摘要
以运动发酵单胞菌(Zymomonas mobilis)的总DNA为模板,PCR扩增运动发酵单胞菌中的丙酮酸脱羧酶(Pyruvate decarboxylase,PDC)基因和乙醇脱氢酶Ⅱ(Alcohol dehydrogenaseⅡ,ADHⅡ)基因。将丙酮酸脱羧酶基因和含核糖体结合位点(RBS)的乙醇脱氢酶基因串联起来置于T7启动子控制下,构成多顺反子表达质粒pQR-PRA。经酶切和PCR验证,表达载体构建成功。将pQR-PRA转入大肠埃希菌(Escherichia coli)BL21中,转化子的定性检测表明有酶表达,并且初步测定了2种酶的表达量。
The genes of the pyruvate decarboxylase（PDC） and alcohol dehydrogenase II（ADHII） of Zymomonas mobilis（Zm） were amplified with PCR using total DNA of the Zm as a template.Then contacted the PDC gene with ADHII gene that contained ribosome synaptic site together and put them under the control of promoter T7 to construct poly-cistron expression plasmid pQR-PRA and confirmed with test and verification of restriction analysis and PCR.The pQR-PRA was transformed to E.coli BL21.And the qualitative detect indicated that the transformant had the enzyme expression and had initially determined the expression volume of the two enzymes.
出处
《微生物学杂志》
CAS
CSCD
2012年第2期9-14,共6页
Journal of Microbiology
基金
国家高技术研究发展计划(863计划
2007AA100702-6)
国家自然科学基金(31070446)
黑龙江省教育厅重点项目(11551z011)
黑龙江省科技攻关重大项目(GA07B401-6)
科技创新人才研究专项资金项目优秀学科带头人(RC2010XK002028)
黑龙江大学高层次人才(创新团队)支持计划(Hdtd2010-17)
关键词
运动发酵单胞菌
大肠埃希菌
丙酮酸脱羧酶
乙醇脱氢酶
载体构建
Zymomonas mobilis
E.coli
pyruvate decarboxylase（PDC）
alcohol dehydrogenase Ⅱ（ADHII）
vector construction
