ HUVECs） were incubated with HMGB1 in concentrations of 200 ng/ml for 3、6、12 and 24 h, to detect the time effect of endothelial cell permeability.Pretreated HMVECs with 25 μmol/L p38 MAPK inhibitor SB203580 for 1 h, followed by HMGB1 for another 12 h,compared the change of cell permeability in different groups.Treatment of HUVECs with 200 ng/mL HMGB1 for 0、10、20、30、60 min to observe the time effect of p38 phosphorylation.Treatment with siRNA against RAGE and culturing RAGE knockout pulmo-nary microvascular endothelial cells, to observe the changes of p38 phosphorylation under HMGB1 stimulation.Experi-ments were accomplished by using western blot, endothelial monolayer permeability assay and transendothelial electrical resistance.Results The permeability of endothelial cells and p38 phosphorylation was significantly increased in a time-dependent manner upon the stimulation of HMGB1.The pharmacological inhibition of p38 MAPK kinase greatly attenuated the HMGB1-induced hyperpermeability.Blockade of cell surface receptors RAGE with RAGE siRNA or using RAGE knock out PMVECs significantly reduced HMGB1-induced p38 phosphorylation.Conclusion HMGB1 induces hyper-meability of endothelial cells through binding with RAGE and activating p38 signaling pathway.
出处
《广东医学》
CAS
北大核心
2015年第16期2479-2483,共5页
Guangdong Medical Journal
基金
国家自然科学基金资助项目(编号:31300950)
教育部2012年高等学校博士学科点专项科研基金联合资助课题(编号:20124433120011)
关键词
高迁移率族蛋白B1
晚期糖基化终产物受体
小鼠肺微血管内皮细胞
内皮细胞通透性
P38
MAPK
high mobility group protein B1
receptor of advanced glycation end products
mouse pulmonary mi-crovascular endothelial cells
endothelial cell permeability
p38 MAPK
