摘要
目的探讨缺氧诱导丝裂原因子（HIMF）在高氧诱导肺上皮和成纤维细胞凋亡中的作用及其意义。方法肺泡Ⅱ型上皮MLE-12细胞和成纤维NIH／3T3细胞分别转染靶向HIMF的小干扰RNA后，置于正常氧（21％O2）、高氧（85％O2）条件下培养3—18h，采用实时定量聚合酶链反应（Real．timePCR）法检测细胞中HIMFmRNA水平，运用吖啶橙-溴化乙锭染色法、Hochest33258染色法及膜联蛋白V（AnnexinV）-碘化丙锭（PI）双染流式细胞术检测细胞凋亡变化。结果与对照组比较，高氧暴露3、6、9、18h后，MLE-12和NIH／3T3细胞中HIMFmRNA水平分别增高2．783—5．023倍（P〈0．05）、2．864～15．162倍（P〈0．05），细胞凋亡率增高1．5～2．3倍（P〈0．05）、1．1～2．1倍（P〈0．05）；沉默HIMF基因后，高氧诱导的MLE．12和NIH／3T3细胞凋亡率分别进一步升高1．5～2．5倍（P〈0．05）、1．3—2．0倍（P〈0．05）。结论HIMF基因可能通过对抗高氧诱导的肺泡Ⅱ型上皮细胞和成纤维细胞凋亡，参与高氧肺损伤的发病机制。
Objective To study the role of hypoxia-indueed mitogenic factor （HIMF） in hyperoxi- a-induced apoptosis of lung typeII epithelial cells and fibroblasts. Methods Lung epithelial type II MLE-12 cells and fibroblast NIH/3T3 cells were transfected with small interference RNA （siRNA） targe- ting HIMF, and exposed to normoxia （21% O2） and hyperoxia （85% O2） for 3, 6, 9 and 18 h. The HIMF expression was detected by using real-time quantitative polymerase chain reaction （Real-time PCR）. Cell apoptosis was examined by using AO-EB staining, Hoehest 33258 staining, and Annexin V-PI staining flow cytometry. Results As compared witho those of normoxia-exposed cells, the HIMF mRNA levels in hyperoxia-exposed MLE-12 and NIH/3T3 cells were enhanced by 2. 783-5. 023 times （ P 〈 0. 05 ） and 2. 864-15. 162 times （P 〈0. 05） at 3, 6, 9, and 18 h, with increased apoptosis ratio by 1.5-2. 3 times （ P 〈 0.05 ） and 1.1-2. 1 times （ P 〈 0. 05 ）, respectively. Knockdown of HIMF increased the hyperoxia- induced apoptosis of MLE-12 and NIH/3T3 cells by 1.5-2. 5 times （ P 〈 0. 05 ） and 1.3-2.0 times （ P 〈 0. 05）. Conclusion HIMF can protect the lung type 11 epithelial cells and fibroblasts from hyperoxia-in- duced apoptosis, which may participate in the etiology of hyperoxia-indueed lung injury.
出处
《中华实验外科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第8期1612-1614,共3页
Chinese Journal of Experimental Surgery
基金
国家自然科学基金资助项目（30200284、30600278、30772359、81071997、81072073）
教育部“新世纪优秀人才支持计划”资助项目（NCET-06-0641）
教育部回国人员基金资助项目（2008889）
