摘要
目的阐明促红细胞生成素产生肝细胞受体A2（erythropoietin—producing hepatocellular receptor，EphA2）蛋白可经p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 mitogen—activated protein kinase，p38MAPK）信号通路调控头颈部鳞状细胞癌血管内皮细胞生长因子（VEGF）的表达。方法采用脂质体2000将EphA2蛋白过表达载体pEGFP—N1-EphA2和空白载体pEGFP—N1分别转染头颈鳞状细胞癌Tu686细胞，酶联免疫吸附法检测EphA2蛋白上调后VEGF蛋白的表达，Westernblot法检测p38MAPK信号通路有无激活；进一步利用不同浓度（0、5、10μmol／L）小分子抑制剂SB203580特异性阻断p38MAPK通路，酶联免疫吸附法检测VEGF蛋白的表达改变有无逆转。结果Tu686细胞EphA2蛋白上调后，VEGF蛋白在空白载体组和亲本细胞组中的表达（x±s）分别为（400．99±33．50）pg／ml和（385．30±33．50）pg／ml，而在实验组中的表达显著升高为（535．31±45．71）pg／ml，差异有统计学意义（F=17．091，P〈0．01）；同时，实验组Tu686细胞磷酸化p38MAPK的表达上调。不同浓度（0、5、10p,mol／L）SB203580作用EphA2蛋白过表达的Tu686细胞后，磷酸化p38MAPK的表达则被梯度抑制，且VEGF蛋白的表达逐渐降低，分别为（643．75±52．00）pg／ml、（513．52±54．05）pg／ml、（302．85±13．93）pg／ml，三组间差异有统计学意义（F=45．761，P〈0．01）。结论EphA2蛋白对p38MAPK信号通路具有调控作用，并经该通路影响VEGF蛋白的表达。
Objective To investigate the regulatory effect of erythropoietin-producing hepatocellular receptor （EphA2） on the expression of VEGF protein, a pro-angiogenic factor, via p38 mitogen-activated protein kinase （p38 MAPK） signaling pathway in squamous cell carcinoma of the head and neck（SCCHN） in vitro. Methods SCCHN Tu686 cells were transfected witch EphA2 overexpression vector pEGFP-N1- EphA2. Western blot was used to detect the expression of p38 MAPK and enzyme-linked immunosorbent assay（ELISA） was applied to assay of VEGF. SB203580 as a inhibitor of p38 MAPK signaling pathway was used. Results The expression of VEGF protein was significantly up-regulated in Tu686 cells transfected with EphA2 overexpression vector （535.31 ± 45.71 ） pg/ml, when compared with Tu686 cells transfected with empty vector （400.99 ±33.50） pg/ml and Tu686 cells with no transfection （385.30 ± 33.50） pg/ml （F = 17. 091, P 〈 0.01 ）. The expression of phosphorylated p38 MAPK was obviously increased in Tu686 cells with EphA2 overexpression. SB203580 inhibited the expressions of VEGF and phosphory]ated p38 MAPK proteins in Tu686 cells with EphA2 overexpression. Conclusion EphA2 can regulate the expression of VEGF protein and stimulate p38 MAPK signaling pathway.
出处
《中华耳鼻咽喉头颈外科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第3期229-233,共5页
Chinese Journal of Otorhinolaryngology Head and Neck Surgery
基金
国家自然科学基金（81202128,81272974,81071757,81172558）
高等学校博士学科点专项科研基金课题（20100162110036,20090162110065）
湖南省科技厅重点项目（2010TP4012.1）
中南大学自由探索计划青年教师助推基金（2012QNZT099）
