摘要
目的采用RNA干扰技术（RNAi）技术观察低氧诱导因子-1a（HIF-1a）对人膀胱癌细胞株BIU一87增殖、侵袭及转移的影响。方法体外培养BIU-87细胞，实时荧光定量聚合酶链反应（FQ—PCIt）和Westernblot检测低氧（90％氮气＋5％氢气＋5％二氧化碳）和常氧下及HIF—lcx—siRNA转染前后BIU-87中HIF-1a、增殖细胞核抗原（PCNA）、基质金属蛋白酶（MMP）-2、MMP-9的表达；采用磺酰罗丹明B（SRB）法检测HIF-a-siRNA转染后的细胞增殖水平，细胞划痕和Transwell试验检测迁移和侵袭能力。结果低氧8、24h条件下，HIF—ln蛋白（0．56±0．08、1．33±0．21）、MMP-2mRNA（1．85±0．21、2．94±0．29）、MMP-2蛋白（0．68±0．11、1．37±0．22）、MMP一9mRNA（2．08±0．32、3．49±0．44）、MMP一9蛋白（0．89±0．12、1．40±0．23）表达与正常氧条件比较HIF一1d蛋白（0．33±0．05）、MMP一2mRNA（O．95±0．13）、MMP-2蛋白（0．47±0．07）、MMP-9mRNA（1．21±0．17）、MMP一9蛋白（0．58±0．14）表达均显著升高（均P〈0．05），HIF-1a mRNA（1．05±0．09、0．96±0．11）与正常氧条件（1．16±0．13）比较无明显变化；HIF-1a-siRNA转染后与转染前比较能有效沉默HIF—1a与转染前（1．12±0．17、315．25±40．94、96．86±9．85）比较，HIF。1饯．siRNA能降低增殖、侵袭及迁移细胞数（0．63±0．08、139．62±19．67、69．17±7．39）（均P〈0．05）；BIU一87中PCNAmRNA（0．57±0．07）、PCNA蛋白（0．52±0．09）、MMP-2mRNA（0．64±0．08）、MMP-2蛋白（0．53±0．07）、MMP-9mRNA（0．49±0．06）、MMP-9蛋白（0．69±0．07）表达与转染前比较显著降低（0．99±0．14、0．80±0．13、1．06±0．13、0．87±0．12、0．99±0．12、1．12±0．14）（P〈0．05）。结论低氧下，HIF一10l—siRNA通过沉默HIF-1a，降低PCNA、MMP-2、MMP-9表达而抑制膀胱癌细胞增殖、侵袭及转移。
Objective To investigate the effects of silencing hypoixa inducible factor-lc~ （HIF-1a geue by RNAi on proliferation, invasion and metastasis of human bladder cancer cell line BIU-87. Methods BIU-87 cells were cultured in vitro. The expression of HIF-1a, proliferating cell nuclear antigen （PCNA）, matrix metalloproteinase （MMP）-2, and MMP-9 was detected by using fluorescence real-time quantitative polymerase chain reaction （PCR） and Western blotting under normoxia or hypoxia （90%0 N2 ±5% H2 ±5% CO2 ）. The cell proliferation was tested by SRB assay after transfection of HIF-lc^-siRNA. Invasion and me- tastasis were tested by cell scratch assay and Transwell chambers respectively. The expression of PCNA, MMP-2, and MMP-9 was detected. Results The expression levels of HIF-1a protein （0. 56 ± 0. 08, 1.33 ± 0. 21 ）, MMP-2 mRNA （ 1.85 ±0. 21, 2. 94 ±0. 29）, MMP-2 protein （0. 68 ±0. 11, 1.37 ±0. 22）, MMP-9 mRNA （2. 08 ±0. 32, 3.49 ±0. 44） , and MMP-9 protein （0. 89 ±0. 12, 1.40 ±0. 23 ） were increased un- der hypoxia for 8, and 24 h than those under normoxia [ HIF-1a protein （0.33 ± 0.05 ） , MMP-2 mRNA （0. 95 ±0. 13）, MMP-2 protein （0. 47 ±0. 07）, MMP-9 mRNA （ 1.21 ±0. 17）, MMP-9 protein （0. 58 ± 0. 14） ± （P 〈 0. 05 ）. There was no significant difference in HIF-1 a mRNA （ 1.05 ± 0. 09, 0. 96 ± O. 11 ） between hypoxia for 8, 24 h and normoxia [ （ 1.16 ± 0. 13） ] （P 〉 0. 05 ）. HIF-lcL expression was sup- pressed after HIF-1a-siRNA transfection. The number of proliferation, invasion and metastasis cells （0. 63 ±0. 08, 139. 62 ± 19.67, 69. 17 ±7.39） was decreased after HIF-la-siRNA transfection as com- pared with that before transfection （ 1.12 _± 0. 17, 315.25 ± 40. 94, 96. 86 ± 9. 85 ） （P 〈 0. 05 ）. The ex- pression of PCNA mRNA （0. 57 ± 0.07）, PCNA protein （0. 52 ± 0. 09）, MMP-2 mRNA （0. 64 ± 0. 08）, MMP-2 protein （0.53 ±0.07）, MMP-9 mRNA （0.49 ±0.06）, and MMP-9 protein （0.69 ±
出处
《中华实验外科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第2期322-325,共4页
Chinese Journal of Experimental Surgery
关键词
低氧诱导因子-1A
膀胱肿瘤
RNA干扰
增殖细胞核抗原
金属基质蛋白酶
Hypoixa inducible factor-la
Human bladder cancer
RNA interference
Prolif-erating cell nuclear antigen
Matrix metalloproteinases
